高效液相色检验方法验证方案2.docx

1、高效液相色检验方法验证方案2型高效液相色谱仪测定川芎含量检验方法验证方案 文件编号 S-YF-013（01）起 草 人 崔英南 日期 2012年08月26日审 核 人 日期 2012年08月31日批 准 人 李立新 日期 2012年08月31日生效日期 2012年09月01日 验证项目申请单 文件编号：再确认项目用高效液相色谱仪测定川芎含量检验方法验证 目的对已进行设计、选型、安装、运行及系统适应性测试设备确认的高效液相色谱仪，通过选用生产品种（药典）川芎进行含量测定，验证其检验方法准确度、精密度、专属性、线性、范围、耐用性的正确性，证实该设备设计、选型是否符合药品质量标准中含量测定的要求，使

2、检验指标具有可控性、科学性、准确性，使设备达到设计要求及规定的技术指标，把好质量关，使合格产品能按GMP要求进行放行。小组成员组 长： 组 员： 要求完成时间2012年09月09日提出部门：质量保证部批准部门：再确认委员会签字 年 月 日签字 年 月 日备注验证项目计划书 文件编号： 验证题目用高效液相色谱仪测定川芎含量检验方法验证目的概要对已进行设计、选型、安装、运行及系统适应性测试设备确认的高效液相色谱仪，通过选用生产品种（药典）川芎进行含量测定，验证其检验方法准确度、精密度、专属性、线性、范围、耐用性的正确性，证实该设备设计、选型是否符合药品质量标准中含量测定的要求，使检验指标具有可控性

3、、科学性、准确性，使设备达到设计要求及规定的技术指标，把好质量关，使合格产品能按GMP要求进行放行。再确认小组成员组 长： 组 员： 验证方法用高效液相色谱仪测定含量检验期待结果用已确认的设备对生产品种进行含量测定，验证检验方法的准确度、精密性等符合生产、质量、GMP的规定，符合该设备的设计、选型能够满足检验要求，所采用的方法达到相应的检测要求，达到测得指标的科学、准确性，已满足控制产品质量的需要。验证方式同步验证超过允许值的对应措施1. 待系统稳定后，重新检测。2. 必要时，对有关设备重新处理和调整后，再测试，分析检测结果以确定不合格原因。3. 若属于设备运行方面的原因，必要时报再确认委员会

4、，调整设备运行参数。验证实施时间2012年09月01日小组负责人 2012年08月31日起草责任者起草时间 2012年08月26日 审核责任者审核时间2012年08月31日批准责任者批准时间2012年08月31日验证方案审批表吉 再确认方案名称用高效液相色谱仪测定川芎含量检验方法验证再确认方案编号S-YF-013（01）起草人崔英南 2012年08月26日审核人所在部门签字审核意见日 期质量管理部 年 月 日生产技术部 年 月 日设备动力部 年 月 日饮片车间 年 月 日供销部 年 月 日化验室 年 月 日 年 月 日 年 月 日 年 月 日 年 月 日 年 月 日 年 月 日 年 月 日批

5、准 人日 期 年 月 日批准意见同意执行日期 年 月 日1再确认目的2再确认范围3再确认责任4内容 概述再确认内容再确认小组4.2.2 预确认4.2.3 安装确认4.2.4 运行确认4.2.5 性能确认4.2.6 结果分析与评价4.2.7 再确认周期文件名称用高效液相色谱仪测定川芎含量检验方法验证文件编号S-YF-013-（01）起 草 人崔英南起草日期2012年08月26日审 核 人审核日期 年 月 日批 准 人批准日期 年 月 日执行日期 年 月 日颁发部门质量管理部版 本 号01分发号分发部门质管化验生产车间办公财务供销设备分发数量21110011目的确认经设备确认高效液相，按药典检验方

6、法测定生产品种含量，验证其检验结果科学性、准确性、精密性等，满足检验结果正确性需要，有效控制产品质量。提供必要的文件以证实本设备的操作与所预期的完全一致。根据本方案的验证，确认按检验操作规程操作，能有效的保持本设备于确认状态下，能稳定地、恒定地达成其所预期的功能。范围质量标准、检验操作规程文件的汇集。验证设备用于含量测定检验方法的准确性在标准范围内验证设备用于含量测定检验方法的精密度可靠性验证设备用于含量测定检验方法，在设计的范围内，测试结果与供试品中被测物尝试直接呈正比关系的程度。验证设备用于含量测定检验方法具有专属性。验证设备用于含量测定检验方法在达到一定精密度、准确度和线性时，其测定值高

