镁缺失对玉米幼苗发育及生理特性的影响.docx

1、镁缺失对玉米幼苗发育及生理特性的影响缺镁对玉米幼苗发育及生理特性的影响的探究摘要：本次实验旨在研究缺镁对玉米发育及生理特征的影响。本次实验使用缺镁培养液以及完全培养液对比培养玉米幼苗，培养三周后，观察两组玉米幼苗外部形态特征，测定了植物光合作用速率，根系活性，过氧化酶活性，叶绿素含量等9项具体指标，在对比实验分析中得到结果。缺镁植株老叶从叶尖前端开始失绿，并逐渐向叶基部扩展，呈现黄绿色相间的条纹，糖含量低，光合作用能力低，叶绿素含量显著降低。根系活力和代谢活性均很弱。关键词：缺镁；玉米；生长发育；生理特性.引言：玉米是我国北方主要栽培作物之一，在当前市场经济迅速发展的过程中，玉米是改善人民生活

2、出口外贸重要的物质之一，对发展农业、畜牧业具有十分重要的意义1。为了提高玉米的产量和品质，在农业栽培技术和作物育种上开展各种研究的同时，掌握作物个体发育中对外界环境条件营养物质需要也是极为重要的。已有一些学者对植物缺素做了研究，关于玉米一生各时期所需要的营养和缺素症状已有大量的报导，本次实验们分别从缺素培养期间植物外观变化的观察，以及后期对于植物叶片，相关组织，根系等所做各项生理指标来测定。镁是可以转移的元素。当新叶合成需要时，转移到新叶部分，老叶由于缺素的原因首先表现出症状3，所以实验选择老叶进行测量。在实验的生理指标测定中，一共进行了9项测定，它们分别是：缺Mg对玉米组织细胞原生质膜的影响

3、，光合作用的测定，根系活力测定，过氧化物酶测定，叶绿素含量测定，可溶性糖含量测定，硝态氮含量测定，蛋白质含量测定，SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳。通过上述9项生理指标的测定，初步了解缺Mg对于玉米生长发育的影响，并探究起理论依据。1 材料与方法1.1 材料1.1.1材料与试剂玉米(Zea mays L)，硝酸钾，硫酸镁、硝酸钙、硝酸钠、EDTA-Na2、微量元素、半饱和KCl溶液、0.1%TTC溶液、80%丙酮、1.0%硫酸铜、2.2%重铬酸钾、2N氨水、无水硫酸钠、石油醚（沸程60-90）、10% KOH的甲醇溶液 、0.2mol/L磷酸缓冲液(PBS)，pH7.0、0.3% H2O2、0.2%

4、愈创木酚 (pH=7.0)、0.02mol/L KH2PO4提取液、凝胶贮液(0%Acry0.8% Bis)、分离胶缓冲液(1.0mol/L Tris-HCI，pH8.8)、浓缩胶缓冲液(1.0mol/L Tris-HCI，pH6.8)、1%过硫酸铵(Ap)、10电极贮存液、联苯胺染色母液、冰醋酸、蔗糖、1%琼脂、25%乙醇、30%丙烯酰凝胶储备液、分离胶缓冲液（1.5mol Tris-HCI，pH8.8）、浓缩胶缓冲液（1.0mol Tris-HCI，pH6.8）、. SDS-PAGE电极贮存液（临用前稀释5倍）、染色液、蛋白质提取液、G-250 蛋白试剂、4SDS凝胶加样缓冲液、饱和醋酸铅

5、、草酸钠、80%酒精、蒽酮试剂、标准葡萄糖母液、1%醋酸、0.8mol/L 醋酸钠、锌粉、硝酸试剂、KNO3标准液1.1.2仪器设备培养缸、棉花、通气玻璃管、pH试纸、量筒(1000ml)、烧杯(1000ml)、吸球、电子天平；Lci便携式光合仪；电导率仪、真空干燥器、抽气机、恒温水浴锅、注射器、剪刀、小烧杯、纱布；分光光度计、研钵、分液漏斗、容量瓶、移液器、磁力搅拌器；电泳仪、电泳槽、微量加样器、离心机、脱色摇床；抽滤瓶、布氏漏斗、滤纸、容量瓶、 烧杯、三角瓶、试管；1.2 方法1.2.1 幼苗的培养 选取饱满的玉米种子或番茄种子，在28-30下浸泡24h，播于盛有湿润营养土培养盆中。在20

