整理双抗原夹心ELISA方法检测艾滋病病毒抗体标准操作规程.docx

1、整理双抗原夹心ELISA方法检测艾滋病病毒抗体标准操作规程八五三农场职工医院检验科文件编号：BWS-07-01-001 作业指导书 第 1 页 共 3 页第 3 版 第 0 次修订文件名称：双抗原夹心ELISA方法检测艾滋病病毒抗体标准操作规程实施日期：2007-7-11双抗原夹心ELISA方法检测艾滋病病毒抗体标准操作规程1、目的规范抗-HIV抗体检测操作程序。2、适用范围 本实施细则使用于对人类血清或血浆中艾滋病毒抗体的初筛检测。3、原理 采用夹心ELISA方法检测血清或血浆样品中人类免疫缺陷病毒HIV（1+2型）抗体，预包被高纯度重组HIV（1+2型）抗原，待检血清中的抗HIV抗体与包被

2、抗原反应，再与酶标HIV-1+2型抗原结合，形成抗原-抗体-酶标抗原复合物，加底物（TMB）显色，在酶标仪上测定OD值，根据OD值判定有无HIV抗体的存在。4、环境条件 室温18-25。室内相对湿度30-605、试剂与材料5.1、吸水纸；5.2、说明书1份；5.3、HIV抗原包被板1块，每板12条，每条8孔；5.4、HIV酶标抗原工作液1瓶；5.5、50倍浓缩洗液1瓶；5.6、HIV阳性对照（已灭活）1支；5.7、HIV阴性对照1支；5.8、底物液A 1瓶；5.9、底物液B 1瓶；5.10、终止液1瓶；5.11、封口胶2张；5.12、塑料袋1个；5.13、（新鲜）蒸馏水或去离子水；5.14、一

3、次性V型水槽；5.15、一次性瓶（塑料），用于准备TMB底物液；5.16、一次性乳胶手套；5.17、记时器；5.18、5次氯酸钠或其他认可消毒液；5.19、适用盛装有可能受污染的物品的容器；5.20、尿过氧化物溶液2瓶，每瓶11ml。6、仪器6.1、酶标仪；6.2、水浴箱（35-39）；6.3、离心机；6.4、洗板机；八五三农场职工医院检验科文件编号：BWS作业指导书第 2 页 共 3 页第 3 版 第 0 次修订文件名称：双抗原夹心ELISA方法检测艾滋病病毒抗体标准操作规程实施日期：2007-7-116.5、打印机。7、操作步骤7.1、使用前将试剂盒从冰箱中取出平衡至室温，取出所须板条，剩

4、余的及时封存放回冰箱。7.2、每次实验均须设立空白对照孔2孔，不加样品和酶结合物，只加底物和终止液；抗-HIV阳性对照孔3孔，每孔50或100l。7.3、其余各孔加待检测标本50或100l。7.4、覆盖粘胶纸，置37孵育30或60分钟。7.5、将50倍浓缩洗液用纯化水50倍稀释后备用。7.6、取出已孵育完毕的反应板，弃去粘胶纸，放入洗板机中，吸干板内液体，将洗涤液注满酶孔（约300l/孔），吸干，反复5次，在干净纱布上将板拍干。7.7、除空白孔外，每空加入酶标抗原工作液50或100l，贴上封口胶。37温育20或30分钟。7.8、洗涤同步骤7.6。7.9、每孔加入底物缓冲液A50l、TMB B5

5、0l，混匀，置37显色10分钟。7.10、加终止液50l振荡反应板5秒种，使之充分混匀。7.11、在酶标读数仪中，取波长450nm（建议使用双波长酶标仪比色，参考波长630nm），以空白对照孔校零，读取每孔吸收值（加终止液后，务必在15分钟内读数完毕）。8、质量控制与评价8.1、抗HIV阳性对照OD值0.8，抗HIV阴性对照OD值0.08或0.12。8.2、阳性对照OD值有效范围：0.50。8.3、阴性对照OD值有效范围：0.10。8.4、阴、阳性对照和被检样本的OD值减去空白对照OD值即为计算值。8.5、临界值（CUT OFF）=0.10或0.15+阴性对照OD均值。8.6、样品OD值临界值

