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1、推荐下载关于气相色谱法测定麝香祛痛搽剂中麝香酮的研究键入文字关于气相色谱法测定麝香祛痛搽剂中麝香酮的研究【编者按】：医药论文是科技论文的一种是用来进行医药科学研究和描述研究成果的论说性文章。论文网为您提供医药论文范文参考，以及论文写作指导和格式排版要求，解决您在论文写作中的难题。关于气相色谱法测定麝香祛痛搽剂中麝香酮的研究【摘要】 目的研究麝香祛痛搽剂中人工麝香质量的控制方法。方法采用气相色谱法对处方中的人工麝香药材进行定性鉴别;用气相色谱法对处方中人工麝香的有效成分麝香酮进行定性测定。结果供试品中各组分出峰时间较合适，分离效果较好，而且各组分对应的峰面积和理论踏板数均较高，同时更能保证检测结

2、果的真实性、准确性、重复性，阴性无干扰，专属性强。结论该方法可用于麝香祛痛搽剂中麝香酮质量的控制。【关键词】 麝香祛痛搽剂; 气相色谱法; 麝香酮1键入文字麝香祛痛搽剂原收载于中国药典2005 年版部，根据 2010 年版中国药典计划任务表要求，本文将处方中的麝香修订为人工麝香，因为人工麝香为贵重药材，所以应对麝香祛痛搽剂中人工麝香制订质量控制方法，本文采用气相色谱法对处方中的人工麝香药材进行定性鉴别，供试品中各组分出峰时间较合适，分离效果较好，而且各组分对应的峰面积和理论踏板数均较高，同时更能保证检测结果的真实性、准确性、重复性，阴性无干扰，专属性强，结果较满意。1 仪器与试药气相色谱仪 A

3、gilent6890 型(FID 检测器);Agilent 色谱工作站; HP-5 弹性石英毛细管柱(柱长 30 m，内径 0.25 mm，膜厚度 0.25 聚乙二醇(PEG)-20M 毛细管柱(柱长 30 m，内径 0.32 mm，膜厚度 0.5 麝香祛痛搽剂样品: 武汉马应龙药业集团股份有限公司产品(批号 080402，080403，080413)，襄樊隆中药业有限责任公司产品(批号 080101，080201，080401)，绍兴华通制药有限公司产品(批号 C03A0753，C03A0809)，李时珍医药集团有限公司产品(批号 2009020001)。麝香酮对照品，中国药品生物制品研究所

4、产品(批号 110719-200512);无水乙醇为分析醇。2 方法与结果2.1 色谱条件色谱柱为 HP-5 弹性石英毛细管柱(柱长 30 m，内径 0.25 mm，膜厚度2键入文字0.25 聚乙二醇(PEG)-20M 毛细管柱(柱长 30 m，内径 0.32 mm，膜厚度 0.5 柱温：程序升温：初温 130，保持 5 min 后，每分钟升高 0.8至 180，保持 2 min 后，再以每分钟升高 20至 220保持 5 min; 检测器为 FID 检测器;检测器温度：250; 进样口温度 220;流速 1.0 ml/min; 理论板数按麝香酮计算应不低于 20 000。2.2 色谱条件的确

5、定2.2.1 色谱柱的确定取供试品(绍兴华通制药有限公司，批号：C03A0753)按供试品制备方法制备得供试品溶液，用聚乙二醇(PEG)-20M 毛细管柱(柱长 30 m，内径 0.32mm，膜厚度 0.5 m)进样。结果表明，用聚乙二醇(PEG)-20M 毛细管柱(柱长 30 m，内径 0.32 mm，膜厚度 0.5 m)能收获较好的分离效果，得到准确高效的分析结果。故选用：聚乙二醇(PEG)-20M 毛细管柱(柱长 30 m，内径 0.32 mm，膜厚度 0.5 m)。2.2.2 程序升温条件的确定将 2.3.1 项下制得供试品溶液按程序升温：初温 130，保持 3 min 后，每分钟升高

