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1、生物技术专业毕业论文植物组织培养生物技术专业毕业论文-植物组织培养2008级生物技术专业毕业论文 引言 1.1植物组织培养的概述 1.1.1植物组织培养的概念 植物组织培养(plant tissue culture)是植物的组织培养是根据植物细胞具有全能性这个理论，近几十年来发展起来的一项无性繁殖的新技术。植物的组织培养广义又叫离体培养，指从植物体分离出符合需要的组织.器官或细胞，原生质体等，通过无菌操作，在人工控制条件下进行培养以获得再生的完整植株或生产具有经济价值的其他产品的技术。狭义是指组培指用植物各部分组织，如形成层.薄壁组织.叶肉组织.胚乳等进行培养获得再生植株，也指在培养过程中从各

2、器官上产生愈伤组织的培养，愈伤组织再经过再分化形成再生植物。 1.1.2植物组织培养的理论起源 19世纪30年代，德国植物学家施莱登和德国动物学家施旺创立了细胞学说，根据这一学说，如果给细胞提供和生物体内一样的条件，每个细胞都应该能够独立生活。 1902年，德国植物学家哈伯兰特在细胞全能性的理论是植物组培的理论基础。 1958年，一个振奋人心的消息从美国传向世界各地，美国植物学家斯蒂瓦特等人，用胡萝卜韧皮部的细胞进行培养，终于得到了完整植株，并且这一植株能够开花结果，证实了哈伯兰特在五十多年前关于细胞全能的预言。植物组培的简单过程如下:植物组培的大致过程是:在无菌条件下，将植物器官或组织(如芽

3、、茎尖、根尖或花药)的一部分切下来，用纤维素酶与果胶酶处理用以去掉细胞壁，使之露出原生质体，然后放在适当的人工培养基上进行培养，这些器官或组织就会进行细胞分裂，形成新的组织。不过这种组织没有发生分化，只是一团薄壁细胞，叫做愈伤组织。在适合的光照、温度和一定的营养物质与激素等条件下，愈伤组织便开始分化，产生出植物的各种器官和组织，进而发育成一棵完整的植株。 植物组织培养即植物无菌培养技术，又称离体培养，是根据植物细胞具有全能性的理论，利用植物体离体的器官如根、茎、叶、茎尖、花、果实等)组织(如形成层、表皮、皮层、髓部细胞、胚乳等)或细胞(如大孢子、小孢子、体细胞等)以及原生质体,在无菌和适宜的人

4、工培养基及光照、温度等人工条件下，能诱导出愈伤组织、不定芽、不定根，最后形成完整的植株的学科。 1.1.3植物组织培养的培养方法与基本步骤 2008级生物技术专业毕业论文 培养方法 1、非试管微组织快繁 非试管微组织快繁技术是将外植体(一般要求带一叶一芽)放置在室内外普通沙子培养基上进行培养，利用植物腋芽自然倍增达到快速繁殖的目的。一般植物7,15天可以生长出根系。此技术投资低，操作环节少。 2、试管组织培养 试管组织培养是将外植体(即离体组织、器官或细胞)放置在组培瓶等器皿中在无菌的条件下进行组织培养获得组培瓶苗。 培养步骤 第一步，将采来的植物材料除去不用的部分，将需要的部分仔细洗干净，如

5、用适当的刷子等刷洗。把材料切割成适当大小，即灭菌容器能放入为宜。置自来水龙头下流水冲洗几分钟至数小时，冲洗时间视材料清洁程度而宜。易漂浮或细小的材料，可装入纱布袋内冲洗。流水冲洗在污染严重时特别有用。洗时可加入洗衣粉清洗，然后再用自来水冲净洗衣粉水。洗衣粉可除去轻度附着在植物表面的污物，除去脂质性的物质，便于灭菌液的直接接触。当然，最理想的清洗物质是表面活性物质吐温。 第二步是对材料的表面浸润灭菌。要在超净台或接种箱内完成，准备好消毒的烧杯、玻璃棒、70%酒精、消毒液、无菌水、手表等。用70%酒精浸10,30秒。由于酒精具有使植物材料表面被浸湿的作用，加之70%酒精穿透力强，也很易杀伤植物细胞

