气相色谱毛细柱精.docx

1、气相色谱毛细柱精气相色谱毛细柱(键合,聚二甲基硅氧烷HP-1,DB-1,P-1,CP-SIL5CB,Ultra-1,007-1,RTx-1,AT-1类似固定相:SE-30,SP-2100,OV-1,OV-101,使用温度:-60-320应用范围:烷烃,芳烃,多环芳烃,醇,酚,酮,酯,醛,胺,卤代烃,吡啶,糖衍生物,氨基酸衍生物,维生素衍生物,镇痛药,农药,溶剂,胆固醇,香料,咖啡,食品添加剂等。SPB-50型中等极性柱(键合, 50%二苯基,50%二甲基聚硅氧烷对照品牌:HP-50,HP-17,DB-17,RTx-50,AT-50SPB-5型弱极性柱类似固定相:OV-17, SP-2250,使

2、用温度:30-310(键合,5%苯基,95%甲基聚硅氧烷应用范围:烷烃,低沸点芳烃,多环芳烃,醇,甘油三酸酯,喹啉,卤素化合物,香料,农药,酯,镇痛药,除草剂等。对照品牌:HP-5,DB-5,BP-5,CP-SIL 8CB,Ultra-2, ,RTx-5,AT-5类似固定相:SE-54,SE-52,OV-73 使用温度:-60-320PTE-5,PTE-5QTM型弱极性柱应用范围:烷基苯,多环芳烃,醇,酚,酮,脂肪(MS专用柱,键合,5%苯基,95%甲基聚硅氧烷酸酯,苯二甲酸酯,硝基芳烃,芳胺,烷基胺,联对照品牌:HP-5 MS,DB-5 MS, DB-5.625,XTI-5,苯胺,卤代烃,多

3、氯联苯,糖类衍生物,维生素衍BPX625,半挥发污染物分析柱(US EPA方法525,生物,有机酸,镇痛药,农药,抗组胺药,溶剂,625.5,625生物碱,防腐剂,香料等。类似固定相:SE-54,SE-52 使用温度:-60-320应用范围:多氯联苯,胺,有机磷,有机氯农药,SUPELCOWAX 10型极性柱含氯除草剂,酚,苯胺,香料等。(键合,聚乙二醇二万对照品牌:HP-Wax,DB-Wax,BP-20,CP-Wax 52CB,SPB-1701型中等极性柱HP-INNO Wax,AT-Wax(键合, 14%氰丙基,86%二甲基聚硅氧烷类似固定相:PEG-20M, CARBOWAX-20M,使

4、用温对照品牌:HP-1701,DB-1701,RTx-1701,AT-1701,度:35-280BP-10,CPSil19CB应用范围:低沸点芳烃,醇,酮,酸,酯,醛,醚,类似固定相:OV-1701,SP-2250 使用温度:室温-280乙二醇,丙二醇,甘油,吡啶,胺,亚硝胺,卤代烃,胆汁酸衍生物,冰片,薄荷,精油,香料,酒,应用范围:醇,卤素化合物,有机氯农药,酸性药苯乙烯,茶,溶剂等。物,有机磷,除草剂等。Nukol型极性柱SPB-608型柱(键合, 改性聚乙二醇(农残/除草剂分析专用柱对照品牌:HP-FFAP,DB-FFAP,AT-1000,BP-21对照品牌:HP-608,DB608,

5、BP608类似固定相:FFAP,SP-1000,OV-351使用温度:使用温度:室温-30060-200应用范围:多氯联苯,有机磷农药,有机氯农药,应用范围:脂肪酸,低沸点芳烃,醇,酯,酚,腈,除草剂,拟除虫菊酯等。固体固定相及分类,什么是固定液,对固定液有哪些要求指直接装填到色谱柱中作为固定相的具有活性的多孔性固体物质。固体固定相大体可分为三类:第一类是吸附剂。如:分子筛、硅胶、活性炭、氧化铝等;第二类是高分子聚合物。如国内的GDX型高分子多孔微球,国外P orapak系列等;第三类是化学键合固定相。在气相色谱中,通常是将固定液涂敷在载体表面上。采用化学键合固定相分析极性或非极性物质通常都能

