化学消毒剂消毒效果验证报告.docx

1、化学消毒剂消毒效果验证报告编码：消毒剂消毒效果验证报告药业有限公司1. 概述：消毒是指消灭微生物的繁殖体，化学消毒剂是指能够消灭微生物繁殖体的化学物质。化学消毒剂仅对繁殖体有效，不能杀死芽孢。为保持洁净室的洁净度，洁净室的墙面、天花板、门窗、机器设备等表面以及操作人员双手（手套）等应定期清洁并用消毒剂进行消毒。本公司批准使用的化学消毒剂包括：75%乙醇、0.5%新洁尔灭溶液、5%甲酚皂溶液。其中5%甲酚皂溶液仅用于不与药品、原辅料、工艺用水等直接接触表面的消毒及水池、地漏液封。对于不同的消毒对象，应使用不同的消毒剂，并制订消毒程序，消毒程序中应明确规定：1.消毒剂的浓度及配制方法2.消毒剂使用

2、的条件3.消毒使用的设备、设施4.消毒操作的详细步骤5.消毒周期6.消毒效果的监测方法制订的消毒程序的消毒效果应经过验证后，才能批准使用。本验证具体规定了评价消毒剂消毒效力的生物学检测方法及其效果评价方法。2. 验证目的：为确认化学消毒剂消毒效果，特制订本验证方案，进行验证。验证过程应严格按照本方案规定的内容进行，若因特殊原因确需变更时，应填写验证方案变更申请报验证小组批准。 3. 适用范围：本方案适用于本公司化学消毒剂消毒效果的验证。4. 各部门职责：验证领导小组：1. 负责验证方案的审批。2. 负责验证的协调工作，以保证本验证方案规定项目的顺利实施。3. 负责验证数据及结果的审核。4. 负

3、责验证报告的审批。5. 负责再验证周期的确认。设备部：1. 负责组织试验所需仪器、设备的验证。2. 负责仪器、仪表、量具等的校正。质量部：1. 负责拟订验证方案。2. 负责验证所需的标准品、样品、试剂、试液等的准备。3. 负责取样及对样品的检验。4. 负责收集各项验证、试验记录，并对试验结果进行分析后，起草验证报告，报验证领导小组。生产技术部：1. 负责按照标准操作规程对洁净区进行清洁消毒。2. 负责根据验证试验结果，修改操作规程。5. 本方案参考了以下标准和指南：中国GMP（1998年修订版）；药品生产验证指南（2003版）消毒与灭菌效果的评价方法与标准 GB 15981一19956. 通用

4、方法：下面说明了一些进行记录测试数据工作的通用标准： 保证每一文件是可追溯的，它应有标题，系统参考（例如项目号）。文件中每个注解、记录等都应该清楚的、易读的、有日期和有签名的。不能使用铅笔而应使用蓝色钢笔或蓝色签字笔记录数据。每次测试必须是：以数字化的形式记录结果。如果在本次测试的格式中并没有描述测试程序，请另外写明测试程序。附上在测试过程中所产生的打印出来的图，签名并注明日期，写清楚是哪一次测试，如果一次测试中出现多个附件，每个附件应以X/Y形式清楚的表示出来，并签名和注明日期。每次测试应签名和注明日期（执行人和审核人的签名必须出现）。如果有些测试没有进行，在偏差表中写明为何未执行的原因和预

5、计执行的日期）。在文件中不要使用修正液，修改错误必须使用以下正确的方式：XX XX XX 姓名对于不使用的部分， 必须如下面所示的划掉， 并签字和注明年、月、日。姓名日期7. 验证内容：7.1 . 验证试验种类：本验证通过测试消毒剂对不同种类的典型菌的定性消毒试验和定量消毒试验，来评价不同消毒剂的消毒效力。7.1.1. 定性消毒试验：定性消毒试验是测定受消毒剂作用后的样本有无细菌生长的试验方法，用于对消毒剂灭菌效果的鉴定和消毒剂杀灭细菌效果的初步评价。7.1.2定量消毒试验：定量消毒试验是测定受消毒剂作用后，样本残存微生物数量的试验方法，以杀灭率表示结果。用于对消毒剂杀灭效果的评价。7.2.

