第五章血型和输血.docx

1、第五章血型和输血第五章血型和输血血型定义：早期指红细胞表面抗原的差异，现知，血小板和白细胞表面抗原也存在差异，因此，血型是抗原抗体系统的遗传特征。血型研究的应用：治疗输血、器官移植、骨髓移植、法医鉴定、考古研究等。第一节红细胞AB0血型系统本节考点：（1）ABO血型系统的抗原及抗体检查（2）ABO血型系统的亚型（3）ABO血型鉴定（4）交叉配血法（5）ABO血型鉴定及交叉配血中常见错误（6）ABO血型系统主要临床意义（一）AB0血型系统的抗原及抗体检查1996年，国际输血协会（ISBT）将红细胞表面抗原分为23个血型系统、5个血型关联和2个血型系列。血型系统指由一个或数个基因所编码的数个相关联

2、抗原的组成。目前，国际输血协会对红细胞血型系统的命名，有2种方法：一种是6位数字法，如001001为AB0血型系统的A抗原；另一种是字母加数字法，如RH1为Rh血型系统D抗原。1.AB0血型抗原（1）AB0抗原的遗传：AB0血型系统的产生及定位：由3个分离位点的基因所控制，即AB0、Hh、Sese基因。基因Hh和Sese紧密相连在第9对染色体上。现在一般接受“三复等位基因”学说：认为在决定AB0血型遗传的基因座上，有A、B、O三个等位基因。AB0遗传座位在第9号染色体的长臂3区4带。A和B基因对于0基因而言为显性基因，0基因为隐性基因。父母双方如各遗传给子代一个基因.则可组成6个基因型；O0、

3、AA、A0、BB、BO、AB；4种表现型：A、B、O、AB。 （2）AB0抗原的发生：56周胎儿红细胞已可测出ABH抗原。新生儿A、B抗原位点较成人少，一般在生后18个月时才能充分表现出抗原性，但抗原性也仅为成人的20%。此外,ABH抗原频率亦随种族而不同。（3）AB0分泌型：ABH抗原不仅存在于红细胞膜上，也可存在于白细胞、血小板及其他组织细胞上。ABH血型特异物质存在于唾液（含量最丰富）、尿、泪液、胃液、胆汁、羊水、血清、精液、汗液、乳汁等体液中，但不存在于脑脊液。这些可溶性抗原又被称为“血型物质”。凡体液中有血型物质者为分泌型（可以中和或抑制抗体与具有相应抗原的红细胞发生凝集），无血型物

4、质者为非分泌型。血型物质意义：测定唾液血型物质，可辅助鉴定血型。中和AB0血型系统中的“天然抗体”，有助于检查免疫性抗体，鉴别抗体的性质。检查羊水可预测胎儿AB0血型等。2.AB0系统抗体（1）天然抗体与免疫性抗体：天然抗体是在没有可觉察的抗原刺激下而产生的抗体，以IgM为主，又称完全抗体或盐水抗体；也可能是由一种无觉察的免疫刺激产生而得。免疫性抗体：有IgM、IgG、IgA，但主要是IgG。抗A和抗B可以是IgM与IgG，甚至是IgM、IgG、IgA的混合物，但主要是IgM，而0型血清中以IgG为主。（2）天然抗体和免疫抗体的主要区别；见表1-5-1。（3）抗A、B抗体：O型人血清中不仅有抗

5、A、抗B抗体，还含有一种抗A、B抗体。它与A型或B型红细胞都能凝集，但当用A或B型红细胞分别吸收时，不能将其分为特异的抗A和抗B。它与两种红细胞反应的活性不能通过特异吸收来分离。即使用A和B型红细胞反复吸收，它仍保持与A和B型红细胞都发生反应的活性。所以，不可能在抗A和抗B的混合液中找到抗A、B具有的血清学活性。这可能是O型血清中的抗A、B是一种直接针对A和B抗原的共同抗体结构。（二）AB0血型系统的亚型亚型是指属同一血型抗原，但抗原结构和性能或抗原位点数有一定差异。AB0血型系统中以A亚型最多见，A亚型主要有A1和A2，占全部A型血的99.9%，其他A亚型（A3、AX、AM）为数少；作AB0

