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1、第一次英文文献精读讲述讲解窗体顶端从植物种子中提取油的脂肪酸和甾醇的组成以及抗氧化活性文章信息文章历史：收到2015年10月1日 收到修订后的表格2016年6月21日 接受2016年6月29日 在2016年6月30日可用摘要 本研究确定并比较了用正己烷（索氏法）和氯仿/甲醇（Folch法）从香菜，葛缕子籽，茴香，肉豆蔻和白芥菜籽提取的植物种子油中生物活性成分的含量。在肉豆蔻和茴香籽油不饱和脂肪酸主要是油酸，而岩芹酸存在于香菜和葛缕子油中。关于甾醇，用这两种方法提取的种子油中的主要组分是-谷甾醇。用氯仿/甲醇萃取的肉豆蔻，白芥和香菜籽油的总酚含量比用正己烷制备它们的对应物中更高。根据Folch方

2、法提取的种子油样表现出比用索氏方法制备的油样清除DPPH自由基的能力更高。用Folch方法生产的油的甲醇提取物的DPPH值也高于用正己烷萃取的油。 关键词：植物种子油；脂肪酸；甾醇；酚类化合物；DPPH；索氏法；Folch方法1引言 脂质是人类饮食的主要成分。在世界许多地区分布的植物种子中它们被大量的发现。他们可以提供给油高浓度的单不饱和脂肪酸，通过几种机制可以预防心血管疾病（Lpez-Miranda等，2006）。他们是清除体内产生自由基的酚类化合物的一个良好来源。通过激活内源性防御系统和调节细胞信号传导过程多酚也可以提供间接的保护（Chen，Yu，Owuor，Kong，2000）。酚类抗氧

3、化剂存在于香料和草药中作为食品添加剂使用可以防止脂质氧化和颜色变化，风味和食品的营养品质（Kozowska，Zbikowska，Gruczyn _ska，Zontaa，Ptorak，2014 _）。甾醇是植物种子油的其他重要成分其显示了降低血清胆固醇的性质和有效的抗氧化剂。它们的抗氧化活性归因于形成烯丙基自由基，其经历异构化到其他相对稳定的自由基（RamadanMoersel，2006）。最常见的植物甾醇（植物甾醇）是-谷甾醇，菜油甾醇，豆甾醇和燕麦甾醇。其中饱和形式称为甾烷醇，谷甾醇是最具代表性的例子。植物甾醇的生物性质，是他们用作食品成分的主要原因，尤其是它们降低血液胆固醇水平的能力。商业

4、食品富含植物甾醇和植物甾烷醇包括涂抹食品，牛奶，奶酪或巧克力制品。这些产品中植物甾醇组分的含量确保每天消耗2-3克足以有效降低总胆固醇及其人体中的LDL分数（Kmiecik et al。，2011）。植物种子油还含有作为抗氧化剂的角鲨烯避免人体乳腺上皮细胞受氧化性DNA损伤（Warleta等人，2010）。 芫荽（Coriandrum sativum L.）和香菜（Carumcarvi L.）是单不饱和脂肪酸的重要来源，尤其是岩芹酸，其可被氧化裂解成产生月桂酸和己二酸及其他们有希望应用在化工行业。葛缕子籽用于提取的香芹酮，可以抑制存储土豆和洋葱的发芽（Raal，Arak，Orav，2012）。

5、此外，香菜精油在药物和人类医学中的应用是重要的。茴香籽（Pimpinella anisum L.）含有1.5-5的精油和8-11的富含脂肪酸的脂质，例如棕榈酸和油酸。在食品工业中，它们用作风味增强剂和在冰淇淋，糖果和树胶中的芳香剂。反过来，芥菜籽具有许多应用，包括油炸用油，调味品和腌菜的防腐剂。肉豆蔻（肉豆蔻）油是用于肉类产品，糕点，可乐饮料的调味和香料制品。对这些植物种子中的大多数进行测试营养和药用性质。他们可以被认为是非传统的富含脂肪酸和其他植物化学物质的油源，例如酚类化合物，甾醇和角鲨烯。此外，它们可用于生产和稳定具有增加的热氧化稳定性的结构化脂质。 因此，本研究的目的是评估和比较从香菜

