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1、高考必看现代生物技术专题选修3 现代生物技术专题精要知识点汇总专题1 基因工程（一）基因工程的概念基因工程是指按照人们的愿望，进行严格的设计，通过体外DNA重组和转基因技术，赋予生物以新的遗传特性，创造出更符合人们需要的新的生物类型和生物产品。基因工程是在DNA分子水平上进行设计和施工的，又叫做DNA重组技术。（二）基因工程的原理：基因重组1.1 基因工程的基本工具一、“分子手术刀”限制性核酸内切酶（限制酶）1、来源：主要是从原核生物中分离纯化出来的。2、功能：能够识别双链DNA分子的某种特定的核苷酸序列，并且使每一条链中特定部位的两个核苷酸之间的磷酸二酯键断开，因此具有专一性。3、结果：经限

2、制酶切割产生的DNA片段末端通常有两种形式：黏性末端和平末端。二、“分子缝合针”DNA连接酶1、两种DNA连接酶（EcoliDNA连接酶和T4DNA连接酶）的比较：相同点：都缝合磷酸二酯键。区别： EcoliDNA连接酶来源于大肠杆菌，只能将双链DNA片段互补的黏性末端之间的磷酸二酯键连接起来；而T4DNA连接酶来源于T4噬菌体，能缝合两种末端，但连接平末端之间的效率较低。2、与DNA聚合酶作用的异同: DNA聚合酶只能将单个核苷酸加到已有的核苷酸片段的末端，形成磷酸二酯键。DNA连接酶是连接两个DNA片段的末端，形成磷酸二酯键。三、“分子运输车”载体1、载体具备的条件：能在受体细胞中复制并稳

3、定保存。具有一至多个限制酶切点，供外源DNA片段插入。具有标记基因，供重组DNA的鉴定和选择。2、常用的载体是质粒,它是一种裸露的、结构简单的、独立于细菌染色体之外，并具有自我复制能力的很小的双链环状DNA分子。3、其它载体：噬菌体的衍生物、动植物病毒 1.2 基因工程的基本操作程序第一步：目的基因的获取1.目的基因主要是指： 编码蛋白质的结构基因 。2.原核基因采取直接分离获得，真核基因是人工合成。人工合成目的基因的常用方法有反转录法_和化学合成法_。3.从基因文库中获取目的基因 （1） 基因文库：将含有某种生物不同基因的许多DNA片段，导入受体菌的群体中储存，各个受体菌分别含有这种生物的不

4、同的基因，这些受体菌称为这种生物的基因文库。（2）基因组文库：如果一个基因文库含有某种生物的全部基因，这个基因文库就是该种生物的基因组文库。（3）部分基因文库：如果一个基因文库含有某种生物的一部分基因，这个基因文库就是该种生物的部分基因文库。4. PCR技术扩增目的基因（1）什么是PCR？ PCR是一项在生物体外复制特定DNA片段的核酸合成技术。通过这一技术，可以在短时间内大量扩增目的基因。（2）原理：DNA双链复制（3）过程：第一步：加热至9095DNA解链；第二步：冷却到5560，引物结合到互补DNA链；第三步：加热至7075，热稳定DNA聚合酶从引物起始进行互补链的合成。第二步：基因表达

5、载体的构建 (这一步是基因工程的核心)1. 目的：使目的基因在受体细胞中稳定存在，并且可以遗传给下一代，同时，使目的基因能够表达和发挥作用。2. 组成：启动子目的基因终止子标记基因（1）启动子：是一段有特殊结构的DNA片段，位于基因的首端，是RNA聚合酶识别和结合的部位，能驱动基因转录出mRNA，最终获得所需的蛋白质。（2）终止子：位于基因的尾端，也是一段有特殊结构的DNA短片段 ，它能使转录在所需要的地方停止下来。（3）标记基因的作用：是为了鉴定受体细胞中是否含有目的基因，从而将含有目的基因的细胞筛选出来。常用的标记基因是抗生素抗性基因。第三步：将目的基因导入受体细胞1. 转化的概念：是目的

