K5600 说明书Biofuture.docx

1、K5600 说明书BiofutureK5600超微量分光光度计使用说明书版本：V 1.00 软件版本：K5600 V1.00 硬件版本：K5600 V1.00 北京凯奥科技发展有限公司中国 北京用户须知 本手册将指导您正确使用K5600超微量分光光度计。在您安装、配置以及使用之前请认真阅读此手册。 此手册版权归北京凯奥科技发展有限公司所有，在没有经过北京凯奥科技发展有限公司的授权之前。本手册不得随意修改和拷贝或发布到互联网上。 在本手册中提到的由于用户操作而引发的数据丢失和其它意外所引起的人员伤亡或损失北京凯奥科技发展有限公司不承担任何责任。对于本手册所没有提到的具有潜在不良的操作而引发的意外

2、事故，北京凯奥科技发展有限公司也不承担责任。 如果您遵守以上规定，从现在开始，您就可以享受由K5600超微量分光光度计给您的工作和生活带来的便利。装箱清单： 在每一套产品的包裹中都包含有以下物品，如果当您第一次打开包裹之后发现和下述列表物品不同，请联系北京凯奥科技发展有限公司或产品经销商为您免费提供或替换相关物件。物品名称件数备注K5600超微量分光光度计1200-850nmK5600产品配套软件光盘1200-850nm比色皿1套USB连接线112V电源适配器112V电源适配器至插座连线1目 录1 产品介绍52 安装72.1 端口连接72.2 安装环境要求72.3 辅助软件安装72.4 软件安

3、装82.5 驱动程序安装 10第部分： 检测平台测量模块3 基本操作 123.1 样品剂量要求 123.2 测量步骤 123.2.1 开机123.2.2 空白对照143.2.3 样品测量153.2.4 结果输出154 工作界面介绍 164.1 菜单栏 164.2 测量类型选项区 194.3 图形显示区 204.4 数据显示区 214.5 测量功能区 215 样品测量 235.1 核酸的测量 235.1.1 样品剂量要求235.1.2 测量范围235.1.3 测量界面235.1.4 测量步骤245.2 蛋白质A280测量265.2.1 样品剂量要求265.2.2 测量范围265.2.3 测量界面

4、265.2.4 测量步骤275.3 BCA法、Bradford法和Lowry法测量 295.3.1 样品剂量要求 295.3.2 测量范围295.3.3 测量界面295.3.4 测量步骤315.4紫外-可见全波长扫描 325.4.1 样品剂量要求 325.4.2 测量范围325.4.3 测量界面325.4.4 测量步骤325.5 细胞溶液测量 345.5.1 样品剂量要求 345.5.2 测量范围345.5.3 测量界面345.5.4 测量步骤345.6 微阵列样品检测 355.6.1 样品剂量要求355.6.2 测量范围355.6.3 测量界面355.6.4 测量步骤36第部分： 比色皿测量

5、模块6 基本操作 386.1 样品剂量要求 386.2 比色皿规格 386.3 测量范围 386.4 测量步骤 386.4.1 开机386.4.2 空白对照406.4.3 样品测量416.4.4 结果输出41注意事项411 产品介绍K5600超微量分光光度计为一款新型全波长（200850nm）超微量分光光度计。在K5500的基础上，K5600超微量分光光度计增加了比色皿的测量功能，即可以使用检测平台进行测量，也可以使用比色皿进行测量。使用检测平台测量时，将样品直接滴加在检测平台上，仪器即可自动完成整个检测过程，如果需要，样品还可回收。该仪器可准确测量0.32L的微量样品，且重复性好。对于浓度低

6、、易挥发或者表面张力比较低不易形成液柱的样品，可以使用比色皿进行测量。开机后，仪器无需预热，即可直接进行测量，操作简单，快捷，且软件可以直接给出浓度值。K5600超微量分光光度计可以测量未经稀释的高浓度样品，测量浓度范围可达普通分光光度计测量浓度范围的50倍。此外，仪器体积小（外形尺寸：24cm21cm11cm），质量轻（净重：1.92kg）。原理该仪器进行样品浓度测定的原理是根据朗伯-比尔（Lambert-Beer）定律,A = b c其中，A 为物质的吸光度， 为物质的摩尔吸光系数，b 为光路长度，c 为物质的摩尔浓度。仪器应用范围K5600超微量分光光度计可用于测量：核酸：核酸样品的浓度

