分生资料综合版.docx

1、分生资料综合版1. ORF：即开放阅读框，是DNA上的一段碱基序列，拥有特殊的起始密码子和直到可以从该段碱基序列产生合适大小蛋白才出现的终止密码子，该段碱基序列编码一个蛋白。2. 结构基因：是决定合成某一种蛋白质或RNA分子结构相应的一段DNA。其功能是把携带的遗传信息转录给mRNA，,再以mRNA为模板合成具有特定氨基酸序列的蛋白质或RNA。3. 断裂基因：真核生物的结构基因，由若干个编码区和非编码区互相间隔开但又连续镶嵌而成，去除非编码区再连接后，可翻译出由连续氨基酸组成的完整蛋白质，这些基因称为断裂基因。4. 选择性剪接：指从一个mRNA前体中通过不同的剪接方式（选择不同的剪接位点组合）

2、产生不同的mRNA剪接异构体的过程，而最终的蛋白产物会表现出不同或者是相互拮抗的功能和结构特性，或者在相同的细胞中由于表达水平的不同而导致不同的表型。5. C值：基因组的大小通常以其DNA的含量来表示，我们把一种生物体单倍体基因组DNA的总量成为C值。人类基因组计划：是20世纪90年代起开始启动的多国科学合作计划，对少数人进行全基因组（即24条非同源染色体，共30亿碱基）的测序和拼接，绘制出人类基因的图谱，旨在为破译人体生命奥秘奠定基础。主要任务是绘制4张图谱分别是遗传图谱、物理图谱、序列图谱和转录图谱。感受态细胞：是指细胞膜结构改变、通透性增加并具有摄取外源DNA能力的细胞。同尾酶：切割不同

3、的DNA片段但产生相同的粘性末端的一类限制性内切酶。融解温度：DNA的热变性是在一个很窄的温度范围内完成的，热变性过程中，紫外吸收值达到最大值的50%时的温度即为融解温度。每一种DNA都有一个固定的融解温度。Southern印迹：指通过吸附或电泳方法将经凝胶电泳分离的DNA从胶上转移到固相载体上，再与特定的核酸探针反应从而达到检测或鉴定DNA的过程。CsCl-EB法Ct值 扩增产物的荧光信号达到设定的阈值时所经过的扩增循环数。此时扩增是呈对数期增长。自杀基因Taqman 技术GC-MS2-DE：即双向凝胶电泳，利用蛋白质的等电点与分子量差异分离之。第一向是等电聚焦，第二向是SDS-聚丙酰胺凝胶

4、电泳。PMF：即肽质量指纹图谱，蛋白质直接从双向电泳凝胶上切下或印迹到PVDF膜上并切下，经过原位酶解将蛋白切成小的片段，得到酶解肽段，然后用质谱检测各产物肽的相对分子质量，即获得了肽质量指纹谱。由于每种蛋白质氨基酸序列都不同，当蛋白质被酶解后，产生的肽片段序列也不同，其肽混合物质量数即具一定特征性。用实测的肽段质量去查找蛋白质和核酸序列库，结合适当的计算机算法，可鉴定蛋白质。Mitochondrial Disorders：即线粒体病，是遗传缺损引起线粒体代谢酶缺陷，致使ATP合成障碍、能量来源不足导致的一组异质性病变，又称为线粒体细胞病。Multiplex PCR：即多重PCR，该技术是在一

5、个反应体系中加入多对引物，同时扩增出多个核酸片段，由于每对引物扩增的片段长度不同，可用电泳加以鉴别。多重PCR主要用于多种病原微生物的同时检测或病原微生物、遗传病及癌基因的分型鉴定。2. 单核苷酸多态性:主要是指在基因组水平上由单个核苷酸的变异所引起的DNA序列多态性。它是人类可遗传的变异中最常见的一种。占所有已知多态性的90%以上。生物大分子:生物大分子指的是作为生物体内主要活性成分的各种分子量达到上万或更多的有机分子。常见的生物大分子包括蛋白质、核酸、脂类、糖类。酚抽提法:即SDS法。最初在1976年由Stafford及其同事提出，通过改良，以含EDTA、SDS及无DNA酶的RNA酶裂解缓