6、，葛缕子，茴香，肉豆蔻和芥菜籽（Soxhlet法）或溶剂混合物 - 氯仿/甲醇（Folch法）中提取的油中这些组分的含量。 甲醇提取物制备的油样的抗氧化活性和种子油样用2,2-二苯基-1-苦基肼（DPPH）测定法测定的确定和比较。 这些研究得出的结果拓展我们研究的油中的脂肪酸含量，甾醇和酚类化合物的认识且可能应用于开发新食品。2材料和方法2.1材料和试剂 从波兰华沙获得有机产品和健康食物的茴香（茴芹），香菜（Coriandrum sativum L.），香菜（Carum carvi L.），白芥（Sinapis alba）和肉豆蔻（肉豆蔻）种子。所有化学品和溶剂均为分析纯，无需进一步使用纯化。

7、氯仿，乙醇，甲醇，正己烷，无水的硫酸镁，碳酸钠和氢氧化钾购自Avantor Performance Materials（Gliwice，波兰）。从SigmaAldric（St.Louis，MO，USA）获得 Trolox （）-6-羟基-2,5,7,8-四甲基苯并二氢吡喃-2-DPPH（2,2-二苯基-1-苦基肼），FolinCiocalteu试剂和没食子酸（GA）。从Sigma-Aldrich购买认证的脂肪酸甲酯（FAME）参考标准混合物（37个脂肪酸从C4至C24）和Sylon BTZ来自Supelco（Bellefonte，PA，USA）。无水吡啶，1M甲醇KOH和甾醇标准菜油甾醇（65

8、），豆甾醇（95），-谷甾醇（P97）和谷甾烷醇（P95）以及内标5a-胆甾烷（P95.0）。2.2 种子油提取2.2.1 正己烷萃取 将植物种子粉碎并在电动咖啡研磨机中研磨成细粉末。 每种植物种子取30克粉末样品用索氏提取器在70下保持8小时用正己烷（300mL）进行提取。 萃取后，己烷 - 油混合物通过置于漏斗中的滤纸上的无水硫酸镁层，然后使用旋转蒸发器Rotavapor R-215（BchiLabortechnik，瑞士）将溶剂蒸发。 称重油样，在氮气流下关闭并储存在-20进行下一步分析2.2.2氯仿/甲醇萃取在室温下提取30克研磨的植物种子粉末用300mL氯仿/甲醇（2:1，v / v

9、）溶液温度摇动2小时（Folch，Lees，Stanley，1957）。然后，将混合物通过Whatman No.1滤纸过滤到分液漏斗中并加入1M KCl溶液（70mL）。轻轻摇动后，将混合物放置过夜将分成两个阶段以进行分离。收集下层相并在40减压蒸发溶剂（Rotavapor R-215，BchiLabortechnik，Switzerland）。称取提取的油并用氮气冲洗，并储存在-20进行下一步分析。2.3脂肪酸分析 通过气相色谱分析脂肪酸组成（GC）之后依据12966-2（2011）用2M的甲醇氢氧化钾溶液分析脂肪酸甲酯衍生化。Shimadzu GC-17A气相色谱仪的装置有火焰离子化检测器

10、和BPX毛细管柱（30m0.22mm，膜厚0.25m）。用氮气（1.0mL / min）作为载气进行分析，温度程序：60保持1分钟，之后以10/ min的速率将温度升至170和以3/ min的速率从170升至230。在230保持15分钟。注射器和检测器温度分别设定在225和250。通过比较它们的保留时间来鉴定个体脂肪酸与认证的脂肪酸甲酯（FAME）混合物和定量总脂肪酸的百分比。2.4甾醇和角鲨烯分析 根据AOCS（1997）Official Method Ch 6-91通过GC程序描述固醇和角鲨烯的含量和组成。在室温条件下将每种种子油（50mg）用1M KOH的甲醇溶液皂化18小时，然后加入水

11、，并且将不皂化物用正己烷/甲基叔丁基醚（1:1，v / v）提取三次。在氮气流下蒸发溶剂。将干燥残余物溶于0.2mL吡啶中，并用0.8mL Sylon BTZ甲硅烷基化（Supelco，Bellefonte，PA，USA）。用Trace GC Ultra（Thermo Electron，Rodano，Italy）上的DB-35MS毛细管（25m0.20mm0.33lm; JWScientific，Folsom，CA，USA）分离甾醇衍生物。将1.0lL的样品在不分流模式注入，注射时间为5分钟。圆柱管在100保持5分钟，然后以25/ min的速率增加至250，保持1分钟，然后再以3/ min的速

