动物性蛋白质饲料胃蛋白酶消化率的测定.docx

1、动物性蛋白质饲料胃蛋白酶消化率的测定动物性蛋白质饲料胃蛋白酶消化率的测定 过滤法参考标准：GB/T 17811-2008一、适用范围适用样品名称不适用样品名称原料动物性蛋白质原料植物性蛋白质原料成品动物性蛋白质饲料植物性蛋白质或混合饲料二、实验原理已脱过脂的试样，用温热的胃蛋白酶溶液(酶液浓度和用量与酶解试样质量恒定),在恒 温、持续不断地振摇或搅拌下消化 16小时,过滤分离不溶性残渣，洗涤、干燥，测定残渣的 粗蛋白质含量。同时测定空白和脱脂未酶解试样的粗蛋白质含量。二、实验用品1 实验用试剂试剂名称规格/浓度配制方法备注乙醚AR无需配制在空气中会慢慢氧 化成过氧化物，过 氧化物不稳定，加 热

2、易爆炸，应避光 保存。丙酮AR无需配制易燃、易挥发。胃蛋白酶溶液胃蛋白酶活性1 :将6.1ml浓盐酸稀释至(1)此溶液临用10 00020 IU/ml1000ml 水中（溶液PH12）,水浴加热至42 C45 C,加入 2g （精确至土 0.0002g ）活 性为1 : 10 000生化级 胃蛋白酶，并缓慢搅拌 直至溶解。前配制。（2）勿在加热板上加热胃蛋白酶溶液或配制时过热。浓硫酸AR, 98%无需配制，直接使用具强腐蚀性、强刺激性，可致人体灼伤。混合催化剂AR称 取 0.4gCuSO 4 5H2O ,6gK2SO4,磨碎混匀氢氧化钠AR, 40%水溶液称取40g氢氧化钠用去离子水配成 10

3、0ml溶 液。此溶液置于塑料桶中保存。硼酸AR, 2%水溶液称取2g硼酸固体，加热 溶于水，配成100ml溶 液。混合指示剂称取0.1g甲基红溶于95%乙醇，配成 100ml溶液；称取0.5g溴甲酚绿溶于阴凉处保存有效期二个月95%乙醇，配成 100ml溶液；两溶液等体积混合。硫酸铵AR无需配制使用前在105 C干燥箱中干燥至恒重蔗糖AR无需配制糖类物质，不能在105 C干燥箱中干燥，使用时可不干燥。盐酸标准溶液AR具体见附录22.实验用设备仪器设备名称规格高速万能粉碎机FW80分析筛孔径 0.84mm（20 目）分析天平感量 0.0001g冷冻水浴恒温振荡器LSHZ-300FOSS手动索氏提

4、取系统2055消煮炉可控温420 C凯式烧瓶250ml凯氏蒸馏装置常量直接蒸馏式磨口三角瓶带盖，250 ml布氏漏斗 80mm真空泵XZ-1快速定量滤纸 12.5cm容量瓶1L烧杯100 ml , 1L滴定管白色、酸式，25ml锥形瓶250m1玻璃棒三、实验内容序号实验项目操作内容注意事项1样品制备选取有代表性的样品用四分法缩减试样勿吸潮变质。至200g ,粉碎后全部通过20目筛，置于密闭样品袋中，阴凉处保存，备用。2样品脱脂称取4g试样于滤纸筒中，用FOSS含脂肪小于1%可不脱脂；含脂手动索式提取系统按粗脂肪检测方肪1%10%建议脱脂；含脂肪法进行，脱脂后的样品只需在室温大于10%则应脱脂。

5、风干，去掉石油醚即可。3胃蛋白酶称取已脱脂风干后的试样(1)应确保磨口瓶中样品完消化1.0000g(精确至土O.OIOg)于 250 ml全被胃蛋白酶溶液浸湿。干燥的带盖磨口瓶中，加150 ml新(2)同时做酶液空白测定（即配制的并已预热至 42 C45 C的不加试样，其它步骤一胃蛋白酶溶液,盖紧瓶盖,将瓶夹于样）恒温摇床上，于45C、80 r/min恒定 速度搅动16小时进行保温酶解消 化。4消化残渣的处理从搅动器上取下磨口瓶，呈 45。角 放置，让残渣沉淀15min以上，随 后在铺有滤纸的布氏漏斗上抽滤， 先用少量水将瓶盖上的残渣洗至滤 纸，再将磨口瓶保持沉淀时的角度 移至布氏漏斗上，慢慢