6、者为HIV抗体阳性，初试阳性应重新取样双孔复试，复试阳性者应按照“全国HIV检测管理规范”送“HIV确认实验室”进行确认实验。8.7、样品OD值临界值者为HIV抗体反应阴性。8.8、阴性对照值若小于0.02，以0.02计算。8.9、被检样本的OD值临界值判为HIV抗体阳性。8.10、每次实验必须做外部质控。8.11、质控血清有明确的标记，保存-20以下。9、说明9.1、本试剂的使用单位必须是经当地卫生部门批准的HIV初筛实验室。9.2、整个检测工作必须符合HIV实验室管理规范和生物安全守则规定，严格防止交叉感染。9.3、标本和酶结合物均应加样器加注，并经常校对其准确性。9.4、所有样品、洗弃液

7、和各种废弃物都应按传染物处理。9.5、洗涤液若出现结晶，可置37溶解。9.6、粘胶纸不能反复使用。9.7、微孔条从冷藏环境中取出时，应在室温平衡至无潮气方可使用，未用完的须放入有干燥剂的密封袋中保存。八五三农场职工医院检验科文件编号：BWS作业指导书第 3 页 共 3 页第 3 版 第 0 次修订文件名称：双抗原夹心ELISA方法检测艾滋病病毒抗体标准操作规程实施日期：2007-7-119.8、洗涤时各孔须加满液体，防止孔口有游离酶不能洗净。使用洗板机洗涤应设定30-60秒浸泡时间。9.9、HIV检测结果的判定必须以酶标仪的读数为准。建议用双波长450/630nm检测。9.10、不同批号的试剂

8、组不可混用。10、方法编写依据10.1、GB16000-1995。10.2、全国艾滋病检测技术规范。10.3、科华、吉比爱、梅里埃、万泰、丽珠HIV1+2抗体诊断试剂使用说明书。编写： 审核： 批准：批准日期： 年 月 日 实施日期： 年 月 日八五三农场职工医院检验科文件编号：BWS-07-01-001 作业指导书 第 1 页 共 2 页第 3 版 第 0 次修订文件名称：酶联免疫法ELISA方法检测乙型肝炎表面抗原标准操作规程实施日期：2007-7-11 酶联免疫法ELISA方法检测乙型肝炎表面抗原标准操作规程1、目的规范乙型肝炎表面抗原检测操作程序。2、适用范围 本实施细则使用于对人类血

9、清或血浆的乙型肝炎表面抗原初筛检测。3、原理 采用单克隆抗-HBs包被反应板，加入待测标本，同时加入多克隆抗-HBs-HRP，当标本中存在HBsAg时，该HBsAg与包被抗-HBs结合并与抗-HBs-HRP结合形成抗-HBs-HBAg-抗-HBs-HRP复合物，加入TMB底物产生显色反应，反之则无显色反应。 4、环境条件 温18-25。室内相对湿度30-605、试剂与材料5.1、吸水纸；5.2、说明书1份；5.3、HBsAg包被板1块，每板12条，每条8孔；5.4、HBsAg酶标抗体工作液1瓶；5.5、25倍浓缩洗液1瓶；5.6、HBsAg阳性对照（已灭活）1支；5.7、HBsAg阴性对照1支

10、；5.8、显色剂A 1瓶；5.9、显色剂B 1瓶；5.10、终止液1瓶；5.11、封口胶2张；5.12、（新鲜）蒸馏水或去离子水；5.13、一次性V型水槽；5.14、一次性瓶（塑料），用于准备TMB底物液；5.15、一次性乳胶手套；5.16、记时器；5.17、5次氯酸钠或其他认可消毒液；5.18、适用盛装有可能受污染的物品的容器；5.19、尿过氧化物溶液2瓶，每瓶11ml。6、仪器6.1、酶标仪；6.2、水浴箱（35-39）；6.3、离心机；6.4、洗板机；6.5、打印机。八五三农场职工医院检验科文件编号：BWS作业指导书第 2 页 共 2 页第 3 版 第 0 次修订文件名称：酶联免疫法EL