12、率升温至290，保持20分钟。检测器温度设定为300。使用氢气作为载体，流速为1.5mL / min。依据内部标准5-胆甾烷用于甾醇定量。通过比较它们的保留时间（相对于5-胆甾烷）来鉴定甾醇与市售的标准和结果表示为mg / kg油。2.5种子油制备的甲醇提取物 用5mL正己烷将油样品（1g）溶解，然后加入5mL甲醇。通过涡旋剧烈搅拌混合物10秒并在6170g离心5分钟（Biofuge Stratos，Thermo Fisher Scientific，Waltham，MA，USA）。使用巴氏移液器将甲醇相与脂质相分离，用新的甲醇（2-5mL）将残余物提取两次。合并，并在40减压条件下使用旋转蒸发

13、器Rotavapor R-215（Bchi）（Labortechnik，Flawil，Switzerland）浓缩甲醇相至5mL2.6总酚含量的测定 使用改性的Folin-Ciocalteus试剂（SingletonRossi，1965）测定种子油的甲醇提取物中的总酚含量。用水（4mL）稀释甲醇提取物（0.5mL），然后加入FolinCiocalteus试剂（0.5mL）。 3分钟后，加入1mL的碳酸钠溶液（1.9M）并用水填充至10 mL。将样品在黑暗中静置60分钟，然后使用分光光度计UV / Vis（型号8500，Techcomp，HongKong）在760nm处测量吸光度。用没食子酸制备

14、的标准曲线来检测每个样品中的总酚含量。结果表示为每克油的没食子酸的毫克数。2.7抗氧化活性的测定 - DPPH测定 依据一些修改的Kiralan，Bayrak和Ozkaya（2009）使用DPPH自由基确定种子油的甲醇提取物的抗氧化活性和种子油样品。 种子油的每种甲醇提取物0.5mL用3.25mL甲醇稀释，然后加入0.25mL 的1mM的DPPH的甲醇溶液。将混合物在涡旋装置中剧烈混合10秒，并置于黑暗中10分钟。使用分光光度计UV / Vis（8500型，Techcomp，HongKong）在515nm下测量相对于纯甲醇的吸光度。使用Trolox校准曲线（1mol TEAC / g油）用Tr

15、olox当量抗氧化能力（TEAC）来表示自由基清除活性。为了确定种子油样品中的抗自由基活性，将每种油50mg溶解在3.0mL乙酸乙酯中。然后，将1mL油液用乙酸乙酯（2.75mL）稀释和添加0.25mL新鲜制备的DPPH溶液（1mM）。将样品在涡旋中剧烈混合10秒并且在20分钟后，使用分光光度计UV / Vis（型号8500，Techcomp，HongKong）在515nm测量吸光度。用Trolox标准曲线（1mol TEAC / g油）将结果表示为Trolox当量抗氧化剂能力。2.8统计分析 对研究的样品的分析做了三次平行。结果表示为平均值标准偏差（SD）。使用版本16的SPSS Stati

16、stical Software进行统计分析。使用单因素方差分析（ANOVA）以比较研究的种子油之间的甾醇组成。对于总酚类化合物和抗氧化活性测定，应用双向方差分析。使用Tukey试验来检测样品之间的区别并考虑显着性P 0.05。使用Pearson检测来发现所研究的油中的总多酚含量，抗氧化能力之间的相关性和总固醇含量。3结果与讨论3.1油提取率 本项研究中所用的油是从选定的植物用索格利特装置中的正己烷和混合物处理种子的氯仿/甲醇提取的。除了从白芥菜提取的油外，比较这两种脂质提取过程中，油提取产率没有显着性差异（表1）。与索氏方法提取相比用Folch方法提取的白芥菜的油提取产率的百分比更高。使用极性