6、基因进入受体细胞内，并且在受体细胞内维持稳定和表达的过程。2. 常用的转化方法：（1）将目的基因导入植物细胞：采用最多的方法是 农杆菌转化法，其次还有 基因枪法和 花粉管通道法等。（2）将目的基因导入动物细胞：最常用的方法是 显微注射技术。此方法的受体细胞多是 受精卵。（3）将目的基因导入微生物细胞： 早期的基因工程用原核生物作为受体细胞的原因：原核生物繁殖快、多为单细胞、遗传物质相对较少等。 应用最为广泛的微生物受体细胞是：大肠杆菌 大肠杆菌细胞最常用的转化方法是：第一步，用Ca2+ 处理细胞,使细胞处于一种能吸收周围环境中DNA分子的生理状态，这种细胞称为感受态细胞。第二步，将重组表达载体

7、DNA分子溶于缓冲液中与感受态细胞混合，在一定的温度下促进感受态细胞吸收DNA分子，完成转化过程。3. 重组细胞导入受体细胞后，筛选含有基因表达载体受体细胞的依据是标记基因是否表达。第四步：目的基因的检测与鉴定 （这是检查基因工程是否做成功的一步）1. 首先要检测 转基因生物的染色体的DNA上是否插入了目的基因，方法是采用 DNA分子杂交技术。2. 其次还要检测 目的基因是否转录出了mRNA，方法是采用 标记的目的基因作探针与mRNA杂交。3. 最后检测 目的基因是否翻译成蛋白质，方法是从转基因生物中提取 蛋白质，用相应的 抗体进行 抗原抗体杂交 。4.有时还需进行 个体生物学水平 的鉴定。如

8、 转基因抗虫植物是否出现抗虫性状 。1.3 基因工程的应用1. 植物基因工程：抗虫、抗病、其他抗逆转基因植物；利用转基因改良植物的品质。2. 动物基因工程：用于提高动物生长速度；用于改善畜产品品质；用转基因动物生产药物（乳腺生物反应器）；用转基因动物作器官移植的供体。3. 基因治疗：把正常的外源基因导入病人体内，使该基因的表达产物发挥功能，从而达到治疗疾病的目的，这是治疗遗传病的最有效的手段。基因治疗又可分体外基因治疗和体内基因治疗。1.4 蛋白质工程的崛起蛋白质工程的概念： 是指以蛋白质分子的结构规律及其生物功能的关系作为基础，通过基因修饰或基因合成，对现有蛋白质进行改造，或制造一种新的蛋白

9、质，以满足人类的生产和生活的需求。（基因工程在原则上只能生产自然界已存在的蛋白质）（1）蛋白质工程崛起的缘由：基因工程只能生产自然界已存在的蛋白质（2）蛋白质工程的基本原理：它可以根据人的需求来设计蛋白质的结构，又称为第二代的基因工程。（3）蛋白质工程的基本途径：从预期的蛋白质功能出发，设计预期的蛋白质结构，推测应有的氨基酸序列，找到相对应的脱氧核苷酸序列（基因）。以上是蛋白质工程特有的途径；以下按照基因工程的一般步骤进行。（注意：目的基因只能用人工合成的方法）设计中的困难：如何推测非编码区以及内含子的脱氧核苷酸序列专题2 细胞工程1、细胞工程的概念：是指应用细胞生物学和分子生物学的原理和方法

10、，通过细胞水平或细胞器水平上的操作，按照人们的意愿来改变细胞内的遗传物质或获得细胞产品的一门综合科学技术。 2、根据操作对象的不同，细胞工程可分为 植物细胞工程 和 动物细胞工程。2.1 植物细胞工程一、植物组织培养技术1、原理：植物细胞具有 全能性 ，即具有某种生物全部遗传信息的任何一个细胞，都具有发育成完整个体的潜能。2、 过程： （脱分化） （再分化）离体的植物器官、组织或细胞 -愈伤组织 -幼根和芽 完整植株 3、几个概念(1) 外植体： 从活植物体上切下进行培养的那部分组织或器官。(2) 细胞脱分化： 已 分化 的细胞，经过诱导后，失去 其特有的结构和功能 而转变成未分化细胞的过程。

11、(3) 愈伤组织: 离体的植物器官、组织或细胞，在培养一段时间以后，通过细胞分裂，形成一种高度液泡化、无定形状态薄壁细胞组成的排列疏松无规则的组织。( 愈伤组织细胞特点：是具有分生能力的薄壁细胞。)（4）再分化： 脱分化产生的愈伤组织在培养过程中重新分化根或芽等器官的过程。 （5）植物组织培养: 在 无菌 和人工控制的条件下，将 离体 的植物器官、组织、细胞，培养在人工配制的培养基上，给予适宜的培养条件，诱导其产生 愈伤 组织、丛芽，最终形成完整植株。4、植物组织培养的条件：（1）细胞离体（2）一定的营养物质、激素和其他外界条件（如含有全部营养成分的培养基、一定的温度、湿度、空气、无菌环境、适