7、和纯度，包括双链DNA，单链DNA，RNA。蛋白质：A280测蛋白质样品浓度，包括1Abs = 1mg/mL，BSA，IgG，Lysozyme；试剂盒法（Lowry法、BCA法、Bradford法）测定蛋白质浓度，软件自动绘制标准曲线，且直接给出浓度值。常规紫外/可见全波长扫描：可进行紫外/可见全波长（200850nm）扫描。细胞溶液：细胞溶液密度的测定。微阵列样品：可同时检测核酸及染料浓度，且直接给出浓度值。2 安装2.1 端口连接用USB连接线连接K5600超微量分光光度计的USB接口和电脑的USB接口。将适配器与电源连接线相连，并与电源插座相连。确保在开关关闭的情况下（开关按钮未按下的状

8、态）将电源连接至分光光度计电源插孔。2.2 安装环境要求软件要求：Microsoft Windows 2000或XP及以上操作系统 Microsoft Office 2000及以上办公软件 Adobe Reader 7.0以上版本硬件要求：CPU：Intel Pentium III 800MHz及以上 内存：256MB及以上硬盘：空闲空间50MB以上USB接口：2.0以上2.3辅助软件安装插入K5600软件光盘。双击光盘目录，打开Setup文件夹。点击安装Java软件，出现如下对话框，选择“我接受该许可证协议中的条款”，点击“下一步”。选择“典型安装”，点击下一步，开始安装Java软件。2.4

9、软件安装点击安装K5600软件，出现如下对话框，点击“Next”。输入序列号，点击“Next”。点击“Next”，点击“Install”开始安装。待安装结束后点击“Finish”按钮完成安装。电脑桌面上将自动形成K5600图标。2.5 驱动程序安装正确的连接设备后，Windows会自动扫描新硬件并提示：“发现新硬件”。Windows自动打开硬件安装向导，此时选择“自动安装软件”，如下图示：点击“下一步”，进行安装。待安装完成后，出现下图所示对话框，单击“完成”，完成硬件安装。此时，Windows提示新硬件已安装并可以使用了。以下我们分两部分介绍K5600超微量分光光度计的基本操作、工作界面和样

10、品测量：第部分：检测平台测量模块第部分：比色皿测量模块第部分：检测平台测量模块3 基本操作3.1 样品剂量要求（推荐）：核酸溶液： 0.32L蛋白质溶液： 2LLowry, BCA, Bradford： 2L细胞溶液： 2L其他样品： 2L 3.2 测量步骤3.2.1 开机 （1）正确连接K5600超微量分光光度计和电脑的USB连接线。（2）正确连接K5600超微量分光光度计和电源适配器的连接线。（3）打开K5600超微量分光光度计的电源开关，开关指示灯变亮。（4）检查检测平台是否干净，否则用干净的吸水纸将上下基座擦干净，然后放下取样臂，使其处于闭合状态。（5）检查暗室内是否有比色皿，在使用检

11、测平台测量时，暗室内不要放比色皿。（6）双击K5600.exe图标，打开K5600测量软件。（7）此时出现如下界面让您选择“Test using slit”(使用检测平台测量)或“Test using cuvette”(使用比色皿测量)，请选择“Test using slit”(使用检测平台测量)。（8）此刻跳出如下对话框，如果仪器与电脑已正确连接，取样臂处于闭合状态，检测平台也是干净的，请点击“确定”，进入下一步。否则，点击关闭按钮，关闭仪器开关，重复步骤（1）-（8）。（9）在软件打开的过程中，将出现如下图片，（10）仪器开始进行自检。当自检结束后，上面的图片会消失，并进入K5600的检测

12、平台测量界面如下，3.2.2 空白对照（1）首先，在测量类型选项区选择正确的测量类型。（2）测量样品之前，要先做一个空白对照。每当重新选择测量类型进行样品测量之前，也要做空白对照。（3）打开取样臂，用移液枪吸取0.32L样品溶剂滴加到检测平台上。（4）合上取样臂，液柱会在上下基座之间自动形成。（5）点击测量功能区的“Blank”按钮，软件会对溶剂自动进行测量，并自动记录空白值。（6）打开取样臂，用干净的吸水纸将上下基座上的空白对照溶剂擦干净。3.2.3 样品测量（1）打开取样臂，用移液枪吸取0.32L待测样品滴加到检测平台上。（2）合上取样臂。（3）点击“Measure”按钮，软件将对样品自动

13、进行检测。（4）数秒后，样品的测量结果（数据值和图形）将出现在工作界面上。 如果您觉得结果有问题或扫面曲线不正常，原因可能是样品没有形成液柱，或者空白对照做得不好。请检查样品液柱是否形成，重新测量样品，或者重新测量空白对照，然后再测样品。（5）当一个样品测量完后，如果想保存图形，请点击“Save Graph”按钮。（6）打开取样臂，用干净的吸水纸将上下基座上的空白对照溶剂擦干净。3.2.4 结果输出全部样品测定结束后，点击“Show Report”按钮，已测定的数据结果将出现在Excel表中。4工作界面介绍 打开K5600软件，进入K5600超微量分光光度计的工作界面如下：为了便于介绍，我们将