6、够得到对称峰,柱效很高,固定相的热稳定性也有所改善。一般是一种高沸点的有机物的液膜,通过对不同组份的不同分子间的作用,使组份在色谱柱中得到分离。对气相色谱用的固定液,一般有如下几点要求:1、在操作温度下蒸气压低,热稳定性好,与被分析物理或载气不产生不可逆反应;2、在操作温度下呈液态,而且粘度愈低愈好。物质在高粘度的固定液中传质速度慢,柱效率因而降低。这决定固定液的最低使用温度;3、能牢固地附着在载体上,并形成均匀和结构稳定的薄层;4、被分离的物质必须在其中有一定的溶解度,不然就会很快地被载气带走而不能在两相之间进行分配;5、对沸点相近而类型不同的物质有分离能力,即保留一种类型化合物的能力大于另

7、一种类型。这种分离能力即是固定液的选择性。使用担体为何要进行处理?一般处理的方法有哪些以及担体的选择常用的担体表面并非惰性,它具有不同程度的催化作用和吸附性(特别是固定液含量低时和分离极性物质时造成峰拖尾和柱效下降,保留值改变等影响,因而需要预处理。现将一般处理方法简述如下:1、酸洗法:用浓盐酸加热处理担体20-30分钟,然后用自来水冲洗至中性,再用甲醇漂洗,烘干备用。此法主要除去担体表面的铁等无机物杂质。2、碱洗法:用10%的氢氧化钠或5%的氢氧化钾-甲醇溶液浸泡或回流担体,然后用水冲洗至中性,再用甲醇漂洗,烘干备用。碱洗的目的是除去表面的三氧化二铝等酸性作用点,但往往在表面上残留微量的游离

8、碱,它能分解或吸附一些非碱性物质,使用时要注意。3、硅烷化:用硅烷化试剂和担体表面的硅醇、硅醚基团起反应,除去表面的氢键结合能力,可以改进担体的性能。常用的硅烷化试剂有二甲基二氯硅烷和六甲基二硅胺。4、釉化:把欲处理的担体在2、3%的碳酸钠-碳酸钾(1:1水溶液中浸泡一天,烘干后先在870度下煅烧3、5小时,然后升温到980度煅烧约40分钟。经过这样处理,担体表面形成一层玻璃化的釉质,故称“釉化担体”。这种担体的吸附性能小,强度大,当固定液中加入少量的去尾剂后,能分析如醇、酸等极性较强的物质。但对非极性物质柱效能则稍有下降。此外甲醇和甲酸等物质在釉化担体上有一定的不可逆化学吸附,在定量分析时应

9、予以注意。其他纯化方法:凡是用化学反应来除去活性作用点或用物理复盖以达到纯化担体表面性质的方法都可以使用。十六、常用的担体目数为多少?答:常用的4-6毫米内径的色谱柱:对于较长色谱柱,选用担体目数一般为40-80目;对于较短色谱柱选用担体目数一般为8 0-100目(每英寸内的筛孔数目为目各种担体,名目繁多。在常用硅藻土担体中: 红色担体(如6201、201,可用于非极性或弱极性物质的分离。白色担体(如101可用于极性物质或碱性物质。釉化红色担体(如301可用于中等极性物质。硅烷化白色担体可用于强极性氢键型物质如废水测定。分离酸性物质,如酚类,要用酸洗处理的担体。分离碱性物质,如乙醇胺,要用碱洗

10、处理的担体。微量分析要用硅烷化的担体。有些特殊的情况下要用特殊的担体,如氟担体分离异氰酸酯类。但是在普通的常量分析中,对担体可以不必过份讲究,甚至如耐火砖粉粒,玻璃珠砂和海沙也可以使用气相色谱中什么叫担体?对担体有哪些要求以及分类担体是一种多孔性化学惰性固体,在气相色谱中用来支撑固定液。对担体有如下几点要求:1、表面积较大,一般应在0、5-2米/克之间;2、具有化学惰性和热稳定性;3、有一定的机械强度,使涂渍和填充过程不引起粉碎;4、有适当的孔隙结构,利于两相间快速传质;5、能制成均匀的球状颗粒,利于气相渗透和填充均匀性好;6、有很好的浸润性,便于固定液的均匀分布。完全满足上述要求的担体是困难

11、的,人们在实践中只能找出性能比较优良的担体。担体通常分为硅藻土和非硅藻土两大类,每一类又有种种小类。1、硅藻土类型:(1白色的:表面积小,疏松,质脆,吸附性能小,经适当处理,可分析强极性组分;(2红色的:有较大的表面积和较好的机械强度,但吸附性较大。2、非硅藻土类型:(1氟担体:表面惰性好,可用来分析高极性和腐蚀性物质,但装柱不易,柱效率低些。(2玻璃微球:表面积小,用它做担体柱温可以大大降低,而分离完全且快速。但涂渍困难,柱效低。(3多孔性高聚物小球:机械强度高,热稳定性好,吸附性低,耐腐蚀,分离效率高,是一种性能优良的新型色谱固定相。(4炭分子筛:中性,表面积大,强度高,祛寿命长,在微量分