7、低限在可控范围内。验证设备用于含量测定检验方法的耐用性。责任质量管理部负责验证方案的起草，申请审批，验证过程的监督、资料的存档，再确认方案的执行及再确认结果的评估。化验室负责实验的操作，原始记录、报告的填写。验证小组负责验证报告的审核。内容1 概述：本设备由P3000高压输液泵和UV3000可变波长紫外/可见分光检测器组成。P3000高压输液泵是以CPLD技术为核心，由单片机控制的高精密输液泵系统。它基于全数字的频率发生系统、先进的马达驱动系统及友好的人机显示页面似的该设备的操作及控制很方便。先进的泵头及单项阀设计思路，融汇了当今世界上最先进的经验，使得用户在各种使用条件下都可以保证输液的精度

8、及重复性指标。UV3000紫外/可见波长检测器是完整的高效液相色谱仪的一个重要的组成部分。该检测器的设计以当今最先进的技术为先导，通过数字化的数据处理和控制，其基线噪声和漂移降低到一个新的极限。由于采用了数字量输出功能，该检测器可以与计算机直接通过串行口相连而不需要任何数据采集单元。该设备已经设计、安装、运行、性能确认，并经过计量校验，在有效期范围内。通过该设备用于生产品种川芎中阿魏酸的含量测定，验证该设备的准确性、精密性、专属性、线性、范围、及耐用性是否符合要求。2验证内容验证小组：由厂验证领导小组安排，成立P3000/U3000高效液相色谱仪验证小组。2.1.1组长： 张杰2.1.2组员：

9、 小组职务姓名所在部门职务组员设备动力部设备管理员组员化验室主任组员质量管理部质量监督员组员化验室化验员 预确认设备基本情况2.2.1.1设备制造商及零件供应商资料设备名称：高效液相色谱仪编 号：021型 号：制 造 商：地 址：电 话：传 真：联 络 人： 设备的档案资料文件名称存放地点高效液相色谱仪质量管理部一份产品保修单质量管理部一份使用证明书质量管理部一份合格证质量管理部一份设备开箱验收单质量管理部一份设备安装调试验收单质量管理部一份色谱工作站质量管理部一份综合性评价结果上述设备档案材料符合GMP和生产工艺要求。检查人检查日期 年 月 日复核人复核日期年 月 日该设备是否满足GMP及现

10、行生产工艺要求的确认检查并确认设备组成的单体结构应完整，并且各单体结构外观应无缺陷性损坏。设备单体结构名称有无缺陷损坏可变波长紫外/可见分光检测器无缺陷损坏高压输液泵无缺陷损坏综合性评价结果设备组成的单体结构完整，并且各单体结构外观无缺陷性损坏。检查人检查日期年 月 日复核人复核日期年 月 日检查设备所有材质制造应符合生产工艺要求单体设备名称要求材质实际材质可变波长紫外/可见分光检测器不与药物发生化学反应不锈钢高压输液泵不与药物发生化学反应不锈钢综合性评价结果设备所有材质制造不与药物发生化学反应，符合药品检验要求。检查人检查日期年 月 日复核人复核日期年 月 日 设备确认该设备已经设备的设计、

11、安装、运行、性能再确认，同时该设备经计量校验确认，并在有效期范围内。 人员、环境、试药的确认化验员已经均经过培训，熟悉方法及使用的仪器，环境湿度为56%，温度为20均在合理范围内。对照品从国家生物检定研究院购置，批号为 有效期为其它试剂为色谱纯，水为纯化水均符合试验要求。3 含量测定准确度验证准确度系指用该方法测定的结果与真实值或参考值接近的程度，一般用回收率（%）表示，准确度应在规定的范围内测试。色谱条件与系统适用性试验 以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以甲醇-1%醋酸溶液（30：70）为流动相；检测波长为321nm。理论板数按阿魏酸峰计算应不低于4000。流速：min；色谱柱规格：250m

12、m；粒度：5m；进样量：10l。对照品溶液的制备 取阿魏酸对照品适量，精密称定，置棕色量瓶中，加70%甲醇制成每1ml含20g的溶液，即得。供试品溶液的制备 取本品粉末（过四号筛）约0. 5g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入70%甲醇50ml，密塞，称定重量，加热回流30分钟，放冷，再称定重量，用70%甲醇补足减失的重量，摇匀，静置，取上清液，滤过，取续滤液，即得。测定法 可用上述已知纯度的对照品做加样回收测定，即于已知被测成分对照品，在规定范围内，取同一浓度的供试品进行测定。分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10l，注入液相色谱仪，测定。同一浓度，用6个测定结果进行评价，应报告已知加入