6、 1.5至 180，再以每分钟升高 20至 220保持 5 min;流速 1 ml/min。结果表明，在该方案下，供试品中各组分出峰时间较合适，分离效果较好，而且各组分对应的峰面积和理论踏板数均较高。通过试验，确定色谱条件为：色谱柱：聚乙二醇(PEG)-20M 毛细管柱(柱长 30 m，内径 0.32 mm，膜厚度 0.5 检测器为 FID 检测器;进样器温度：220;检测器温度：250;分流进样(分流比 11);程序升温：初温 130，保持 5 min 后，每分钟升高 0.8至3键入文字180，保持 2 min 后，再以每分钟升高 20至 220保持 5 min;流速 1 ml/min;进样

7、量：1 l。2.3 溶液的制备2.3.1 供试品溶液的制备针对麝香酮的脂溶性，采用石油醚(3060)提取的方法，这样组分的转移率较高，同时操作简便。但是因为本品麝香酮的处方量过低;必须进行富集的过程。因为样品为 50%的乙醇制剂，与石油醚(3060)会发生混溶，因此加入4 倍量的水，再置于分液漏斗中用石油醚(3060)提取 2 次，100 ml/次，石油醚(3060)液自然挥干，可使麝香酮成分不会损失。取本品 50 ml，加水 200 ml，摇匀。置于分液漏斗中，用石油醚(3060)提取 2次，100 ml/次。合并石油醚，自然挥干。残渣用无水乙醇 2 ml 溶解，取上清液作为供试品溶液。ti

8、ps:感谢大家的阅读，本文由我司收集整编。仅供参阅！4键入文字【编者按】：医药论文是科技论文的一种是用来进行医药科学研究和描述研究成果的论说性文章。论文网为您提供医药论文范文参考，以及论文写作指导和格式排版要求，解决您在论文写作中的难题。通脉醒脑滴丸对线栓法致脑缺血再灌注大鼠细胞凋亡线粒体的信号转导作者：陈小睿，唐光曦，孟宪丽，黄雷雷，李佳川【摘要】 目的 探讨中药复方制剂通脉醒脑滴丸防治脑缺血卒中可能的机理。 方法选用大鼠线栓阻断大脑中动脉法复制脑缺血再灌注模型，运用免疫组化方法，测定脑组织 bcl-2、Bax、Cyt-C 和 Caspase-3 的表达，考察药物对 Caspase-3 细胞

9、凋亡通路的作用。结果通脉醒脑滴丸下调神经细胞的促凋亡基因 Bax、Caspase-3 和 CytC 表达。结论研究初步证实通脉醒脑滴丸对脑缺血损伤的保护作用，可能与负调 Caspase-3 介导的细胞凋亡通路有关。【关键词】 通脉醒脑滴丸; 脑缺血; 再灌注脑缺血卒中作为临床常见的危重急症，一直备受关注。目前认为对脑缺血的治疗核心在于对神经元损伤的保护以及溶栓再通。是否能在脑缺血卒中发生后，尽可能延缓细胞凋亡组织坏死的进程，减轻神经元的损伤，是考察药物对脑缺血保护作用的要5键入文字点。本实验选用大鼠线栓法致局灶性脑缺血再灌注模型，采用免疫组织化学方法检测脑组织神经细胞 bcl-2、Bax、Cy

10、t-C、Caspase-3 的表达，探求药物是否可通过影响 bcl-2或 Bax 的表达，影响 Cyt-C 在线粒体膜的聚集，进一步影响凋亡因子 Caspase-3 的表达，发挥其对抗缺血脑组织损伤和神经细胞凋亡的作用。1 材料1.1 药物受试药物：通脉醒脑滴丸，成都润华堂药业有限公司产品，批号：070530。规格：10 mg/粒。用法用量：口服，88 粒/d，分 4 次服用。主治缺血性中风引起的半身不遂、口眼歪斜、言语不利、偏身麻木等。阳性对照药物：尼莫地平片，山西亚宝药业集团股份有限公司产品，批号：070109。规格：20 mg/片。用法用量：用于治疗缺血性脑血管病，口服，30120mg/

11、d。1.2 试剂 Rabbit Anti-Caspase-3，北京博奥生物技术有限公司产品;Cytochrome C(A-8)SC-13156，北京中杉金桥生物技术有限公司产品;Bax(P-19)SC-526，北京中杉金桥生物技术有限公司产品;bcl-2 GM88702，基因有限公司产品;ChemMate Envision HRP 鼠/兔 GK500705，基因有限公司产品;其它实验室常备试剂均为国产分析纯。6键入文字1.3 仪器 Leica rm 2135 石蜡切片机，德国;Olympus-BX40 型光学显微镜，日本Olympus 公司产品;MIAS2000 型计算机图像工作系统，电子科大