11、ISA方法检测乙型肝炎表面抗原标准操作规程实施日期：2007-7-117、操作步骤7.1、使用前将试剂盒从冰箱中取出平衡至室温，取出所须板条，剩余的及时封存放回冰箱。7.2、每次实验均须设立空白对照孔1孔，不加样品和酶结合物，只加底物和终止液；每孔加入阴性对照（或阳性对照）各50ul（或1滴）。7.3、其余各孔加待检测标本50ul。7.4、每孔加入酶结合物50ul（或1滴）充分混匀，覆盖粘胶纸，置37孵育30分钟。7.5、将蒸馏水作25倍稀释后备用。7.6、取出已孵育完毕的反应板，弃去粘胶纸，放入洗板机中，吸干板内液体，将洗涤液注满每孔（约300l/孔），吸干，反复5次，在干净纱布上将板拍干。

12、7.7、每孔加显色剂A液、B液各50ul（或1滴），充分混匀，贴上封口胶。37温育15分钟。7.8、每孔加入终止液50l（或1滴），振荡反应板5秒钟，使之充分混匀。7.9、在酶标读数仪中，取波长450nm（建议使用双波长酶标仪比色，参考波长630nm），先以空白对照孔校零，读取每孔OD值（加终止液后，务必在15分钟内读数完毕）。8、质量控制与评价8.1、HBsAg阳性对照OD值2.1，HBsAg阴性对照OD值2.1。8.2、阳性对照OD值有效范围：2.1。8.3、阴性对照OD值有效范围：0.05。8.4、阴、阳性对照和被检样本的OD值减去空白对照OD值即为计算值。8.5、阴性对照值若小于0.0

13、5，以0.05计算。9、注意事项9.1、从冷藏环境中取出的试剂盒内全部瓶装试剂及待测标本所需微孔反应条应置37平衡30后方可使用，余者应及时封存于冰箱中以备后用。在平衡试剂的同时，待测标本需室温平衡30分钟后再行测试。9.2使用前试剂应摇匀，并弃去12滴后垂直滴加。3、封片不能重复使用。4、结果判断须在反应终止后10分钟内完成。5、不同批号试剂不可混用。6、待测标本不可用NaN3防腐。7、本试剂盒应视为有传染性物质，请按传染病实验室检查规程处理。10、贮存条件和有效期试剂盒应置28中避光保存，有效期十二个月。国药准字S1*（48人份） 国药准字S1*（96人份）10、方法编写依据10.1、GB

14、16000-1995。10.2、全国临床检验操作规程。10.3、科华、吉比爱、梅里埃、万泰、丽珠HBV抗体诊断试剂使用说明书。编写： 审核： 批准：批准日期： 年 月 日 实施日期： 年 月 日八五三农场职工医院检验科文件编号：BWS-07-01-001 作业指导书 第 1 页 共 2 页第 3 版 第 0 次修订文件名称：酶联免疫法ELISA方法检测乙型肝炎表面抗体标准操作规程实施日期：2007-7-11酶联免疫法ELISA方法检测乙型肝炎表面抗体标准操作规程1、目的规范乙型肝炎表面抗体检测操作程序。2、适用范围 本实施细则使用于对人类血清或血浆的乙型肝炎表面抗体初筛检测。3、原理 采用纯化

15、单克隆HBsAg包被反应板，加入待测标本，同时加入HBsAg-HRP，当标本中存在抗-HBs时，该抗-HBs与包被HBsAg结合并与酶结合物结合形成HBsAg复合物，加入TMB底物产生显色反应，反之则无显色反应。 4、环境条件 温18-25。室内相对湿度30-605、试剂与材料5.1、吸水纸；5.2、说明书1份；5.3、抗-HBs包被板1块，每板12条，每条8孔；5.4、抗-HBs酶标抗体工作液1瓶；5.5、25倍浓缩洗液1瓶；5.6、抗-HBs阳性对照（已灭活）1支；5.7、抗-HBs阴性对照1支；5.8、显色剂A 1瓶；5.9、显色剂B 1瓶；5.10、终止液1瓶；5.11、封口胶2张；5

