专题2微生物的培养与应用.docx

1、专题2微生物的培养与应用专题2 微生物的培养与应用课题1微生物的实验室培养目标聚焦1知道培养基的种类、营养要素、配制原则2掌握消毒灭菌的原理和方法3尝试用牛肉膏蛋白胨固体培养基进行大肠杆菌的纯化培养精例点拨【例1】关微生物营养物质的叙述中，正确的是A是碳源的物质不可能同时是氮源B凡碳源都提供能量C除水以外的无机物只提供无机盐D无机氮源也能提供能量【解析】不同的微生物，所需营养物质有较大差别，要针对微生物的具体情况分析。对于A、B选项，它的表达是不完整的。有的碳源只能是碳源，如二氧化碳；有的碳源可同时是氮源，如NH4HCO3；有的碳源同时是能源，如葡萄糖；有的碳源同时是氮源，也是能源，如蛋白胨。

2、对于C选项，除水以外的无机物种类繁多，功能也多样。如二氧化碳，可作为自养型微生物的碳源；NaHCO3，可作为自养型微生物的碳源和无机盐；而NaCl则只能提供无机盐。对于D选项，无机氮源提供能量的情况还是存在的，如NH3可为硝化细菌提供能量和氮源。答案：D【例】培养基、培养皿、接种环、实验操作者的双手、空气、牛奶所采用的灭菌、消毒方法依次是 ( )化学消毒 灼烧灭菌 干热灭菌 紫外线灭菌 高压蒸汽灭菌 巴氏消毒法 A B C D【解析】培养基用高压蒸汽灭菌；培养皿能耐高温，需用干热灭菌；接种环可用灼烧灭菌达到迅速彻底的灭菌效果；实验操作者的双手可用化学药剂进行消毒，如用酒精擦拭双手；空气可用紫外

3、线消毒；牛奶为不破坏其营养成分可采用巴氏消毒法。答案：A。【例】关于制备牛肉膏蛋白胨固体培养基的叙述，错误的是 ( )A操作顺序为计算、称量、溶化、倒平板、灭菌B将称好的牛肉膏连同称量纸一同放人烧杯C待培养基冷却至50左右时进行倒平板D待平板冷却凝固约510min后将平板倒过来放置 -【解析】制备牛肉膏蛋白胨固体培养基的步骤是计算、称量、溶化、灭菌、倒平板，不能颠倒；牛肉膏容易吸潮，所以当牛肉膏溶化并与称量纸分离后，用玻璃棒取出称量纸；待培养基冷却至50，用手触摸锥形瓶刚刚不烫手，并且培养基处于溶化状态；平板冷却几分钟后还需倒置。答案：A。【例】为了检测饮用水中是否含有某种细菌，配制了如下表培

4、养基配方：蛋白胨乳糖蔗糖K2HPO4伊红 Y荚蓝蒸馏水PH10g5g5g2g04g0.065 g100 mL72(1)该培养基所含的碳源有 ，其功能是 。(2)该培养基所含的氮源有 ，其功能是 。(3)该培养基除含碳源、氮源外，还有微生物需要的营养物质是 。(4)该细菌的同化作用类型是 。(5)该培养基可用来鉴别哪种细菌?( )A霉菌 B大肠杆菌C母菌 D乳酸菌【解析】对于异养型微生物来说，含C、H、O、N的物质，既是碳源，也是氮源。各类微生物的最适PH不同，酵母菌、霉菌适宜在偏酸(pH为4560)环境中生长。伊红、美蓝是鉴别大肠杆菌的物质。答案，(1)乳糖、蔗糖、蛋白胨；主要用于构成细胞物质

