乳酸脱氢酶之欧阳数创编.docx

1、乳酸脱氢酶之欧阳数创编乳酸脱氢酶时间：2021.03.02创作：欧阳数乳酸脱氢酶是一种糖酵解酶。乳酸脱氢酶存在于机体所 有组织细胞的胞质内，其屮以肾脏含量较高。乳酸脱氢酶 是能催化丙酮酸生成乳酸的酶，几乎存在于所有组织屮。 同工酶有六种种形式,即LDH-1(H4)、LDH-2(H3M)、LDH- 3 (H2M2) LDH-4 (HM3) LDH-5 (M4)及 LDH-C4,可用电泳方 法将其分离。LDH同功酶的分布有明显的组织特异性，所 以可以根据其组织特异性来协用诊断疾病。正常人血清屮 LDH2, ) LDHlo如有心肌酶释放入血则LDH1) LDH2,利用 此指标可以观察诊断心肌疾病。基

2、本信息英文名称：LDH(lactate dehydrogenase)序列信息：1 gsgcnldsar frylmg长度：16 aa物种来源:Homo sapiens (human)正常范围:血清135. 0215. 0U/L;脑脊液含量为血清的l/10o乳酸脱氢酶A简介乳酸脱氢酶(LDH)分子量为130、140KDa,由两种亚单位 组成:H (表示heart)和M(表示muscle) o它们按不同的形 式排列组合形成含4个亚基的5种同工酶，即：LDH1 (H4)、 LDH2 (H3M1). LDH3(H2M2)、LDH4(HM3)、LDH5(M4)。LDH催化丙酮酸与乳酸Z间还原与氧化反应，

3、在碱性条 件下促进lactic acid向pyruvic acid方向的反应，而在 中性条件下促进pyruvic acid向lactic acid的转化(为 逆反应)。LDH是参与糖无氧酵解和糖异生的重要酶。由于LDH几乎存在于所有体细胞屮，而且在人体组织屮 的活性普遍很高，所以血清屮LDH的增高对任何单一组织 或器官都是非特异的。在AMI时升高迟、达峰晚，故对早 期诊断价值不大。由于半寿期长(10163小时)，多用于回 顾性诊断，如对入院较晚的AMI病人、亚急性的诊断和 病情监测。LDH在组织中的分布特点是心、肾以LDH1为主，LDH2 次之;肺以LDH3. LDH4为主;骨骼肌以LDH5为

4、主;肝以LDH5 为主,LDH4次之。血清中LDH含量的顺序是 LDH2LDH1LDH3LDH4LDH5.正常参考值人组织中的乳酸脱氢酶(LDH)用电泳法可以分离出5种 同工酶区带，根据其电泳迁移率的快慢，依次命名为 LDH1, LDH2, LDH3, LDH4, LDH5。不同组织的乳酸脱氢酶 同工酶分布不同，存在明显的组织特异性，人心肌、肾和 红细胞中以LDH1和LDH2最多,骨骼肌和肝中以LDH4和 LDH5最多，而肺、脾、胰、甲状腺、肾上腺和淋巴结等组 织屮以LDH3最多。后来从睾丸和精子中发现了 LDHx,其 电泳迁移率介于LDH4和LDH5之间。LDH是由H(心肌型)和 M(骨骼肌

5、型)两类亚基组成，分别形成LDH1(H4)、 LDH2(H3M)、LDH3(H2M2)、LDH4(HM3)、LDH5 (M4) o正常参考值(1)琼脂糖电泳法：LDH1(28. 45. 3)%;LDH2(41.0 + 5. 0)%;LDH3(19. 04. 0)%;LDH4 (6. 63. 5)%;LDH5(4. 63. 0)%。(2)醋酸纤维素薄膜法：LDH1 (25. 32 2. 62)%LDH2 (34. 361. 57)%LDH3 (21.861.38)%LDH4(11.31.84)%LDH5(7. 971.59)%(3)聚丙烯酰胺法：LDH1(26. 90. 4)%LDH2 (36.