16、.12、（新鲜）蒸馏水或去离子水；5.13、一次性V型水槽；5.14、一次性瓶（塑料），用于准备TMB底物液；5.15、一次性乳胶手套；5.16、记时器；5.17、5次氯酸钠或其他认可消毒液；5.18、适用盛装有可能受污染的物品的容器；5.19、尿过氧化物溶液2瓶，每瓶11ml。6、仪器6.1、酶标仪；6.2、水浴箱（35-39）；6.3、离心机；6.4、洗板机；6.5、打印机。八五三农场职工医院检验科文件编号：BWS-07-01-001 作业指导书 第 2 页 共 2 页第 3 版 第 0 次修订文件名称：酶联免疫法ELISA方法检测乙型肝炎表面抗体标准操作规程实施日期：2007-7-116

17、.5、打印机。7、操作步骤7.1、使用前将试剂盒从冰箱中取出平衡至室温，取出所须板条，剩余的及时封存放回冰箱。7.2、每次实验均须设立空白对照孔1孔，不加样品和酶结合物，只加底物和终止液；每孔加入阴性对照（或阳性对照）各50ul（或1滴）。7.3、其余各孔加待检测标本50ul。7.4、每孔加入酶结合物50ul（或1滴）充分混匀，覆盖粘胶纸，置37孵育30分钟。7.5、将蒸馏水作25倍稀释后备用。7.6、取出已孵育完毕的反应板，弃去粘胶纸，放入洗板机中，吸干板内液体，将洗涤液注满每孔（约300l/孔），吸干，反复5次，在干净纱布上将板拍干。7.7、每孔加显色剂A液、B液各50ul（或1滴），充分

18、混匀，贴上封口胶。37温育15分钟。7.8、每孔加入终止液50l（或1滴），振荡反应板5秒钟，使之充分混匀。7.9、在酶标读数仪中，取波长450nm（建议使用双波长酶标仪比色，参考波长630nm），先以空白对照孔校零，读取每孔OD值（加终止液后，务必在15分钟内读数完毕）。8、质量控制与评价8.1、抗-HBs阳性对照OD值2.1，抗-HBs阴性对照OD值2.1。8.2、阳性对照OD值有效范围：2.1。8.3、阴性对照OD值有效范围：0.05。8.4、阴、阳性对照和被检样本的OD值减去空白对照OD值即为计算值。8.5、阴性对照值若小于0.05，以0.05计算。9、注意事项9.1、从冷藏环境中取出

19、的试剂盒内全部瓶装试剂及待测标本所需微孔反应条应置37平衡30后方可使用，余者应及时封存于冰箱中以备后用。在平衡试剂的同时，待测标本需室温平衡30分钟后再行测试。9.2使用前试剂应摇匀，并弃去12滴后垂直滴加。3、封片不能重复使用。4、结果判断须在反应终止后10分钟内完成。5、不同批号试剂不可混用。6、待测标本不可用NaN3防腐。7、本试剂盒应视为有传染性物质，请按传染病实验室检查规程处理。10、贮存条件和有效期试剂盒应置28中避光保存，有效期十二个月。国药准字S1*（48人份） 国药准字S1*（96人份）10、方法编写依据10.1、GB16000-1995。10.2、全国临床检验操作规程。1

20、0.3、科华、吉比爱、梅里埃、万泰、丽珠HBV抗体诊断试剂使用说明书。编写： 审核： 批准：批准日期： 年 月 日 实施日期： 年 月 日八五三农场职工医院检验科文件编号：BWS-07-01-001 作业指导书 第 1 页 共 2 页第 3 版 第 0 次修订文件名称：酶联免疫法ELISA方法检测乙型肝炎e抗原标准操作规程实施日期：2007-7-11 酶联免疫法ELISA方法检测乙型肝炎e抗原标准操作规程1、目的规范乙型肝炎e抗原检测操作程序。2、适用范围 本实施细则使用于对人类血清或血浆的HBsAg初筛检测。3、原理 采用多克隆抗-HBe包被反应板，加入待测标本，同时加入单克隆抗-HBe-H