6、冲液破碎细胞，经蛋白酶K处理后，用pH8.0的Tris饱和酚抽提DNA，重复抽提至一定纯度后，根据不同需要进行透析或沉淀处理获得所需的DNA样品。凝胶过滤层析:凝胶过滤层析亦称凝胶色谱、排阻色谱或分子筛，是利用凝胶把分子大小不同的物质分离开的一种方法。凝胶过滤层析的机理是分子筛效应。基因芯片：又称DNA芯片或DNA微阵列，将大量的基因片段有序地、高密度地排列在玻璃片或纤维膜等载体上，称之为基因芯片。原位杂交：是以特定标记的已知序列的核酸分子作为探针与细胞或组织切片中核酸进行杂交并对其进行检测的方法。荧光域值：一般将 PCR反应前 15个循环的荧光信号作为荧光本底信号，荧光域值是PCR315个循

7、环荧光信号标准的10倍，荧光域值设定在PCR扩增的指数期。盐析：在溶液中加入无机盐类而使某种物质溶解度降低而沉淀析出的过程称为 “盐析” 超滤法： 超滤是一种以压力为驱动力，利用超滤膜的筛分作用，根据相对分子质量的不同来进行分离的膜技术。亲和层析：生物分子间存在很多特异性的相互作用，如酶-底物、抗体-抗原、核酸-互补核苷酸序列等，它们之间都能够专一而可逆的结合，这种结合力就称为亲和力。亲和层析就是通过将具有亲和力的两个分子中一个固定在不溶性基质上，利用分子间亲和力的特异性和可逆性，对另一个分子进行分离纯化。PCR ：DNA的半保留复制，在模板DNA、引物和四种dNTP存在的条件下，依赖于DNA

8、聚合酶的酶促反应。逆转录PCR ：提取组织或细胞中的总RNA，以其中的mRNA作为模板，采用Oligo或随机引物利用逆转录酶反转录成cDNA。再以cDNA为模板进行PCR扩增，而获得目的基因或检测基因表达。2. 表观遗传：指在DNA序列不发生改变的情况下，基因功能出现可逆的、可遗传的变化。表观遗传现象包括组蛋白修饰、DNA甲基化、RNA干扰等。4. 动态突变：指DNA中的碱基重复序列拷贝数发生异常扩增而导致的突变。在动态突变中的重复单位片段的大小从3个碱基到33个碱基长不等。4.miRNA：是起源于内源性表达转录本，长约2125个核苷酸的非编码单链RNA分子。通过基因的转录后调控过程参与了生命

9、体的发生、生长、发育、分化和死亡的各个过程。Real time又称实时定量荧光PCR，是指在PCR反应体系中加入荧光基团，利用荧光信号累积实时监测整个PCR进程，最后通过标准曲线对未知模板进行总量分析或通过Ct值对模板进行相对定量。代谢组学:代谢组学(metabonomics/metabolomics)是效仿基因组学和蛋白质组学的研究思想，通过考察生物体系（细胞、组织或生物体）受刺激或扰动后（如某个特定的基因变异或环境变化后），其代谢产物的变化或其随时间的变化，来研究生物体系的一门科学。其研究对象大都是相对分子质量1000以内的小分子物质。毛细管电泳:毛细管电泳是以毛细管为分离通道、采用高压直

10、流电场为驱动力的新型液相分离技术，通过离子化合物的质荷比（m/z）不同造成迁移速率不同来实现分离的一项技术。NMR :核磁共振技术是基于具有自旋性质的原子核在核外磁场的作用下，吸收射频辐射而产生的能级跃迁谱学，主要用于反映化合物结构中的H和C原子的位置信息。stem cell:干细胞是一类具有自我复制能力，在一定条件下可以分化成多种功能细胞的多潜能细胞。CRISPR/Cas system:clustered regularly interspaced short palindromic repeats associated (Cas)系统是一种广泛存在于细菌及古生菌中, 由RNA指导的降解入侵

11、病毒或噬菌体DNA的适应性免疫系统。基于细菌的这种免疫功能，人们把型CRISPR-Cas系统改造成一种能够对靶基因进行修饰的全新的人工核酸内切酶。2. 试述双向凝胶电泳技术的基本原理。双向凝胶电泳技术的基本原理是根据蛋白质等电点和分子量的差异，连续进行成垂直方向的两次电泳，实现蛋白质分离的技术。第一向为等电聚焦电泳，其基本原理是利用蛋白质分子的等电点的差异在PH成梯度变化的凝胶中实现蛋白质的分离。第二向为十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳，它是利用SDS与蛋白质结合后蛋白质统一带大量负电荷，消除待分离蛋白质间的电荷差异，仅按蛋白质分子量的大小进行分离。分子克隆技术包括哪些基本步骤？获取目的基因