12、合的PH、适时光照等）。5、决定植物细胞脱分化、再分化的关键因素是 植物激素（主要是生长素与细胞分裂素）。当生长素含量高于细胞分裂素时，主要诱导植物组织脱分化和根原基的形成；而当细胞分裂素的效应高于生长素时，则主要诱导植物组织再分化和芽原基的形成。6、生物生长发育过程中，细胞不表现全能性的原因：基因的选择性表达。7、植物组织培养的用途：微型繁殖、作物脱毒、制造人工种子、单倍体育种、细胞产物的工厂化生产。（1） 植物繁殖微型繁殖：可以高效快速地实现种苗的大量繁殖作物脱毒：采用茎尖组织培养来除去病毒（因为植物分生区附近的病毒极少或没有）人工种子：以植物组织培养得到的胚状体、不定芽、顶芽和腋芽等为材

13、料，经人工薄膜包装得到的种子。（优点：完全保持优良品种的遗传特性，不受季节的限制；方便储藏和运输）（2） 作物新品种培育单倍体育种：单倍体育种的过程：植株（AaBb）通过减数分裂得到花粉（AB、Ab、aB、ab四种类型）；对花粉进行花药离体培养（技术是植物组织培养）, 得到单倍体植株；在单倍体的幼苗时期用秋水仙素处理；得到了正常的纯合二倍体植株（AABB、AAbb、aaBB、aabb四种类型）。单倍体育种的优点：明显缩短育种年限。突变体利用：在组织培养中会出现突变体，通过从有用的突变体中选育出新品种（如筛选抗病、抗盐、含高蛋白的突变体）（3） 细胞产物的工厂化生产：通过对能够产生对人们有利的产

14、物的细胞进行组织培养，从而让它们能够产生大量的细胞产物。如人参皂苷的工厂化生产。8、地位：是培育转基因植物、植物体细胞杂交培育植物新品种的最后一道工序。二、植物体细胞杂交技术1、过程（图解）： 2、注意点: 去细胞壁所用的物质： 纤维素酶和果胶酶 ；诱导融合的方法：物理法包括离心、振动、电刺激 等。化学法一般是用 聚乙二醇（PEG）作为诱导剂。融合完成的标志： 杂种细胞再生出细胞壁 ； 过程： 植物细胞融合及植物组织培养 ；3、植物体细胞杂交的概念：是将不同种的植物 体细胞 ，在一定条件下融合成 杂种 细胞，并把杂种细胞培养成新的植物体的技术。 4、意义：打破不同种生物间的生殖隔离限制，在一定

15、程度上克服了远缘杂交不亲和的障碍，大大扩展了可用于杂交的亲本组合范围。2.2 动物细胞工程 动物细胞工程常用的技术手段有：动物细胞培养、动物细胞核移植、动物细胞融合、生成单克隆抗体等。其中 动物细胞培养技术 是其他动物细胞工程技术的基础。一、 动物细胞培养1、概念：动物细胞培养就是从动物机体中取出相关的组织，将它分散成单个细胞，然后，放在适宜的培养基中，让这些细胞生长和繁殖。2、动物细胞培养的流程：取动物组织块（动物胚胎或幼龄动物的器官或组织）剪碎用胰蛋白酶或胶原蛋白酶处理分散成单个细胞制成细胞悬液转入培养瓶中进行原代培养贴满瓶壁的细胞重新用胰蛋白酶或胶原蛋白酶处理分散成单个细胞，继续传代培养

16、。3、细胞贴壁和接触抑制：悬液中分散的细胞很快就贴附在瓶壁上，称为细胞贴壁。细胞数目不断增多，当贴壁细胞分裂生长到表面 相互接触 时，细胞就会停止分裂增殖，这种现象称为 细胞的接触抑制。4、动物细胞培养需要满足以下条件：无菌、无毒的环境：培养液应进行无菌处理。通常还要在培养液中添加一定量的抗生素，以防培养过程中的污染。此外，应定期更换培养液，防止代谢产物积累对细胞自身造成危害。营养：合成培养基成分：糖、氨基酸、促生长因子、无机盐、微量元素等。通常需加入血清、血浆等天然成分。温度和pH ： 适宜温度：哺乳动物多是36.50.5； pH：7.27.4。气体环境：95% 空气 5% CO2。O2是细