21、RP，如待测标本中含有HBeAg时就与包被抗-HBe、抗-HBe-HRP结合形成复合物，加入TMB底物产生显色反应，反之则无显色反应。 4、环境条件 温18-25。室内相对湿度30-605、试剂与材料5.1、吸水纸；5.2、说明书1份；5.3、抗-HBe包被板1块，每板12条，每条8孔；5.4、HBeAg酶标抗体工作液1瓶；5.5、25倍浓缩洗液1瓶；5.6、HBeAg阳性对照（已灭活）1支；5.7、HBeAg阴性对照1支；5.8、显色剂A 1瓶；5.9、显色剂B 1瓶；5.10、终止液1瓶；5.11、封口胶2张；5.12、（新鲜）蒸馏水或去离子水；5.13、一次性V型水槽；5.14、一次性瓶

22、（塑料），用于准备TMB底物液；5.15、一次性乳胶手套；5.16、记时器；5.17、5次氯酸钠或其他认可消毒液；5.18、适用盛装有可能受污染的物品的容器；5.19、尿过氧化物溶液2瓶，每瓶11ml。6、仪器6.1、酶标仪；6.2、水浴箱（35-39）；6.3、离心机；6.4、洗板机；6.5、打印机。八五三农场职工医院检验科文件编号：BWS-07-01-001 作业指导书 第 2 页 共 2 页第 3 版 第 0 次修订文件名称：酶联免疫法ELISA方法检测乙型肝炎e抗原标准操作规程实施日期：2007-7-117、操作步骤7.1、使用前将试剂盒从冰箱中取出平衡至室温，取出所须板条，剩余的及时

23、封存放回冰箱。7.2、每次实验均须设立空白对照孔1孔，不加样品和酶结合物，只加底物和终止液；每孔加入阴性对照（或阳性对照）各50ul（或1滴）。7.3、其余各孔加待检测标本50ul。7.4、每孔加入酶结合物50ul（或1滴）充分混匀，覆盖粘胶纸，置37孵育30分钟。7.5、将蒸馏水作25倍稀释后备用。7.6、取出已孵育完毕的反应板，弃去粘胶纸，放入洗板机中，吸干板内液体，将洗涤液注满每孔（约300l/孔），吸干，反复5次，在干净纱布上将板拍干。7.7、每孔加显色剂A液、B液各50ul（或1滴），充分混匀，贴上封口胶。37温育15分钟。7.8、每孔加入终止液50l（或1滴），振荡反应板5秒钟，使

24、之充分混匀。7.9、在酶标读数仪中，取波长450nm（建议使用双波长酶标仪比色，参考波长630nm），先以空白对照孔校零，读取每孔OD值（加终止液后，务必在15分钟内读数完毕）。8、质量控制与评价8.1、HBsAg阳性对照OD值2.1，HBsAg阴性对照OD值2.1。8.2、阳性对照OD值有效范围：2.1。8.3、阴性对照OD值有效范围：0.05。8.4、阴、阳性对照和被检样本的OD值减去空白对照OD值即为计算值。8.5、阴性对照值若小于0.05，以0.05计算。9、注意事项9.1、从冷藏环境中取出的试剂盒内全部瓶装试剂及待测标本所需微孔反应条应置37平衡30后方可使用，余者应及时封存于冰箱中

25、以备后用。在平衡试剂的同时，待测标本需室温平衡30分钟后再行测试。9.2使用前试剂应摇匀，并弃去12滴后垂直滴加。3、封片不能重复使用。4、结果判断须在反应终止后10分钟内完成。5、不同批号试剂不可混用。6、待测标本不可用NaN3防腐。7、本试剂盒应视为有传染性物质，请按传染病实验室检查规程处理。10、贮存条件和有效期试剂盒应置28中避光保存，有效期十二个月。国药准字S1*（48人份） 国药准字S1*（96人份）10、方法编写依据10.1、GB16000-1995。10.2、全国临床检验操作规程。10.3、科华、吉比爱、梅里埃、万泰、丽珠HBV抗体诊断试剂使用说明书。编写： 审核： 批准：批准