12、析上有无比的优越性。(5活性炭:可以单独做为固定相。(6沙:主要用于分离金属。常用担体有:101担体:为白色硅藻土担体;102担体:为白色硅藻土担体;celite545:为白色硅藻土担体;201担体:为红色硅藻土担体;6201担体:为红色硅藻土担体;C -22保温砖:为红色硅藻土担体;chromosorb:为红色硅藻土担体。色谱柱管材料应根据什么原则选择?常用的柱管是由什么材质制成的对色谱柱管材质,应按如下要求选择:1、应与固定相、试样、载气不起化学反应。2、要易于加工成型。管内壁应光滑,横截面应均匀呈圆形。一般色谱柱管形状呈U型或螺旋形,大多由铜、不锈钢,玻璃等材质制成新柱管应先用稀酸或稀碱

13、(1:1盐酸或氢氧化钠洗涤,以除去油污等脏垢,而后用自来水冲洗,继而用蒸馏水冲洗至中性,再用干净的空气吹洗并烘干后,即可使用了。气相色谱分析中柱长、柱内径、柱温、载气流速、固定相、进样等操作条件对分离的影响?操作条件对于色谱分离有很大影响。1、柱长,柱内径:一般讲,柱管增长,可改善分离能力,短则组分馏出的快些;柱内径小分离效果好,柱内径大处理量大,但柱内径过大,将导致担体不能均匀地分布在色谱柱中。分析用柱管一般内径为3-6毫米,柱长为1-4米。2、柱温:是一个重要的操作变数,直接影响分离效能和分析速度。选择柱温的根据是混合物的沸点范围,固定液的配比和鉴定器的灵敏度。提高柱温可缩短分析时间;降低

14、柱温可使色谱柱选择性增大,有利于组分的分离和色谱柱稳定性提高,柱寿命延长。一般采用等于或高于数十度于样品的平均沸点的柱温为较合适,对易挥发样用低柱温,不易挥发的样品采用高柱温。3、载气流速:载气流速是决定色谱分离的重要原因之一。一般讲流速高色谱峰狭,反之则宽些,但流速过高或过低对分离都有不利的影响。流速要求要平稳,常用的流速范围每分钟在10-100亳升之间。4、固定相:固定相是由固体吸附剂或涂有固定液的担体构成。(1固体吸附剂或担体粗细:一般采用40-60目、60-80目、80-100目。当用同等长度的柱子,颗粒细的分离效率就要比粗的好些。(2固定液含量:固定液含量对分离效率的影响很大,它与担

15、体的重量比一般用15%-25%。比例过大有损于分离,比例过小会使色谱峰拖尾。5、进样:一般讲进样快,进样量小,进样温度高其分离效果好。对进液体样,速度要快,汽化温度要高于样品中高沸点组分的沸点值,一次汽化,保证色谱峰形不致展宽、使柱效高。当进样量在一定限度时,色谱峰的半峰宽是不变的。若进样量过多就会造成色谱柱超载。一般讲柱长增加四倍,样品的许可量增加一倍。对于常规分析,液体进样量为1-20微升;气体进样量为0、1-5毫升。新装填的色谱柱为什么要老化一段时间才能使用装填好的色谱柱,连接于仪器上后,应先试压,试漏,而后在恒定的温度下用载气吹洗数小时后承受分析,一般称此为柱子的老化过程。老化的目的是

16、把固定相的残存溶剂,低沸点杂质,低分子量固定液等赶走,使记录器基线平直,并在老化温度下使固定液在担体表面有一个再分布过程，从而涂得更加均匀牢固。装填好的色谱柱，经过老化一段时间后，柱效及性 能均稳定了，这样才可使用。 色谱柱失效主要表现为色谱分离不好和组分保留时间显著变短。色谱柱失效的主要原因是： 对气固色谱来说是固定相的活性或吸附性能降低了， 对气液色谱来说， 是使用过程中固定液 逐渐流失所致。 气相色谱柱的检定，柱效测定 在线色谱柱的检定：可以在每次分析产品时进行检定，主要考察峰对称性、柱效、分离度、 保留时间等内容， 具体参数可以在相应产品的分析方法中规定， 如果达不到分析方法中的规 定