12、。选择合适的载体。对目的基因和载体进行酶切与连接。将重组DNA导入受体细胞。筛选和鉴定重组体。即分、切、接、转、筛等步骤。6.分子杂交的一般过程？探针制备及标记（同位素或非同位素） 待测核酸样品制备（分离，纯化）杂交（液相，固相，原位杂交）杂交后处理（去掉非特异杂交分子）显示结果（显色，发光，放射自显影）结果分析目的基因和载体连接主要有哪些方法？主要有黏性末端DNA分子的连接、平末端连接法和通过同聚尾连接三种方法。黏性末端DNA分子的连接适合用于在质粒和目的基因上有相同单或双酶切位点时。没有相同的酶切位点时，建议用平末端连接法或通过同聚尾连接。举例说明载体应具备的基本要素。如广泛使用的pBR3

13、22质粒载体，长4，36kb。它含有一个能保证高拷贝自我复制的复制起始点（Ori），并带有四环素抗性（Tetr）基因和氨苄青霉素抗性（Ampr)基因供菌落筛选。在这两个基因中分别含有BamH和Pst等限制性核酸内切酶的单一酶切位点，用于插入外源DNA片段。如有外源基因的插入，会导致这些标志性基因的失活。简述双抗生素筛选的原理。双抗生素筛选原理：某些质粒载体如pBR322质粒中装有Ampr和Tetr抗性基因，在含四环素和氨苄青霉素的平皿上都能够生长的细菌只含有空载体，此筛选方法称为双抗生素对照筛选。以DNA的分离纯化为例，阐述生物大分子分离纯化的基本原则和注意事项。原则：一是保持核酸碱基序列的完

14、整性。二是尽量清除其它分子的污染，保证核酸制品的纯度。 注意事项：1）核酸样品中不存在过高浓度的金属离子和对酶有抑制作用的有机溶剂； 2）其它生物大分子如蛋白质、脂类和多糖分子的污染应降至最低程度； 3）排除其它核酸分子的污染，如提取DNA分子时应去除RNA，提取RNA分子时应去除DNA。4)分离纯化时温度不要过高(04)，高温破坏氢键；控制pH值范围(pH值4-10)，极端酸碱破坏磷酸二酯键；保持一定离子强度；减少物理因素对核酸的机械剪切力；5)DNA样品保存时可溶于pH8.0的TE，4 或-20 保存，在-70可保存数年；6)长期保存样品中可加入1滴氯仿。试阐述分离纯化His-tag融合蛋

15、白的原理和操作步骤。原理：组氨酸标记的蛋白质即在蛋白质的氨基端加上610个组氨酸，在一般或变性条件下（如8mol/l尿素）下能与Ni2+螯合柱紧密结合，用咪唑或将PH降至5.9可将其洗脱，达到分离纯化的目的。操作步骤：收集融合蛋白表达细菌，于-80下保存；用细胞裂解液稀释已储存的细菌细胞；超声波法破碎细胞；离心，去上清，收集包涵体，沉淀混合物；用含尿素的细胞裂解液充分溶解包涵体沉淀物，取上清；将上清液加入装有Ni-NTA凝胶的试管中，充分混合后置于4下1h；离心，收集沉淀；用洗涤液洗涤，低速离心收集沉淀的凝胶树脂；用含低浓度咪唑的洗涤缓冲液洗涤，低速离心收集沉淀的凝胶树脂；向所得的沉淀中加入含

16、高浓度咪唑的样品洗涤液，在4下3min，离心，取上清，此为分离纯化的his-tag融合蛋白；最后，用SDS-PAGE或其他方法检测分离纯化的蛋白质。Taqman技术的原理？基于Taq酶5外切酶活性这一特性，涉及合成一个能与PCR产物杂交的探针，探针的5端标记一个荧光分子，3端标记另一个荧光分子，其中3端的荧光分子能够吸收5端荧光分子的荧光信号，但当有特异的PCR产物时，该探针与模板退火，即产生了适合于核酸外切酶活性的底物，从而激活了Taq酶5外切酶活性，将探针5端连接的荧光分子从探针上切割下来，破坏了两荧光分子间的FRET，从而发出荧光，切割下来的荧光分子数与PCR数量成比例。6. 什么是SN