13、量的回收率（%），或测定结果平均值与真实值之差及其相对标准偏差（RSD%）。用实测值与供试品中含有量之差，除以加入对照品量计算回收率。公式：回收率%=（C-A）/B*100%式中A为供试品所含被测成分量；B为加入对照量；C为实测值。实测值公式：平均值X=Xi/n平均偏差=Xi-X/n平均相对偏差=平均偏差/平均值附图：样品与对照品峰面积见图谱。加样回收率考察取本品粉末6份，精密称定，按照供试品方法制备，得到供试品溶液各50ml，各加入10ml对照品溶液，摇匀，得到待测溶液，滤过，进样，计算峰面积，得到数据如下表：注意：在加样回收试验中须注意对照品的加入量与供试品中被测成分含有量之和必须在标准曲

14、线性范围之内；加入的对照品的量要适当，过小则引起较大的相对误差，过大则干扰成分相对减少，真实性差。表1 含量测定川芎加样回收率试验表序号样品称量（g）样品阿魏酸的含量（mg）对照品加入量（mg）实测值（mg）回收率（%）回收率的平均值（）RSD（%）123456检测人： 检测日期：结果评价：检查人： 复核人： 日期： 年 月 日精密度验证精密度系指在规定的测试条件下，同一个均匀供试品，经多次取样测定所得结果之间的接近程度。精密度一般用偏差，标准偏差或相对标准偏差表示。同一浓度，用6个测定结果进行评价。精密度包含重复性，中间精密度和重现性，其中重现性是在不同化验室不同时间进行实验，查看实验结果有

15、没有重现性，本公司只一个实验室此项略。重复性（设操作人员A）在相同操作条件下，由同一个分析人员在较短的间隔时间内测定所得结果的精密度称为重复性；色谱条件与系统适用性试验 以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以甲醇-1%醋酸溶液（30：70）为流动相；检测波长为321nm。理论板数按阿魏酸峰计算应不低于4000。流速：min；色谱柱规格：250mm；粒度：5m；进样量：10l。对照品溶液的制备 取阿魏酸对照品适量，精密称定，置棕色量瓶中，加70%甲醇制成每1ml含20g的溶液，即得。供试品溶液的制备 取本品粉末（过四号筛）约0. 5g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入70%甲醇50ml，密塞，称定

16、重量，加热回流30分钟，放冷，再称定重量，用70%甲醇补足减失的重量，摇匀，静置，取上清液，滤过，取续滤液，即得。含量测定计算 式中f为对照品的浓度除以对照品峰面积得到的值的平均值；AT为对照品峰面积；单位v*sec ；n为供试品的稀释倍数；WT为供试品的称量；单位g。将计算的结果填入下表表2 含量测定阿魏酸重复性试验表序号样品称量（g）含量（g/g）含量的平均值（g/g）RSD（%）123456检测人： 检测日期：结果评价：检查人： 复核人： 日期： 年 月 日中间精密度（换一时间，换一操作人员，设操作人员为B）在同一个实验室，不同时间由不同分析人员用不同设备测定结果之间的精密度称为中间精密

17、度；同一浓度，用6个测定结果进行评价。色谱条件与系统适用性试验 以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以甲醇-1%醋酸溶液（30：70）为流动相；检测波长为321nm。理论板数按阿魏酸峰计算应不低于4000。流速：min；色谱柱规格：250mm；粒度：5m；进样量：10l。对照品溶液的制备 取阿魏酸对照品适量，精密称定，置棕色量瓶中，加70%甲醇制成每1ml含20g的溶液，即得。供试品溶液的制备 取本品粉末（过四号筛）约0. 5g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入70%甲醇50ml，密塞，称定重量，加热回流30分钟，放冷，再称定重量，用70%甲醇补足减失的重量，摇匀，静置，取上清液，滤过，取续滤液

18、，即得。含量测定计算公式：式中f为对照品的浓度除以对照品峰面积得到的值的平均值；AT为对照品峰面积；单位v*sec ；n为供试品的稀释倍数；WT为供试品的称量；单位g。表3： 含量测定阿魏酸甲中间精密度试验表序号样品称量（g）含量（g/g）含量的平均值（g/g）RSD（%）操作员A123456操作员B123456检测人： 检测日期：结果评价：检查人： 复核人： 日期： 年 月 日线性及线性范围线性系指在设计的范围内，测试结果与供试品中被测物尝试直接呈正比关系的程度。应在规定的范围内测定线性关系。可用一贮备液经精密稀释，或分别精密称样，制备一系列供试品的方法进行测定，至少制备5个浓度的供应品，以

19、测得的响应信号作为被测物尝试的函数作图，观察是否呈线性，再用最小二乘法进行线性回归。必要时，响应信号可经数学转换，再进行线性回归计算。数据要求：应列出回归方程，相关系数和线性图。范围系指能达到一定精密度、准确度和线性、测试方法适用的高低限尝试或量的区间。范围应根据分析方法的具体应用和线性、准确度、精密度结果及要求确定。色谱条件与系统适用性试验 以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以甲醇-1%醋酸溶液（30：70）为流动相；检测波长为321nm。理论板数按阿魏酸峰计算应不低于4000。流速：min；色谱柱规格：250mm；粒度：5m；进样量：10l。对照品溶液的制备 取阿魏酸对照品适量，精密称定，置