12、金盘多媒体科技有限公司产品;LD2-5 医用离心机，北京医用离心机厂产品;WH-2 型微量旋涡混合仪，上海沪西分析仪器厂产品;DHW-600 型不锈钢电热恒温水箱，北京国华医疗器械厂产品;202-2 型干燥箱，上海市实验仪器总厂产品。其它实验室常备器皿、耗材均为国产优质品。1.4 动物 SD 大鼠，SPF 级，质量(300 20)g，雌雄各半，由四川省医学科学院实验动物研究所提供，合格证号：SCXK(川)2004-15。2 方法2.1 分组及给药选取健康 SD 大鼠 18 只，雌雄各半，随机将大鼠分为模型组、给药组、假手术组 3 组，每组 6 只。其中给药组给予通脉醒脑滴丸 73.85 mg/

13、kg;模型组和假手术组给予等体积蒸馏水。灌胃给药，1 次/d，连续给药 7 d。于第 7 天给药 1 h 后，假手术组大鼠仅在麻醉状态下分离右侧颈总动脉，不予阻断血流。模型组和给药组参照下述方法，复制线栓法致大鼠脑缺血再灌注模型。参照文献方法13，第 7 天给药 1 h 后，腹腔注射 10%水合氯醛 3.5 ml/kg(350mg/kg)将大鼠麻醉，分离右侧颈总动脉(CCA)、颈外动脉(ECA)和颈内动脉(ICA)，在距CCA 分叉部 4 mm 处剪一小口，将拴线插入到 ICA，实现对大脑中动脉(MCA)的阻7键入文字断。固定线栓。逐层缝合切口并消毒。MCA 阻断 2 h 后，拔出线栓，进行再

14、灌注。假手术组大鼠仅在麻醉状态下分离右侧颈总动脉，不予插入线栓阻断血流。再灌注 24 h 后，各组大鼠 10%水合氯醛 3.5 ml/kg(350 mg/kg)腹腔注射麻醉，仰卧位固定，剪开胸壁，暴露心脏，将灌流装置的针头刺入左心室，止血钳固定，剪开右心耳，生理盐水 250 ml 快速灌流冲洗至肺叶和肝脏变白，换用 4%多聚甲醛磷酸盐缓冲液 250 ml 灌注固定，30 min 后断头取脑，置于 4%多聚甲醛中低温避光固定 24 h。心脏灌流前 1h 给药 1 次。常规制备石蜡切片，HE 染色项下，采用 DAKO EnVision 显色系统，光镜 100 视野下寻找海马结构，400 视野下，运

15、用电子科技大学金盘科技有限公司 MIAS2000 型计算机图像工作系统，对染色结果进行检测，每张片选取不重叠的 10 个视野，每个视野选 20 个细胞，统计阳性表达的细胞数和阳性面积百分比。2.2 统计方法运用 SPSS 13.0 统计软件进行统计分析。3 结果3.1 对线栓法致脑缺血再灌注大鼠脑组织神经细胞 Bax 表达的影响结果见表 1。表 1对线栓法致脑缺血再灌注大鼠 脑组织神经细胞 Bax 表达的影响( s)8键入文字在高倍镜下，免疫组织化学染色结果显示：大鼠脑组织神经细胞 Bax 蛋白主要在胞浆出现阳性表达。正常大鼠神经细胞 Bax 有一定的阳性表达，而脑缺血再灌注大鼠的神经细胞表达

16、则出现几乎满视野表达，染色呈棕黄或黄褐色。从表 1 可见，模型组大鼠脑组织神经细胞的 Bax 表达较假手术组有明显的升高(P 0.01)。通脉醒脑滴丸组较之模型组，Bax 阳性细胞表达和阳性面积比明显降低(P 0.01)，提示通脉醒脑滴丸具有减少大鼠脑缺血再灌注损伤后神经细胞 Bax 表达的作用。3.2 对线栓法致脑缺血再灌注大鼠脑组织细胞色素 C(Cyt-c)表达的影响表 2 对线栓法致脑缺血再灌注大鼠脑组织神经细胞 Cyt-C 表达的影响( s)在高倍镜下，免疫组织化学染色结果显示，大鼠脑组织神经细胞 Cyt-C 蛋白主要在胞浆出现阳性表达。正常大鼠神经细胞 Cyt-C 的有一定阳性表达，