6、微生物指示剂选择：分别选择细菌、真菌中的典型菌种测试消毒剂的消毒效力7.2.1细菌：细菌繁殖体：金黄色葡萄球菌（ATCC6538）、大肠埃希菌CMCC（B）44102细菌芽孢：枯草杆菌黑色变种芽孢（ATCC9732）7.2.2真菌：白色念珠菌（ATCC10231）7.3消毒剂的配制：本公司批准使用的化学消毒剂包括：75%乙醇、0.5%新洁尔灭溶液、5%甲酚皂溶液。其中5%甲酚皂溶液仅用于不与药品、原辅料、工艺用水等直接接触表面的消毒及水池、地漏液封。本次验证应对以上三种消毒剂分别单独进行7.4. 消毒剂的配制及用途：7.4.1. 0.5%新洁尔灭溶液的配制：配制：取一定量的5%新洁尔灭溶液倒入

7、配制桶，再加纯化水，比例为1：49，搅拌均匀即得。用途：墙壁、地面、水池、地漏、微生物检验室洁净台的消毒。7.4.2. 75%乙醇溶液：配制：取一定量的95%药用乙醇，倒入配制桶，加纯化水，比例为100：27搅拌均匀即得。乙醇易挥发，配制后将桶盖好。用途：皮肤、直接接触药品的设备、容器具的消毒。7.4.3. 5%的甲酚皂液：取一定量的50%甲酚皂溶液倒入配制桶，再加纯化水，比例为1：9，搅拌均匀即得。用途：墙壁、地面、水池、地漏、微生物检验室洁净台的消毒。7.4.4. 以上三种消毒液配制记录见附件18. 定性消毒试验8.1. 培养基与试剂8.1.1. 培养基：营养肉汤培养基。8.1.2. 试剂

8、8.1.2.1. 稀释剂：含1%蛋白胨的氯化钠溶液(pH7.27.4)8.1.2.2 . 灭菌注射用水。8.1.2 . 器材8.1.2.1 . 灭菌刻度吸管（1.0,5.0,10.0ml）。8.1.2.2. 灭菌试管。8.1.2.3. 灭菌三角烧瓶。8.1.2.4 . 酒精灯。8.1.2.5 . HH-2电热恒温水浴锅。8.1.2.6 . SPX-250B型生化培养箱。8.2. 试验方法8.2.1. 将菌液进行活菌计数，并用稀释液配制成含菌量为51055106cfu/ml的菌悬液。8.2.2 . 将灭菌后的试管10支排列于试管架上，标记管号。8.2.3. 除第1管外，其他每个试管加灭菌注射用水

9、2.5ml，放202水浴中。8.2.4. 于第1管和第2管内分别加消毒液2.5ml，第2管混匀后取 2.5ml移入第3管，再次混匀，从第3管中取2.5ml移入第4管，以此类推至第9管，混匀后弃去2.5ml，第10管中不加消毒液作对照。 8.2.5. 加菌悬液2.5ml于各管中，混匀并记录各管加菌时间。8.2.6各管在加入菌悬液10分钟后，取出0.5ml，加入4.5ml中和剂内，中和10分钟后，取出0.5ml，加入4.5ml营养肉汤中。8.2.7. 将接种细菌的肉汤管放37培养48h ,观察初步结果，无菌生长管继续培养至第7天。8.2.8 . 试验重复5次。8.3. 结果判定：8.3.1 . 若

10、肉汤管浑浊，则表示有菌生长，记为阳性，以（+）表示。8.3.2. 若培养至第7天，肉汤管澄清，则表示无菌生长，记为阴性，以（）表示。8.3.3. 对难以判定的肉汤管，取0.1ml接种于培养琼脂平板，用灭菌L棒涂匀，放37培养48h，观察菌落形态；并做涂片染色镜检，判断是否有指示菌生长。有指示菌生长记为阳性。8.3.4. 试验进行5次，均无指示菌生长的消毒液浓度范围为适用的浓度范围。8.4. 消毒剂定性试验记录9. 消毒剂定量试验：定量消毒试验是测定使用确定了浓度的消毒剂后，样本残存微生物数量的试验方法，以杀灭率表示结果。用于对消毒剂杀灭效果的评价。9.1. 培养基与试剂9.1.1. 营养琼脂培