6、，所以浸润时间不能过长。有一些特殊的材料，如果实、花蕾、包有苞片、苞叶等的孕穗，多层鳞片的休眠芽等等，以及主要取用内部的材料，则可只用70%酒精处理稍长的时间。处理完的材料在无菌条件下，待酒精蒸发后再剥除外层，取用内部材料。 第三步是用灭菌剂处理。表面灭菌剂的种类较多，可根据情况选取12种使用见表。第四步是用无菌水涮洗，涮洗要每次3min左右，视采用的消毒液种类，涮洗3-l0次左右。无菌水涮洗作用是免除消毒剂杀伤植物细胞的副作用注意:?酒精渗透性强，幼嫩材料易在酒精中失绿，所以浸泡时间要短，防止酒精杀死植物细胞。?老熟材料，特别是种子等可以在酒精中浸泡时间长一些，如种子可以浸泡5分钟。?升汞的

7、渗透力弱，一般浸泡10分钟左右，对植物材料的杀伤力不大。?漂白粉容易导致植物材料失绿，所以对于幼嫩材料要慎用。?在消毒液中加入浓度为0.080.12%的吐温20或80(一种湿润剂)，可以降低植物材料表面的张力，达到更好的消毒效果。 1.1.4植物组织培养的应用 (1) 苗木快速繁殖 目前用于快速繁殖的植物1 000余种，并且还不断有新的报道。市场上出售的组培苗主要是花卉、果木及经济作物。据不完全统计，仅观赏花卉而言，一般认为重要的包括60余科，近l 000种，如月季(Rosa chinen-s )、菊花(Dendranthema morifolium)、牡丹(Paeonia suffrutic

8、osa)、花叶芋(Caladium bicolor)、龟背竹(Monstera deliciosa)、各类兰花等。其他植物如柑桔属(Citrus)、按树(Eucalyptus robusta)、槭树属(Acer)和珍贵的针叶树等2008级生物技术专业毕业论文 6也都应用组织培养快速繁殖。 (2) 脱毒苗培育 脱毒苗培育主要集中于观赏植物。观赏植物受到病毒侵染后，品质下降，产量降低。长期无性繁殖的植物，在繁殖过程中病毒可通过营养体进行传递，逐代累积，使病毒病的为害更为严重。为消除病毒的为害，2O世纪80年代人们就广泛采用了茎尖组培脱毒的方法。茎尖生长点通常没有或只有很少病毒，以茎尖为材料或加以适

9、当的热处理，在无菌条件下培养即可获得脱毒植株，然后通过决繁得到大量无毒苗。脱毒后的植株生长势强，品质提高，产量增加，且能够保持品种的优良特性。目前，利用生物技术方法对植物脱毒苗进行组织培养和扩大繁殖，已被各国园艺界广泛应用，并且我国的脱毒技术已取得了很大成就。 (3) 新品种培育 通过组织培养产生的体细胞无性系变异(常规育种中不可能出现的变异)，为植物的品种改良和新品种的选育提供了新的途径。20世纪80年代以来，我国在作物无性系变异育种方面取得了令人鼓舞的进展，已培育出了7一大批优良新品种。利用胚培养技术是育种研究中克服胚败育或发育不良，提高萌发率以及提早萌发，缩短童期的有效手段。此外，组织培