17、而脑缺血再灌注大鼠的神经细胞表达则相对较高，染色呈棕黄或黄褐色。从表 2 可见，模型组大鼠脑组织神经细胞的 Cyt-C 表达较假手术组有明显的升高(P 0.01)，给药组较之模型组，Cyt-C阳性细胞表达个数和阳性面积比明显降低(P 0.01)，提示通脉醒脑滴丸具有减少大鼠脑缺血再灌注损伤神经细胞 Cyt-C 表达的作用。3.3 对线栓法致脑缺血再灌注大鼠脑组织神经细胞 Caspase-3 表达的影响结果见表 3表 3 对线栓法致脑缺血再灌注大鼠脑组织神经细胞 Caspase-3 表达的影响( s)9键入文字高倍镜下，免疫组织化学染色结果显示，大鼠脑组织神经细胞 Caspase-3 蛋白在胞浆

18、和胞核均出现阳性表达。正常大鼠神经细胞 Caspase-3 有一定阳性表达，而模型组大鼠几乎出现满视野的阳性表达，染色呈棕黄或黄褐色。从表 3 可见，模型组大鼠脑组织神经细胞的 Caspase-3 表达较假手术组有明显的升高(P 0.01)。通脉醒脑滴丸组较之模型组，Caspase-3 阳性细胞表达和阳性面积比有所降低(P 0.05)，提示通脉醒脑滴丸具有减少大鼠脑缺血再灌注损伤神经细胞 Caspase-3 表达的作用。3.4 对线栓法致脑缺血再灌注大鼠脑组织神经细胞 bcl-2 表达的影响在高倍镜下，免疫组织化学染色结果显示，正常组和给药组大鼠神经细胞 bcl-2 未见阳性表达，而脑缺血再灌

19、注大鼠的神经细胞仅出现极少量表达，平均每 100 个细胞约有 1 个阳性细胞表达，染色呈黄褐色，分布在神经胶质细胞胞浆和胞膜。tips:感谢大家的阅读，本文由我司收集整编。仅供参阅！2.3.2 对照品溶液的制备取麝香酮对照品，加无水乙醇制成每毫升含 0.1 mg 的溶液，作为对照品溶液。10键入文字2.3.3 阴性对照溶液的制备按处方量制备不含麝香酮的阴性样品，按供试品溶液制备方法制备阴性对照溶液。2.4 专属性考察取对照品溶液、供试品溶液、阴性对照溶液，分别依法测定。在该色谱条件下，在与麝香酮对照品保留时间相同的位置不出现色谱峰，表明其他成分对麝香酮的测定无干扰。结果见图 13。图 1 麝香

20、酮对照组色谱图2.5 样品测定按正文所述方法，对各厂家各批次样品进行检验，结果均呈正结果。图2 样品色谱图 图 3 阴性色谱图3 讨论因为麝香酮具有脂溶性，采用石油醚(3060)提取的方法，这样组分的转移率较高，同时操作简便。但是因为本品麝香酮的处方量过低，必须进行富集的过程。因为样品为 50%的乙醇制剂，与石油醚(3060)会发生混溶，因此加入 4 倍量的水，再置于分液漏斗中用石油醚(3060)提取，可使麝香酮成分不会损失。但是富集后导致杂质峰较多，用平温或较快的升温速率均达不到较好的分离效果，因此经过摸索将升温速率定为每分钟升高 0.8，在该方案下，供试品中各组分出峰时间较合适，分离效果11键入文字较好，而且各组分对应的峰面积和理论踏板数均较高，同时更能保证检测结果的真实性、准确性。【参考文献】1 国家药典委员会.中国药典，部S.北京：化学工业出版社，2005.医药卫生栏目tips:感谢大家的阅读，本文由我司收集整编。仅供参阅！12