26、日期： 年 月 日 实施日期： 年 月 日八五三农场职工医院检验科文件编号：BWS-07-01-001 作业指导书 第 1 页 共 2 页第 3 版 第 0 次修订文件名称：酶联免疫法ELISA方法检测乙型肝炎e抗体标准操作规程实施日期：2007-7-11酶联免疫法ELISA方法检测乙型肝炎e抗体标准操作规程1、目的规范乙型肝炎e抗体检测操作程序。2、适用范围 本实施细则使用于对人类血清或血浆的乙型肝炎e抗体检测。3、原理 采用多克隆抗-HBe基因工程重组HBeAg包被反应板，加入待测标本，同时加入单克隆抗-HBeAg-HRP，与抗原形成竞争结合，如待测标本中抗-HBe含量高，则抗-HBe-H

27、RP与HBeAg结合少，加入TMB底物时显色淡，反之则无显色深。 4、环境条件 温18-25。室内相对湿度30-605、试剂与材料5.1、吸水纸；5.2、说明书1份；5.3、抗-HBe包被板1块，每板12条，每条8孔；5.4、抗-HBs酶标抗体工作液1瓶；5.5、25倍浓缩洗液1瓶；5.6、抗-HBs阳性对照（已灭活）1支；5.7、抗-HBs阴性对照1支；5.8、显色剂A 1瓶；5.9、显色剂B 1瓶；5.10、终止液1瓶；5.11、封口胶2张；5.12、（新鲜）蒸馏水或去离子水；5.13、一次性V型水槽；5.14、一次性瓶（塑料），用于准备TMB底物液；5.15、一次性乳胶手套；5.16、记

28、时器；5.17、5次氯酸钠或其他认可消毒液；5.18、适用盛装有可能受污染的物品的容器；5.19、尿过氧化物溶液2瓶，每瓶11ml。6、仪器6.1、酶标仪；6.2、水浴箱（35-39）；6.3、离心机；6.4、洗板机；6.5、打印机。八五三农场职工医院检验科文件编号：BWS-07-01-001 作业指导书 第 2 页 共 2 页第 3 版 第 0 次修订文件名称：酶联免疫法ELISA方法检测乙型肝炎e抗体标准操作规程实施日期：2007-7-117、操作步骤7.1、使用前将试剂盒从冰箱中取出平衡至室温，取出所须板条，剩余的及时封存放回冰箱。7.2、每次实验均须设立空白对照孔1孔，不加样品和酶结合

29、物，只加底物和终止液；每孔加入阴性对照（或阳性对照）各50ul（或1滴）。7.3、其余各孔加待检测标本50ul。7.4、每孔加入酶结合物50ul（或1滴）充分混匀，覆盖粘胶纸，置37孵育30分钟。7.5、将蒸馏水作25倍稀释后备用。7.6、取出已孵育完毕的反应板，弃去粘胶纸，放入洗板机中，吸干板内液体，将洗涤液注满每孔（约300l/孔），吸干，反复5次，在干净纱布上将板拍干。7.7、每孔加显色剂A液、B液各50ul（或1滴），充分混匀，贴上封口胶。37温育15分钟。7.8、每孔加入终止液50l（或1滴），振荡反应板5秒钟，使之充分混匀。7.9、在酶标读数仪中，取波长450nm（建议使用双波长酶标仪比色，参考波长630nm），先以空白对照孔校零，读取每孔OD值（加终止液后，务必在15分钟内读数完毕）。8、质量控制与评价8.1、抗-HBe阳性对照OD值COV，抗-HBe阴性对照OD值COV。8.2、阳性对照OD值有效范围：COV。8.3、阴性对照OD值有效范围：COV。8.4、阴、阳性对照和被检样本的OD值减去空白对照OD值即为计算值。8.5、阴性对照值若小于0.05，以0.05计算。9、注意事项9.1、从冷藏环境中取出的试剂盒内全部瓶装试剂及待测标本所需微孔反应条应置37平衡30后方可使用，余者应及