6、 00. 5)%LDH3 (21.90. 4)%LDH4(11. l0. 4)%LDH5(4. l0. 3)%总之，健康成人血清LDH同工酶有如下的规 律:LDH2LDH 1 LDH3LDH4LDH5o 临床意义(1)心肌细胞LDH活性远高于血清数百倍，尤以LDH1和 LDH2含量最高，LDH2占主导地位。急性心肌梗塞时，血清 LDH1和LDH2显著升高，约95%的病例的血清LDH1和LDH2 比值大于1,且LDH1升高早于LDH总活性升高。LDH在心 肌梗死后上升速度比肌酸激酶慢很多，所以LDH上升在血 液中存在时间较长，使得LDH成为诊断心肌梗死发生一周 以上的有效工具。病毒性和风湿性心肌

7、炎及克山病，岀现 心肌损害时，病人的血清LDH同工酶的改变与心肌梗塞相 似。LDH1/LDH2比值1还见于溶血性贫血、地中海贫血、 恶性贫血、镰形细胞性贫血、肾脏损伤、肾皮质梗塞、心 肌损伤性疾病、瓣膜病等。(2)脑干含LDH1较高。颇脑损伤仅累及大脑半球时，只 有血清同工酶谱的绝对值增高，而不影响同工酶的相互比 值，如果累及脑干时，病人血清LDH1的含量也增高。(3)急性心肌梗塞发病后1224小时，血清LDH1也已升 高。若同时测定LDH总活性，可发现LDH1/总LDH的比值 升高。早期血清中LDH1和LDH2活性均升高，但LDH1增高 更早，更明显，导致LDH1/LDH2的比值升高。对急性

8、心肌 梗塞诊断的阳性率和可靠性优于单纯测定LDH1或CK-MB。(4)胚胎细胞瘤病人的血清LDH1活性升高。(5)急性肝炎，肝细胞损伤或坏死后，向血流释入大量 的LDH4和LDH5,致使血中LDH5/LDH4比值升高，故 LDH5/LDH41可做为肝细胞损伤的指标。急性肝炎以LDH5 明显升高，LDH4不增,LDH5/LDH41为特征;若血清LDH5 持续升高或下降后再度升高，则可认为是慢性肝炎;肝昏迷 病人的血清LDH5. LDH4活性极高时，常不预后不良；原发性 肝癌以血清LDH4LDH5较为常见。(6)肾皮质以LDH1和LDH2含量较高，肾髓质以LDH4和 LDH5活性较强。患急性肾小管

9、坏死(ATN)、慢性肾盂肾 炎、慢性肾小球肾炎以及肾移植排异时，血清LDH5均可增 高。(7)肺含LDH3较多，肺部疾患时血清LDH3常可升高。 肺梗塞时LDH3和LDH4相等，LDH1明显下降;肺脓肿病人 的血清LDH3. LDH4常与LDH5同时升高。煤矿、鹄矿矽肺 病人的血清LDH1. LDH2下降,LDH4. LDH5升高。(8)iflL清LDH总活性升高而同工酶谱正常(LDH1/LDH21) 的病例，临床出现率依次为;心肺疾病、恶性肿瘤、骨折、 中枢神经系统疾患、炎症、肝硬化、传染性单核细胞增多 症、甲状腺功能减退、尿毒症、组织坏死、病毒血症、肠 梗阻等。(9)肌营养不良病人肌肉中L

