ImageVerifierCode 换一换
格式:DOCX , 页数:8 ,大小:465.79KB ,
资源ID:4611845      下载积分:3 金币
快捷下载
登录下载
邮箱/手机:
温馨提示:
快捷下载时,用户名和密码都是您填写的邮箱或者手机号,方便查询和重复下载(系统自动生成)。 如填写123,账号就是123,密码也是123。
特别说明:
请自助下载,系统不会自动发送文件的哦; 如果您已付费,想二次下载,请登录后访问:我的下载记录
支付方式: 支付宝    微信支付   
验证码:   换一换

加入VIP,免费下载
 

温馨提示:由于个人手机设置不同,如果发现不能下载,请复制以下地址【https://www.bdocx.com/down/4611845.html】到电脑端继续下载(重复下载不扣费)。

已注册用户请登录:
账号:
密码:
验证码:   换一换
  忘记密码?
三方登录: 微信登录   QQ登录  

下载须知

1: 本站所有资源如无特殊说明,都需要本地电脑安装OFFICE2007和PDF阅读器。
2: 试题试卷类文档,如果标题没有明确说明有答案则都视为没有答案,请知晓。
3: 文件的所有权益归上传用户所有。
4. 未经权益所有人同意不得将文件中的内容挪作商业或盈利用途。
5. 本站仅提供交流平台,并不能对任何下载内容负责。
6. 下载文件中如有侵权或不适当内容,请与我们联系,我们立即纠正。
7. 本站不保证下载资源的准确性、安全性和完整性, 同时也不承担用户因使用这些下载资源对自己和他人造成任何形式的伤害或损失。

版权提示 | 免责声明

本文(BPG 层析柱标准装柱流程规范.docx)为本站会员(b****3)主动上传,冰豆网仅提供信息存储空间,仅对用户上传内容的表现方式做保护处理,对上载内容本身不做任何修改或编辑。 若此文所含内容侵犯了您的版权或隐私,请立即通知冰豆网(发送邮件至service@bdocx.com或直接QQ联系客服),我们立即给予删除!

BPG 层析柱标准装柱流程规范.docx

1、BPG 层析柱标准装柱流程规范操 作 标 准目的:为了使BPG300层析柱装柱过程可重复,并能够得到较好的柱效,故建立此操作规范。范围:配合KTA process系统进行有效的蛋白质纯化操作。责任人:层析工序操作人员标准操作程序:1 基本术语概念填料因子(Packing Factor, PF):指在在装柱过程中,用低流速(如60cm/h)对填料进行沉降压缩得到的调料高度和最后装柱完成时填料高度(柱高)的比值,GEHC生产的各种常见填料的PF参见GEHC AxiChrom 300-1000 columns User Manual 28-9562-89 Edition AA;线性流速(linear

2、 flow rate):单位时间内液体流经的直线距离,常用cm/h表示;体积流速(volume flow rate):单位时间内液体流经的空间容积,常用ml/min表示;换算:2 准备工作2.1 检查层析柱的完整性,所带配件,是否水平(用水平仪矫正),是否清洁(如有污染应进行清洗)。2.2 确定所用填料及其特性、浓度等以DEAE Sepharose Fast Flow填料为例,其填料因子(PF)为1.15,新填料(slurry)浓度为75%(保存于20%乙醇中),耐压3bar。2.3 确定放大后的工艺参数以XX生化制药股份有限公司的放大工艺为例,中试工艺参数:柱高h=10cm;体积流速v1=3

3、ml/min;柱内径d=1.6cm.即,线性流速v2=v1/s柱=3/(3.140.82) cm/min=1.5 cm/min;样品与填料接触时间t=h/v2=10/1.5min=6.67min;在工艺的线性放大中h、v2和t均不变,则可保证样品出峰的位置(洗脱时间)和形状不变。使用BPG300层析柱进行放大的工艺参数:装柱体积V柱= S柱h=3.141.521L=7L;装柱需要slurry体积Vslurry=V柱PF/Cslurry以DEAE Sepharose Fast Flow为填料,则,Vslurry=71.15/0.75L=10.73L;装入柱中的slurry高度Lslurry=Vs

4、lurry/S柱=10.73/(3.141.52)dm=1.52dm=15.2cm.3管路安装3.1 层析柱管道和配件安装3.1.1卸下柱子顶部和底部的盲堵垫圈,旋松密封调节器,用纯水或20%乙醇充分浸润柱内壁和柱头O型圈;3.1.2 用扳手对称卸下支持杆连接到法兰的螺丝,并通过旋转高度调节手柄将柱头旋至最高处,在柱头顶部依次安装压力表和四路二通阀,在柱底安装四路二通阀;3.1.3在顶部四路二通阀上横向连接一根细管,另一端连至KTA process上端连接口COLUMN TOP,同时从柱底四路二通阀横向接出一根细管至KTA process的下端连接口COLUMN BOTTOM。 图1、BPG3