17、P？试述研究SNP的意义。答：SNP（单核苷酸多态性）指的是在基因组水平上由单个核苷酸的变异所引起的序列多态性。它是人类可遗传的变异中最常见的一种。占所有已知多态性的90%以上。其在人类基因组中广泛存在，平均每5001000个碱基对中就有1个，估计其总数可达300万个甚至更多。 研究意义：具有数量多、分布广和稳定遗传等特点，它与许多疾病直接相关，如血友病和苯酮尿病等，是决定人类疾病易感性和药物反应差异的主要因素。因此在发现致病基因，新药研究，个体化用药，在药物基因组学、诊断学和生物医学研究中起重要作用 。7. 简要介绍质粒并举例说明其在分子生物学中的用途。答：质粒是细菌染色体以外的遗传物质，是

18、环状闭合的双链，存在于细胞质中，具有自主复制的能力，所携带的遗传信息能赋予宿主菌某些生物学性状。质粒常作为基因工程中的载体工具来携带外源片段导入宿主细胞进行扩增或表达。请介绍目前蛋白质组学研究中最常用的基本技术流程并简述其原理。答：蛋白质组学研究需要两条互补的实验工作流程：基于凝胶的工作流程和基于液相色谱的工作流程。.最常用的流程是基于凝胶的工作流程，通过样品制备、样品标记、双向电泳分离、图像获取、图像分析，到抠点、酶切、点靶和MALDI-TOF蛋白质鉴定等一整套技术手段从而获得蛋白质性质数据。而基于液相色谱的工作流程则可以对在双向电泳中难以分离鉴定的高相对分子质量、低相对分子质量、极酸性、极

19、碱性和疏水性强的蛋白质进行更有效的分离鉴定。这两种方法结合起来可以对复杂样品进行预分离、对低丰度蛋白进行富集，还可以完成蛋白酶解后多维液相分离。用于分离的双向电泳原理： 即根据蛋白质的等电点（pI）差异将蛋白质分离。第二向步骤为十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳（SDS-PAGE），即利用蛋白质的分子量（Mr, 相对分子量）差异将蛋白质分离。双向凝胶电泳结果中的每个斑点都对应着样本中的一种蛋白。因此，可将上千种不同的蛋白质分离开来，并得到每种蛋白质的等电点、表观分子量和含量等信息。简述酵母双杂交技术的原理。答：酵母双杂交技术是在真核模式生物酵母中进行的，用于发现和研究在活体细胞内的蛋白质和蛋白

20、质之间的相互作用，对蛋白质之间微弱的、瞬间的作用也能通过报告基因的表达产物敏感地检测到，是一种具有很高灵敏度的研究蛋白质之间关系的技术。其既可以用来研究哺乳动物基因组编码的蛋白质之间的相互作用，也可以用来研究高等植物基因组编码的蛋白质之间的相互作用。在许多领域中有着广泛的运用。很多真核生物的位点特异转录激活因子通常具有两个可分割开的结构域，即DNA特异结合域（BD）与转录激活域（AD）。这两个结构域各具功能，互不影响。但一个完整的激活特定基因表达的激活因子必须同时含有这两个结构域,否则无法完成激活功能。不同来源激活因子的BD区与AD结合后则特异地激活被BD结合的基因表达。基于这个原理，可将两个

21、待测蛋白分别与这两个结构域建成融合蛋白，并共表达于同一个酵母细胞内。如果两个待测蛋白间能发生相互作用，就会通过待测蛋白的桥梁作用使AD与BD形成一个完整的转录激活因子并激活相应的报告基因表达。通过对报告基因表型的测定可以很容易地知道待测蛋白分子间是否发生了相互作用。2、分离纯化过程中，如何保持核酸的完整性？答：在整个操作过程中应尽量避免各种有害因素对核酸的破坏。1）温度不要过高(04)；(高温破坏氢键)2）控制pH值范围(pH值4-10);(极端酸碱破坏磷酸二酯键) 3）保持一定离子强度; 4）减少物理因素对核酸的机械剪切力.有哪些常用的探针标记物？常用的探针标记物有P32、S35、H3、I1