5、和代谢产物。(2)蛋白胨；主要用于合成蛋白质、核酸以及含氮的代谢产物。(3)水、无机盐。(4)异养型。(5)B。【例】下面对发酵工程中灭菌的理解不正确的是A防止杂菌污染 B消灭杂菌C培养基和发酵设备都必须灭菌 D灭菌必须在接种前【解析】灭菌是微生物发酵过程的一个重要环节。A说的是灭菌的目的，因为发酵所用的菌种大多是单一的纯种，整个发酵过程不能混入其他微生物（杂菌），所以是正确的；B是错误的，因为灭菌的目的是防止杂菌污染，但实际操作中不可能只消灭杂菌，而是消灭全部微生物。C是正确的，因为与发酵有关的所有设备和物质都要灭菌；发酵所用的微生物是灭菌后专门接种的，灭菌必须在接种前，如果接种后再灭菌就会

6、把所接菌种也杀死。答案：B基础过关1关于微生物的营养，说法正确的是()A同一种物质不可能既作碳源又作氮源除水以外的无机物仅提供无机盐C凡是碳源都能提供能量D无机氮源也能提供能量关于配置培养液的叙述正确的是制作固体培养基必须加入琼脂发酵工程一般用半固体培养基培养自生固氮菌不需要氮源加入青霉素可得到放线菌下表为牛肉膏蛋白胨培养基的成分表成分千肉膏蛋白胨NaClH2O含量05g1g05g100mL其中的牛肉膏和蛋白胨能够提供 ( ) 碳源 B生长因子 氮源 D包括ABC 获得纯净培养物的关键是 ( ) 将用于微生物培养的器皿、接种用具、培养基等进行灭菌 接种纯种细菌 适宜环境条件下培养 防止外来杂菌

7、的入侵 下列操作与灭菌无关的是 ( ) 接种前用火焰灼烧接种环 接种前用酒精擦拭双手 将平板倒置，放入培养箱中培养 接种要在酒精灯的火焰旁完成 将接种后的培养基和一个未接种的培养良人37恒温箱的目的是 ( ) 对比观察培养基有没有被微生物利用第比分析培养基上是否生有杂菌没必要放入媒介中的培养基为了下次接种是在使用菌种保存应控制的条件是湿度低温烦躁有光隔绝空气适当有氧 外科手术器械和罐头食品的消毒，都要以能够杀死什么为标准？球菌 杆菌螺旋菌 芽孢有关平板划线的正确操作是是用已灭菌的接种环、培养皿、操作过程中不再杀菌打开含菌种的试管需通过火燃灭菌取出菌种后要马上赛上棉塞将沾有菌种的接种环迅速深入平

8、板内，划三至五条平行线即可最后将平版倒置放入培养箱中培养10有关稀释涂布平板法，叙述错误的是( )A首先将菌液进行一系列的梯度稀释B然后将不同稀释度的菌液分别涂布到琼脂固体培养基的表面适宜条件下培养D结果都可在培养基表面形成单个的菌落11若大肠杆菌和圆褐固氮菌混合在一起，采用下列哪组培养基可将它们分离? ( ) A加食盐的培养基和蛋白胨培养基 B伊红一美蓝培养基和无氮培养基 C加青霉素的培养基和液体培养基 D斜面培养基和液体培养基12细菌培养实验中，在试管口加的棉塞，既要能防止杂菌的污染，又要保证通气良好。图中正确的棉塞位置是 ( )13金黄色葡萄球菌有很强的致病力，还可能引起食物中毒。下述实

9、验结束后的做法错误的是 ( )A对接种环进行灼烧处理带菌培养基须经加热后才能倒掉C带菌培养基须经高压蒸汽灭菌锅灭菌后才能倒掉D接种后双手须经肥皂洗净，再用75的酒精棉球擦拭14下表所示为某微生物培养基配方，请分析回答： 成分 含量 NaNO3 3g K2HPO4 1s KCl 0.5g MgS047H2O 0.5 FeSO4 0.01g (CH2O) 30g H20 100mL 青霉素 0.1万单位 (1)根据物理性质，该培养基属于培养基；根据用途划分则属于 ，培养基。 (2)根据培养基原料，所培养的微生物的代谢类型是 ，培养的微生物可能是 。 (3)该培养基中的碳源是 。 (4)如果要鉴别自