11、养基。9.1.2. 试剂9.1.2.1. 稀释液：含1%蛋白胨的氯化钠溶液(pH7.27.4)。9.1.2.2. 灭菌注射用水9.1.2.3. 洗脱液：1%蛋白胨、0.1%吐温80的氯化钠溶液。9.1.2 . 器材9.1.2.1. 灭菌刻度吸管（1.0,5.0,10.0ml）。9.1.2.2. 灭菌试管。9.1.2.3. 灭菌三角烧瓶。9.1.2.4. 灭菌平皿（直径9cm）。9.1.2.5. HH-2电热恒温水浴锅。9.1.2.6. SPX-250B型生化培养箱。9.1.2.7. 酒精灯。9.1.2.8. 微量进样器。9.2. 试验方法：9.2.1. 定量消毒试验：9.2.1.1. 将菌液进

12、行活菌计数，并用稀释液稀释成含菌量为51055106cfu/ml的菌悬液。9.2.1.2. 取9支灭菌后的试管，每3支为一组，编号，分别加入灭菌注射用水0ml、4.5ml、9ml，加入消毒剂4.5ml，混匀。混匀后分别弃去0ml、4.5ml、9ml，放202水浴中。9.2.1.3. 待试管内液体温度与水浴温度平衡后，在三个试管中分别加入0.5ml菌悬液，混匀并开始计时。9.2.1.4 分别于2分钟、5分钟、10分钟从每个试管中取0.5ml菌液混合液，加入4.5ml中和剂混匀，中和10分钟，适当稀释后进行活菌计数。9.2.1.5. 阳性对照以洗脱液代替消毒液，同时按9.2.1.29.2.1.4操

13、作。9.2.1.5. 按不同稀释度推算出每个样本存活菌数（cfu/ml），按式（C1）计算杀灭率。9.2.1.6. 试验重复5次 9.3. 消毒效果评价标准：9.3.1. 对细菌和真菌的5次试验的杀灭率均99.9%判为消毒合格。9.3.2. 对枯草杆菌黑色变种芽孢5次试验均全部杀灭判为消毒合格。10. 验证所需文件资料资料名称编号存放处备注：执行人日期复核人日期11. 检验仪器的校验：名称规格型号校正结果校正有效期备注：执行人日期复核人日期75%乙醇消毒剂定性试验记录消毒剂种类乙醇浓度75%配制日期试验次数第 1 次每支编号样品制备1. 除第1管外，其他每个试管加灭菌注射用水2.5ml，放20

14、2水浴中。2. 于第1管和第2管内分别加75%乙醇2.5ml，第2管混匀后取 2.5ml移入第3管，再次混匀，从第3管中取2.5ml移入第4管，以此类推至第9管，混匀后弃去2.5ml，第10管中不加消毒液作对照。 3. 加菌悬液2.5ml于各管中，混匀并记录各管加菌时间。4. 各管在加入菌悬液10分钟后，取出0.5ml，加入4.5ml中和剂内，中和10分钟后，取出0.5ml，加入4.5ml营养肉汤中。5. 将接种细菌的肉汤管放37培养48h ,观察初步结果，无菌生长管继续培养至第7天。检验依据消毒剂消毒效果验证方案STP-B微生物种类时间（D）123456789阳性对照金黄色葡萄球菌12345

15、67大肠埃希菌1234567枯草杆菌黑色变种芽孢1234567白色念珠菌1234567本次试验结论消毒剂种类乙醇浓度75%配制日期试验次数第 2 次每支编号样品制备1. 除第1管外，其他每个试管加灭菌注射用水2.5ml，放202水浴中。2. 于第1管和第2管内分别加75%乙醇2.5ml，第2管混匀后取 2.5ml移入第3管，再次混匀，从第3管中取2.5ml移入第4管，以此类推至第9管，混匀后弃去2.5ml，第10管中不加消毒液作对照。 3. 加菌悬液2.5ml于各管中，混匀并记录各管加菌时间。4. 各管在加入菌悬液10分钟后，取出0.5ml，加入4.5ml中和剂内，中和10分钟后，取出0.5m