17、溶剂提取油如氯仿和甲醇的结合提取可能会引起除了中性三酰基甘油以外的极性物质（磷脂）的产生，因此它可以影响高产油量。在许多情况下，提取时间和温度对于产油率的影响是显着的。白芥菜产油量是最高的;用氯仿/甲醇为29.80，用正己烷为25.30，而茴香产油率是最低的，用氯仿/甲醇为5.40，用正己烷为7.40。用正己烷萃取的芥菜籽油的结果低于已经出现的研究作品Sengupta和Bhattacharyya（1996）或Lohani，Fallahi，和Muthukumarappan（2015）。他们报告了以下芥子油提取率的值：35.10和28.80。这些差异可能主要归因于地理起源和芥菜籽的种属。在我们的研

18、究中，使用 -索克斯特和Folch这两中方法低产油率也出现在肉豆蔻种子。从芫荽籽中提取油，用Folch方法产量为22.10，用索格利方法特产量为20.00。从葛缕子籽中提取油，使用氯仿/甲醇产量为18.90和使用正己烷产量为20.13。结果与Sriti（2010）等人报道的结果相似。 他们发现用正己烷萃取芫荽籽油占干物质的22.6。另一方面，我们的价值低于Ramadan和Morsel（2002），用氯仿/甲醇萃取确定香菜中总脂质的量为种子重量28.4。这些差异可能主要与研究中使用的芫荽果实种子的成熟度有关。3.2脂肪酸组成 研究的所有种子油的脂肪酸组成如表1。茴香油的特征是PUFAs和SFAs

19、的贡献最高，然而研究的所有油样品中MUFAs的含量是最低的。用正己烷从八角茴香种子提取的油中 PUFAs的含量和SFAs的含量分别为32.05和31.33，然而用氯仿/甲醇提取的油含有35.73的PUFAs和27.58的SFAs。反过来，用Soxhlet和Folch两种方法提取的油中发现从茴香中提取的油中MUFAs的含量占了 35.63和36.69。葛缕子籽油也富含PUFAs。此外，这些油中饱和脂肪酸的含量相当低，使用Soxhlet方法为5.83，使用Folch方法为6.78。 用正己烷萃取种子PUFAs在其他油中的含量为，在肉豆蔻油中为15.77，在白芥子油中为16.97，在芫荽油中为15.

20、57。氯仿/甲醇萃取后类似的值也在这些油中测定。此外，白芥和芫荽籽油特征是相对低含量的SFAs（使用Soxhlet方法分别为5.02和4.42，）和高分子量的MUFAs（分别为78.01和79.94）。在MUFA中，岩芹酸（C18：1，n-12）是普遍存在于芫荽油中并在无论何种提取方法中测定水平高达73。在我们的研究中获得岩芹酸的水平与报告（RamadanMrsel，2002）中的非常相似。该酸的含量也在测定葛缕子油中超过33。香菜油还含有油酸（正己烷萃取为29.12）和亚油酸（正己烷萃取为31）。油酸的含量是芫荽油的5倍，亚油酸的含量是芫荽油的2倍。 Laribi，Kouki，Mougou和

21、Marzouk（2010）报道了类似的结果，他们证明了从三种孜然种子生态型的葛缕子提取油，岩芹酸含量范围为31.5338.36，而亚油酸超过30，亚麻酸含量小于0.5。 正如预期，白芥子油是唯一一个含有芥酸（C22：1，n-9）占43.46（Soxhlet方法）和45.07%（Folch方法）。白芥子油中相当数量的其他脂肪酸包括油酸（C18：1，n-9），龙胆酸（C20：1，n-9），亚油酸（C18：2，n-6）和亚麻酸（C18：3，n-3）。在分析的所有油中，巨头鲸鱼酸的含量是最高，值为10.88（正己烷萃取种子）和9.70（氯仿/甲醇萃取种子）。在测试的所有油中，白芥子油的特征还在于最高水

22、平的亚麻酸（8.14）。 An和Choe（2012）也发现芥酸，油酸，龙胆酸，亚油酸和亚麻酸作为芥子油中最具代表性的脂肪酸，但是它们报道芥酸的百分比为13.96，而我们的结果表明它的含量高三倍。高芥子油中芥酸的含量也被Sengupta和Ghosh（2011）或Parti，Deep和Gupta（2003）证实，值在48.55和49.43。我们的结果也部分与Zheljazkov，Vick，Ebelhar，Buehring和Astatkie（2012）和Vaidya和Choe（2011）相一致，发现了芥酸，油酸，龙胆酸，亚油酸和亚麻酸占芥子油的主要成分，与我们的结果相比他们报告了亚油酸含量高于2.4