10、来水中的大肠杆菌是否超标，至少要加入 。 和 ，除去 。成分牛肉膏蛋白胨NaCI H2O含量 05g 1805g100mL 15下表为牛肉膏蛋白胨培养基的成分表，据表回答相关问题：(1) 蛋白胨在培养基中的主要作用是 。 (2)若用表中成分材料配制观察金黄色葡萄球菌菌落状况的培养基，还需要添加的成分是 。(3)培养基配制好时，分装前应进行的工作程序是 。 (4)从配制培养基直至接种培养，所采用的预防杂菌感染的方法是 。 (5)对培养基进行搁置斜面处理的目的是 。能力拓展1下表中给出某培养基的配方。请回答牛肉膏蛋白胨 NaCI 琼脂 2 05g 1g 05g 2g100mL(1)蛋白胨能提供的营

11、养素有 等。琼脂的作用为 。 (2)在各种成分溶化分装前，必须进行的重要步骤是 。 (3)此培养基一般不适用于工业生产，工业生产常用 培养基。 (4)此培养基能培养的细菌的同化作用类型是 。 (5)若要分离出金黄色葡萄球菌，可在培养基中加入 。 (6)若用此培养基纯化大肠杆菌，最常用的方法是 和 。若在此培养基中加入 和 ，可直接鉴定大肠杆菌，其菌落特征是 。 2某学校打算开辟一块食用菌栽培基地，以丰富学生的劳动技术课内容。首先对食用菌实验室进行清扫和消毒处理，准备食用菌栽培所需的各种原料和用具，然后从菌种站购来各种食用菌菌种。请回答： (1)对买回来的菌种进行扩大培养。首先制备试管培养基，写

12、出制备固体牛肉膏蛋白胨培养基所需的原料： 、 、 、 、 ，其中提供氮源的主要是 ；提供碳源的主要物质是 ；琼脂的作用是 ，他不提供营养。(2)微生物在生长过程中对各种成分所需量不同，配制培养基时各成分要有合适的 。在烧杯中加入琼脂后要不停地 ，防止 。 (3)将配制好的培养基分装到试管中，培养基体积约占试管长度的 。加棉塞后若干个试管一捆，包上牛皮纸并用皮筋勒紧放入 中灭菌，压力是 kPa，温度是 ，时间 。灭菌完毕后拔掉电源。待锅内压力自然降到0时，将试管取出。如果棉塞上沾有培养基此试管应 。 (4)使用高压蒸汽灭菌锅时注意，先向锅内倒入 。把锅内水加热煮沸并将其中原有冷空气彻底排除后将锅

13、密闭。 (5)从一支试管向另一支试管接种时，接种环要在酒精灯 (“内”或“外”)焰灭菌，并且待接种环 后沾取菌种，试管口不能离开酒精灯火焰附近，将接种的试管放人 冰箱中保藏。课题2 土壤中分解尿素的细菌的分离与计数目标聚焦1研究培养基对微生物的选择作用2运用相关技术进行微生物数量的测定精例点拨【例1】对细菌群体生长规律测定的正确的表述是A在液体培养基上进行 B至少接种一种细菌 C接种一个细菌 D及时补充消耗的营养物质【解析】细菌群体生长规律的测定是人们在一定条件下进行的。这些条件是：一种细菌、恒定容积的培养基，液体培养基、定时测定细菌总数。在这些条件下，才能测定出细菌的生长规律。测定时只能用一

14、种细菌的子细胞群体的变化规律表达微生物的生长；恒定容积是给微生物提供一定的生存环境；液体培养基才能通过样品推测细菌总数。若接种多种细菌，则会发生种间斗争而不能测定一种微生物的生长规律。在接种时，要保证一定的接种量。答案：A【例2】在微生物群体生长规律的测定中，种内斗争最显著最激烈的时期是A调整期 B对数期 C稳定期 D衰亡期【解析】种内斗争是一种生态因素。种内斗争反应了种内生物对生存空间和生活资源的争夺。在生活空间充裕，营养充足的时候，种内斗争的程度是比较低的。随着微生物个体数目的增加，每个个体的生存空间越来越少，营养物质也越来越少，每个个体对生存空间和资源的争夺也越来越激烈，种内斗争就越来越