20、棕色量瓶中，加70%甲醇制成每1ml含20g的溶液，即得。供试品溶液的制备 取本品粉末（过四号筛）约0. 5g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入70%甲醇50ml，密塞，称定重量，加热回流30分钟，放冷，再称定重量，用70%甲醇补足减失的重量，摇匀，静置，取上清液，滤过，取续滤液，即得。含量测定计算公式：式中f为对照品的浓度除以对照品峰面积得到的值的平均值；AT为对照品峰面积；单位v*sec ；n为供试品的稀释倍数；WT为供试品的称量；单位g。表4 川芎阿魏酸不同浓度的峰面积浓度（mg/ml）峰面积（v*sec）回归方程y=x相关系数R2=检测人： 检测日期：结果评价：检查人： 复核人： 日

21、期： 年 月 日耐用性耐用性系指在测定条件有小的变动时，测定结果不受影响的承受程度，为使方法用于常规检验提供依据。开始研究分析方法时，就应考虑其耐用性。液相色谱法中典型的变动因素有：不同厂牌或批号的色谱柱、固定相，不同类型的担体，柱温，进样口和检测器温度等。经试验，应说明小的变动能否通过设计的系统适用性试验，以确保方法有效。本试验以流动相的组成比例、同一规格的色谱柱为变动因素，得出测定结果不受影响的程度，为使方法用于常规检验提供依据。对照品溶液的制备 取阿魏酸对照品适量，精密称定，置棕色量瓶中，加70%甲醇制成每1ml含20g的溶液，即得。供试品溶液的制备 取本品粉末（过四号筛）约0. 5g，

22、精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入70%甲醇50ml，密塞，称定重量，加热回流30分钟，放冷，再称定重量，用70%甲醇补足减失的重量，摇匀，静置，取上清液，滤过，取续滤液，即得。色谱条件与系统适用性试验 以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；1、以甲醇-1%醋酸溶液（30：70）为流动相；检测波长为321nm。理论板数按阿魏酸峰计算应不低于4000。流速：min；色谱柱规格：250mm；粒度：5m；进样量：10l。2、以甲醇-1%醋酸溶液（35：65）为流动相；检测波长为321nm。色谱柱规格：250mm；粒度：5m；进样量：10l。测定将数据整理，填入下表。表4 含量测定耐用性试验表保留时间分离度

23、理论板数色谱条件1色谱条件2检测人： 检测日期：结果评价：检查人： 复核人： 日期： 年 月 日专属性专属性是指在其他成分可能存在下，采用的方法能正确测定出被测 的特性，以不含被测成分的供试品（除去含待测成分药材或不含待测成分的模拟复方）试验说明方法的专属性。色谱法，光谱法等应附代表性图谱，并标明相关成分在图中的位置，色谱法中的分离度应符合要求。必要时可采用二极管阵列检测和质谱检测，进行峰纯度检查。色谱条件与系统适用性试验 以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以甲醇-1%醋酸溶液（30：70）为流动相；检测波长为321nm。理论板数按阿魏酸峰计算应不低于4000。流速：min；色谱柱规格：250m

24、m；粒度：5m；进样量：10l。对照品溶液的制备 取阿魏酸对照品适量，精密称定，置棕色量瓶中，加70%甲醇制成每1ml含20g的溶液，即得。供试品溶液的制备 取本品粉末（过四号筛）约0. 5g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入70%甲醇50ml，密塞，称定重量，加热回流30分钟，放冷，再称定重量，用70%甲醇补足减失的重量，摇匀，静置，取上清液，滤过，取续滤液，即得。空白溶液的制备：直接取甲醇作为空白溶液。含量测定计算公式：将结果填入下表。表3 含量测定专属性试验表保留时间供试品溶液对照品溶液空白溶液检测人： 检测日期：验证标准：供试品溶液中应呈现与阿魏酸对照品保留时间相同的色谱峰；空白溶液中在这点应无色谱峰。结果评价：检查人： 复核人： 日期： 年 月 日4最终评价:41 经上述试再确认明高效液相色谱仪安装符合设计和GMP要求，资料和文件符合GMP管理要求。 高效液相色谱仪的运行性能符合设计和产品含量测定要求。 P3000/UV3000高效液相色谱仪在检验药材时，能保证检验的药材含量准确性、稳定性的要求，保证质量符合要求。5 再验证再验证时间：设备改进或修理足以影响操作功能时；设备发生改变时；检验方法发生改变时；一般每年一次进行再验证。