10、养可为植物遗传转化提供理想的受体材料，是植物基因工程研究的基本条件和重要手段，在植物基因工程改良中发挥着重要作用。 (4) 种质资源保存 地球上存在着丰富的植物种质资源库，对植物育种、生态系统的丰富稳定以及人类的可持续发展都是无价之宝。但是，这些物种的存在正受到越来越严重的多种威胁，许多濒I临灭绝。而传统的种子保存，随着时间的推移，生活力下降，并常常受到病虫害的侵染。实地保存不但成本高，而且受到天灾毁灭的危险。而植物组织培养的成功，就可以将少量的芽、胚或茎尖保存在试管中，不仅节省成本，利用很小的空间就能安全地保存大量的物种基因，需要时随时取出大量繁殖，并且因为不带病毒和病原菌，可以将其在国际间

11、进行交换，达到资源共享。 (5) 次生代谢物的生产 2008级生物技术专业毕业论文 高等植物中含有的药物、调味品及香料等天然成分，一直是人类生活不可缺少的，但很多的复合物人工还无法合成。随着生活水平的提高和疾病的复杂化，人们对这一类生物产品的需求越来越多;相反，由于野生资源的减少，环境的恶化，来自于高等植物的一些药物越来越不能满足需求，而组织培养过程中可产生这些有用的次生物。利用该特点，可以利用组织培养，用工厂化生产的方式，不受季节和地区限制地进行生产。如银杏(Ginkgo biloba)是原产我国的重要药用植物，主要含黄酮类和银杏内醋类等药用成分，由叶片提取药用成分受到含量低、提取工艺复杂、

12、成本高等问8题的限制，通过离体培养生产黄酮和银杏内脂近年取得了一定进展。刺果番荔枝中含有抗肿瘤活性的番荔素，并被证明还具有杀虫活性、细胞毒性、9抗疟活性。赵沛基等进行了刺果番荔枝(Annonam muricata)的组织培养，为解决其快速繁殖以及为下一步开展次生代谢产物生物合成的研究提供了基础性资料。 1.1.5 植物组织培养的发展现状 (1) 近年来植物组织培养技术发展十分迅速,其发展的水平和程度最突出地表现在相关研究的数量。在中国期刊网,采用“组织培养”作为篇名精确搜索,结果发现在所有组织培养的相关研究中植物的组织培养占有绝对优势(91.95%) 。 (2) 随着植物组织培养技术在国内的兴

13、起和发展,该技术的应用和研究迅速渗入到相关的部门和领域。通过对国内已发表权威核心期刊论文系统搜索,并将其根据所属领域进行系统划分。结果发现,目前植物组织培养的应用和研究主要涉及到花卉、药用植物、农林蔬菜和理论研究4 个方面。 (3) 在我国,植物组织培养的发展不仅表现在不同领域中的进步和繁荣,而且体现在所涉及和研究植物种类丰富度的增加。21 世纪,植物组织培养所涉及的植物种类已经几乎遍及所有研究领域,而且植物种类的数量还将进一步增加。 (4) 科学技术的发展从来都不是单一孤立的,在技术和技术之间、领域和领域之间会不断地交叉、融合。在植物组织培养的发展历程中,同样也表现出这种变化趋势。21世纪最

14、明显、最突出的特点是植物组织培养技术与2008级生物技术专业毕业论文 分子手段密切结合并快速发展。 (5) 定性与定量研究历来是科学研究的2 种基本定位方向。,随着植物组织培养研究的深入,研究所选取的自变量逐渐丰富和全面;因变量并非仅仅局限于基本的形态指标,生理生化指标也逐渐被选择,并且作为重要的试验变量;试验设计方法也逐步从单因素试验过渡到设计相对复杂、但结果更加可靠的多因素设计。 (6) 随着科技的进步,植物组织培养在微观和宏观2 个大方向上都有非常广阔的发展空间。在微观方面,随着分子技术的蓬勃发展,从分子水平上探索植物组织培养的机理,研究植物组织培养过程的基本规律,将是未来研究的一大热点