6、血型鉴定时，应加O型血清，以防对A亚型误定型。B亚型（B3、BM、BX）比A亚型少见，临床意义不大。1.A1、A2亚型基本特征A1亚型的红细胞上具有A1和A抗原，其血清中含有抗B抗体；A2亚型的红细胞上只有A抗原，其血清中除含抗B抗体外，还有少量抗A1抗体。在直接凝集反应中，A1、A2亚型两种红细胞的A1与A2抗原均能与抗A试剂发生凝集反应。但抗A1不仅存在于A2亚型，在B型和0型人的血清中除含抗A外还有抗A1，所以可以从B型人血清中获取抗A1试剂。2.A1、A2亚型的鉴定方法以抗A1试剂可区别Al、A2血清，方法是：可从B型人血清获取抗A1试剂，B型血清有抗A、抗A1，其中抗A抗体能与A型红

7、细胞的Al、A2抗原凝集，如吸收抗A，就只剩下抗A1。鉴定A1、A2亚型，凡与抗A1试剂发生凝集反应者为A1，如果同时还与抗B凝集，则为A1B型；不与抗A1试剂凝集者，为A2或A2B型。3.A1、A2亚型鉴定的意义目的是防止误定血型。尽管我国A2、A2B型在A与AB型中所占比例少于1%，但定型时易将弱A亚型误定为O型，如果给其输入0型血，不会有太大问题，但是如果把弱A亚型误定为O型，并输给O型人，则受血者的抗A抗体就可能与输入的弱A亚型的红细胞起反应，引起血管内溶血性输血反应。因此，应避免将弱的A亚型定为0型，如：Ax型红细胞与B型血清（抗A抗体）不发生凝集，但与0型血清可发生程度不一的凝集，

8、这可能是因为0型血中抗A效价比B型血抗A效价高，故现做AB0血型鉴定时，应加0型血清（内含抗A、抗B及抗AB），以防将Ax型误定为0型。（三）AB0血型鉴定1.原理常用盐水凝集法检测红细胞上存在的血型抗原，以及血清中存在的血型抗体，依据抗原抗体存在的情况判定血型。常规的方法有：正向定型：用已知抗体的标准血清检查红细胞上未知的抗原。反向定型：用已知血型的标准红细胞检查血清中未知的抗体。结果判定：凡红细胞出现凝集者为阳性，呈散在游离状态为阴性。ABO血型定型原则见表1-5-2。2.鉴定方法（1）生理盐水凝集法：玻片法：操作简单，适于大量标本检查，但反应时间长；被检查者如血清抗体效价低，则不易引起红

9、细胞凝集，因此，不适于反向定型。试管法：由于离心作用可加速凝集反应，故反应时间短，而且，借助于离心力可以使红细胞接触紧密，促进凝集作用，适于急诊检查。 红细胞亚型抗原性弱，如抗A抗B标准血清效价低时，易造成漏检或误定。如加用0型（抗A、B）血清和反向定型，可避免此类错误。玻片法凝集结果判断：红细胞呈均匀分布，无凝集颗粒，镜下红细胞分散。在低倍镜下凝集程度强弱判断标准：呈一片或几片凝块，仅有少数单个游离红细胞为（+）。呈数个大颗粒状凝块，有少数单个游离红细胞为（+）。数个小凝集颗粒和一部分微细凝集颗粒，游离红细胞约占12为（+）。肉眼可见无数细沙状小凝集颗粒。于镜下观察，每凝集团中有58个以上红

10、细胞凝集为（+）。可见数个红细胞凝集在一起，周围有很多的游离红细胞（）。可见极少数红细胞凝集，而大多数红细胞仍呈分散分布为混合凝集外观。镜下未见细胞凝集，红细胞均匀分布为（-）。（2）凝胶微柱法：是红细胞抗原与相应抗体在凝胶微柱介质中发生凝集反应的免疫学方法。血型抗体为单克隆抗体，加入试剂、标本，用专用离心机离心后可直接用肉眼观察结果或用血型仪分析。此法操作标准化，定量加样，确保结果准确性。3.抗A、抗B和抗AB标准血清标准准血清均采自健康人，并应符合下述条件：特异性：只能与相应的红细胞抗原发生凝集，无非特异性凝集。效价：我国标准抗A和抗B血清效价均在1：128以上。亲和力：我国标准要求抗A对