22、25、辣根过氧化物酶、荧光素、生物素、光敏生物素、地高辛等。影响核酸分子杂交的因素有那些？如何进行杂交条件的优化？影响核酸分子杂交的因素有：探针的选择、探针的标记方法、探针的浓度、杂交温度、反应时间和洗膜温度。优化：针对不同的杂交实验，选择不同的核酸探针；视灵敏度和显示方法等实验要求和条件选择标记方法；探针的浓度尽量高；选择杂交最适温度，最适复性温度比Tm低25；选择合适的杂交反应时间，时间既不能太短也不能太长，一般杂交反应要进行20h左右；杂交后的最终洗膜温度一般应低于Tm值5-12，典型的最终洗膜强度为0.1*SSC（0.015mol/Na），55；此外，除了使用标准杂交液之外，必要时可以

23、加一些杂交促进剂，常用的有硫酸葡聚糖及聚丙烯酸的钠盐，它们能促进DNA链之间的缔合。根据作用原理生物分子的分离纯化有那几类？根据作用原理生物分子的分离纯化可分为以下几种类型：根据分子极性大小和溶解度的不同进行分类，包括溶剂提取技术、盐析法、分配层析法、分级沉淀法等；根据分子形状和大小不同进行分类，包括凝胶过滤层析等；根据物质吸附性质不同进行分类，包括选择性吸附与吸附层析法等；根据分子带电性（电离性质）的差异进行分类，包括离子交换层析、电泳、等电聚焦法等。根据配体特异性进行分类，包括亲和层析等。什么原因易引起DNA降解，该如何解决？引起DNA降解原因可能是：材料不新鲜或反复冻融；未很好抑制内源核

24、酸酶的活性；提取过程操作过于剧烈；DNA被机械打断；外源核酸酶污染；保存过程中反复冻融。主要的解决办法包括：尽量取新鲜材料，低温保存材料避免反复冻融；液氮研磨或匀浆组织后，应在解冻前加入裂解缓冲液；在提取内源核酸酶含量丰富的材料的DNA时，可增加裂解液中螯合剂的含量；细胞裂解后的后续操作应尽量轻柔；所有试剂用无菌水配制，耗材经高温灭菌；将DNA分装保存于缓冲液中，避免反复冻融。如何对镰刀形细胞贫血和地中海贫血进行基因诊断？答： 镰状细胞贫血的基因诊断原理在于它的血红蛋白中的 珠蛋白基因发生了突变， 导致 链第 6 位谷氨酸变为缬氨酸。基于 AT 的变换，改变了限制性内切酶的位点，因此在酶解 正

25、常人 DNA 和患者 DNA 后再用标记的 珠蛋白基因为探针做 Southern 杂交时，就会出现 不同的 DNA 条带。 654 地中海贫血是指发生在 珠蛋白基因第二外显子第 654 位 CT 突变而引起的一种地中海贫血。该突变在 IVS-第 654 位上出现的单碱基取代产生了一个 新的 GT 二核苷酸， 联同旁侧序列构成了一个新的 5端一场的剪切位点， 同时还激活了 IVS第 579 位处 3端隐匿的剪切位点，从而将 IVS-nt579nt652 之间一段 73bp 的内含子 序列作为额外的外显子插入到外显子 2 和外显子 3 之间，产生了一场的 珠蛋白 mRNA。 在异常剪切的 mRNA

26、 中存在一个提前的终止密码子，使翻译提前中止而产生截断的、不稳 定的异常珠蛋白，导致了正常 珠蛋白链合成减少。基因诊断常用到的方法有哪些？答：（1）DNA 诊断：核酸分子杂交聚合酶链式反应（PCR）限制性酶切图分析DNA 测序DNA 芯片技术。 （2）RNA 诊断：反转录 PCRNorthern 印记杂交实时荧光定量 PCR表达谱基因芯片。（PCR、核酸杂交、基因芯片、bDNA、NASBA、测序）TaqMan技术如何设计引物和探针？答：PCR 扩增时在加入一对引物的同时加入一个特异性的荧光探针，该探针为一寡核苷酸， 两端分别标记一个报告荧光基团和一个淬灭荧光基团。 探针完整时， 报告荧光基团发

27、射的荧 光信号被淬灭荧光基团吸收；PCR 扩增时，Taq 酶的 53外切酶活性将探针酶降解， 使报告荧光基团和淬灭基团分离， 从而荧光监测系统可接收到荧光信号， 即每扩增一条 DNA 链，就有一个荧光分子形成，实现了荧光信号的积累与 PCR 产物形成完全同步。引物设计原则序列选取应在基因的保守区段； 避免引物自身或与引物之间形成4个或4个以上连续配对，避免引物自身形成环状发卡结构； 典型的引物18到24个核苷长。引物需要足够长，保证序列独特性，并降低序列存在于非目的序列位点的可能性。Tm值在5565，GC含量在40%60%； 引物之间的TM相差避免超过2； 引物的3端避免使用碱基A，引物的3端