15、,因为植物组织培养技术材料的快速易得将会表现出明显的优势;在宏观方面,植物组织培养技术将更加取向于快速扩繁,趋近于生产实践,将加快从实验室搬到生产实际应用大舞台上的步伐,其快速化、高效化、简约化、低成本等特点将是研究考虑的主要因素。 1.2米斛的概述 米斛又称霍山石斛，是兰科石斛属的草本植物。中国国家地理标志产品。主产于大别山区的安徽省霍山县，大多生长在云雾缭绕的悬崖峭壁崖石缝隙间和参天古树上。霍山石斛能大幅度提高人体内SOD(延缓衰老的主要物质)水平，对经常熬夜、用脑、烟酒过度，体虚乏力的人群，经常饮用非常适宜。霍山石斛有明目作用，也能调和阴阳、壮阳补肾、养颜驻容，从而达到保健益寿的功效。

16、1.3米斛的形态与生物学特征 形态特征 茎直立，肉质，长3-9厘米，从基部上方向上逐渐变细，基部上方粗3-18毫米，不分枝，具3-7节，节间长3-8毫米，淡黄绿色，有时带淡紫红色斑点，干后淡黄色。叶革质，2-3枚互生于茎的上部，斜出，舌状长圆形，长9-21厘米，宽5-7毫米，先端钝并且微凹，基部具抱茎的鞘;叶鞘膜质，宿存。总状花序1-3个，从落了叶的老茎上部发出，具1-2朵花;花序柄长2-3毫米，基部被1-2枚鞘;鞘纸质，卵状披针形，长3-4毫米，先端锐尖;花苞片浅白色带栗色，卵形，长3-4毫米，先端锐尖;花梗和子房浅黄绿色，长2-2.7厘米;花淡黄绿色，开展;中萼片卵状披针形，长12-14毫

17、米，宽4-5毫米，先端钝，具5条脉;侧萼片镰状披针形，长12-14毫米，宽5-7毫米，先端钝，基部歪斜;萼囊近矩形，长5-7毫米，末端近圆形;花瓣卵状长圆 2008级生物技术专业毕业论文 1 图1.霍山石斛兰 形，通常长12-15毫米，宽6-7毫米，先端钝，具5条脉;唇瓣近菱形，长和宽约相等，1-1.5厘米、基部楔形并且具1个胼胝体，上部稍3裂，两侧裂片之间密生短毛，近基部处密生长白毛;中裂片半圆状三角形，先端近钝尖，基部密生长白毛并且具1个黄色横椭圆形的斑块;蕊柱淡绿色，长约4毫米，具长7毫米的蕊柱足;蕊柱足基部黄色，密生长白毛，两侧偶然具齿突;药帽绿白色，近半球形，长1.5毫米，顶端微凹。

18、花期5月。 该种很近细茎石斛Dendrobium moniliforme(L.)Sw.，区别在于该种的茎较短，在基部上方肿胀，然后向上逐渐变细，唇瓣中裂片半圆状三角形，易于区别。 生长习性 图2.霍山石斛植株 产河南西南部(南召)、安徽西南部(霍山)。生于山地林中树干上和山谷岩石上。霍山石斛主产于大别山区的安徽省霍山县，属未进化的的气生兰科植物，大多生长在云雾缭绕的悬崖峭壁崖石缝隙间和参天古树上。其生长条件极为苛刻。 性状评价 霍山石斛俗称米斛，霍山石斛一名，最早见载于清代赵学敏本草钢目拾遗， 2008级生物技术专业毕业论文 图3. 霍山石斛干品 距今有200年以上历史。该书记载称:“霍石斛出

