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1、最新16免疫分析仪器汇总16免疫分析仪器第十六章 免疫分析仪器* 免疫分析法：应用不同的标记物，以抗原抗体相互结合为基础的免疫学测定方法。* 类型：(1)用酶作标记物，称为酶免疫分析法。 (2)以化学发光物质作标记，为化学发光免疫分析法。 (3)用放射性核素作标记物，称为放射免疫分析法。第一节 酶标分析仪一、酶免疫分析法 * 分类：有两种类型。(1)均相酶免疫测定：主要用于药物测定。(2)非均相酶免疫测定：也叫酶联免疫吸附测定(ELISA)，常用于医学检验。二、酶标仪的工作原理及结构(1)微机：可通过控制电路控制微孔板在X和Y方向的移动。(2)微孔板：是一透明塑料板，板上有装载待测样品的多排小

2、孔。1、原理：采用比色法。光源光线经滤光片后成单色光，射入微孔板中待测样品后被吸收掉一部分，透射光到达光电检测器，经放大及模数转换后，送入微机处理、显示和打印结果。2、光路系统：光源发出的光，经聚光镜、光栏、到反射镜作900反射后，垂直通过比色溶液，然后经滤光片到达光电管。3、酶标仪和光电比色计的不同点： 两者都用比色法测定，不同点为(1)装载比色液的容器不是比色皿，而是塑料微孔板。(2)光束垂直通过待测液即微孔板。(3)通常不用吸光度A而是用光密度OD表示。4、酶标仪类型：有两种。(1)单通道：分自动型和手动型。(2)多通道：均为自动型，特点是检测速度快。三、EL312E型酶标仪简介 是美国

3、BIO-TEK公司的产品。 1、光学系统原理：采用比色法。滤光片类型为后密封式干涉滤光片，半通带宽度10nm；比色板为标准96孔板。2、技术指标：如表。四、半自动微孔板式ELISA分析仪结构 在酶标仪的基础上再配置加液器、温育器、洗板机、测读仪。测定中需由手工将微孔板移至下一步骤的仪器中进行。五、全自动微孔板式ELISA分析仪结构 自动化酶免疫分析系统由 加样系统、温育系统、洗板系统、判读系统、机械臂系统、液路动力系统、软件控制系统等组成第二节 化学发光免疫分析仪* 发光剂：指能产生化学发光反应的物质，也叫发光底物。一、化学发光免疫分析法1、概念：利用化学发光作为抗原抗体反应的指示系统，用于定

4、量检测抗原或抗体的方法。2、类型：有化学发光标记免疫测定和化学发光酶免疫测定两种。* 发光现象：指物质分子吸收能量后跃迁到激发态，当激发态分子返回基态时，以发射可见光的形式释出能量的现象。* 化学发光：是指由化学反应产生的发光现象。二、 ACS-180SE全自动化学发光免疫分析仪简介： 由德国拜耳(BaYer)公司生产。(一)性能特点：(1)检测灵敏度高，达10-15g/ml。 (2)分析速度快，达180个测定/hr，并可同时完成13个项目。 (3)采用两点定标法，节省时间和试剂消耗。(二)仪器测定原理 利用化学反应和免疫反应相结合的原理和方法，采用微量倍增技术，因而灵敏度很高。 * 选用的化

5、学发光剂为吖啶酯。(三)仪器结构： 包括主机和微机两部分，外观如图。1、主机： 包括原材料配备、液路、机械传动、光路检测等部分。2、微机系统： 功能有程控操作、自动监测、指示判断、数据处理、故障诊断等。第三节 放射免疫测定仪器一、放射免疫分析概述：1、历史： 1959年：美国学者Berson和Yalow，用131I作示踪，首次创立血浆微量胰岛素的测定方法。定名为放射免疫分析(RIA)。 1977年：获诺贝尔生物医学奖。2、特点： 放射免疫具有高特异和高灵敏两个基本特点。(1)高特异：即用特异的抗体取代了化学试剂，不再是针对物质的局部基团，具有很高特异性。(2)高灵敏：是指创造性地应用了放射性核

6、素示踪技术，具有很高灵敏度。3、设备类型： 标记的核素分两类，发射g射线的核素用g仪测量。发射能量较低的b射线的核素用b仪测量。二、放射性核素的基本概念* 核素：指有确定质子数和中子数的原子核所对应的原子统称。核素有1900多种，其中279种是稳定的，其余都是不稳定的，会发生衰变并放射出射线，故称为放射性核素。* 同位素：质子数相同而中子数不同的一类核素。* 同质异能素：核内中子数和质子数都相同，但原子核所处能量状态不同的核素。(一)放射性核素衰变方式1、a衰变：原子核放出a粒子(氦核)而衰变为另一种原子核的过程。2、b衰变：有两种。(1) b-衰变：原子核内放射出电子和反中微子的衰变。(2)

7、 b+衰变：原子核内放射出正电子和中微子的衰变。3、电子俘获：原子核俘获一个核外电子，使核内一个质子转变为中子，同时发射一个中微子的过程。4、g跃迁：放射性核素从激发态跃迁到能量较低状态，并发射g光子的过程。(二)放射性衰变规律1、放射性活度A：指单位时间内发生衰变的原子核数。 l为衰变常数，N为t时刻的原子核数，则：A=lN 2、半衰期T1/2：样品中的放射性原子衰变掉一半所需的时间。公式：T1/2=ln2/l3、设A0和A为t=0和t时的放射性活度，则：A=A0e-lt(三)放射性活度的单位1、SI制：Bq(贝克) 1Ci=3.71010Bq2、比放射性：指单位质量物质所含的放射性活度，B