11、A1、A2及A2B发生反应开始出现凝集的时间分别是15s、30s和45s；抗B对B型红细胞开始出现凝集的时间为15s。凝集强度为3min时，凝块不小于1mm2。冷凝集素效价：在1：4以下。无菌。灭活补体。4.血型鉴定操作时注意事项一般注意事项：所用器材必须干燥清洁、防止溶血，凝集和溶血的意义一样。为避免交叉污染，建议使用一次性器材。标准血清从冰箱取出后，应待其平衡至室温后再用，用毕后应尽快放回冰箱保存。加试剂顺序：一般先加血清，然后再加红细胞悬液，以便核实是否漏加血清。虽然IgM抗A和抗B与相应红细胞的反应温度以4最强，但为了防止冷凝集现象干扰，一般在室温2024内进行试验，而37条件，可使反

12、应减弱。幼儿红细胞抗原未发育完全、老年体弱者抗原性较弱，最好采用试管法鉴定血型。玻片法反应时间不能少于10min，否则较弱凝集不能出现，造成假阴性。正、反定型结果一致才可发报告。反定型法：先天性免疫球蛋白缺陷，长期大量应用免疫抑制，血型抗体可减弱或消失；血清中存在自身免疫性抗体、冷凝集素效价增高、多发性骨髓瘤、免疫球蛋白异常均可造成反定型困难；新生儿体内可存在母亲输送的血型抗体，且自身血型抗体效价又低，因而出生6个月以内的婴儿不宜做反定型。老年人血清中抗体水平大幅度下降或被检者血清中缺乏抗A及（或）抗B抗体，可引起假阴性或血型鉴定错误。（四）交叉配血法最重要的是AB0血型配合。必须在AB0血型

13、相同，且交叉配血无凝集时才能输血。1.目的：检查受血者与供血者是否存在血型抗原与抗体不合的情况。2.原则：主侧加受血者血清与供血者红细胞；次侧加受血者红细胞与供血者血清，观察两者是否出现凝集。3.方法（1）盐水配血法：简便快速。主要缺点是只能检出不相配合的完全抗体，而不能检出不完全抗体。（2）抗球蛋白法配血法：又称Coombs试验。是最可靠的确定不完全抗体的方法，但操作繁琐。抗球蛋白法配血法是最早用于检查不完全抗体的方法。直接抗球蛋白法可检查受检者红细胞是否已被不完全抗体致敏；间接抗球蛋白法可用于鉴定Rh血型及血清中是否存在不完全抗体。本法虽较灵敏，但也有一定限度，且操作复杂，不利于急诊检查和

14、血库的大批量工作。试剂：抗球蛋白试剂盒：包括抗广谱、抗C3、抗IgG 3种试剂。阳性对照：IgG型抗D致敏5%RhD阳性红细胞生理盐水悬液。阴性对照：正常人5%红细胞生理盐水悬液。注意事项：标本采集后应立即进行试验，延迟试验或中途停止可使抗体从细胞上丢失。抗人球蛋白血清应按说明书最适稀释度使用，否则可产生前带或后带现象而误为阴性结果。阴性对照凝集：可能是抗人球蛋白血清处理不当，仍有残存的种属抗体，或被细菌污染，应更换血清重做试验。核实阴性结果方法：在该试管中加1滴IgG致敏红细胞，如结果为阳性，则表示试管内的抗球蛋白血清未被消耗，阴性结果可靠。阳性对照不凝集：可能是抗人球蛋白血清或用于致敏红细

15、胞的不完全抗D血清失效，或红细胞未洗净带人球蛋白所致，应更换血清或洗净红细胞后重做。如需了解体内致敏红细胞的免疫球蛋白的类型，则可分别以抗IgG、抗IgM或抗C3单价抗球蛋白血清进行试验。（3）聚凝胺法配血法：可以检出IgM与IgG两种性质的抗体，能发现可引起溶血性输血反应的几乎所有规则与不规则抗体，故本法已逐渐推广使用。配血原理：聚凝胶分子是带有高价阳离子多聚季镀盐，溶解后带有很多正电荷可以中和红细胞表面负电荷，有利于红细胞凝集，低离子强度溶液也能减低红细胞的Zeta电位，可进一步增加抗原抗体间的吸引力。当血清中存在IgM或IgG类血型抗体时，与红细胞发生紧密结合，此时加入枸橼酸盐解聚液以消

16、除聚凝胶的正电荷，使IgM或IgG类血型抗体与红细胞产生凝集不会散开。如血清中不存在IgM或IgG类血型抗体，加入解聚液可使非特异性凝集消失。（4）凝胶配血法：又称微管（板）凝胶抗球蛋白试验，此法在凝胶中进行，保持了传统抗球蛋白试验的准确、具有简便、可靠的特点，全自动血型分析仪进行交叉配血，也是利用凝胶配血。其他可检出不完全抗体的方法有蛋白酶法、胶体介质法等。卡式配血血型鉴定检测法已成为国际安全输血检查的推荐方法。4.质量控制（1）血液标本：交叉配血的血液标本，受血者标本应为新鲜血，供血者标本应为血袋两端刚剪下小管中的血液。（2）选用方法：用试管法做交叉配血。（3）溶血现象：配血管出现溶血现象