19、江淮霍山，形似钗斛细小，色黄而形曲不直，有成球者，彼土人以代茶茗.，霍石斛嚼之微有浆、黏齿、味甘、微咸，形缩为真”该书引用年希尧集经验方曰:“长生丹用甜石斛，即霍山石斛也。”该书又引用其弟赵学楷百草镜语曰:“石斛近时有一种形短祗寸许，细如灯芯，色青黄、咀之味甘，微有滑涎，系出六安及颍州府霍山是名霍山石斛，最佳.” 中国药典会委员，石斛属研究专家包雪声教授在中华仙草之最,霍山石斛一书前言开篇语中就说道:“如果说世界上确有什么仙草的话，这种仙草应当是霍山石斛。” 道家经典道藏曾把霍山石斛、天山雪莲、三两人参、百二十年首乌、花甲茯苁、深山灵芝、海底珍珠、冬虫夏草等列为中华“九大仙草”，且霍山石斛名列

20、之首。霍山石斛又名龙头凤尾草、皇帝草。主产于大别山安徽霍山，生长于崇山峻岭之峭壁上，秉山川之天然灵气，滋生出名贵之瑞草。常代茶茗冲饮服用。 霍山石斛历史上一直贵为皇室专用，皇帝们为了长生不老而用霍山石斛炼制长生丹。也成为新贵们争先到原产地抢购的养生保健佳品。霍山石斛历史上被誉为“中华九大仙草之首”，“救命仙草”现代人尊称为“中华仙草之最”“健康软黄金”，用霍山石斛加工的饮品,枫斗，被称为“枫斗之王”。 1.4米斛的药用价值 补五脏虚劳。心阴虚一营养大脑，营养心肌，降心火;肝阴虚一改善肝血循环，养肝明目;脾胃阴虚一养胃生津，促进肠胃蠕动;肺阴虚一润肺、祛燥、平咳;肾阴虚一补阴潜阳，生精血、填骨髓

21、。 抗肿瘤降血糖。中国科技大学、中山医科大学的研究表明:“霍山石斛具有增强T细胞、B细胞，NK细胞和巨噬细胞的作用，对抑制肿瘤和降血糖有非常好的疗效。 抗衰老消除疲。霍山石斛能大幅度提高体内SOD(延缓衰老的主要物质)水平，对经常熬夜、用脑、烟酒过度，体虚乏力的人群，经常饮用非常2008级生物技术专业毕业论文 适宜。 明目恢复嗓音。台湾阳明大学新药研究中心等科研机构，经过多年研究表明，霍山石斛的确有明目作用，以霍山石斛为主的眼科用药有较高的临床应用价值，霍山石斛医治了中国很多失音，吵哑的政府官员、教师和演艺界人士。 其他医效。功效:具有益胃润肺、养阴生津之功效。对亏阴虚火、五脏虚损、烦热自汗、

22、精气不足、眼目昏暗、胃热烦渴、咳嗽咽痛、口燥舌苔、熬夜积火、烟酒过度有显著疗效。常服能治标固本、调和阴阳、壮阳补肾、养颜驻容，从而达到保健益寿之功效。 材料与方法 2.1实验材料 2.11实验原料 米斛幼苗:安徽华艺兰业兰花生产基地。 2.1.2实验试剂 名称 生产厂家 CaCl2?2H2O(AR) 广东汕头市西陇化工厂 琼脂(AR) 青岛冻粉厂 蔗糖(AR) 天津化学试剂厂 葡萄糖(AR) 天津化学试剂厂 氢氧化钠(1mol/L)(AR) 天津化学试剂厂 脲(AR) 天津化学试剂厂 NH4Cl(AR) 天津化学试剂厂 IAA(AR) 上海化学试剂有限公司 6-BA(AR) 国药集团化学试剂有

23、限公司 NaCl (AR) 广东汕头市西陇化工厂 75,乙醇(AR) 天津化学试剂厂 乙二胺四乙酸钠(AR) 上海东懿化学试剂公司 KH2PO4(AR) 天津化学试剂三厂 KNO3(AR) 天津化学试剂三厂 MgSO4?7H2O(AR) 天津化学试剂三厂 FeSO4?7H2O(AR) 天津化学试剂三厂 2008级生物技术专业毕业论文 CuSO4?5H2O(AR) 天津化学试剂三厂 NH4NO3(AR) 天津化学试剂三厂 KI(AR) 上海东懿化学试剂公司 H3BO3(AR) 上海东懿化学试剂公司 MnSO4?4H2O(AR) 上海东懿化学试剂公司 ZnSO4?7H2O(AR) 天津化学试剂厂

