Eppendorf plus 移液枪校准方法要点.docx

1、Eppendorf plus 移液枪校准方法要点Eppendorf plus 移液枪校准方法1、准备超纯水、万分之一天平（如果校正0.52.5ul量程的，至少要十万分之一的天平）、温湿度计、恒温室，还需准备一个小口容器，防止水分挥发。2、按移液器总量程的100%、50%、10%分别进行第三和第四步。3、吸头要反复吸取超纯水三次后，吸取固定容积的超纯水，推入放置在天平上的小口容器中，待数据稳定读取天平数值，同时记录温度。重复10次。4、将测量的数据用iso8655中的计算公式计算获得对应温度下的体积，取平均值。5、根据三个测量点的偏差，用移液器专用的校正扳手通过移液器的校正窗进行调整。6、重复3

2、、4步，直至偏差在ISO8655的要求内为止。ISO 8655-1-2002活塞式容量测量仪器.第1部分:术语、一般要求和用户使用建议ISO 8655-2-2002 活塞式容量测量仪器.第2部分:活塞式吸量管ISO 8655-6-2002 活塞式容量测量仪器.第6部分:确定测量误差的重量分析法三、校准方法及步骤操作环境：温度应控制在15-30，恒定在0.5，相对湿度50%-80%，要保持较高的空气湿度以减少水分蒸发对结果造成的影响。建议使用防蒸发装置。测试应在独立无通风的房间内进行，并配备温度和湿度显示。所需设备： 1、分析天平一台。确保室内空气流动平缓，应避免天平正对空调出风口。根据所测试的

3、移液器的容量来选择适合的天平：移液器容量范围天平可读性天平的重复性和线性测量不准确度1l10l0.001mg0.002mg0.002mg10100l0.01mg0.02mg0.02mg100l0.1mg0.2mg0.2mg2、纯水、三蒸水或去离子水，需达到ISO 3696三级水的标准。3、独立工作间，配备防震、防尘、远离热源、无阳光直射的操作台。4、温度计、湿度计。校准操作：为确保校准的准确性，采用三点移液十次，具体步骤如下：1、同温处理，将移液器、吸头、天平、测试用水、操作台等校准用具放置在同一工作间内，至少四小时。2、在正式操作前，先预洗吸头，吸排测试用水5次。3、用最大体积、50%最大体

4、积和最小体积（或10%最大体积），各移液10次，记录每次移液的质量。4、计算每组数据的平均值，代入计算公式，计算出不准确度与不精确度。5、对比可允许的最大误差限度，根据实际需要确定进行调整。附：相关计算公式质量体积转换公式1：V=(w+e)Z 式中： V=体积（l）w=质量（mg）e=蒸发损失（mg）Z转换因子以上公式参考ISO 8655标准。蒸发损失对测量小体积液体影响较大，因此应将蒸发损失计算在内。方法：在称过重的容器中注入定量清水，按下秒表观察30秒，读出损失量，然后算出每秒的损失量。（若30s内质量损失3mg，则损失量为3mg30s=0.1mg/s）。记录移液时间，将移液时间乘以每秒损

5、失量，算出实际蒸发损失量，代入上述公式计算实际体积。若使用防蒸发装置，通常可以忽略蒸发损失量。不同温度、压力下水的质量和体积不同，具体转换因子Z值请查看附录1。公式2：V20=mK(t)式中： V20=标准温度20下实际体积（l）m=质量（mg）K(t)值以上公式参考JJG 646-2006移液器检定规程。根据天平测试蒸馏水的质量，以及检测时温度所对应的K(t)值，即可计算出标准温度下蒸馏水的实际体积。具体K(t)值请查看附表2。计算式时，请根据实际需要，选择公式进行计算。不准确度（系统误差）不准确度是指实际移取体积和显示体积的差异。A=- V0 式中： A=不准确度=平均值V0 =标称容量A

6、%=100%A/V0 不精确度（随机误差）不精确度指每次实际移取体积与实际体积平均值的差异，其变化是不可预计的测量误差的一部分。它可以表示为标准差S或变异系数CV：式中：S =标准偏差=平均值n =测量次数Vi =单次测量数值CV=100%S附表1：转换因子Z(l/mg)数值表（无菌水）温度气压（KPa） 1KPa=10hPa（）80859095100101.310515.001.00171.00181.00191.00191.00201.00201.002015.501.00181.00191.00191.00201.00201.00201.002116.001.00191.00201.00

7、201.00211.00211.00211.002216.501.00201.00201.00211.00211.00221.00221.002217.001.00211.00211.00221.00221.00231.00231.002317.501.00221.00221.00231.00231.00241.00241.002418.001.00221.00231.00231.00241.00251.00251.002518.501.00231.00241.00241.00251.00251.00261.002619.001.00241.00251.00251.00261.00261.00

8、271.002719.501.00251.00261.00261.00271.00271.00281.002820.001.00261.00271.00271.00281.00281.00291.002920.501.00271.00281.00281.00291.00291.00301.003021.001.00281.00291.00291.00301.00311.00311.003121.501.00301.00301.00311.00311.00321.00321.003222.001.00311.00311.00321.00321.00331.00331.003322.501.003