17、胞代谢所必需的，CO2的主要作用是维持培养液的pH。5、动物细胞培养技术的应用：制备病毒疫苗、干扰素、单克隆抗体等；检测有毒物质；培养医学研究所需用的各种细胞。二、动物体细胞核移植技术和克隆动物1、概念：动物核移植就是将动物的一个细胞的细胞核，移入一个已经去掉细胞核的卵母细胞中，使其重组并发育成一个新的胚胎，这个新的胚胎最终发育为动物个体。用核移植方法得到的动物称为克隆动物。2、哺乳动物核移植可以分为胚胎细胞核移植（比较容易）和体细胞核移植（比较难）。3、选用去核卵(母)细胞的原因：卵(母)细胞比较大，容易操作；卵(母)细胞细胞质多，营养丰富。4、体细胞核移植的大致过程（以牛为例）是：高产奶牛

18、（提供体细胞）进行细胞培养；同时采集卵母细胞，在体外培养到减数第二次分裂中期，去核（显微操作）注：为什么要用卵细胞？它可以提供充足的营养；操作简便；细胞质不会抑制细胞核全能性的表达；将供体细胞注入去核卵母细胞；通过电刺激使两细胞融合，供体核进入受体卵母细胞，构建重组胚胎；将胚胎移入受体（代孕）母牛体内；生出与供体奶牛遗传基因相同的犊牛。5、体细胞核移植技术的应用：加速家畜遗传改良进程，促进良畜群繁育； 保护濒危物种，增大存活数量；生产珍贵的医用蛋白； 作为异种移植的供体； 用于组织器官的移植等。6、体细胞核移植技术存在的问题：成功率低；克隆技术的各个环节有待改进；克隆动物存在着健康问题，表现出

19、 遗传和生理 缺陷等。三、动物细胞融合1、概念：动物细胞融合也称细胞杂交，是指两个或多个动物细胞结合形成一个细胞的过程。融合后形成的具有原来两个或多个细胞遗传信息的单核细胞，称为杂交细胞。2、动物细胞融合与植物原生质体融合的原理基本相同，诱导动物细胞融合的方法与植物原生质体融合的方法类似，常用的诱导因素有 聚乙二醇（PEG）、灭活的病毒、电激 等。3、动物细胞融合的意义：突破了有性杂交方法的局限，使 远缘杂交 成为可能, 成为研究细胞遗传、细胞免疫、肿瘤和生物新品种培育等 的重要手段。4、动物细胞融合与植物体细胞杂交的比较：细胞工程植物体细胞杂交动物细胞融合理论基础细胞膜的流动性、细胞的全能性

20、细胞膜的流动性融合前处理酶解法去除细胞壁（纤维素酶、果胶酶）注射特定抗原，免疫处理正常小鼠诱导手段物理法:离心、振动、电激化学法：聚乙二醇（PEG）物理法:离心、振动、电激化学法：聚乙二醇（PEG）生物法：灭活的病毒（灭活的仙台病毒）诱导过程第一步：原生质体的制备（酶解法）第二步：原生质体融合（物、化法）第三步：杂种细胞的筛选和培养第四步：杂种植株的再生与鉴定正常小鼠免疫处理动物细胞的融合（物、化、生法）杂交瘤细胞的筛选与培养专一抗体检验阳性细胞培养单克隆抗体的提纯意义和用途意义：克服了远缘杂交不亲和的障碍，大大扩展了用于杂交的亲本组合范围。应用：白菜-甘蓝等杂种植株（1）制备单克隆抗体（2）

21、诊断、治疗、预防疾病，例如“生物导弹”治疗癌症5、单克隆抗体（1）抗体：一个B淋巴细胞只分泌一种特异性抗体。从血清中分离出的抗体产量低、纯度低、特异性差。（2）单克隆抗体的制备过程：对免疫小鼠注射特定的抗原蛋白（目的使小鼠产生了效应B细胞）；提取B淋巴细胞；同时用动物细胞培养的方法培养骨髓瘤细胞并提取；促使它们细胞融合注：融合的结果是有很多不符合要求的；如有2个B淋巴细胞融合的细胞等，所以要进行筛选；在特定的选择培养基上筛选出融合的杂种细胞 特点是能迅速大量增殖，又能产生专一的抗体；然后对它进行克隆化培养和抗体检测 筛选出能够分泌所需抗体的杂种细胞；最后将杂交瘤细胞在体外做大规模培养或注射入小