6、-28下玉米培养8-10d，当幼苗长出第二片真叶时，便可作为溶液培养材料。1.2.2 对照培养： 分别配制大量元素营养液和缺镁营养液。具体数据见表1。表中的参数是相对于1L的培养液而言，将pH调至pH5-6。 先将幼苗种于塑料盆中土壤培养。一周后，分为完全营养液和缺镁营养液两组，选取生长一致的玉米幼苗，去除胚乳后将地上部穿过培养缸盖的孔口，用少许棉花把植株固定。每个培养缸三株幼苗，剩下的一个孔口插入一只玻璃管，用于给培养液通气。移植完毕后，将培养缸放在玻璃温室中培养。设置缺镁、完全的两个处理，每盆处理为3株玉米幼苗，盆14为缺镁组，盆57为完全组，植株随机排列。处理开始后，每隔1天浇施1次营养

7、液。并同时进行室外观测。培养4周结束后，取出植株。剪下症状出现的叶片，保存在-80摄氏度的条件下待用。进行室内生理生化指标测定。表1 玉米的完全培养液和缺镁培养液配置（ml/1L培养液）贮备液Ca(NO3)2.H2O K NO3 MgSO4.7H2O KH2PO4 Na2SO4 EDTA-Fe 微量元素 完全555551缺Mg5555511.2.3测定各项指标（1）缺镁对植株外观形态的影响 ：在将玉米进行缺素培养时，同步观察玉米的症状，包括叶片颜色，症状首先出现部位，叶片形状，植株大小粗细等性状。（2）缺镁对组织细胞原生质膜的影响：可以根据电解质外渗反映抗逆性，分缺素和完全叶片两组，每组取相同

8、部位叶片0.5g剪成小片。分别加20ml蒸馏水浸没30min。搅拌，测得初始电导率(S1) 。转入100沸水中煮10min，冷却后测得终点电导率(S2)。 计算样品的相对电导率：相对电导率(SR)= S1 / S2 100。（3）缺镁对对光合作用的测定：取完全培养和缺镁培养的叶片利用LCi 便携式光合仪测定，得到光合作用的生理指标。（4）植物根系的活力测定：取完全和缺镁根浸入在适量的0.1%TTC溶液中，在37左右的黑暗的恒温培养箱中放1.5小时。吸水后对比观察红色的深浅。 （5）植物组织中过氧化酶活性的影响：两组各取玉米叶片0.3g，液氮研磨，加入10ml预冷的50mM 磷酸缓冲液，继续研磨

9、成匀浆，在4、4000g离心15 min ，上清液定容到15ml。向比色杯中加 0.3% H2O2 2ml，0.2%愈创木酚0.9ml，吹匀，记录470nm波长处OD增加的速度。（6）叶绿素含量的测定：取两组叶片各0.5g，用10ml丙酮研磨，分34次加石油醚，每次5mL抽提3次。转到分液漏斗中，旋转，使杂物融入水中，静置弃下层。用水冲洗完毕后，弃去下层的水分，倾斜分液漏斗，加入1g无水硫酸钠，轻轻摇动，以便吸去残留的水分，待溶液澄清后，从分液漏斗上部开口处倒出溶液，用石油醚定容至15ml。取液5ml，加入10%KOH 的甲醇溶液10ml皂化5分钟，分层，上层为叶黄素和胡萝卜素（淡黄色），下层

10、为皂化叶绿素a 、b溶液（蓝绿色）。在650nm 波长下进行比色测定，根据所测定的光密度值，再标准曲线上查得相应的叶绿素含量。 叶绿素含量（mg/克样品）=（V1C/W103）V2/ V3。制作标准曲线进行比对。（7）可溶性糖含量测定： 用标准葡萄糖母液配置成每毫升含0、20、40、60、80、100g葡萄糖的标准溶液各1ml，分别放入试管中，在每只试管中依次加入5ml蒽酮试剂，震荡试管，使溶液充分混合。为了防止水分蒸发，试管口盖放一个玻璃球，将试管置沸水浴中煮沸10min，取出置试管架上，冷却后倒入比色杯，以空白作对照，在620nm波长下进行比色，读取光密度值。以葡萄糖浓度为横坐标，光密度值