9、21.00321.00331.00331.00341.00341.003423.001.00331.00331.00341.00341.00351.00351.003623.501.00341.00351.00351.00361.00361.00361.003724.001.00351.00361.00361.00371.00371.00381.003824.501.00371.00371.00381.00381.00391.00391.003925.001.00381.00381.00391.00391.00401.00401.004025.501.00391.00401.00401.004

10、11.00411.00411.004226.001.00401.00411.00411.00421.00421.00431.004326.501.00421.00421.00431.00431.00441.00441.004427.001.00431.00441.00441.00451.00451.00451.004627.501.00451.00451.00461.00461.00471.00471.004728.001.00461.00461.00471.00471.00481.00481.004828.501.00471.00481.00481.00491.00491.00501.005

11、029.001.00491.00491.00501.00501.00511.00511.005129.501.00501.00511.00511.00521.00521.00521.005330.001.00521.00521.00531.00531.00541.00541.0054附表2：K（t）值表（=0.00045/）水温K(t)水温K(t)水温K(t)cm3/gcm3/gcm3/g15.01.00421318.41.00326121.81.00243615.11.00418318.51.00323521.91.00241415.21.00415318.61.00320922.01.00

12、239115.31.00412318.71.00318422.11.00236915.41.00409418.81.00315822.21.00234715.51.00406418.91.00313222.31.00232515.61.00403519.01.00310722.41.00230315.71.00400619.11.00308222.51.00228115.81.00397719.21.00305622.61.00225915.91.00394819.31.00303122.71.00223816.01.00391919.41.00300622.81.00221616.11.00

13、389019.51.00298122.91.00219516.21.00386219.61.00295623.01.00217316.31.00383319.71.00293123.11.00215216.41.00380519.81.00290723.21.00213116.51.00377719.91.00288223.31.00211016.61.00374920.01.00285823.41.00208916.71.00372120.11.00283423.51.00206816.81.00369320.21.00280923.61.00204716.91.00366520.31.00

14、278523.71.00202617.01.00363720.41.00276123.81.00200617.11.00361020.51.00273723.91.00198517.21.00358220.61.00271424.01.00196517.31.00355520.71.00269024.11.00194517.41.00352820.81.00266624.21.00192417.51.00350120.91.00264324.31.00190417.61.00347421.01.00261924.41.00188417.71.00344721.11.00259624.51.00

15、186417.81.00342021.21.00257324.61.00184517.91.00339321.31.00255024.71.00182518.01.00336721.41.00252724.81.00180518.11.00334021.51.00250424.91.00178618.21.00331421.61.00248125.01.00176618.31.00328821.71.002459附表3：移液器容量允许误差和测量重复性简表JJG-646ISO 8655检定点系统误差（容量允差）随机误差（重复性）标称容量系统误差（容量允差）随机误差（重复性）l（%）（%）l（%）

16、（%）0.120.010.00.220.010.00.520.010.0112.06.015.05.0212.06.024.02.058.04.052.51.5108.04.0101.20.8204.02.0201.00.5254.02.0403.01.5503.01.5501.00.41002.01.01000.80.31252.01.01502.01.02001.51.02000.80.32501.51.03001.51.05001.00.55000.80.310001.00.510000.80.312501.00.520000.80.325000.50.250000.60.250000.

17、80.3100000.60.2100000.60.3注：标称容量为制造商在移液器上标注的可使用的最大容量，如量程范围是50-1200l，其标称容量为1200l。JJG-646中，同一个检定点在不同的量程范围，容量允差、重复性要求一致，即无论是1-10l的移液器还是10-100l的移液器，10l这一检定点容量允差都为8%，重复性都为4%。ISO 8655中，所有有效量程点的容量允差、重复性都与标称容量的一致，即10-100l的移液器，10l、20l、50l、100l，其容量允差要求都为0.8%，重复性都为0.3%。四、维护保养1 清洁和消毒为确保移液器的准确度和精确度，应根据具体使用情况进行定期

18、保养。尤其在移取腐蚀性溶剂后，应该对移液器进行清洁。通过简单的清洁和保养，可适当地延长移液器的使用寿命。注意：在清洁或消毒前，请务必将电池取出。 外部清洗方法：根据使用情况，可以用沾有70%乙醇或60异丙醇的湿棉布拭擦移液器表面，去除外部污垢，再用双蒸水拭擦一遍，然后晾干。每天开始工作前，检查移液器外表是否有灰尘或污垢，尤其是吸头连杆部分。 内部清洗清洁步骤：1、按照步骤拆卸需要清洁的部件。2、外套柄、吸头连杆用沾有70%乙醇或60异丙醇的湿棉布拭擦，再用双蒸水淋洗，然后晾干。3、一般情况，O型圈、活塞无需清洁。如沾有固体颗状物，请用干净的干棉布轻轻拭去即可。4、给O型圈、活塞上润滑脂，只需涂