23、倍，芥酸含量低于2倍。 在肉豆蔻油中，不管何种提取方法油酸被确定为主要的，其后是棕榈酸和亚油酸。用Soxhlet和Folch方法提取的大茴香籽这些酸也被发现是油中主要的。非洲肉豆蔻油（Monodora miristica）中的脂肪酸性状亚油酸和油酸也存在，不同于我们研究中分析的肉豆蔻油的脂肪酸性状。我们的研究（Yeboah，Mitei，Ngila，Wessjohann，Schmidt，2011）。亚油酸的数量高于三倍，油酸低于1.5倍。3.3甾醇含量 测试的油样品的特征是存在以下甾醇：胆固醇，菜子甾醇，菜油甾醇，D5-豆甾醇，氯甾醇，-谷甾醇，D5-燕麦甾醇，环烷花醇，D7-燕麦甾醇，24-亚

24、甲基环木花醇以及两甾烷醇：菜油甾烷醇和谷甾烷醇。数据列于表2。菜油甾烷醇仅在白芥子油中被鉴定为324mg / kg油，而角质甾醇仅存在于香菜中油。使用氯仿/甲醇比正己烷从葛缕子籽提取的油的混合物含有的氯菊酯高2.6倍。然而，无论何种提取方法，菜油甾醇在白芥子油中的含量最高。另一方面，白芥子油是唯一一个不含D5-豆甾醇。在用正己烷萃取的香芹籽油中测定最高的化合物含量（2799.9mg / kg油）。与我们的研究相比，Hassanien et al（2014）报道在黑孜然（Nigella sativa）种子油中D5豆甾醇（243.00mg / kg油）的含量低于10倍。分别用正己烷和氯仿/甲醇萃取

25、后的油 Brassicasterol发生在白芥末油其含量分别为514.56和489.68mg / kg油。这种植物甾醇也在肉豆蔻油中发现，但分别使用正己烷和氯仿/甲醇混合物萃取后其含量仅达到48.97和51.20mg / kg油。最普遍的甾醇是-谷甾醇含量，范围是从用正己烷提取芫荽油的997.97至用氯仿/甲醇提取茴香油的6264.84mg / kg油，占总甾醇量的28.7和73.7。由Sriti et al （2010）报道在突尼斯芫荽种子中含有相当量的-谷甾醇。他们也明显发现在突尼斯香菜种子中含有豆蔻醇，这与我们的研究结果一致。然而，Ramadan和Mrsel（2002）报告了芫荽籽油的含

26、量略高。在他们的样品中的-谷甾醇和豆甾醇的含量分别为1464和1548lg / g油。在我们的研究中，无论何种提取方法，都在葛缕子油中发现D5-燕麦甾醇的含量最高。然而，在肉豆蔻，芫荽和香菜油中均检测到D7-verasterol。在研究的油中其他甾醇也被发现包括环木菠萝烯醇和24-亚甲基环木菠萝烯醇。在茴香油中环木菠萝烯醇的含量最高的含量为643.08mg / kg油，而在芫荽油中是最低的含量为51.29mg / kg油。在白芥子油中未检测到该甾醇。 反过来，使用Soxhlet和Folch两种方法提取香菜和肉豆蔻油中均鉴定出24-亚甲基环木花醇。在茴香油样品中也检测到，但仅用正己烷萃取。 用S

27、oxhlet方法提取的白芥子油总甾醇的含量达到最高水平（8597.90mg / kg油）和用氯仿/甲醇混合物提取的茴香油（8498.80mg / kg油）。有趣的是，用Folch法提取（8498.80mg / kg油）茴香油，总甾醇含量比索氏法提高1.5倍（5688.03mg / kg油）。在其他油中，用正己烷和氯仿/甲醇从种子中提取油的总甾醇含量存在显著性差异。 胆固醇，植物脂质的非典型固醇，只在肉豆蔻和白芥子油中检测到，其含量超过230mg /kg油。Hassanien et al（2014）确定了番茄种子油中的胆固醇，而Ciftci，Przybylski，Rudzinska和Achary