6、倾出内容物， 使之通过滤纸后形成连续的细流， 避免任何不必要的搅动。（1） 先过上层清液，液体通过 滤纸的速度应与倾入的 速度相同。（2） 过滤过程要小心操作，保 证残渣毫无损失。当上层液体通过滤纸后，于瓶中加 入15ml丙酮，用拇指盖住瓶口剧烈 振摇，放开。再用拇指堵住瓶口， 在滤纸上方将瓶倒置振摇，放开拇 指，丙酮和残渣流到滤纸上。再用 一份15ml的丙酮进行洗涤，照上法 振摇和倒出。检查瓶子，并用丙酮 再次洗涤。当全部液体通过滤纸后， 用洗瓶以少量丙酮洗涤漏斗壁上残 渣两次，并抽干。从布氏漏斗上小心 取下载有残渣的滤纸（用滤纸将残 渣包裹好）,无损地移入100烧杯中磨口瓶内的残渣要全部冲

7、洗至滤纸上。并置于105 C烘箱内烘干。5粗蛋白质的测定将上述已烘干的滤纸包无损地移入 凯氏烧瓶中，按FOSS定氮仪测 定饲料中粗蛋白含量的方法测定 残渣粗蛋白质的质量分数（32）。同 时，称取脱脂风干的样品0.3 g （精 确至0.0002 g ），直接按FOSS 定氮仪测定饲料中粗蛋白含量的方法测定脱脂未酶解的样品中粗蛋白质的质量分数（3 1）。测定残渣粗蛋白质时应从每个 样品残渣粗蛋白质中减去酶液 的空白值。6计算CJ _ 3 *工二 X1D03 !X-试样胃蛋白酶消化率，以质 量分数计（%）;31 -脱脂未酶解的样品中粗蛋白 质的质量分数（% ）；32-脱脂酶解后的残渣中粗蛋白 质的质

8、量分数（% ）。重复性：1每个试样脱脂风干后取两份试料进行酶解，平行测定残渣粗蛋白质的质量分 数，以其算术平均值为测定结果（保留三位有效数字），测定结果的相对W 6% ;2每个试样脱脂风干后取两份试料进行平行测定粗蛋白质的质量分数，以其算术平均值为测定结果（保留三位有效数字），测定结果的相对偏差应符合:粗蛋质含量允许相对偏差25%1 %10%X 25%2 %10%3 %3每个试样胃蛋白酶消化率测定结果保留三位有效数字误差来源及分析误差来源控制方案样品抽样取样要有代表性、真实性。制备样品要有一定数量；充分混匀，用四分法缩分；粉碎至能全部通过20目。试剂试剂规格按照标准要求选购一定规格的试剂，控制

9、杂质量。配制方法区分精确配制和粗配制。加热方式胃蛋白酶溶液配制时用水浴加热，防过热。保存按照试剂的保存要求（避光、塑料瓶、阴凉等条件限制）存放。注意试剂的保存期限。称样称样量称样量要适宜，一般根据该样品的含氮量和所适用的滴定管最大体积估算，保证滴定体积不低于滴定管量程的 1/3，不超过其量程。消化条件于45 C恒定速度搅动16小时。过滤操作要先过上层清液。要保证残渣毫无损失。滴定操作严格按照标准滴定操作进行。系统气密性用AR硫酸铵蒸馏，根据测得的含氮量评估系统气密性。附录2:盐酸标准溶液的配制与标定参考标准：GB/T601-20021盐酸标准溶液的配制按下表的规定量取盐酸，注人1000m L水

10、中，摇匀盐酸标准滴定溶液的浓度c(HCI)/(mol/I)盐酸的体积Vm/L1900.5450.192盐酸标准溶液的标定按下表的规定 称取于270-300 C高温炉中灼烧至恒重的工作基准试剂无水碳酸钠，溶于50ml.水中，加10滴溴甲酚绿-甲基红指示液，用配制好的盐酸溶液滴定至溶液由 绿色变为暗红色，煮沸2 min，冷却后继续滴定至溶液再呈暗红色。同时做空白试验。盐酸标准滴定溶液的浓度C(HCl)/(mol/L)工作基准试剂无水碳酸钠的质量。 m/g11.90.50.950.10.23.计算盐酸标准滴定溶液的浓度c(HCI).数值以摩尔每升(mol/L表示，按式(2)计算:m-无水碳酸钠的质量的准确数值，单位为克 (g);V1 -盐酸溶液的体积的数值，单位为毫升(ml);V:-空白试验盐酸溶液的体积的数值，单位为毫升 (mL) 注意事项：1.灼烧温度不能超过300度，当温度超过300度时无水碳酸钠分解，可将马福炉的温度调 至250,等升温稳定后再调至280，或者将马福炉事先升温至280度，待稳定后再放入无 水碳酸钠2.无水碳酸钠的称量质量小于0.2g时要用十万分子之一天平称量。3.混合指示剂为0.1%甲基红，0.1%溴甲酚绿，1:1混合。4.滴定一定要滴到暗红色再煮沸，可事先根据大体浓度计算大约的滴定体积。5.滴定终点到达之后一定是再次去煮不会变回绿色。