22、鼠腹腔内增殖，从细胞培养液或小鼠腹水中可得到大量的单克隆抗体。（3）杂交瘤细胞的特点：既能迅速大量繁殖，又能产生专一的抗体。（4）单克隆抗体的优点：特异性强，灵敏度高，并可能大量制备。（5）单克隆抗体的作用：作为诊断试剂：准确识别各种抗原物质的细微差异，并跟一定抗原发生特异性结合，具有准确、高效、简易、快速的优点； 用于治疗疾病和运载药物：主要用于治疗癌症治疗，可制成“生物导弹”（由抗癌细胞的单克隆抗体结合化学药物而成），也有少量用于治疗其它疾病。专题3 胚胎工程1、胚胎工程的概念：指对动物早期胚胎或配子所进行的多种显微操作和处理技术，如体外受精、胚胎移植、胚胎分割、胚胎干细胞培养等技术。经过

23、处理后获得的胚胎，还需要移植到雌性动物体内生产后代，以满足人类的各种需求。2、胚胎工程的理论基础：哺乳动物的受精卵和早期胚胎的发育规律 3.1 内体受精和早期胚胎发育一、精子和卵子的发生 （一）精子的发生1、发生场所：睾丸2、时间： 初情期生殖机能衰老3、精子发生的过程 （1）精子细胞变形中的主要变化： （2）成熟精子外形似蝌蚪，分头、颈和尾三大部分。不同种动物精子的形态相似，大小略有不同，与动物的体型大小无关。 （二）卵子的发生1、发生部位：卵巢2、时间： 减数第一次分裂在雌性动物排卵前后完成；减数第二次分裂在精子和卵子结合的过程中完成。3、卵子发生的过程在胎儿时期，卵原细胞进行有丝分裂演变

24、成初级卵母细胞被卵泡细胞包围，减一分裂在排卵前后完成，形成次级卵母细胞和第一极体进入输卵管准备受精；减二分裂是在受精过程中完成的。 4、判断卵子是否受精的重要标志： 当在卵黄膜和透明带的间隙可以观察到两个极体时，说明卵子已经完成了受精。 （ 受精完成的标志是：雌、雄原核融合为合子。）5、哺乳动物精子和卵子的发生主要有哪些相似点和不同点？ 相似之处：细胞分裂的最初阶段为有丝分裂，不断增加性原细胞的数量；经过减数分裂（MI和MII）才能形成精子或卵子。不同之处：由一个精原细胞分裂最后可产生多个精子；一个卵原细胞最后只能生成一个卵子。精子的形状为蝌蚪状；卵子为球形。 特别提醒：精子和卵子在发生上的重

25、要区别是哺乳动物卵泡的形成和在卵巢内的贮备是在胎儿出生前完成。 二、受精1.概念：是精子和卵子结合形成合子（即受精卵）的过程。2.场所：输卵管3.过程：（1)受精前的准备阶段:精子获能:精子必须在雌性动物的生殖道发生相应的生理变化后,才获得受精能力的生理现象。卵子的准备:在输卵管中发育到减数第二次分裂的中期,才具有与精子受精的能力。（2)受精阶段:精子穿越放射冠和透明带 顶体反应：使顶体内的酶释放出来并溶解放射冠内卵丘细胞之间的物质。 透明带反应：是防止多精入卵受精的第一道屏障。精子进入卵黄膜 卵黄膜封闭作用：是防止多精入卵受精的第二道屏障。原核形成 雄原核形成和雌原核形成。配子结合 雌雄原核

26、融合形成合子(受精卵)。4.意义：维持每种生物前后代体细胞中染色体数目的恒定 ；对于生物的遗传和变异十分重要。三、胚胎发育（1）受精场所是母体的输卵管。（2）卵裂期：特点：细胞有丝分裂，细胞数量不断增加，但胚胎的总体体积并不增加，或略有减小。 （3）桑椹胚：特点：胚胎细胞数目达到32个左右时，胚胎形成致密的细胞团，形似桑椹。是全能细胞。（4）囊 胚：特点：细胞开始出现分化（该时期细胞的全能性仍比较高）。聚集在胚胎一端个体较大的细胞称为内细胞团，将来发育成胎儿的各种组织。中间的空腔称为囊胚腔。（5）原肠胚：特点：有了三胚层的分化，具有囊胚腔和原肠腔。 3.2 体外受精和早期胚胎培养试管动物技术：