28、a（2011）检测证实其存在于葫芦巴种子中被用作香料以增强食物的感觉质量。来自十字花科的植物油，如芥菜和油菜籽，可能也含有适量的胆固醇。在植物油中，亚麻油的特点是含有异常高的胆固醇（Shukla，Dutta，Artz，2002）。另一方面，在芫荽籽中未检测到胆固醇（Sriti等，2012），这与我们的研究结果一致。肉豆蔻和香芹油被认为是角鲨烯的来源，并且在用索格利特和Folch方法获得的油之间存在显著差异。该化合物在亚麻籽，葡萄籽和大豆油中未检测到，但在花生，南瓜和橄榄油（Amarowicz，2009）中相当突出，。3.4总酚含量 植物种子油中的总酚含量是作为酚类化合物是评价油质量的重要指标。

29、他们保护脂质免受过氧化反应，并对其清除自由基能力负有责任。如表3所示，在植物油中酚类含量的变化取决于萃取油的方法。使用Folch方法提取比用正己烷萃取的油显示出更高的总酚含量（P 0.05）。这归因于从种子提取的极性酚类物质（Khattab，Rempel，Suh，Thiyam，2012）中存在极性溶剂（甲醇）。已知总酚类化合物含量取决于类型和提取溶剂的极性等因素，如栽培的植物，种子的成熟度，气候和位置。在本项研究中，在肉豆蔻和大茴香油中检测到这些组分的最高含量分别为3.21和2.52 mg 没食子酸（GA）/ g油;在芫荽和葛缕子油中最低含量记录为（0.20和0.78mg GA /g油）。这些

30、水平大于比那些用正己烷萃取的油中所检测到的。在这种情况下，总酚含量最高的是在肉豆蔻油中检测的，随后是茴香，香菜，葛缕子和白芥子油。 Janu et al（2014）报道在未精制的芥子油中酚类化合物的含量0.56mg GAE / 100g油。相反，Ramadan和Morsel（2004）分析各种种子油的原油并测定芫荽油中的总酚含量为11mg咖啡酸当量每kg油当量。在另一项研究中，Ramadan（2013）报道在香菜冷压油中的总酚含量为每克油4.3mg没食子酸当量。 Yu，Zhou和Parry（2005）发现冷压黑葛缕子籽油的总酚含量为3.53mg GAE / g油。然而，六种冷压黑孜籽油的总酚含

31、量各不相同从1.02至1.40 mg GAE/ g油（Lutterodt等人，2010），并且在加速氧化的条件下可以部分有助于油的稳定性。就我们所知，我们的工作是第一个报告使用Folch和Soxhlet这两种替代方法对提取植物种子油的总酚类化合物进行比较的。3.5抗氧化活性 - DPPH测定 用DPPH测定所研究的植物种子油的抗氧化活性以及他们的甲醇提取物和所得结果表示为Trolox当量抗氧化能力。所有种子油样品显示DPPH自由基清除能力从2.24至31.69 lmol TE / g油不等，如表3所示。用正己烷萃取的油比使用氯仿/甲醇萃取的油的DPPH值较低。无论何种提取方法，作为DPPH自由

32、基清除剂肉豆蔻油是最有效的。当使用Folch方法提取时，其对DPPH自由基的作用显示出较高的影响（P 香菜白芥末茴香香菜。用Folch方法获得油的甲醇提取物观察种子样品油来比较抗氧化活性序列的相关性。正如甲醇提取物来自于用正己烷提取的油，肉豆蔻油具有最高的清除DPPH自由基的能力。 其他油的甲醇提取物的DPPH值较低但彼此接近。Assa，Widjanarko，Kusnadi和Berhimpon（2014年）基于DPPH和FRAP测试研究出肉豆蔻的甲醇提取物清除自由基的能力是最强的。这种高抗氧化能力是由于含量相对高的单宁，类黄酮和萜类化合物。最好的抗氧化活性是从大麻和南瓜油（Siger，Nogala-Kalucka，Lampart-Szczapa，2008）的甲醇提取物发现的。这些油含量最高的是总酚类化合物。但是，很难比较种子油样品的甲醇提取物的DPPH估计值，因为在进行测量油中含有使用的另一种溶剂（乙