17、，为配血不合。（五）AB0血型鉴定及交叉配血中常见错误1.分型血清方面的原因（1）自制分型血清抗体：效价太低、亲和力不强，造成定型不准确。（2）患者纤维蛋白原增高或为异常蛋白血症：如多发性骨髓瘤，巨球蛋白血症等，可产生缗线状假凝集。新生儿脐血中含有华顿胶或操作中使用了质量差的玻璃管（瓶），误认其脱下的胶状硅酸盐为串钱状凝集。（3）患者输入了高分子血浆代用品或静脉注射造影剂等药物：可引起红细胞聚集，易误认为凝集。（4）血清中可能存在的不规则抗体：如A2和A2B型患者血清内有抗A1抗体，能凝集A1红细胞。此外还有抗抗体等。有些癌症患者（如胃癌、胰腺癌等）血中含有大量可溶性A或B物质，这些物质可中和

18、抗血清的抗体，从而抑制反应。造成假性不凝集。克服的办法是红细胞先洗涤后再试验。（5）婴儿尚未产生自己的抗体或有从母亲获得的血型抗体：新生儿不宜用血清作反定型。（6）老年人血型抗体水平下降：某些免疫缺陷的人或慢性淋巴细胞白血病，遗传性无丙种球蛋白血症以及有些用了免疫抑制剂的患者，由于免疫球蛋白下降,血型抗体也下降甚至缺如。可出现反向定型错误。2.红细胞方面的原因（1）用近期内输过血的患者血液做对照红细胞：此时，患者血液红细胞为混合型细胞。（2）患者红细胞被大量抗体包被：例如某些自身免疫疾病或新生儿溶血病患者的红细胞，或红细胞悬浮于高浓度蛋白的介质中，红细胞都会自发地发生凝集。（3）红细胞膜有遗传

19、性或获得性异常。（4）抗原变异：A或B的弱抗原易判为不凝集（假阴性），而由细菌引起的获得性类B抗原易误判为阳性。有些细菌含有乙酰基酶，能使特异性A型物质末端的N-乙酰氨基半乳糖水解成半乳糖，从而使A型获得类B抗原后易误定为AB型。由于患白血病或某些恶性肿瘤使A或B抗原变弱。婴儿及老年人的红细胞抗原也较青壮年为弱。（5）血清中有高浓度血型物质：当用血清配制红细胞悬液时，血型物质则会中和分型血清中的抗体，而不再与红细胞抗原起反应。（6）红细胞被细菌污染：细菌的酶消化了红细胞表面的唾液酸，暴露了人人都有的T抗原，被具有抗T活性的IgM凝集。（7）嵌合体现象：混合细胞群见于异卵双生子。如，有98%型红

20、细胞，2%B型红细胞会定为型，但血清中只有抗A抗体。3.操作方面的原因：是最常见原因。（1）操作器材：玻璃器皿不洁或使用了严重污染的血清、红细胞，可出现假阳性。试管污染洗涤剂会造成假阴性。（2）红细胞与血清比例和离心：红细胞与血清比例不当、过度离心或离心不足可引起假阳性或假阴性。（3）溶血现象：误认为溶血现象为阴性结果。（4）试验温度：温度过高会造成假阴性。AB0血型系统的IgM抗体最适温度为422，如达37凝集力即下降。（5）信息记录差错：标本、试剂、标签、加样弄错，或出现记录错误。大批标本检查时搞错标本号，张冠李戴最易造成错误。（六）AB0血型系统主要临床意1.输血：是治疗与抢救生命的重要

21、措施。输血前必须检查血型，选择血型相同的供血者，进行交叉配血，结果完全相合才能输血。2.新生儿溶血病：母婴AB0血型不合引起的新生儿溶血病（常为第1胎溶血），主要依靠血型血清学检查作出诊断。3.器官移植：受者与供者必须AB0血型相符才能移植第二节红细胞Rh血型系统检查 本节考点：（1）Rh系统的命名（2）Rh的抗原与抗体（3）Rh系统血型鉴定（4）交叉配血法（5）质量控制（6）Rh血型系统临床意义Rh血型系统是红细胞血型中最复杂的系统，其临床的重要性仅次于AB0血型系统。（一）Rh系统的命名1.起源：1940年，Landsteiner和Wiener发现用恒河猴的红细胞免疫家兔所得抗血清能与约8