11、为纵坐标绘制标准曲线。 各取0.3g玉米叶片，研磨，分3次加酒精20ml、蒸馏水30-40ml， 70-80保温30min，加入0.5ml饱和醋酸铅，定容到100ml 。抽滤混合液，加入0.2克草酸钠。得溶性糖提取液。吸取提取液和1ml蒸馏水各1ml，加入5ml蒽酮试剂，沸水中煮沸10min，620nm波长下比色，从标准曲线上查得相应的糖浓度。可溶性糖含量%=（CV/W106）100%。（8）植物组织中硝态氮含量的测定： 吸取每毫升含10g氮的标准溶液0.5、1.0、1.5、2.0、2.5ml于5支试管中,对应加入3.5、3.0、2.5、2.0、1.5ml1%醋酸，然后分别加入4ml0.8mo

12、l/L醋酸钠，混匀。加入10mg锌粉，放置10min，每分钟震荡1-2次。分别取4ml滤液放入试管中，加入1ml硝酸试剂，混匀，10min后于540nm下比色测定光密度值。以含氮量(g/ml)为横坐标，光密度为纵坐标绘制标准曲线。 称取玉米功能叶片0.5g，置研钵中，加入5-10ml 1%醋酸研磨成浆, 匀浆液转移到25ml容量瓶中，并用1%醋酸定容。匀浆液用滤纸过滤到一干净的烧杯中。吸取4ml转入试管中,加入4ml0.8mol/L醋酸钠，混匀。加入10mg的锌粉，放置10min，每分钟震荡1-2次，滤纸过滤到另一干净烧杯中。取4ml滤液放入试管中，加入1ml硝酸试剂，混匀，10min后于54

13、0nm下比色测定光密度值。并计算硝态氮含量X(100g样品中硝态氮毫克数)=(5 C 2 25)/V/W 0.1=(25 C)/(WV)。（9）蛋白质含量测定：准确吸取0.1毫升含 20、40、60、80、100微克的牛血清蛋白标准溶液，分别放入10毫升试管中 ，加入4.9ml考马斯蓝G-250蛋白试剂，将试管中溶液倒转充分混合，放置2分钟后用在595nm下比色。制作100-1000微克/毫升标准曲线。 各称取0.5克玉米叶片，液氮研磨，加1ml蛋白质提取液，充分研磨，12000rpm离心5分钟，上清液1转移到一干净试管中备用;再向离心管中加入1ml蛋白质提取液悬浮沉,12000rpm离心5分

14、钟,上清液2转移到另一干净试管中，再向每支1.5ml离 心管中加入1ml蛋白质提取液悬浮沉,12000rpm离心5分钟,上清液转移到另 一干净试管中。 分别放入10毫升试管中，加入4.9ml考马斯蓝G-250蛋白试剂，将试管中溶液倒转充分混合，放置2分钟后用在595nm下比色。（10）蛋白质SDS-聚丙烯酰氨凝胶电泳：制备分离胶和浓缩胶。蛋白质样品加入1/4体积的4SDS凝胶加样缓冲液，于100水浴加热3min使蛋白质变性，用微量加样器变性后的蛋白质样品注入浓缩胶样品槽中，上样量为20-30g；按说明书要求制备标准蛋白质，每块凝胶加入1-2个槽。接通电泳槽电源，调整电流为60mA，继续进行电泳

15、。电泳完毕后，将凝胶剥离放入合适的培养皿中，到入100-200ml染色液，置于45下染色3060分钟。染色完成后，回收染色液，加入脱色液，置于脱色摇床上振荡脱色，30min换一次，直到蛋白质条带清晰即可2 1. 3数据统计所有数据均通过Office2007统计软件处理，并用Excel软件作图。2 结果与分析2.1 缺镁对植株外观形态的影响 图1 缺镁植株与正常植株外观比较缺镁幼苗的老叶从叶尖前端开始失绿，逐渐向叶基部扩展。一段时间后，叶脉仍为绿色，叶间变黄，呈现黄绿色相间的条纹。缺镁组和完全组植株高度差别不大，但不够粗壮。图1中左边为缺镁组，右边为完全组。镁是可以转移的元素。当新叶合成需要时，