14、工作界面分为五部分：菜单栏、测量类型选项区、图形显示区、数据显示区和测量功能区。下面我们对这五部分逐一进行介绍。4.1 菜单栏菜单栏中有“File”，“View”，“Tool”和“Help”四个主菜单。File：“File”主菜单下有一个“Exit”菜单，点击“Exit”菜单将会退出程序。View：“View”主菜单下含有“Auto Scale”，“Multi Draw”，“Show Grid”和“Color Solution”四个子菜单。点击“Auto Scale”菜单可调整Y轴范围大小。点击“Auto Scale”会出现下面的对话框，用户可从这里输入Y轴最大值来调整Y轴范围，使图形在图形显

15、示区内显示最佳效果。其默认设置是根据样品自动调节Y轴。点击“Multi Draw”菜单会同时显示前几次测量的样品的波形，用户可以由此比较相同样品的重复性或不同样品的变化。点击“Show Grid”菜单将会出现背景网格或取消背景网格。 点击“Color Solution”菜单会弹出一个“Color Solution”对话框，可对图形显示区的颜色进行更改，如背景、测量线、扫描曲线等。但是，测量线和扫面曲线的颜色一定不要跟背景颜色一样。Tool： “Tool”主菜单下含有 “Check Calibration”和“Dye Editor”子菜单。点击“Check Calibration”菜单会出现一个

16、“Check Calibration”对话框，点击“UV”可检测紫外光光强，点击“VIS”可检测可见光光强。 点击“Dye Editor”，会弹出荧光染料信息表，包括荧光染料的吸光系数、吸收波长和260nm和280nm处的修正百分数。Help： “Help”菜单将会解决您在软件使用中出现大部分问题。该菜单下有“About”和“Help”两个子菜单。“About”是关于K5600的产品说明，如果您发现软件出现异常错误或终止运行，您可以在此菜单的对话框下点击Email地址直接发送Email至我们的工程师。当然您也可以通过点击Web地址来访问我们的网页。点击“Help”子菜单将会打开K5600超微量

17、分光光度计的使用说明书。4.2 测量类型选项区测量类型选项区有“Nucleic Acid”，“Protein”，“UV-VIS”，“Cell Culture”，“Micro Array”和“Sample &Test Type”六项可供选择，其中“Sample &Test Type”是对前面五项的补充。用户可根据待测样品的类型来选择正确的测量类型。Nucleic Acid：该类型用于测量核酸，这时，“Sample &Test Type”中又有“DS-DNA”，“SS-DNA”和“RNA”三个类型可供选择，可分别用来测量双链DNA、单链DNA和RNA的浓度和纯度。Protein：该类型用于测量蛋白

18、质，点击该项进入蛋白质测量界面，这时，“Sample &Test Type”中又有“A280”，“BSA”，“IgG”，“Lysozyme”，“Labels”，“BCA”、“Bradford”和“Lowry”8种类型可供选择。“A280”用于测量浓度为1mg/mL，光程为10mm时，吸光度约为1.0的蛋白质。BSA、IgG、Lysozyme分别用于测量牛血清白蛋白、免疫球蛋白G和溶菌酶。“BCA”，“Bradford”和“Lowry”为试剂盒法测定蛋白质浓度，本软件设计了自动绘制标准曲线的程序，测量完标准蛋白质后，点击Standard，软件会自动绘制标准曲线，当您再测量样品时，浓度显示栏会自动

19、显示出样品浓度。UV-VIS：该类型可进行紫外/可见全波长扫描，该功能是K5600超微量分光光度计具有普通紫外可见分光光度计功能的体现，波长扫描范围为200nm850nm，有0.2mm和1mm两个光程可选。Cell Culture：可测量细胞悬浮溶液的密度，检测波长范围为200nm 850nm，光程为固定光程1mm。Micro Array：该类型是专为检测微阵列实验中染料标记效率而设计，在测量核酸浓度的同时，可以测量标记的染料的浓度，即用260nm光吸收对核酸进行定量，同时由荧光探针的最大吸收峰得出染料的浓度，可测的核酸包括双链DNA、单链DNA和RNA，本软件为您提供了常用的10种染料。4.