22、5%白种人红细胞发生凝集反应，认为这些人红细胞含有与恒河猴红细胞相同的抗原，即命名为Rh抗原。但Levine与Stetson却从一名新生儿溶血病胎儿的妇女血清中发现了与这种抗原反应的抗体。虽然，Landsteiner用动物血清鉴别的抗原和Levine用人抗体确定的抗原仍不完全相同，但因为Rh这个术语已普遍采用，故一直沿用至今。因此，把Landsteiner用动物血清鉴别的那种抗原命名为LW抗原。但目前，普遍用采自人体的血清抗体，而不用免疫动物得到的抗体。2.Rh系统的命名及遗传：有Fisher-Race、Wiener、Rosenfield 3种命名法。Fish- er-Race命名法又称CDE

23、命名法，这种学说认为Rh遗传基因位于第1号染色体的短臂上，Rh血型有3个紧密相连的基因位点，每一位点有一对等位基因（D和d，C和c、E和e），这3个基因是以一个复合体形式遗传。3个连锁基因可有8种基因组合，即CDe、cDE、cDe、CDE、Cde、cdE、cde和CdE，两条染色体上的8种基因组合可形成36种遗传型。Rh抗原命名为C、D、E、c、d、e，虽从未发现过d抗原及抗d活性，但仍保留 “d”，符号，以相对于D。因此，Rh抗原只有5种，有相应5种抗血清，可查出18种Rh表现型。临床上，习惯将有D抗原者称Rh阳性，而将虽有其他Rh抗原而无D抗原者称为Rh阴性。D阴性人中最常见的基因型为cd

24、ecde。（二）Rh的抗原与抗体1.Rh系统抗原Rh抗原：已发现40多种Rh抗原，与临床关系最密切的5种为D、E、C、c、e，这5种抗原中D的抗原性最强，对临床更为重要。DU（弱D）：为一组弱D抗原。尽管DU的抗原性较D为弱，但仍是Rh阳性细胞，所以将DU血输给Rh阴性受血者时，仍有引起产生抗D的可能性，因此应将DU型供血者做Rh阳性处理，而DU型受血者归入Rh阴性则较为安全。如果把DU血输给有抗D者，也可以产生严重的溶血性输血反应。-D-：-D-/-D-遗传基因型红细胞只有D抗原，而缺乏C、c、E、e抗原。此型能与抗D抗体在盐水中凝集。2.Rh系统抗体Rh抗体中，除偶尔可见天然的抗E、抗CW

25、抗体外，其余各种Rh抗原的抗体多系输血或妊娠时，由外来红细胞免疫刺激后产生。这些抗体均为IgG，但在免疫应答的早期，也可有IgM成分。D抗原是非AB0红细胞抗原中免疫性最强的抗原，可以引起抗D的产生，抗D与D红细胞产生严重的溶血反应。习惯将D阴性者认为是Rh阴性，多不再进行其他Rh抗原检测，除D抗原外，通常抗E和抗c比较多见。抗及抗其他Rh抗原的抗体偶尔也可引起迟发性溶血性输血反应或新生儿溶血病。（三）Rh系统血型鉴定红细胞Rh表型可用特殊的具有抗D、C、c、E和e抗血清检测来鉴定。虽然Rh血型系统中有许多种抗原，但常规只用抗D血清检查有无D抗原。当有特殊需要如家系调查、父权鉴定、配血不合等情

26、况时才需用抗C、抗c、抗E、抗e等标准血清做全部表型测定。Rh抗体属IgG，不能在盐水介质中与红细胞发生凝集，因此必须采用以下几种鉴定方法：1.低离子强度盐水试验: 可提高抗D抗体与D阳性红细胞结合率，并提高其灵敏度。2.酶介质法:木瓜酶或菠萝酶可以破坏红细胞表面的唾液酸，使红细胞膜失去电荷，缩小红细胞间的距离；同时酶还可以部分地改变红细胞表面结构，使某些隐蔽的抗原得以暴露，增强凝集性；且对IgG的作用大于IgM，故有利于检出不完全抗体。（1）试剂：IgG型抗D标准血清、1%木瓜酶（或菠萝蛋白酶）溶液、5%D阳性红细胞生理盐水悬液、5%D阴性红细胞生理盐水悬液。（2）注意事项：Rh血型系统的抗

