维生素B6片分析方法验证.docx

1、维生素B6片分析方法验证概述1.维生素B6片有关物质测定：照高效液相色谱法（通则0512）测定1.1色谱条件与系统适用性试验 用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以0.04%戊烷磺酸钠溶液（用冰醋酸调节 pH值至3.0 ）-甲醇 （85： 15）为流动相；检测波长为291 nm理论板数按维生素R峰计 算不低于4000。1.2测定法 取本品细粉适量，加流动相适量，振摇使维生素R溶解，用流动相制成每1ml中约含维生素R1mg的溶液，滤过，取 续滤液作为供试品溶液，精密量取 1ml,置100ml量瓶中，用流动相 稀释至刻度，摇匀，作为对照溶液。取对照溶液 10卩l注入液相色谱仪,精密量取供试品溶液与对照

2、溶液各10卩l，分别注入液相色谱仪， 记录色谱图至主成分峰保留时间的 3倍。1.3供试品溶液的色谱图中如有杂质峰，各杂质峰面积的和不得 大于对照溶液主峰面积（1.0%）。2.维生素B6片含量测定：照高效液相色谱法（通则 0512）测定。3.1色谱条件与系统适用性试验 用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以0.04%戊烷磺酸钠溶液（用冰醋酸调节 pH值至3.0 ）-甲醇 （85： 15）为流动相；检测波长为291 nm理论板数按维生素R峰计 算不低于4000。3.2测定法取本品30片，精密称定，研细，精密称取适量（约 相当于维生素Be 0.1g ）,置100ml量瓶中，加流动相适量，超声使维 生素B

3、6溶解，放冷，用流动相稀释至刻度，摇匀，滤过，精密量取续 滤液5ml，置50ml量瓶中，用流动相稀释至刻度，摇匀，作为供试 品溶液，精密量取10卩l注入液相色谱仪，记录色谱图；另取维生素 Be对照品，同法测定。按外标法以峰面积计算，即得。3.3本品含维生素B6计算，应为标示量的93.0%107.0%。4.工艺处方组成规格：10mg物料名称基准处方1000片维生素B610.0g 淀粉22.7g糊精27.0g硬脂酸镁0.3g乙醇（95%8.5g纯化水12.5g 丁合计60g5、仪器基本情况:设备名称高效液相色谱仪设备编号XXXXX型 号XXXXX出厂编号XXX出厂日期XXXXX安装位置XXXXXX

4、生产厂家XXXXX供货厂家XXXXXX6.相关术语：6.1准确度：系指采用该方法测定的结果与真实值或参考值接近的程 度。一般用回收率（%表示。回收率限度应在 98%- 102沱间。6.2精密度：系指在规定的条件下同一份均匀的供试品，经多次取样 测定所得结果之间的接近程度。精密度一般用偏差、标准偏差或相对 标准偏差表示。6.3线性:系指在设计的范围内，测定响应值与试样中被测物质浓度 呈比例关系的程度6.4范围：系指分析方法能达到一定精密度、准确度和线性要求时的 高低限浓度或量的区间。6.5检测限:系指试样中被测物能被检测出的最低量。6.6耐用性：系指在测定条件有小的变动时，测定结果不受影响的承

5、受程度。2.验证目的通过验证以确认所采用的方法适合于维生素 B6片的测定。根据样品特性制订检验方法和检验条件， 按制定的方法进行试验，根据验证结果判断是否符合验证标准。 若符合，按验证的方法和条件进行维生素B6片检查；若不符合，要进行原因调查分析，或是重 新进行试验。3.验证依据中国药典2015年版二部中国药典2015年版四部9101药品质量标准分析方法验证指导原则4.参考文件1、 验证管理规程2、 验证总计划3、 SIL-20A高效液相色谱仪操作维护保养规程4中国药典2015年版5、 变更控制规程6、 偏差控制规程5.验证职责6.验证步骤1.维生素B6片含量分析方法验证1.1系统适应性试验1

6、固定相：十八烷基硅烷键合硅胶色谱柱（G8）；2检测器：紫外检测器，检测波长 291 nm3流动相：0.04%戊烷磺酸钠溶液（用冰醋酸调节PH值至3.0）: 甲醇=85: 15。4流速：1.0mL/min。5柱温：35C6进样量：10卩L。照高效液相色谱法（通则0512）测定。1.1.1系统适用性试验溶液：取维生素 B对照品约25mg置25ml 容量瓶中加流动相使溶解并稀释至刻度，摇匀，精密量取续滤液5ml, 置50ml量瓶中，加流动相稀释至刻度，摇匀，作为系统适应性实验 溶液。1.1.2取系统适用性试验溶液10 L注入液相色谱仪。1.1.3判定标准：理论塔板数按维生素 B6峰计算不低于4000