16、转移到新叶部分，老叶由于缺素的原因首先表现出症状3。 2.2 缺镁植株对原生质膜的影响表2 缺镁植株与正常植株电导率 不同组S1S2相对电导率（）平均相对电导率（）完全组124.912919.3014.07完全组229.83378.84缺镁组124.99825.4117.34缺镁组2303239.29 完全组1与缺镁组1选择的是相同部位的叶片，完全组2与缺镁组2选择的是相同部位的叶片。如表2所示，在常温处理下，完全组1的相对导电率为19.30，缺镁组1的相对导电率为25.41；完全组2的相对导电率为8.84，缺镁组2的相对导电率为9.29。完全组的平均相对电导率为14.07，缺镁组的平均相对电

17、导率为17.34。缺镁组明显大于完全组。镁离子对电解质对原生质膜的渗透作用有所影响。缺镁组渗过细胞膜的电解质较完全组多，说明缺镁组的原生质膜的透性更高。可以得出结论，镁离子使原生质膜上的蛋白质的种类和数目发生了改变，使其透性更高，电解质外渗量增加，导致植物细胞抵抗逆境的能力减弱。2.3 缺镁对对光合作用的测定 表3 光合速率和呼吸速率 （molm-2s-1）光合速率A呼吸速率E完全3.112.12缺镁4.452.04 如表3所示，完全组的光合速率为3.11molm-2s-1，缺镁组的光合速率为4.45molm-2s-1, 完全组的呼吸速率为2.12molm-2s-1，缺镁组的呼吸速率为2.04

18、molm-2s-1。光合速率完全组缺镁组，而呼吸速率没有明显差距。镁是叶绿素的重要组成物质。在实验中，光合速率结果为完全组缺镁组，与理论情况不符，并且数值都偏小，原因可能是选择的叶片同为最后一片，本身作为老叶光合速率就会降低，实验中可能由于机械损伤导致实验结果有误。在光合速率出现偏差的时候，呼吸作用速率的数值已经没有考虑的意义。玉米幼苗缺镁,则不能合成叶绿素,故玉米的老叶部分叶绿素减少，光合作用的强度会随之减弱，气孔导度和蒸腾速率均降低, 缺镁还可以减少光合产物的积累, 使植物生长量减少；呼吸作用是利用光合作用生成的有机物进行呼吸，所以光合速率下降会导致呼吸速率下降。4缺镁影响叶绿素含量的原因

19、可能为：叶片结构不完整，叶片叶绿素a、叶绿素a +b含量和类胡萝卜素含量随着供镁的减少逐渐降低；羧化效率(CE) 降低，使固定CO2 的能力下降；缺镁可能影响叶片中物质的运输, 从而积累蔗糖和淀粉, 也可能反馈抑制光合作用5。 2.4植物根系的活力测定图2 缺镁对根系活力影响根系是植物生命活动中的重要器官，是活跃的吸收器官、合成器官和贮存器官，根的生长情况及其活力水平直接影响地上部的营养状况及产量水平。根系活力泛指根系的吸收、合成、氧化和还原能力等，是一种客观地反映根系生命活动的生理指标6。如图2所示，左侧为缺镁组，右侧为完全组。缺镁处理的植株的根的颜色为浅红，完全组的植株根颜色为深红。说明缺

20、镁组植株中的脱氢酶的活性低于正常植株。TTC还原能力测定的是与呼吸有关的琥珀酸脱氢酶，所以TTC还原能力与呼吸作用有一定的相关性 ，TTC还原量能表示脱氢酶活性，并作为根系活力的指标7。得出结论：缺镁植物的脱氢酶活性较弱，呼吸作用的强度较弱，根系生长不好。2.5植物组织中过氧化酶活性的影响表4 缺镁对过氧化酶活性影响反应时间/min 缺镁组完全组PODt缺镁PODt完全00.180.2610.27 0.340.270.3420.350.390.1750.19530.350.44 0.1170.14740.380.450.0950.112550.400.490.080.098如表4所示，缺镁组的

21、POD值小于完全组，两组的POD值都随着时间的增加而增加，说明过氧化酶活性低于完全组。PODt的值被认为与酶活性呈正相关，由处理的数据得到，过氧化物酶的活性随着时间的增加而降低。过氧化物酶广泛存在于植物体中，它与呼吸作用、光合作用及生长素的氧化等都有关系。一般老化组织中活性较高，幼嫩组织中活性较弱，这是因为过氧化物酶能使组织中所含的某些碳水化合物转化成木质素,增加木质化程度。在实验中，缺镁组的植株测定出过氧化物酶活性低于完全组，得出结论：镁离子的缺少会导致植物体内过氧化物酶活性降低。而POD值随着时间增加而增加是由于开始的几分钟反应属于初级阶段，还没反应完全，所以PODt的值才能代表过氧化物酶