8、q/mg。3、放射性浓度：指单位体积物质所含的放射性活度，Bq/ml。(四)放射性活度的检测原理：闪烁体NaI单晶，在g线作用下产生光辐射，再由光电倍增管接收并转成电信号计数。1、g射线的测量：用g闪烁计数器(g仪)。2、b射线的测量：用液体闪烁计数器(b仪)。液体闪烁测量原理，也是将射线与闪烁体的作用产生转换成光脉冲，再转成电信号而计数。 * 为何b放射源要置于闪烁液中？ 因低能b线穿过物质时，易受原子中正负电荷的影响，使其穿透力减弱，故将b放射源置于闪烁液中，使射线直接被闪烁液吸收，以提高其探测效率。三、液体闪烁计数器(b仪) 适用于3H、14C等低能b射线及a射线的辐射探测。 (一)液体

9、闪烁计数器结构1、基本电路：主要由双管快符合、相加电路、线性门电路及多道脉冲幅度分析器等组成。2、自动换样器：样品传送机构有传送带、升降机、轮盘等。3、微机操作系统：可作工作条件选定，各种因素的校正等。 (二)液体闪烁计数器的使用与调试1、样品-闪烁液反应体系建立：将样品-闪烁液按一定比例装入测量瓶即可。(1)闪烁液：由溶剂、溶质组成。常用溶剂有甲苯和二氧六环等.(2)测量瓶：规格容量为20ml，口径为22mm。(3)样品：根据样品的可溶性，作不同的处理。含水量较高的溶液多用二氧六环作溶剂。2、猝灭：指样品、氧气、水及色素等加入闪烁体后，闪烁体的荧光效率会降低，能量衰减，从而使探测效率下降的现

10、象。3、计数效率测定：液闪仪是通过待测样品与标准样品的计数率比较来测定放射性的。因两者猝灭情况不同，故需作校正。 * 常用校正法有内源法、外源法及道比法等。目前多用外部标准源校正法，可方便仪器自动化猝灭校正。(三)液体闪烁技术的应用： 医学检验中，液闪仪可作多种标记物竞争性结合放射分析，以及作体液构成成分的检查等。例：利用液体闪烁计数法可检查人体的水分含量及各种电解质含量。 * 方法：是根据放射性同位素的稀释原理，通过放射性标记物在体内的交换量的测定，从而得知相对体液构成成分的量。四、晶体闪烁计数器(g放射免疫计数仪) 用于测量125I、131I等核素发射的g射线。(一)仪器组成及工作原理：1

11、、闪烁体：指射线通过后可产生闪光的荧光物质。 常用的有无机闪烁体、有机闪烁体及特殊闪烁体等。(1)有机闪烁体：常由两种以上有机物如蒽、芪等混合而成。(2)无机闪烁体：有碱金属卤化物闪烁体，ZnS(Ag)晶体等。(3)其它：有玻璃闪烁体、气体闪烁体等，医学中应用不多。2、光电倍增管：作用是把闪烁体发出的极弱闪光转换成电信号。其结构包括光阴极、光电转换、电子倍增及阳极所组成。* 光电倍增管原理：(1)光阴极：有光敏层，能高效地把入射光子转换成低能电子。(2)打拿极：级联的十几个打拿极受到加速的低能电子轰击，从表面倍增地发出次级电子，最后到达阳极。(3)阳极：收集由最后一级打拿极发来的电子，并输入电

12、子线路。* 然后信号送入甄别器；3、多道脉冲分析器(1)脉冲高度分析器原理：如图，由比例放大器、两个甄别器和一个反符合电路三部分组成。* 介于U和U+DU送入反符合电路；产生一个脉冲计数，否则电路无脉冲输出。* U称阈电压， DU称窗电压或窗宽。* 光电倍增管产生的信号输入到比例放大器放大；(2)多道分析器：由模-数变换器和存储器两部分组成。 进入分析器的所有脉冲、按幅度大小安排在不同存储单元独立计数。各计数器再记录每一顺序时间段的总计数，从而完成多路定标的脉冲高度多道分析。(3) g能谱分析： g射线通过光电吸收、康普顿散射、电子对产生三种机制与物质发生作用；作用时损失的能量记录在能谱仪中。

13、* 能谱的横坐标为脉冲高度，纵坐标为各个脉冲高度的频数。能谱曲线的峰面积和g射线的强度成正比。* g能谱分析就是根据能谱中各峰的面积、位置等来测定样品中放射性的组成和含量。(二)FJ-2008g-辐射免疫计数器简介1、仪器工作原理：* 探测元件：为掺少量Tl的NaI晶体。* 样品位于NaI晶体井内，晶体吸收125I释放的g射线能量后，发出一光脉冲射到光电倍增管，经光电转换和逐级放大，最后获得一电脉冲信号。2、仪器结构：由采样和数据处理两大部分组成。(1)采样：由探头、换样装置、高低压电源、放大器等组成。(2)数据处理：由接口、计算机、输入输出装置等组成。3、仪器使用注意事项(1) g仪效率一般应大于70。(2) 防止探头的NaI晶体碰坏或受潮。 (三) g计数器的临床应用1、可做体外样品的放射性检测。2、中子活化分析：指稳定同位素经中子活化后、产生的放射性同位素，可通过g能谱分析装置测定其化学成分。3、闪烁扫描及照相：称为g相机，又叫SPECT(或ECT)。是一种在体外的新型检查手段，用于对放射性示踪剂在体内的分布及转移作描记。* 思考测试题：1. 简述酶免疫分析法和酶标仪的工作原理，以及酶标仪和光电比色计对比的异同点。2. 液体闪烁计数仪和晶体闪烁计数仪由哪几部分组成？技术上各有何特点？