27、是指通过人工操作使卵子和精子在 体外条件 下成熟和受精，并通过培养发育为 早期胚胎 后，再经移植产生后代的技术。一、体外受精属有性生殖过程包括的主要步骤： 卵母细胞的采集、精子的获取和受精 等1、卵母细胞的采集和培养 方法一： 对于体型小的动物，用促性腺激素处理，使其排出更多的卵子，然后，从输卵管中冲取卵子，直接与获能的精子在体外受精。方法二： 从刚屠宰母畜的卵巢中采集卵母细胞；方法三： 借助超声波探测仪、内窥镜或腹腔镜等直接从活体动物的卵巢中吸取卵母细胞。采集的卵母细胞，都要在体外经人工培养成熟后，才能与获能的精子受精。2、精子的采集和获能（1）收集精子的方法：假阴道法、手握法和电刺激法；

28、（体外受精前，要对精子进行获能处理）（2）获能方法： 对啮齿动物、兔、猪等的精子用 培养法（放入人工配制的获能液中）；对牛、羊等精子用化学法（放在一定浓度的肝素或钙离子载体A23187溶液中）。 3、受精： 获能的精子和培养成熟的卵细胞在获能溶液或专用的受精溶液中完成受精过程。二、胚胎的早期培养：1、精子与卵子在体外受精后，应将受精卵移入发育培养液中继续培养，以检查受精状况和受精卵的发育能力。2、培养液成分: 较复杂，除一些无机盐和有机盐外，还需添加维生素、激素、氨基酸、核苷酸等营养成分，以及血清等物质。3、当胚胎发育到适宜的阶段时，可将其取出向受体移植或冷冻保存。不同动物胚胎移植的时间不同。

29、(牛、羊一般要培育到桑椹胚或囊胚阶段才能进行移植，小鼠、家兔等实验动物可在更早的阶段移植，人的体外受精胚胎可在4个细胞阶段移植。)3.3 胚胎工程的应用及前景一、胚胎移植1、概念：是指将雌性动物的早期胚胎，或者通过体外受精及其他方式得到的胚胎，移植到同种的、生理状态相同的其他雌性动物的体内，使之继续发育为新个体的技术。其中提供胚胎的个体称为“供体”，接受胚胎的个体称为“受体”。（供体为优良品种，作为受体的雌性动物应为常见或存量大的品种。）胚胎移植实际上是生产胚胎的供体和孕育胚胎的受体共同繁殖后代的过程。2、地位：如转基因、核移植，或体外受精等任何一项胚胎工程技术所生产的胚胎，都必须经过胚胎移植

30、技术才能获得后代，胚胎移植是胚胎工程的最后一道“工序”。3、意义（或优势）：可以充分发挥雌性优良个体的繁殖潜力，缩短供体本身的繁殖周期。4、胚胎移植的生理学基础：（1）动物发情排卵后，同种动物的供、受体生殖器官的生理变化是相同的。这就为供体的胚胎移入受体提供了相同的生理环境。（2）早期胚胎在一定时间内处于游离状态。这就为胚胎的收集提供了可能。（3）受体对移入子宫的外来胚胎不发生免疫排斥反应。这为胚胎在受体的存活提供了可能。（4）供体胚胎可与受体子宫建立正常的生理和组织联系，但移入受体的供体胚胎的遗传特性在孕育过程中不受影响。5、胚胎移植的基本程序：（1）对供、受体的选择和处理。选择遗传特性和生

31、产性能优秀的供体，有健康的体质和正常繁殖能力的受体，供体和受体是同一物种。并用激素进行同期发情处理，用促性腺激素对供体母牛做超数排卵处理。（2）配种或人工授精。（3）对胚胎的收集、检查、培养或保存。配种或输精后第7天，用特制的冲卵装置，把供体母牛子宫内的胚胎冲洗出来(也叫冲卵)。对胚胎进行质量检查，此时的胚胎应发育到桑椹或胚囊胚阶段。直接向受体移植或放入196的液氮中保存。（4）对胚胎进行移植。（5）移植后的检查。对受体母牛进行是否妊娠的检查。二、胚胎分割1、概念：是指采用机械方法将早期胚胎切割2等份、4等份或8等份等，经移植获得同卵双胎或多胎的技术可看作是动物无性繁殖或克隆。2、意义：来自同一胚胎的后代具有相同的遗传物质，属于无性繁殖。