5、00层析柱安装示意图3.2层析柱下端筛网排气泡3.2.1连接两根足够长的细管到KTA process进样泵的A1和B1进口,两管另一端均放入纯水中;3.2.2从A1泵入纯水:打开UNICORN软件,在system control窗口点击manualvalvesInletA,选择inletA1,insert;InletB,选择closed,insert;Column,选择upflow,insert;PumpFlow,设定流速60L/h,点击execute运行程序充水至BPG柱中2-3cm左右,pause,清除下端筛网中的空气,用注射器吸出筛网中残留的气泡。4装填料4.1准备填料所用填料为DEAE

6、 Sepharose Fast Flow ,装置的是保存于20%乙醇中的新slurry;4.2卸下柱头,用搅拌棍引流加入混匀的slurry至15.2cm处,再加入纯水至40cm左右,充分搅拌混匀,同时避免挤压筛网和柱壁,静置使填料界面至少低于38cm;4.3在system control窗口点击manualvalvesInletA,选择inletA1,insert;InletB,选择closed,insert;Column,选择downflow,insert;PumpFlow,设定流速60L/h,点击execute运行程序将柱头上端筛网充满水以除去气泡,再装上柱头,用密封调节器固定柱头,拧紧螺

7、丝;4.4在system control窗口点击manualPumpFlow,设定流速为42L/h(60cm/h),进行填料的沉降,待填料高度降至14cm左右,将密封调节器旋至全松,将柱头快速调至距离填料3-4cm处,将密封调节器旋至半松,将柱头快速调至滤网距离填料1-2cm,旋紧密封调节器,再设定高流速(如150L/h),继续压缩填料,最后再调节柱头至10cm。整个过程一直有流速,泵速不能停。5 柱效测定图2、柱效测定示意图5.1 平衡 将A1接口细管放入0.4M NaCl溶液中,将柱顶端四路二通阀调至管路与大气相连状态,在system control窗口点击manualvalvesInle

8、tA,选择inletA1,insert;InletB,选择closed,insert;Column,选择downflow,insert;PumpFlow,再设定高流速(如150L/h),点击execute运行,排气泡,再将阀调至管路与柱头相连状态,平衡3-5个柱体积至电导曲线稳定,点击END;5.2上样5.2.1将B1接口细管放入2M NaCl溶液,柱顶端四路二通阀调至管路与大气相连状态,在system control窗口点击manualvalvesInletA,选择Closed,insert;InletB,选择InletB1,insert;Column,选择downflow,insert;P

9、umpFlow,设定高流速(150L/h)点击execute运行,排气泡,pause;5.2.2 在system control窗口点击manualOtherEnd_Timer,选择Acc. Volumn, Timeout 设上样量为70mL(1%柱体积);PumpFlow,设定上样流速60L/h,点击execute的同时将柱顶端四路二通阀调至管路与柱头相连,完成上样;5.3 洗脱5.3.1 将柱顶端四路二通阀调至管路与大气相连状态,在system control窗口点击manualvalvesInletA,选择inletA1,insert;InletB,选择closed,insert;Col

10、umn,选择downflow,insert;PumpFlow,设定高流速(150L/h)点击execute运行,排气泡,同时将管路充满0.4M NaCl溶液,调流速至21L/h(30cm/h);5.3.2 待流速稳定后,在system control窗口点击manualvalvesInjection Mark,insert,点击execute的同时将柱顶端四路二通阀调至管路与柱头相连,开始洗脱,在一个柱体积左右,电导检测下将产生目的峰。5.4 测柱效在Evaluation窗口中,选择实验保存的结果,在结果图中点击鼠标右键,选择Properties,点击Clear,并选中Cond_102,点击O

11、K。回到Evaluation窗口,选择积分按钮,在弹出窗口中,选择Cond_102,peak window中调整积分的范围,并在Reject Peaks中,填Peak must be one of 1 largest;确定后,在积分结果窗口,点击右键,选择Properties,在peak table选项中,勾选Plate Height(HETP)和Asymmetry。确定后即可计算得到计算理论塔板高度HETP和对称因子As。 1 When calculating the amount of media to be packed use the Compression Factor 1.1 instead of the Packing Factor above which is used during packing.

copyright@ 2008-2022 冰豆网网站版权所有

经营许可证编号:鄂ICP备2022015515号-1