16、l，加入4.5ml营养肉汤中。5. 将接种细菌的肉汤管放37培养48h ,观察初步结果，无菌生长管继续培养至第7天。检验依据消毒剂消毒效果验证方案STP-B微生物种类时间（D）123456789阳性对照金黄色葡萄球菌1234567大肠埃希菌1234567枯草杆菌黑色变种芽孢1234567白色念珠菌1234567本次试验结论消毒剂种类乙醇浓度75%配制日期试验次数第 3 次每支编号样品制备1. 除第1管外，其他每个试管加灭菌注射用水2.5ml，放202水浴中。2. 于第1管和第2管内分别加75%乙醇2.5ml，第2管混匀后取 2.5ml移入第3管，再次混匀，从第3管中取2.5ml移入第4管，以此

17、类推至第9管，混匀后弃去2.5ml，第10管中不加消毒液作对照。 3. 加菌悬液2.5ml于各管中，混匀并记录各管加菌时间。4. 各管在加入菌悬液10分钟后，取出0.5ml，加入4.5ml中和剂内，中和10分钟后，取出0.5ml，加入4.5ml营养肉汤中。5. 将接种细菌的肉汤管放37培养48h ,观察初步结果，无菌生长管继续培养至第7天。检验依据消毒剂消毒效果验证方案STP-B微生物种类时间（D）123456789阳性对照金黄色葡萄球菌1234567大肠埃希菌1234567枯草杆菌黑色变种芽孢1234567白色念珠菌1234567本次试验结论消毒剂种类乙醇浓度75%配制日期试验次数第 4 次

18、每支编号样品制备1. 除第1管外，其他每个试管加灭菌注射用水2.5ml，放202水浴中。2. 于第1管和第2管内分别加75%乙醇2.5ml，第2管混匀后取 2.5ml移入第3管，再次混匀，从第3管中取2.5ml移入第4管，以此类推至第9管，混匀后弃去2.5ml，第10管中不加消毒液作对照。 3. 加菌悬液2.5ml于各管中，混匀并记录各管加菌时间。4. 各管在加入菌悬液10分钟后，取出0.5ml，加入4.5ml中和剂内，中和10分钟后，取出0.5ml，加入4.5ml营养肉汤中。5. 将接种细菌的肉汤管放37培养48h ,观察初步结果，无菌生长管继续培养至第7天。检验依据消毒剂消毒效果验证方案S

19、TP-B微生物种类时间（D）123456789阳性对照金黄色葡萄球菌1234567大肠埃希菌1234567枯草杆菌黑色变种芽孢1234567白色念珠菌1234567本次试验结论消毒剂种类乙醇浓度75%配制日期试验次数第 5 次每支编号样品制备1. 除第1管外，其他每个试管加灭菌注射用水2.5ml，放202水浴中。2. 于第1管和第2管内分别加75%乙醇2.5ml，第2管混匀后取 2.5ml移入第3管，再次混匀，从第3管中取2.5ml移入第4管，以此类推至第9管，混匀后弃去2.5ml，第10管中不加消毒液作对照。 3. 加菌悬液2.5ml于各管中，混匀并记录各管加菌时间。4. 各管在加入菌悬液10分钟后，取出0.5ml，加入4.5ml中和剂内，中和10分钟后，取出0.5ml，加入4.5ml营养肉汤中。5. 将接种细菌的肉汤管放37培养48h ,观察初步结果，无菌生长管继续培养至第7天。检验依据消毒剂消毒效果验证方案STP-B微生物种类时间（D）123456789阳性对照金黄色葡萄球菌1234567大肠埃希菌1234567枯草杆菌黑色变种芽孢1234567白色念珠菌123