17、指标，则该色谱柱不能用做该产品的分析。 标准试液检定： 检定周期：在线检定不合格时，再生处理前后，需要报废前。 检定方法 - 检定溶液配制：乙二醇、对氯苯酚、壬酸甲酯、4-丙基苯胺、正十三烷、十一烷醇、十五 烷的 250ppm 二氯甲烷溶液。 - 分析条件：气化室温度为 260， 检测器（FID） 温度为 320， 恒流速为 1.0ml/min， 柱温箱恒定为 130，进样量为 1，分流比为 1：50，运行 15 分钟。 结果评价：每次进样一针，分析完毕打印出一张带有系统评价的谱图，其中柱效和对称因子 以十五烷峰计。其中最小分离度 R1.5；十五烷对称因子 S 在 0.80-1.50 之内；十

18、五烷 柱效3000m-1。 气相色谱柱再生方法 常使用的气相色谱柱每半年或发现性能不佳时，对色谱柱进行再生、老化处理。 对于 大多数色谱柱使用的是健合、交联的固定相，可以用甲醇、二氯甲烷和己烷冲洗。或者重新 按照前述方法重新进行色谱柱的老化处理。 气相色谱柱老化方法 柱子第一次使用时， 必须进行色谱柱的老化。 目的是彻底除去柱子中的残留溶剂和某些挥发 性物质， 另一方面是促进固定液均匀牢固地分布在但体的表面上。 根据使用条件和固定液膜 厚、极性等设置恒温老化或程序升温老化。一般来讲，固定液膜厚越厚、极性越强，需要的 老化时间越长。老化温度要大于实际使用温度而低于柱子的最高使用温度 20左右。项

19、目 经理接到项目所需新柱子后，根据不同的柱子进行适宜的老化，直至升到最高老化温度，保 持一段时间后，色谱仪基线保持平稳即可。 怎样选择液相色谱柱 现代高效液相色谱中， 分离效果好坏很大程度上取决于色谱填料的选择。 但是色谱填料的选 择范围很宽，要做合适的选择，必须对此有一定的认识和了解。 一硅胶基质填料： 1.正相色谱 正相色谱用的固定相通常为硅胶 （Silica） 以及其它具有极性官能团,如胺基团 （NH2,APS） 和氰基团（CN,CPS）的键合相填料。 由于硅胶表面的硅羟基（SiOH）或其它极性基团极性较强，因此，分离的次序是依据样品 中各组份的极性大小，即极性较弱的组份最先被冲洗出色谱

20、柱。 正相色谱使用的流动相极性相对比固定相低， 如： 正己烷 （Hexane） 、 氯仿 （Chloroform） 、 二氯甲烷（Methylene Chloride）等。 2.反相色谱 反相色谱用的填料常是以硅胶为基质， 表面键合有极性相对较弱的官能团的键合相。 反相色 谱所使用的流动相极性较强，通常为水、缓冲液与甲醇、乙腈等的混合物。 样品流出色谱柱的顺序是极性较强的组份最先被冲洗出， 而极性弱的组份会在色谱柱上有更 强的保留。 常用的反相填料有：C18(ODS、C8(MOS、C4(Butyl、C6H5(Phenyl等。 二. 聚合物填料 聚合物填料多为聚苯乙烯-二乙烯基苯或聚甲基丙烯酸酯

21、等，其主要优点是在 pH 值为 1 14 均可使用。 相对于硅胶基质的 C18 填料，这类填料具有更强的疏水性；大孔的聚合物填料对蛋白质等 样品的分离非常有效。 现有的聚合物填料的缺点是相对硅胶基质填料，色谱柱柱效较低。 三其它无机填料 其它 HPLC 的无机填料色谱柱也已经商品化。 由于其特殊的性质， 一般仅限于特殊的用途。 如，石墨化碳正逐渐成为反相色谱柱填料。这种填料的分离不同于硅胶基质烷基键合相，石 墨化碳的表面即是保留的基础， 不再需其它的表面改性。 该柱填料一般比烷基键合硅胶或多 孔聚合物填料的保留能力更强。石墨化碳可用于分离某些几何异构体,又由于在 HPLC 流动 相中不会被溶解, 这类柱可在任何 pH 与温度下使用。 氧化铝也可用于 HPLC,氧化铝微粒 刚性强，可制成稳定的色谱柱柱床，其优点是可在 pH 高达 12 的流动相中使用。但由于氧 化铝与碱性化合物作用也很强，应用范围受到一定的限制，所以未能广泛应用。新型氧化锆 基质色谱填料也可用于 HPLC,商品化的仅有聚合物涂层的多孔氧化锆微球色谱柱， 应用 pH 范围 114，温度可达 100。由于氧化锆填料是最近几年才开始研究，加之面临的实验 难度，其重要用途与优势尚在进行中。