24、NaMoO4?7H2O(AR) 上海东懿化学试剂公司 CoCl2?6H2O(AR) 上海东懿化学试剂公司 HCl(1mol/L)(AR) 天津化学试剂厂 以上试剂均分析纯 2.1.3实验器材及仪器 实验用具:镊子，解剖刀，接种针，铝饭盒，锡箔纸，记号笔，橡皮筋，酒精灯，注射器，移液枪，吸管，培养皿，容量瓶，三角瓶，纱布，细绳，称量纸，药勺等。实验设备见表2-1。 表2-1重要实验设备 表1. Important experimental device 仪器名称 生产厂家 Instruments Manufacturer 电子天平 德国赛多利斯股份有限公司 分析天平 德国赛多利斯股份有限公司 冰

25、箱 海尔集团 微电脑电磁炉 荣事达集团 立式高压蒸汽灭菌锅 上海博迅实业有限公司医疗设备厂 FS-1型可调高速匀浆器 江苏省金坛市金城国胜实验仪器厂 洁净工作室 上海博迅实业有限公司医疗设备厂 自动高温灭菌锅 上海生化仪器厂 恒压干热灭菌箱 上海博迅实业有限公司医疗设备厂 光照恒温培养箱 海精宏试验设备有限公司 微电脑电磁炉 荣事达集团 2008级生物技术专业毕业论文 GHP-250智能光照培养箱 上海三发科学仪器有限公司 无菌超净工作台 苏净集团安泰公司 2.2培养基成分 2.2.1 培养基的基本组分 培养基的组成对植物细胞的生长和代谢物质的生产影响极大。植物细胞培养的培养基多种多样，其组分

26、比较复杂，但培养基一般都含有碳源、氮源、无机盐和生长因子等几大类组分。 2.2.1.1 碳源 不同的细胞对碳源的利用有所不同，在配制培养基时，应当根据细胞的营养需要而选择不同的碳源。植物细胞通常使用2,3,的蔗糖作碳源，也有使用葡萄糖或果糖。具有叶绿体的植物和藻类可以利用二氧化碳为碳源等。使用单糖的优点是方便分析测定，且有助于细胞生长动力学分析。 2.2.1.2 氮源 氮源是植物细胞生长、繁殖和生物碱等次级代谢物的生成和积累所必不可少的营养物质。氮源可分为有机氮源和无机氮源两大类，不同的细胞对氮源有不同的要求，也应当根据细胞的营养要求进行选择和配制。 2.2.1.3 无机盐 无机盐的主要作用是

27、提供细胞生命活动所必不可缺的各种无机元素，并对细胞内外的pH值、氧化还原电位和渗透压起调节作用。根据细胞对无机元素需要量的不同，无机元素可分为大量元素和微量元素两大类。不同的无机元素在细胞的生命活动中作用有所不同，有些是细胞的主要组成元素，如磷、硫等;有些是酶分子的组成元素，如磷、硫、锌、钙等;有些作为酶的激活剂调节酶的活性，如钾、镁、锌、铜、铁等;有些则对pH值、氧化还原电位、渗透压等起调节作用，如纳、钾、钙、磷、氯等。 2.2.1.4 生长因子 生长因子是指细胞生长繁殖所必须的微量有机化合物。主要包括各种氨基酸、嘌呤、嘧啶、维生素、卟啉及其衍生物等。氨基酸是蛋白质和多肽的组分;嘌呤、嘧啶是