22、的活性。镁是多种酶的活化剂，植物光合作用、糖酵解、三羧酸循环、氮和硫的同化及ATP的结合等过程都有几十种酶需要镁激活8。因此镁在碳水化合物代谢、呼吸作用及蛋白质代谢中起重要作用。在逆境胁迫下，活性氧的产生与清除之间的平衡会被破坏，使膜的结构和功能遭到破坏，引起一系列生理生化代谢紊乱，导致伤害发生9。此实验证明缺镁将影响植物代谢，降低植物的抗性。2.6叶绿素含量的测定表5 在D650下缺镁和完全组的OD值叶绿素D650的OD值叶绿素含量完全组0.15716.214缺镁组0.09910.296 图3 叶绿素总量测定的标准曲线 图3为OD值与叶绿素含量的标准曲线。如表5所示，完全组的OD值明显大于缺

23、镁组，经计算得到的叶绿素含量完全组明显大于缺镁组。可以轻易得出结论：缺镁可以使叶绿素的含量明显减少。 光合作用是植物生长的重要能量来源和物质基础，叶绿素作为植物进行光合作用的主要色素，其含量的多少对光合速率有直接的影响10，是反映植物叶片光合能力的一个重要指标。镁是构成叶绿素分子的核心元素，其对植物体内叶绿素的含量至关重要。 玉米幼苗缺镁,则不能合成叶绿素,故玉米的老叶部分叶绿素减少。在缺镁对光合作用影响的实验中曾提到，缺镁影响叶绿素含量的原因可能为：缺镁导致叶片结构不完整，叶片叶绿素a、叶绿素a +b含量和类胡萝卜素含量随着供镁的减少逐渐降低，造成叶绿素水平降低。2.7可溶性糖含量测定 图4

24、 可溶性糖含量的测定标准曲线表6 缺镁与正常组可溶性糖OD值与含量D630 OD值含量（%）平均值（%）完全组0.2460.2170.217缺镁组10.2650.2340.238缺镁组20.2730.241可溶性糖含量pV/(m106)100图4为OD值与糖浓度的标准曲线，如表6所示，完全组的OD值为0.246，缺镁组的OD值为0.265和0.273。完全组略大于缺镁组。根据图4所示的标准曲线，得到完全组的含量为含量为0.217，缺镁组的含量为0.234和0.241，求平均值后为0.238。得到完全组的含量是缺镁组的1.1倍。植物体内可溶性糖含量的变化是植物体内碳水化合物代谢的重要标志,它既可

25、反映碳水化合物的合成情况,也可说明碳水化合物在植物体内的运输情况。这些证据表明，造成这些变化的原因可能为：镁可以促进叶片的光合作用，提高叶片中可溶性糖含量；并且镁能促进可溶性糖的运输,促使叶片中可溶性糖向其他器官运输，导致叶片本身可溶性糖含量较小。所以缺镁组的可溶性糖含量较高。2.8植物组织中硝态氮含量的测定图5 硝态氮标准曲线表7 缺镁与正常组硝态氮OD值及含量D540 OD值硝态氮含量（mg）完全组0.0250.0985缺镁组0.0100.0394 100g样品中硝态氮的质量（mg）（5*p2*25）v/m 图5为OD值与含氮量的标准曲线，如表7所示，在540mm下，完全组的OD值为0.0

26、25,缺镁组的OD值为0.010，完全组明显大于缺镁组。经与标准曲线比对和计算，得到的硝态氮含量完全组为0.0985mg，缺镁组为0.394mg，完全组的硝态氮含量为缺镁组的2.5倍。 硝态氮是植物从土壤中吸收氮的主要形式，是植物吸收的主要含氮物质之一。硝态氮还原成氨态氮后才能参加有机氮化合物的合成。以上证据表明，镁可以使硝态氮的含量上升，但是是由于从外界吸收硝态氮需要镁离子，还是镁会抑制硝态氮向氨态氮转化，还需要进一步实验证明。缺镁会使植物老叶硝态氮含量降低。2.9可溶性蛋白质含量测定表8 缺素与正常组蛋白质含量比较分类完全组缺镁组体积/mLOD值蛋白质含量mgg体积/mLOD值蛋白质含量m