7、。1.2维生素 B6 片含量分析方法线性验证1.2.1 溶液配制1.2.2流动相配制0.04%戊烷磺酸钠溶液（用冰醋酸调节 PH值至3.0 ）:甲醇=85:15。1.2.3处方量辅料配制精密称定淀粉约227mg、糊精约270mg硬脂酸镁约3mg混合。 此混合辅料约为10片维生素B6 （100mg所需的辅料共约500 mg。1.2.4样品溶液配制精密称定维生素B6对照品约50mg置50ml容量瓶中，加入处 方量混合辅料250mg加流动相适量振摇使维生素 B6溶解，继续振 摇数分钟，再加流动相稀释至刻度，摇匀,滤过, 精密量取续滤液 5ml， 置50ml量瓶中制成浓度为100 /ml的溶液。按 6

8、0%、 80%、 100%、 120%、 140%的倍数稀释， 精密量取 3ml、 4ml、 5ml、6ml、7ml分别置50ml容量瓶中，加流动相配置成浓度为60 /ml、 80g /ml 、 100g/ml 、 120g /ml 、 140g /ml 的溶液。1.2.5测定精密量取经微孔滤膜过滤后各不同浓度稀释液 10 l，注入液相色谱仪，每个样品进样 2次，记录色谱图。按外标法以峰面积计算。1.2.6判定标准：维生素B6在60血/ml至140血/ml的浓度范围内，维 生素B6峰面积成线性且相关系数R 99.8%。1.3维生素B6片含量分析方法精密度验证1.3.1流动相配制见维生素B6片含

9、量分析方法线性验证项下。1.3.2样品溶液配制取本品30片（XXXX）生产）,研细，精密称取样品适量（约相当 于维生素 B6 0.1g ），置 100ml 量瓶中，加流动相适量，超声使维生素 B6 溶解，放冷，用流动相稀释至刻度，摇匀滤过，精密量取续滤 液 5ml 置 50ml 量瓶中，用流动相稀释至刻度，摇匀，作为供试品溶 液。滤过制成 100g /ml 的溶液,取续滤液作为样品溶液。1.3.3测定精密量取10l注入液相色谱仪，记录色谱图，连续6次，得到维 生素B6峰面积，计算维生素B6峰的Srel。1.3.4判定标准：维生素 B6峰面积的Srel ,精密称定，置25ml容量瓶中加 流动相使

10、溶解并稀释至刻度，摇匀，精密量取续滤液5ml，置50ml量 瓶中，加流动相稀释至刻度，摇匀，作为对照品溶液。制成浓度为 100 /ml的溶液。按 80%、100%、120%的倍数稀释 , 精密量取续滤液 4ml、5ml、6ml， 分别置于50ml容量瓶中，加流动相配制成浓度为80血/ml、100 /ml、 120g /ml 的测试溶液。1.4.3 测定精密量取10 1注入液相色谱仪，记录色谱图，得到维生素 B6峰面积。通过线性方程计算维生素 B6 浓度。用测得浓度和实际浓度 之比计算回收率。144判定标准：回收率限度应在98%-102陆间，回收率的Srel 2.0%。1.5维生素B6片含量分析

11、方法范围验证1.5.1数据 记录及结果计算依据 1.2 线性， 1.3 精密度， 1.4 准确度，确定高效液相色谱法符合中国药典2015版维生素B6峰含量的范围一般为测定浓度的 范围。1.5.2判定标准：含量的范围一般为测定浓度的 80%? 120%。1.6维生素B6片含量分析方法专属性验证1.6.1流动相配制、溶剂I配制、处方量辅料配制见维生素 B6片含量分析方法线性验证项下。1.6.2 溶液配制1.6.2.1供试品溶液：取本品30片（XXXX）生产）,研细，精密 称取样品适量（约相当于维生素 B6 0.1g ），置 100ml 量瓶中，加流动相适量，超声使维生素 B6 溶解，放冷，用流动相