10、DH1. LDH2明显增高，LDH5 显著下降；而血清则相反，LDH1. LDH2明显减少， LDH4. LDH5显著，表明血清LDH同工酶主要来自肌肉组 织。(10)恶性病变时LDH3常增高。升高的原因乳酸脱氢酶偏高的原因至于乳酸脱氢酶高的原因，有以下方面：1.当乙肝病毒携带者病情恶化成乙肝患者时，部分肝细 胞受损，血清屮LDH4和LDH5含量就会有不同程度的增 咼。2.乙肝治疗方法特别是是用药不当，长期服用同一种药 物时造成肾毒现彖的产生。当肾毒现彖岀现时，血清中乳 酸脱氢酶含量会迅速升高。3.乙肝不进行合适积极的治疗，发展到一定程度时会造 成肝脏代谢严重异常，导致肾脏功能衰竭，从而也会引

11、起 乳酸脱氢酶含量升高。4.肺梗塞、恶性贫血、休克及肿瘤转移所致的胸腹水 时，会引起乳酸脱氢酶的偏高。偏低的原因乳酸脱氢酶存在于机体所有组织细胞的胞质内，其中以 肾脏含量较高。血清乳酸脱氢酶正常范围是100300U/L, 当出现乳酸脱氢酶偏低时，常见原因如下。乳酸脱氢酶偏低的原因1：检查过程屮出现误差；乳酸脱氢酶偏低的原因2:内分泌失调；乳酸脱氢酶偏低的原因3:过于劳累、睡眠不好、心情不 好等。总之，乳酸脱氢酶偏低一般不是很严重，经过调理即可 恢复。但如果出现乳酸脱氢酶偏高就要引起重视了。因为 肺梗塞、恶性贫血、休克及肿瘤转移所致的胸腹水时，会 引起乳酸脱氢酶的偏高。LDH实验折叠概述乳酸脱氢

12、酶（LDH）是催化乳酸和丙酮相互转化的同工 酶，属于氢转移酶。该酶存在于所有动物的组织屮，在肝 脏屮活性最高，其次为心脏、骨骼肌、肾脏，在肿瘤组织 及白血病细胞中也能检测到。在大多数动物组织屮，它是 由两种肽链按一定比例组成的5种四聚体。它的每条肽链 各由一个基因编码，经转录、翻译、修饰加工等过程，最 后成为有生物学活性的物质。不同的动物，不同的组织或 器官在不同的发育阶段或不同的生活周期均有其特异性的 同工酶酶谱。自然界屮存在L和D两种乳酸脱氢酶。折叠实验原理用纯化的抗体包被微孔板，制成固相载体，往包被抗D- LDH抗体的微孔屮依次加入标本或标准品、生物素化的抗 D-LDH抗体、HRP标记的

13、亲和素，经过彻底洗涤后用底物 TMB显色。TMB在过氧化物酶的催化下转化成蓝色，并在酸 的作用下转化成最终的黄色。颜色的深浅和样品屮的D- LDH呈正相关。用酶标仪在450nm波长下测定吸光度(0D 值)，计算样品浓度。折叠试剂盒组成及试剂配制1.酶联板(Assay plate ):一块(96 孔)。2.标准品(Standard) : 2瓶(冻干品)。3.样品稀释液(Sample Diluent) : 1 X20ml/瓶。4.生物素标记抗体稀释液(Biotin-antibody Diluent) : 1X 10ml/瓶。5.辣根过氧化物酶标记亲和素稀释液(HRP-avidin Diluent)

14、 : 1X 10ml/瓶。6.生物素标记抗体(Biotin-antibody) : 1 X 120 U 1/瓶 (1:100)7.辣根过氧化物酶标记亲和素(HRP- avidin) :lX120u 1/瓶(1:100)8.底物溶液(TMB Substrate) : 1 X 10ml/瓶。9.浓洗涤液(Wash Buffer) : 1 X 20ml/瓶，使用时每瓶 用蒸镭水稀释25倍。10.终止液(Stop Solution) : IX 10ml/瓶(2N H2S04)。 折叠需要而未提供的试剂和器材1.标准规格酶标仪2.高速离心机3.电热恒温培养箱4.干净的试管和Eppendof管5.系列可调