28、避免出现3个或3个以上连续相同的碱基； 为避免基因组的扩增，引物设计最好能跨两个外显子；Taqman探针技术要求片段长度在50bp150bp； 引物末端（最后5个核苷酸）不能有超过2个的G和C。 探针设计原则先选择好探针，然后设计引物使其尽可能的靠近探针； 探针长度应在15-45bp（最好是20-30bp)，以保证结合特异性； 探针的DNA折叠和二级结构；尽量避开二级结构； Tm值在65-70，通常比引物TM值高5-10（至少要5），以确保在退火过程中探针先于引物与目的片段结合，GC含量在40%70%； 探针的5端应避免使用G鸟嘌呤因为5G会有淬灭作用，而且即使是被切割下来还会存在淬灭作用；

29、整条探针中，碱基C的含量要明显高于G的含量G含高会降低反应效率，这时就应选择配对的另一条链作为探针； 为确保引物探针的特异性，最好将设计好的序列在blast中核实一次，如果发现有非特异性互补区，建议重新设计引物探针。磁珠分离法分离mRNA的原理PUC质粒结构及筛选原理miRNA调控靶基因的机制4、 简述PCR实验中常见的问题及其对策。答：（1）假阳性。对策：PCR前后工序分室操作，试剂器材分室存放；凡耐高温的试剂器材均高压灭菌；Tip头、Ep管等最好一次性使用；操作人员必须戴手套进行操作；试剂小量分装保存，用前先离心，防止开盖时液体溅出。（2）非特异性PCR产物。对策：引物特异性不高，引物用量

30、过多，应调换引物或降低引物用量；TapDNA聚合酶质量不好或用量偏高，应将低酶量或使用质量较好的酶；Mg2+浓度过高，可适当调节Mg2+浓度；退火温度过低，退火及延伸时间偏长，可提高退火温度，减少退火及延伸时间，或者采用二温循环PCR进行扩增；热循环次数过多，适当增加模板用量，减少循环次数。（3）假阴性。对策：纯化模板或者使用试剂盒提取模板DNA或加大模板的用量； 更换Buffer或调整浓度；重新设计引物（避免链间二聚体和链内二级结构）或者换一管新引物。（4）引物二聚体。对策：重新设计引物或者使用巢式PCR ；适当降低模板或引物浓度；适当减少酶量；降低镁离子浓度；适当提高退火温度或使用二阶段温

31、度法；减少循环次数；降低退火温度、延长延伸时间 简述PCR技术的基本原理及其反应体系的一般组成？基本原理：DNA的半保留复制，在模板DNA、引物和四种dNTP存在的条件下，依赖于DNA聚合酶的酶促反应。基本反应分变性、退火、延伸三步完成。体系组成：模板DNA、四种dNTP(包括dATP、dTTP、dGTP和dCTP)、引物1、引物2、Taq DNA聚合酶、缓冲液及Mg2+（MgCl2）。试分析PCR出现非特异性扩增产物的原因及解决方法？造成PCR非特异性产物的常见原因及其预防措施：引物特异性不高，引物用量过多，应调换产物或降低引物用量；TaqDNA聚合酶质量不好或用量偏高，应降低酶量或使用质量

32、较好的酶；Mg2+浓度过高，可适当调整其浓度；退火温度过低，退火及延伸时间偏长，可提高退火温度，减少退火及延伸时间，或者采用二温式循环PCR进行扩增；热循环次数过多，适当增加模板用量，减少循环次数。简述代谢组学特点？关注于内源性小分子化合物。对生物体系中的小分子化合物进行定性定量研究内源性小分子化合物的上调和下调指示了与疾病、毒性、基因修饰或环境因子的影响。内源性化合物的特点用来表征疾病和药物筛选。简述MicroRNA的生物合成过程？miRNA基因被转录成pri-miRNA (RNA 聚合酶)；pri-miRNA被剪切成具有70-100个核苷酸的pre-miRNA (Drosha,DGCR8)； pre-miRNA从核内被转移至胞质 (Exportin-5,