20、3 图形显示区图形显示区显示扫描曲线，如下图所示， 图中有紫色、黄色和蓝色三条垂直测量线，对应的波长分别为数据显示区的Xa Pos，Xb Pos和Xc Pos，对应的吸光度数值分别为数据显示区中的xa Value，xa Value和xc Value。 将鼠标移动到测量线附近，鼠标指针会变为一个左右向的箭头，按下鼠标左键，慢慢拖动鼠标，测量线和测量值将会随着鼠标的拖动而变化。修改Xa Pos，Xb Pos和Xc Pos的值，若其值在波长可显示的范围内，则测量线会移动到相对应的波长处，同时测量其对应波长处的吸光度。测量完一个样品后，图形显示区会出现一条样品吸光度随波长变化的扫描曲线，如图中红色曲线

21、。用“UV-VIS”进行全波长扫描时，如果1mm和0.2mm两个光程都被选中，则图形显示区会出现分别与1mm和0.2mm两个光程对应的2条曲线。4.4 数据显示区数据显示区显示波长、吸光度、样品浓度及其他。 X Value 的吸光度值分别对应X Pos和图形显示区中的测量线。260/280为样品在波长为260nm和280nm处的吸光度的比值，用于评价核酸的纯度，ng/L 显示样品的浓度，测蛋白时单位为mg/mL。4.5 测量功能区测量功能区有5个按钮：“measure”, “Blank”, “Save Graph”, “Show Report” 和“View History Data”。Bla

22、nk按钮用来测量和保存空白对照，测量样品前要先测空白对照。Measure在测量完空白对照后被激活，可以用来测量样品。在测量空白对照之前，Measure按钮处于未激活状态。Save Graphic按钮可保存扫描图形。Show Report 的功能是以Excell的形式出去测量结果。View History Data的功能是能够浏览以前检测过的样品的测量结果。另外，工作界面的右上方的“Sample Name”栏可以输入样品的名称，“Sample ID”栏可以输入样品的编号，只能输入数字和字母，当不输入任何值时，每测量一个样品，软件会自动增加一。5 样品测量5.1核酸的测量K5600超微量分光光度计

23、可以测量核酸样品的浓度，评价核酸的纯度。由于核酸在波长260nm处对紫外光有最高吸收峰，通过测量核酸样品在260nm的吸光度，软件通过浓度计算公式（朗伯-比尔定律），可以直接给出核酸样品的浓度，并且参考A260/A280和A260/A230的比值，可以评价核酸样品的纯度。5.1.1 样品剂量要求体积（推荐）：0.32L5.1.2 测量范围DS-DNA： 23700ng/L SS-DNA： 22400ng/L RNA： 23000ng/L 重复性（SD= ng/L；CV= %）： 样品范围 2100 ng/L： 2ng/L 样品范围 100 ng/L： 25.1.3测量界面打开K5600软件，软

24、件的默认界面即核酸测量界面如下，测量类型点击“Sample & Test Type”，弹出一个下拉式列表，含有“DS-DNA”，“SS-DNA”，“RNA”三个类型选项，分别用于测量双链DNA、单链DNA和RNA样品。波长及吸光度图形显示区的粉色、黄色和蓝色测量线对应的波长分别为数据显示区的Xa Pos（230），Xb Pos（260）和Xc Pos（280），对应的数值分别为数据显示区中的Xa Value，Xb Value和Xc Value。即，Xa Value，Xb Value和Xc Value的值分别为样品在230nm，260nm和280nm处的吸光度（光程为10mm）。260/2802

25、60nm与280nm处的吸光度的比值用来评价DNA和RNA的纯度，纯的DNA，A260/A280比值约为1.8，纯的RNA该比值约为2.0，如果测得的比值低，则说明样品可能受到污染。A260/A230260nm与230nm处的吸光度比值也可以用来评价DNA和RNA的纯度，一般来说，纯的核酸，A260/A230比值约为2.0，如果比值明显低于2.0，则说明样品可能受到污染。测量结果每测量完一个样品，工作界面右下角的ng/L一栏会显示样品的浓度值，单位为ng/L。5.1.4 测量步骤详细测量步骤请参考 (4.2)。（1）点击“Sample & Test Type”，选择要测量的核酸的类型“DS-DNA”，“SS-DNA”或“RNA”，如果待测样品为双链DNA，则选则DS-DNA。（2）先用溶解核酸的溶剂做空白对照，将溶剂滴加到检测平台上，点击测量功能区的“blank”按钮，程序会自动记录空白值。（3）用干净的吸水纸擦去检测平台上的溶剂。（4）将样品滴加到检测平台上，点击“Measure”按钮。（5）数秒后显示检测结果（数值和图形）。核酸典型的吸收光谱图如下，（6）如果要保存图形，请在测量完一个样品后点击“Save Graph”按钮。（7）当所有的双链DNA样品测量结束后，点击“Show Report”按钮，测量数据将以Excel表格输