血清碱性磷酸酶ALP磷酸对硝基苯酚法测定作业指导书.docx

1、血清碱性磷酸酶ALP磷酸对硝基苯酚法测定作业指导书血清碱性磷酸酶ALP磷酸对硝基苯酚法测定作业指导书1. 实验原理碱性磷酸酶的活性由在pH值为10.4，2-氨基-2甲基-1-丙醇（AMP）存在的情况下测量p-硝基-磷酸苯酯（pNPP）的转换速率决定。ALPpNPP + AMP -pNP+AMP-PO4在410/480nm测定pNP的生成速率，它与标本中ALP的活性成正比。2. 标本采集与处理：2.1 病人准备：无特殊要求。2.2 标本类型：标本最好是无溶血的血清或肝素化的血浆。2.3 血清分离：应在收集后两小时内分离出来。避免使用含EDTA或草酸盐的血浆。3. 标本存放：23天内的活性损失：1

2、525保存：10%；标本稳定性：48保存稳定7天；-20保存至少可稳定2个月标本。如果分析延迟8小时以上，最好把血清冷藏。冷冻的血清在融解后会表现出血清值的显著降低。4. 标本运输：常温条件下运输5. 标本拒收标准：细菌污染的不能做测定。6. 实验材料：6.1 上海申能ALP测定试剂盒（141 0417170 1 试剂1 664 ml 试剂2 616 ml）6.1.1 试剂组成试剂1：2-氨基-2甲基-1-丙醇（AMP）缓冲液 0.90mol/L（pH:10.4）醋酸镁 1.6mmol/L硫酸锌 0.4mmol/LHEDTA 2.0mmol/L试剂2：磷酸对硝基酚 16.0mmol/L6.1.

3、2 试剂准备：试剂为即用式。6.1.3 试剂稳定性与贮存：原试剂避光保存于28，若无污染，可稳定至失效期。试剂不可冰冻。6.1.4 变质指示：当试剂有浊度时，表明有细菌污染，不能继续使用。6.1.5 注意事项：碱性磷酸酶试剂中含叠氮钠，避免接触皮肤及粘膜。反应过程中产生的对硝基苯酚有毒性，切勿吸入、吞食、接触皮肤或粘膜。若反应液与皮肤或粘膜接触，请速用水冲洗。6.2 校准品：使用DiaSys公司提供的TruCal U校准品对自动分析仪进行校准，具体参见生化检验校准品和质控品.SOP文件。6.3 质控品：参见生化检验校准品和质控品.SOP文件。7. 仪器：奥林巴斯AU1000生化分析仪8. 操作

4、步骤8.1 项目基本参数：参见生化检验奥林巴斯AU1000生化分析仪项目测定参数.SOP文件8.2 仪器操作步骤：参见生化检验奥林巴斯AU1000生化分析仪操作规程.SOP文件9. 检验结果的判断与分析10. 质量控制：在每一批标本中都应把非定值血清水平I与II质控做为未知标本进行分析，以2S为质控警告限，3S为失控限，绘制质控图，判断是否在控。质控规则参见生化室室内质控操作规程.SOP文件。11. 计算方法：以TruCal U复合校准品ALP校准值校准仪器后，在病人结果可报告范围内，仪器直接报告可靠的检测结果。不使用校准品进行ALP活力检测，可以直接使用A/min均值乘以计算因子得到结果，但

5、是这样所得结果的可靠性不如使用校准品。计算ALP活力的计算因子见下：A/min因子 = ALP活力U/L 底物起始的反应（37） 样品起始的反应（37）05 nm 3433 275712. 参考值范围成年人4男性 2050岁 53128U/L男性 60岁以上 56119U/L女性 2050岁 42 98U/L女性 60岁以上 53141U/L儿童5男性 女性130天 75319U/L 48406U/L1个月1岁 82383U/L 124341U/L1岁3岁 104345U/L 108317U/L4岁6岁 93309U/L 96297U/L7岁9岁 86315U/L 69325U/L10岁12岁

6、 42362U/L 51332U/L13岁15岁 74390U/L 50162U/L16岁18岁 52171U/L 47119U/L参考值因性别、年龄、饮食和地域的不同而有所差别。根据好的实验室经验，每个实验室应建立自己的参考值。13. 临床意义1,2：碱性磷酸酶（ALP）是一种在碱性条件下具有较强活性的水解酶，并以多种形态存在于血液中，其大多来自骨骼的成骨细胞和肝脏，也来源于其他一些组织例如肾脏、胎盘、肠、睾丸、胸腺、肺及肿瘤。在儿童生长期和妊娠期，血清中ALP生理性活性增高，骨疾病与肝胆疾病等引起ALP病理性活性增高。在肝胆疾病中引起ALP活性增高的原因包括胆道梗阻，例如因胆结石、肿瘤或炎

7、症造成的胆汁郁积。在传染性肝炎中也可发现ALP活性增高。在骨疾病中，Paget病、骨软化症（佝偻病）、骨转移瘤和甲状旁腺功能亢进等，使成骨活性升高引起ALP活力增高。14. 操作性能14.1 线性范围 2850U/L14.2 精密度：精密度的评估是根据NCCLS推荐的典型方法5，AU1000批内不精密度小于5%，总不精密度小于10%。用于分析的质控血清和数据处理符合以上的NCCLS的规则7。批内精密度n=20(U/L)s(U/L)CV(%)批间精密度n=20(U/L)s(U/L)CV(%)样品197.81.151.18样品11031.061.02样品21891.820.96样品21881.04

8、0.55样品32351.680.72样品32361.640.7014.3 方法学比较：本公司试剂盒(y)与某商品化试剂盒(x)，同时对78个样品进行ALP活力检测，将检测结果作方法学比较，其统计结果如下：y=1.00x+0.00U/L；r =0.999。14.4 灵敏度：本试剂的检测限为2U/L。14.5 病人结果可报告范围：2850U/L15. 超出范围结果处理：本法对ALP活力检测的最大A/min在405nm为0.25。当样品测定值超过上限时，应将样品用9 g/L氯化钠溶液作1+9稀释，重新测定，结果乘以10。16. 病危报警值的处理17. 方法局限性17.1 本法对ALP活力检测的最大A

9、/min在405nm为0.25。当样品测定值超过上限时，应将样品用9g/L氯化钠溶液作1+9稀释，重新测定，结果乘以10。17.2 干扰物质：当样品中抗坏血酸浓度 1704 mol/L，胆红素浓度 684 mol/L，血红蛋白浓度 2.00g/L，甘油三酯浓度 22.6mmol/L时没有观察到干扰18. 补救措施：当仪器发生故障时，迅速联系仪器厂家进行维修。19. 参考文献1. Thomas L. Clinical Laboratory Diagnostics. 1st ed. Frankfurt： TH-Books Verlagsgesellschaft; 1998. p. 36-46.2.

10、 Moss DW, Henderson AR. Clinical enzymology. In： Burtis CA, Ashwood ER. editors. Tietz textbook of clinical chemistry. 3rd ed. Philadelphia： W. B. Saunders Company; 1999. p.617-721.3. Tietz NW, Rinker D, Shaw LM. IFCC method for alkaline phosphatase. J Clin Chem Clin Biochem 1983; 21： 731-48.4. Burtis CA, Ashwood ER. editors. Tietz textbook of clinical chemistry. 3rd ed. Philadelphia： W. B. Saunders Company; 1999. p. 1829.5. Soldin JS, Hicks JM. Pediatric reference ranges. Washington： AACC Press, 1996. p. 5.20. 其他：仪器测定后的废液及难降解的材料集中收集后按检验科废物处置管理规定执行。