12、稀释至刻度，摇 匀滤过，精密量取续滤液 5ml 置 50ml 量瓶中，用流动相稀释至刻度， 摇匀，作为供试品溶液。滤过制成 100g /ml 的溶液,取续滤液作为样品溶液。1.6.2.2对照品溶液：取维生素 B6对照品（约25mg,精密称定， 置 25ml 容量瓶中加流动相使溶解并稀释至刻度 , 摇匀，精密量取续滤 液5ml，置50ml量瓶中，加流动相稀释至刻度，摇匀，作为对照品溶 液。制成浓度为 100g /ml 的溶液。1.6.2.3空白溶液：0.04%戊烷磺酸钠溶液（用冰醋酸调节 PH值 至 3.0）：甲醇=85： 15。1.6.2.4 阴性溶液：按照片剂配方， 加入处方量混合辅料 50

13、0mg， 置 100ml 量瓶中， 用流动相稀释至刻度，摇匀滤过，精密量取续滤液 5ml置50ml量瓶中，用流动相稀释至刻度，摇匀，作为供试品溶液。 用流动相稀释至刻度，继续振摇数分钟，再加流动相稀释至刻度，摇 匀, 滤过, 取续滤液，作为阴性溶液。1.6.3 测定精密量取经微孔滤膜过滤后的供试品溶液、 对照品溶液、 空白溶 液、阴性溶液各10卩l，注入液相色谱仪，每个样品进样 2次，记录 色谱图。164判定标准：维生素B6寸照品溶液与样品溶液主峰保留时间一致， 空白溶液与阴性溶液在主峰保留时间处应为平直基线，无吸收峰。1.7维生素B6片含量分析方法耐用性验证1.7.1改变流动相比例1.7.1

14、.1色谱条件1固定相：十八烷基硅烷键合硅胶色谱柱（ C18）；2检测器：紫外检测器，检测波长 291nm；3流动相：0.04%戊烷磺酸钠溶液（用冰醋酸调节PH值至3.0 ）: 甲醇 =80： 20。4流 速： 1.0mL/min。5柱温：35C6进样量：10卩L。照高效液相色谱法（通则 0512）测定。1.7.1.2系统适用性试验溶液：取维生素 B对照品（约25mg,精密 称定，置 25ml 容量瓶中加流动相使溶解并稀释至刻度 , 摇匀，精密量 取续滤液5ml，置50ml量瓶中，加流动相稀释至刻度，摇匀，作为系 统适应性实验溶液。1.7.1.3取系统适用性试验溶液10 L注入液相色谱仪。1.7

15、.2 改变柱温1.7.2.1 色谱条件1固定相：十八烷基硅烷键合硅胶色谱柱（ C18）；2检测器：紫外检测器，检测波长 291nm；3流动相：0.04%戊烷磺酸钠溶液（用冰醋酸调节PH直至3.0 ）: 甲醇 =80： 20。4流 速： 1.0mL/min。5柱温：40C6进样量：10卩L。照高效液相色谱法（通则 0512）测定。1.722系统适用性试验溶液：取维生素 B对照品（约25mg,精密 称定，置 25ml 容量瓶中加流动相使溶解并稀释至刻度 , 摇匀，精密量 取续滤液5ml，置50ml量瓶中，加流动相稀释至刻度，摇匀，作为系 统适应性实验溶液。1.723取系统适用性试验溶液10 L注入

16、液相色谱仪。1.7.3判定标准：在改变流动相柱温比例后，通过系统适用性试验 , 理论塔板数按维生素 B6 峰计算不低于 4000。2.维生素 B6 片有关物质分析方法验证2.1系统适用性实验2.1.1色谱条件1固定相：十八烷基硅烷键合硅胶色谱柱（ C18）；2检测器：紫外检测器，检测波长 291nm；3流动相：0.04%戊烷磺酸钠溶液（用冰醋酸调节PH值至3.0 ）: 甲醇=85：15。4流 速： 1.0mL/min。5柱温：35C6进样量：10卩L。2.1.2测定方法 按高效液相色谱法（通则 0512）测定。2.1.3 溶液配制系统适用性试验溶液：取维生素 B对照品（约25mg，精密称定，置