27、gg第一次上清液3.40.3183.1803.10.3032.762第二次上清液3.00.1691.4912.20.2161.398总4.6714.160 蛋白质含量（mg/g FW）（m0*V0V1）m1图6 蛋白质标准曲线图6为标准曲线，m0由标准曲线求得。由表8可知，玉米叶片蛋白质含量的测定结果为：完全组叶片4.671mgg，缺镁组叶片4.160mgg。完全组叶片的蛋白质含量明显大于缺镁组。植物可溶性蛋白质的含量与其抗逆性的形成有关11,可溶性蛋白质有着很强的持水力,对作物起着有效的保护作用。 所以得到结论：镁离子的缺失会导致植物体内可溶性蛋白质减少，持水能力差，抗逆性弱。 2.10 蛋

28、白质SDS-聚丙烯酰氨凝胶电泳图7 缺镁与正常蛋白质SDS-聚丙烯酰氨凝胶电泳 如图7所示，加样的顺序依次为：Marker1、缺镁、缺镁、完全、完全、Marker2 。可以观察到，缺Mg组植株蛋白质的条带比完全培养植株蛋白质条带颜色浅，并且比完全组多出一些“细”的条带。可以得出结论：缺Mg胁迫可以导致蛋白质合成总量减少，缺镁组多处一些条带可能是植株产生一些中间蛋白，但是由于缺镁导致无法继续合成，只能处在中间状态。123讨论镁是植物结构组成的重要元素，通过营养液培养法对玉米幼苗进行缺镁培养液和完全培养液培养，进行观察和比对，得出以下结论。玉米植株缺镁，其幼苗的老叶从叶尖前端开始失绿，逐渐向叶基部

29、扩展。一段时间后，叶脉仍为绿色，叶间变黄，呈现黄绿色相间的条纹。镁离子对电解质对原生质膜的渗透作用有所影响，使其透性更高，电解质外渗量增加。缺镁的植株光合作用和呼吸作用都有明显的减弱，由于呼吸作用的减弱，导致缺镁植物的根系活力叶大大下降。植物缺镁的情况下，叶绿素和过氧化物酶的合成都会减弱，这也是造成其光合作用和呼吸作用减弱的重要原因。同时，缺镁植物可溶性糖的含量较高，而硝态氮的含量较低，说明了镁不仅与植物体内各种酶的合成相关，也与植物体内的物质运输有关。另外，缺少镁离子会导致某些蛋白的合成受阻，只能停留在中间蛋白，而可溶性蛋白的合成总量也有所减少。通过上述的实验结果来看，镁在玉米植株的生长发育

30、过程中有着很重要的作用，缺镁会导致玉米植株的发育异常，除了外观有所改变，各项生理指标都有所变化，这些变化是消极的，会影响植物的正常生长发育，也会导致玉米植株抗逆性减弱。在玉米植株的正常生长发育中，镁起到积极的作用，是不可缺少的元素。参考文献：1汪洪,褚天铎.植物镁素营养的研究进展J.植物学通,1999,16(3):245250.2张以顺,黄霞,陈云凤.植物生理学实验教程.北京：高等教育出版社，2009.2.3 李延,刘星辉,庄卫民.植物Mg素营养生理的研究进展J. 福建农业大学学报. 2000(01) 4孙文越,等.外来甜菜对干旱胁迫下小麦幼苗膜脂过氧化作用的影响J.西北植物学报，2001,22(1):1-3.5李六林,杨佩芳,田彩芳.新红星苹果不同枝类叶片中叶绿素含量的变化J.果树科学,1999,16(1):78-80.6王芳，刘鹏，朱靖文.镁对大豆根系活力叶绿素含量和膜透性的影响J.农业环境科学学报,2004,23(2):235-239.7张雄. 用TTC（红四氮唑）法测定小麦根和花粉活力及其应用J.植物生理学通讯,1982,3:48-50. 8先开远,李圣彦.烤烟毁灭性冰雹灾害补救措施的研究J.湖北烟草,2005 (2) :21-24.9Lagrif