27、体多由获得性免疫产生，血清中很少有天然抗体，故不需要做反定型。对照：酶易失活，故每次试验都要设置阳性对照。若阳性对照不出现凝集，表明酶或抗血清已经失效。酶活性过强出现假阳性结果，因而要设立阴性对照，以排除假阳性。只有在阳性对照管出现凝集而阴性对照管不凝集的情况下，才说明被检管的结果是可靠的。结果阴性：说明被检红细胞上无相应抗原，但由于DU抗原性弱，因此，如被检者无凝集，还应进一步检查以排除DU的可能。（四）交叉配血法Rh血型系统的交叉配血的原则与AB0血型系统的交叉配血相同。由于此系统的抗体为不完全抗体，故应选用酶介质法、抗球蛋白法或聚凝胺法等。（五）质量控制1.严格设定试剂和抗原阳性和阴性对

28、照系统。2.严格控制反应条件：试验介质、浓度、温度、离心、反应时间等条件。3.受检者红细胞必须洗涤干净，以免血清蛋白中和抗球蛋白，出现假阴性。（六）Rh血型系统临床意义抗Rh抗体主要通过输血或妊娠免疫而产生，较大量的Rh阳性（D抗原阳性）细胞进入Rh阴性者体内后，25个月内血浆中可测到抗体，如经再次免疫，3周内抗体浓度可达高峰。受血者或孕妇血浆中含有Rh抗体时，当再与含相应抗原血液相遇，将引起严重输血反应或新生儿溶血病（常为第2胎溶血）。因此Rh抗体具有十分重要的临床意义。第三节新生儿溶血病检查 本节考点：（1）新生儿溶血病的发病机制与临床表现（2）新生儿溶血病实验室检查及诊断依据（一）新生儿

29、溶血病的发病机制与临床表现1.发病机制新生儿溶血病（HDN）主要原因为母婴血型不合，孕母体内IgG类血型抗体通过胎盘进入胎儿体内，胎儿红细胞被母亲的同种抗体包被，这种抗体是针对胎儿红细胞上父源性的抗原。被包被的红细胞在分娩前后加速破坏，发生溶血，造成胎儿发生以溶血为主要损害的一种被动免疫性疾病。2.临床表现主要表现为：贫血：正常新生儿血红蛋白为180220gL，此时病儿的血红蛋白多低于l80gL，甚至低于120gL。高胆红素血症：由于溶血后产生大量胆红素，浓度可达255molL340molL，超过340molL可疑存在核黄疸，血清中未结合胆红素增高。患儿皮肤严重黄染。肝脾肿大：由于贫血使器官组

30、织缺氧，导致代偿性肝脾肿大。组织水肿。肌张力减低，各器官功能障碍等。本病的血型抗体以抗A，抗B，抗A、B，抗D等为多见，病情程度从重到轻依次为：抗D抗体、Rh系统其他抗体、AB0血型抗体。（二）新生儿溶血病实验室检查及诊断依据HDN的诊断除应注意产妇的妊娠史，分娩史、输血史及健在子女的血型和健康状况外，无论对诊断与治疗实验室诊断都是非常重要的。1.确诊患婴的依据（1）红细胞直接抗球蛋白试验阳性：从患儿红细胞上直接查到了被吸附的抗体，证明红细胞已经受累。本试验为直接证据。（2）从红细胞上释放了具有血型特异性的抗体：用热释放法检查AB0血型不合婴儿的红细胞是否释放了抗A，抗B，抗A、B抗体或AB0

31、血型系统以外的抗体。用乙醚释放法检查Rh血型不合的婴儿红细胞是否释放了抗D、抗C或抗E抗体。本试验也为直接证据。（3）血清中存在与患婴红细胞上抗原相对应的游离抗体。2.辅助诊断依据（1）高胆红素血症：出生时脐血胆红素超过85.8molL（50mgL），24h血清胆红素超过102.6molL（60mgL），且以未结合胆红素为主。（2）孕母血清内查到与胎儿红细胞不相合的完全抗体。3.产前试验如怀疑有HDN可能时，最好在产前开始检查，以期及早诊断及采取适当的预防与治疗措施。（1）血清学检查：首先要对孕妇做AB0血型系统及Rh系统的D抗原检查及不规则抗体筛选，所有筛选出阳性抗体都要区别是IgG或IgM，并应进一步做抗体鉴定分析，以确定是否会引起H