15、激烈。由此可知，在稳定期的种内斗争最激烈。在衰亡期，微生物的数目已经开始减少，PH已经极度不适于微生物的生存，次级代谢产物积累到很高的程度，这时的微生物的生存斗争主要是与无机环境的斗争。答案：C 【例】分析下面培养基的配方：KH2PO4、Na2HPO4、MgSO47H2O、葡萄糖、尿素、琼脂。请回答： (1)在该培养基的配方中，为微生物的生长提供碳源和氮源的分别是_和 。 (2)想一想这种培养基对微生物是否具有选择作用?如果具有，又是如何进行选择的? 【解析】碳源是提供碳元素的物质，氮源是提供氮元素的物质。所以碳源是葡萄糖，氮源是尿素。绝大多数生物都能利用葡萄糖，但是，只有能合成脲酶的微生物才

16、能分解尿素，所以这种培养基对微生物有选择作用。选择的原则是只有能够利用尿素的微生物才能够生长。答案：(1)葡萄糖；尿素。(2)有选择作用。因为此配方中尿素是惟一氮源，因此，只有能够利用尿素的微生物才能够生长。 【例】用稀释涂布平板法测定同一土壤样品中的细菌数，在对应稀释倍数为106的培养基中，得到以下几种统计结果，正确的是 ( )A涂布了一个平板，统计的菌落数是230B涂布了两个平板，统计的菌落数是215和260，取平均值238C涂布了三个平板，统计的菌落数分别是21、212和256，取平均值163D涂布了三个平板，统计的菌落数分别是210、240和250，取平均值233【解析】在设计实验时，

17、一定要涂布至少3个子板，作为重复组，才能增强实验的说服力与准确性，所以A、B不正确。C项虽涂布了3个子板，但是，其中1个子板的计数结果与另两个相差太远，说明在操作过程中可能出现了错误，因此，不能简单地将3个平板的计数值用来求平均值。答案；D。基础过关 1在做分离分解尿素的细菌实验时，A同学从对应稀释倍数为106的培养基上筛选出大约150个菌落，而其他同学选择出大约50个菌落。A同学的结果产生原因可能是 ( )采用的土样不同 培养基被污染 操作出现失误 没有设置对照A BC 2在微生物学中，将允许特定种类的微生物生长，同时抑制或阻止其他种类微生物生长的培养基称为 ( )A鉴别培养基 B固体培养基

18、C选择培养基 D液体培养基3下列能选择出分解尿素的细菌的培养基 ( )AKH2PO4、Na2HPO4、MgSO47H2O、葡萄糖、尿素、琼脂、水BKH2PO4、Na2HPO4、MgSO47H2O、葡萄糖、琼脂、水CKH2P4、Na2HP4、MgSO47H2O、尿素、琼脂、水DKH2PO4、Na2HPO4、MgSO47H2O、牛肉膏、蛋白胨、琼脂、水4下表资料表明在各种培养基中细菌的生长，(S、C、M)为简单培养基；U、V、X、Y、Z代表加入培养基的不同物质，问细菌不能合成哪一种物质? ( )培养基生长状态S、C、MS、C、M+V+ZS、C、M+U+Y+S、C、M+Z+XS、C、M+V+Y+S、

19、C、M+U+XS,C、M+Y+Z+AU BV Y DZ5统计菌落数目的方法有涂布平板法 重量法 直接计数法 比浊法 生理指标法 膜过滤法A C D6关于测定土壤中细菌的数量的叙述，正确( )A一般选用103104倍的稀释液分别涂布B测定放线菌的数量，一般选用103、104和 105倍稀释C测定真菌的数量，一般选用103、104和 105倍稀释D当第一次测量某种细菌的数量时，可以将104107倍的稀释液分别涂布到平板上培养7用稀释涂布平板法来统计样品中活菌的数目，其结果与实际值相比 ( ) A比实际值高 B比实际值低 C和实际值一致 D比实际值可能高也可能低 8用来判断选择培养基是否起到了选择作