17、 25ml 容量瓶中加流动相使溶解并稀释至刻度 , 摇匀，精密量取 续滤液5ml，置50ml量瓶中，加流动相稀释至刻度，摇匀，作为系统 适应性实验溶液。2.1.4取系统适用性试验溶液10 L注入液相色谱仪。2.1.5 系统适应性试验取系统适用性实验溶液 20ul 注入液相色谱仪，记录色谱图。 2.1.6判定标准：理论塔板数按维生素 B6峰计算不低于4000。2.2维生素B6片有关物质分析方法专属性验证2.2.1 溶液配制A.处方量辅料：精密称定淀粉约 22.7mg、糊精约27mg硬脂酸镁约0.3mg。混合。B.供试品溶液：精密称取本品细粉适量（约相当于维生素 B 10mg , 置10ml量瓶中

18、，加流动相溶解并稀释制成每1ml中约含维生素B6 1mg 的溶液，滤过，取续滤液，作为供试品溶液。C.空白溶液：取已配制的全部处方量辅料，置 10ml量瓶中，加流动 相充分振摇匀，加流动相稀释至刻度 , 摇匀,滤过, 取续滤液，作为储 备液。2.2.2 测定 按高效液相色谱法（通则 0512）测定。色谱条件同 2.1.1 。精密量取供试品溶液和储备液各 10卩l，注入液相色谱仪，记录 色谱图。223判定标准：维生素B6片在291 nm处有吸收峰出现，维生素 B6 片的处方量辅料无吸收峰出现，维生素 B6片的处方量辅料不干扰有 关物质的检查。2.3维生素B6片有关物质分析方法检测限验证2.3.1

19、溶液配制供试品溶液：取专属性验证项下供试品溶液适量，加流动相分别配置成 100 /ml、10 /ml、1 /ml、0.1 g/ml、0.01 血/ml 浓度的 溶液。2.3.2测定按高效液相色谱法（通则 0512）测定。色谱条件同 3.1.1 。 精密量取样品溶液 10l ，注入液相色谱仪，记录色谱图。2.3.3判定标准：当S/N3时为检测限。2.4维生素B6片有关物质分析方法耐用性验证（改变流动相比例）2.4.1溶液配制：系统适用性试验溶液：取维生素 Be对照品（约25mg ,精密称 定，置 25ml 容量瓶中加流动相使溶解并稀释至刻度 , 摇匀，精密量取 续滤液5ml，置50ml量瓶中，加

20、流动相稀释至刻度，摇匀，作为系统 适应性实验溶液。2.4.2色谱条件1固定相：十八烷基硅烷键合硅胶色谱柱（ C18）；2检测器：紫外检测器，检测波长 291nm；3流动相：0.04%戊烷磺酸钠溶液（用冰醋酸调节PH值至3.0 ）： 甲醇 =80： 20。4流 速： 1.0mL/min。5柱温：35C6进样量： 10 L。2.4.3测定按高效液相色谱法（通则 0512）测定。取系统适用性实验溶 液 10ul 注入液相色谱仪，记录色谱图。244判定标准：理论塔板数按维生素 B6峰计算不低于40002.5维生素B6片有关物质分析方法耐用性验证（改变 PH值）2.5.1溶液配制：系统适用性试验溶液：取

21、维生素 E3b对照品（约25mg，精密称 定，置25ml容量瓶中加流动相使溶解并稀释至刻度，摇匀，精密量取 续滤液5ml，置50ml量瓶中，加流动相稀释至刻度，摇匀，作为系统 适应性实验溶液。2.5.2色谱条件1固定相：十八烷基硅烷键合硅胶色谱柱（C18）；2检测器：紫外检测器，检测波长 291 nm3流动相：0.04%戊烷磺酸钠溶液（用冰醋酸调节PH值至3.5）： 甲醇=85： 15。4流速：1.0mL/min。5柱温：35C6进样量：10卩L。2.5.3测定按高效液相色谱法（通则 0512）测定。取系统适用性实验溶 液10ul注入液相色谱仪，记录色谱图。2.5.4判定标准：理论塔板数按维生素B6峰计算不低于4000。七、变更/偏差控制：1、 如验证过程中出现变更，则按变更控制程序进行。2、 如验证过程中出现偏差，则按偏差控制程序进行。3、 任何可接受的变更/调查/偏差和采取的措施，均应记载在下表中。4、 变更/调查/偏差纪录序号变更/偏差编号问题简述是否附报告处理日期填写人/日期： 复核人/日期：QA检查人/日期：所附的变更/调查/偏差修正报告和支持文件，应作为此文件的附录部分。八附件:序号附件名称填写人/日期： 复核人/日期：QA检查人/日期：九变更记载及原因修订号执行日期变更原因、依据及详细变更内容01XXXXXXXXX验证。