19、上薄薄一层即可。5、按步骤组装好移液器。 消毒移液器清洁干净后，在121,1bar下，消毒20分钟。消毒后在室温下冷却至少2个小时后方可使用。部分手动移液器可整支消毒，电动移液器只可以下端消毒，请根据产品的具体情况进行消毒。整支在紫外线下进行消毒灭菌，无需拆卸。2 日常维护针对不同性质的液体，有不同的清洗和保养方法，见下表：处理液体预防方法清洗和保养方法水溶液和缓冲液拆卸移液器下端，用双蒸水冲洗受污染的部件，在60以下干燥或者自然晾干，并给活塞涂抹少量润滑脂无机酸或碱=使用带有滤芯的吸头移液结束后，将移液器下端拆下，并放在通风处。必要时可用双蒸水冲洗受污染的部件，在60以下干燥或者自然晾干，并

20、给活塞涂抹少量润滑脂传染性液体=使用带有滤芯的吸头=正向移液将移液器下端拆下，放在实验室常规的消毒剂中浸泡30分钟，随后用双蒸水清洗，对受污染的部件进行121、1bar、20分钟高压灭菌细胞培养物=使用带有滤芯的吸头将移液器下端拆下，放在实验室常规的消毒剂中浸泡30分钟，随后用双蒸水清洗，对受污染的部件进行121、1bar、20分钟高压灭菌有机溶剂=快速移液移液结束后，将移液器下端拆下，并放在通风处。必要时可用双蒸水冲洗受污染的部件，在60以下干燥或者自然晾干，并给活塞涂抹少量润滑脂放射性溶液=使用带有滤芯的吸头=正向移液将移液器下端拆下，将受污染部件放在复合溶液或专用的清洁溶液中浸泡30分钟

21、后，用双蒸水清洗，在60下烘干或自然晾干，并给活塞涂抹少量润滑脂核酸或蛋白质溶液=使用带有滤芯的吸头=正向移液核酸：在氨基乙酸或盐酸缓冲液(pH2.0)中煮沸10分钟，用双蒸水清洗干净，在60下烘干或自然晾干，并给活塞涂抹少量润滑脂蛋白质：将移液器下端拆下，用去污剂清洗，再用双蒸水淋洗，在60下烘干或自然晾干故障排除现象原因解决方法活塞运动异常=活塞安装过紧=活塞润滑不充分=活塞表面润滑脂凝固=活塞表面有异物或损坏=在活塞、O型圈和吸头连杆之间有杂质和颗粒=O型圈损坏拆开下端，重新组装给活塞上润滑脂清除旧润滑脂，上新润滑脂清洁活塞或更换活塞清洁并润滑O型圈和吸头连杆更换O型圈移液体积不准确或漏

22、液=吸头安装不当=吸头不匹配=在吸头与吸头连杆之间有杂质颗粒=吸头损坏=移液过快=吸头离开液面过快=活塞表面有异物或损坏=在活塞、O型圈和吸头连杆之间有杂质和颗粒=O型圈与活塞润滑不充分=O型圈损坏=操作不正确重新安装吸头清洁吸头连杆，更换合适吸头清洁吸头连杆，更换吸头更换新吸头调节移液速度，慢吸慢放移取粘性大、体积大的液体时吸液后停留几秒，再移离液面清洁活塞或更换活塞清洁并润滑O型圈和吸头连杆上润滑脂更换O型圈请按说明书操作吸头内有残液=选用了带附加液的模式（反向、分样、不等体积）=吸头不匹配=吸头安装不当按启动键排空吸头使用合适的吸头重新安装吸头吸头内有残液=吸头吸附性高=液体粘性过大更换

23、低吸附吸头选用反向移液模式，预洗吸头，调慢吸放速度操作时有杂音=活塞润滑不充分给活塞上润滑脂特殊液体分液不准确=校准不当，高粘度的液体需要重新校准=移取易挥发性或密度与水有明显差别的液体用问题液体重新校准预洗吸头或重新校准吸头脱落或难以安装=劣质吸头=吸头已经损坏使用优质吸头更换新吸头3 储放日常储放：使用完毕，请将移液器竖直挂在移液枪架上。当移液器吸头内有液体时，切勿将移液器水平放置或倒置，以免液体倒流腐蚀活塞。当产品长期不使用时，请将电池取出，然后将清洁消毒后的移液器在干燥、洁净、常温下储存。避免放置在温度变化大、湿度高、灰尘量大的环境中。4 注意事项在移液器的化学腐蚀力限度以内使用请勿移取高度易燃的液体若移取液体与移液器、吸头温度不一致时，移取结果可能会出现偏差，因此三者应保持温度一致请勿在有爆炸危险的气体范围中使用本产品请勿蛮力使用、拆卸移液器若移液器无法正常运作，应立即停止操作，查阅故障分析章节操作温度应保持在15到40之间，相对湿度应在80%以下请妥善放置移液器、充电器等物件，避免意外跌落造成损坏