20、要设置的对照是A未接种的选择培养基B未接种的牛肉膏蛋白胨培养基C接种了的牛肉膏蛋白胨培养基D接种了的选择培养基9关于土壤取样的叙述，错误的是A应选取肥沃、湿润的土壤B先铲去表层土3cm左右，再取样C取样用的小铁铲和信封在使用前不用灭菌D应在火焰旁称取土壤10关于微生物培养的叙述错误的是(A细菌一般在3037的温度下培养12dB放线菌一般在2528的温度下培养57dC霉菌一般在2528的温度下培养34dD不同种类的微生物，一般需要相同的培养温度和培养时间11不同种类的细菌菌落表现为不同的特征。下列属于菌落特征的是 ( )菌落的大小菌落的形状菌落的隆起程度 菌落的颜色 菌落的透明度A BC D12

21、菌落特征常用来鉴定微生物的种类。下列关于菌落的叙述，正确的是( )一个菌落就是单个微生物在固体培养基上迅速生长繁殖，并以此母细胞为中心形成的子细胞集团不同种类的微生物其菌落特征完全不一样C同一种类的微生物其菌落特征完全一样D不同种类的微生物所表现出来的菌落差异是个体细胞形态差异的反映13可以鉴定出分解尿素的细菌的方法是( )A在以尿素为唯一氮源的培养基中加入酚红指示剂B在以尿素为唯一氮源的培养基中加入二苯胺试剂C在以尿素为唯一氮源的培养基中加入苏丹试剂D在以尿素为唯一氮源的培养基中加入双缩脲试剂14在做本课实验时，甲同学筛选出的菌落与其他同学不同，并且他在设计实验时并没有设置对照。思考下列问题

22、：(1)你认为甲同学结果产生的原因可能有哪些？(2)请你设置对照实验，帮助甲同学排除可能影响实验结果的因素。(3)由此问题你得出的启示是什么?15下面是探究如何从土壤中分离自生固氮菌与计数的实验。实验原理：农田的表层土壤中，自生固氮菌的含量比较多。将用表土制成的稀泥浆，接种到无氮培养基上进行培养。在这种情况下，只有自生固氮菌才能生长繁殖。用这种方法，可以将自生固氮菌与其他细菌分离开来。材料用具：农田的表层土壤、无氮培养基、牛肉膏蛋白胨培养基、盛9mL无菌水的试管、无菌吸管、无菌涂布器、无菌培养皿、盛90mL无菌水的锥形瓶、恒温箱。方法步骤： (1)倒平板。分别将无氮培养基、牛肉膏蛋白胨培养基倒

23、平板，应在 操作。 (2)制备土壤稀释液。取土样10 g加入盛有90mL无菌水的锥形瓶中，充分摇匀。用无菌吸管吸取上清液lmL，转至9mL的无菌水的大试管中，依次稀释到107倍稀释度。(3)涂布。按照由101108倍稀释度的顺序分别吸取01mL进行平板涂布，每个稀释度下，无氮培养基应至少涂布 个子板，牛肉膏蛋白胨培养基涂布 个。(4)培养。放入恒温箱内，在2830下培养34d。(5)细菌的计数。当菌落数目稳定时，选取茵落数在 的平板进行计数。如果测试的平均值为50，则每克样品中的菌落数是 (稀释度是105倍)。预期结果：相同稀释度下，牛肉膏蛋白胨平板上的菌落数 (填“多于”或“少于”)无氮培养

24、基上的数目，原因是 。能力拓展1某同学的研究性学习课题是“探究影响细菌生长繁殖的因素”。他在培养细菌的过程中，发现了某种细菌(记作R)的周围其他细菌的生长繁殖受到抑制。他把R细菌接种到专门的培养基上进行培养，一段时间后，他除去R细菌，用该培养基再培养其他细菌，结果其他细菌仍然不能在这个培养基上生长和繁殖。根据以上材料回答下列问题： (1)从生态学的角度分析，R细菌与其周围细菌之间的关系，叫做 。 (2)于是，该同学假设了以下“造成R细菌周围的其他细菌不能生长和繁殖”的可能原因：AR细菌占据了其他细菌的生存空间BR细菌吞噬了其他细菌CR细菌产生了不利于其他细菌生存的物质 DR细菌更容易吸收培养基