15、节移液器及吸头，一次检测样品较多时, 最好用多通道移液器6.蒸镭水，容量瓶等 折叠操作步骤实验开始前，请提前配置好所有试剂，试剂或样品稀释 时，均需混匀，混匀时尽量避免起泡。每次检测都应该做 标准曲线。如样品浓度过高时，用样品稀释液进行稀释， 以使样品符合试剂盒的检测范围。1.加样:分别设空白孔、标准孔、待测样品孔。空白孔 加样品稀释液100 U1,余孔分别加标准品或待测样品 loom,注意不要有气泡，加样将样品加于酶标板孔底 部，尽量不触及孔壁，轻轻晃动混匀，酶标板加上盖或覆 膜，37C反应120分钟。为保证实验结果有效性，每次实验请使用新的标准品溶 液。2.弃去液体，甩干，不用洗涤。每孔加

16、生物素标记抗 体工作液100 U 1 （取1 U 1生物素标记抗体加99 U 1生物素 标记抗体稀释液的比例配制，轻轻混匀，在使用前一小时 内配制）,37C, 60分钟。3.温育60分钟后，弃去孔内液体，甩干，洗板3次， 每次浸泡1-2分钟，350 H 1/每孔，甩干。4.每孔加辣根过氧化物酶标记亲和素工作液（同生物素 标记抗体工作液）100 ul, 3VC, 60分钟。5.温育60分钟后，弃去孔内液体，甩干，洗板5次， 每次浸泡1-2分钟，350 U 1/每孔，甩干。6.依序每孔加底物溶液90 ul, 37C避光显色（30分钟 内，此时肉眼可见标准品的前3-4孔有明显的梯度蓝色， 后3-4孔

17、梯度不明显，即可终止）o7.依序每孔加终止溶液50 U1,终止反应（此时蓝色立 转黄色）o终止液的加入顺序应尽量与底物液的加入顺序相 同。为了保证实验结果的准确性，底物反应时间到后应尽 快加入终止液。8.用酶联仪在450nm波长依序测量各孔的光密度（0D 值）o在加终止液后15分钟以内进行检测。折叠计算以标准物的浓度为横坐标（对数坐标），0D值为纵坐标 （普通坐标），在半对数坐标纸上绘出标准曲线，根据样品 的0D值由标准曲线查出相应的浓度;再乘以稀释倍数;或用 标准物的浓度与0D值计算出标准曲线的直线回归方程式， 将样品的0D值代入方程式，计算出样品浓度，再乘以稀释 倍数，即为样品的实际浓度。

18、折叠注意事项1.当混合蛋白溶液时应尽量轻缓，避免起泡。2.洗涤过程非常重要，不充分的洗涤易造成假阳性。3.一次加样时间最好控制在5分钟内，如标本数量 多，推荐使用排枪加样。4.请每次测定的同时做标准曲线，最好做复孔。5.如标本中待测物质含量过高，请先稀释后再测定， 计算时请最后乘以稀释倍数。6.在配制标准品、检测溶液工作液时，请以相应的稀 释液配制，不能混淆。7.底物请避光保存。8.不要用其它生产厂家的试剂替换试剂盒屮的试剂。偏高怎么办血清屮乳酸脱氢酶偏高主要有恶性肿瘤，肝炎、肝硬化 等疾病引起的，乳酸脱氢酶检查偏高常见于急性肝炎、阻 塞性黄疸、心肌炎、恶性肿瘤、肝硬化、肝癌、运动肌肉 营养不良、急性白血病及恶性贫血等病症。临床医学实践 表明，80%以上患者体内的血清乳酸脱氢酶升高是由肝脏疾 病引起的，尤其是急性乙肝、肝硬化、肝癌等。因此，若 患者发现乳酸脱氢酶在血清屮的含量不再正常范围之内， 应及时到肝病医院进行检测，在医生的指导下进行有针对 性的治疗。时间：2021.03.02 创作：欧阳数