28、某些辅酶或辅基的组分;维生素主要起辅酶作用。 2.2.1.5 植物生长调节物质 2008级生物技术专业毕业论文 植物生长调节物质对植物细胞的生长和代谢物质生产的影响很大。它可分为两大类:植物生长素类有 2，4D ( 二氯苯氧基乙酸 )、IAA ( 吲哚基醋酸 )、NAA ( 萘乙酸 )等，细胞激动素类有 BA (苄基腺嘌呤 )、动力精和玉米素。 2.2.1.6 水 配制培养基母液时要用蒸馏水，以保持母液以及培养基成分的精确性，防止储存过程中发霉变质。 2.2.2 培养基母液的成分 ? 水 配制培养基母液时要用蒸馏水，以保持母液及培养基成分的精确性，防止储藏过程发霉变质。 ? 无机盐营养成分(包

29、括大量元素、微量元素和铁盐)。 ? 有机营养成分(包括维生素，氨基酸及微生物等)。 ? 碳水化合物。 ? 植物生长调节物质(常称为激素)。 ? 琼脂或其他支持物。 ? 其他添加物(含天然提取物)。 本实验采用的是1/2 MS培养基:MS培养基是由Murashige和Skoog为培养烟草细胞而设计的。特点是无机盐和离子浓度比较高，是一种较稳定的平衡溶液。其养分的数量和比例较为合适，可满足植物的营养和生理需要。它的硝酸盐含量较其他培养基为高，广泛的应用与植物的器官、花药、细胞和原生质体培养，效果良好。 19 2.2.3 MS培养基母液表2 MS培养基配方 Table 2-2 Formula of

30、MS medium 类别 成分 规定量 称取量 母液体积 扩大倍数 配1升培养Category Compone(mg) (mg) (ml) 基的吸取量nts (ml) 大量元素 KNO 1900 19000 5000 10 100 3NHNO 1650 16500 43MgSO.7HO 370 3700 42KHPO 170 1700 24CaCl.2HO 440 4400 222008级生物技术专业毕业论文 微量元素 MnSO.4HO 22.30 2230 5000 100 10 42ZnSO.7HO 8.6 860 42HBO 6.2 620 33KI 0.83 83 NaMoO.2H0.

31、25 25 24O 0.025 2.5 2CuSO.5HO 0.025 2.5 42CoCl.6HO 22铁盐 Na-EDTA 37.25 3725 5000 100 10 2FeSO.7HO 27.85 2785 42有机物质 甘氨酸 2.0 100 500 100 10 盐酸硫胺素 0.4 20 盐酸吡哆素 0.5 25 烟酸 0.5 25 肌醇 100 5000 2.3 实验方法 严格清洗培养基 培养基 三角烧瓶 配制 灭菌 外植体 外植体 外植体 消毒接种 培养 扩大培养 炼苗 移栽 2.3.1 配制MS培养基母液 以1000ml为单位制备，配制各母液时，先用量筒称取蒸馏水约700ml

32、，放入1000ml的烧杯中，按顺序用天平称量所需的成分倒入烧杯中，并用玻璃棒搅拌，待第一种化合物完全溶解再加入第二种，当最后一种完全溶解后，将溶液倒入1000ml的容量瓶中，用蒸馏水定容至1000ml，然后倒入磨口试剂瓶中，在瓶o壁上贴上标签，存放在4C冰箱中保存，以备留用(使用前须摇匀)。 注:铁盐母液应将FeSO.7HO缓慢倒入NaEDTA溶液中，同时缓慢搅拌，422配好后置入棕色瓶中保存。2008级生物技术专业毕业论文 2.3.2 配制激素母液,分别单独配制生长素和细胞分裂素, 1、生长素IAA 配制两种浓度0.1mg/mL、0.5mg/mL 称取IAA10mg，先用少量95%乙醇或0.1mol/L NaOH溶解，用蒸馏水定容o至100ml,倒入小磨口试剂瓶中，制成0.1mg/mL生长素I