25、中的物质 你认为以上哪项是最可能的? 。 (3)参照上述题目中给出的有关材料，设计你对第(2)题所作选择的验证实验。 方法步骤：结果结论： 2下面是某同学做自生固氮菌分离实验的方案和观察结果： 培养基成分： NaNO3一2g； K2HP041g；KCl05g；FeSO4：一001g；琼脂一1520g；MgSO4蔗糖30g 蒸馏水1000mL一、实验目的(略)二、材料用具(略)三、方法步骤(1)接种。接种前，准备好盛有上述配方的培养基，放入培养皿中并灭菌，供实验用。 取10g土壤，放在无菌研钵中，注入5mL蒸馏水，并用无菌玻璃棒搅拌均匀，备用。 将接种环放在酒精灯的火焰上灭菌。将培养皿盖轻轻放在

26、桌面上，手拿培养皿。将接种环放在培养基边缘处冷却。然后，用接种环蘸取少许泥浆，轻轻地点接在培养基的表面上，共点接1520处。 接种后，轻轻地盖上培养皿盖，将培养皿放在实验桌上。 (2)培养。 将接过种的培养皿放入恒温箱内，在2830的温度下培养34d。 (3)观察。 34d后，取出培养皿，仔细观察培养基上的菌落，其中大而扁平、边缘呈现波状或锯齿状并为褐色的菌落为自生固氮菌。 (4)镜检(略)该实验方案和观察结果中有几处明显错误，请指出错误并改正。(至少找出三处)课题3 分解纤维素的微生物的分离目标聚焦 1简述纤维素酶的种类和作用 理解纤维素分解菌的筛选原理 3掌握从土壤中分离某种特定微生物的操

27、作技术精例点拨【例1】分离土壤中纤维素分解菌用到的方稀释倒平板法 涂布平板法单细胞挑取法 选择培养分离A D D【解析】分离土壤中纤维素分解菌，先进行选择培养，增大纤维素分解菌的浓度，梯度稀释，涂布平板、培养，单细胞挑取以获得纯培养。稀释倒平板法是先进行梯度稀释，然后分别取不同稀释液少许，与已溶化并冷却至50左右的琼脂培养基混合、摇匀后，倾人灭菌的培养皿中，制成可能含菌的琼脂平板，保温一定时间即可出现菌落。涂布平板法是先将溶化的培养基倒人无菌培养皿，制成无菌平板，冷却凝固后，将一定量的某一稀释度的样品液涂布在整个子板表面，经培养后形成单个的菌落。答案：B。 【例2】根据下面的实验原理和材料用具

28、，设计实验选择运载体质粒，探究质粒的抗菌素基因类别。 实验原理：作为运载体的质粒，须有标记基因，这一标记基因有抗菌素抗性基因。故凡有抗菌素抗性的细菌，其质粒才可能用作运载体。 材料用具：青霉素、四环素的10万单位溶液、菌种试管、灭菌的含细菌培养基的培养皿、酒精灯、接种环、一次性注射器、蒸馏水、恒温箱。 方法步骤： 第一步：取三个含细菌培养基的培养皿并标1、2、3号，在酒精灯旁，用三支注射器，分别注入lmL蒸馏水、青霉素、四环素液，并使之分布在整个培养基表面。 第二步：将接种环，并在酒精灯火焰旁取种，然后对三个培养皿分别接种。 第三步：培养。将接种后的三个培养皿放人37的恒温箱中培养24h。 预期结果及分析：(1)设置1号的目的是的现象是。 (2)若仅2号生存，则说明。(3)若2号不存活，3号存活，则说明。(4)若2号、3