检验科产前诊断操作规程SOP文件.docx

1、检验科产前诊断操作规程SOP文件唐氏征产前筛查腾程孕期胎儿软件操作规程本文档提示医院从孕妇初次到医院抽血筛查直至最后孕妇妊娠结局，孕妇、检验科、产科涉及其它相关部门需要注意的一些步骤、过程以及其他注意事项。各医院可以结合自身流程融入这些步骤。一、孕妇告知书：在孕妇进行唐氏征产前筛查之前，医院有义务告知孕妇“什么是筛查”，“产前筛查是做什么的”“筛查报告的结果和意义”，需要提到存在假阳性和假阴性的可能。在孕妇知情并签字同意后才能进行筛查。告知书的内容可以参考另一文档。通常情况下，孕妇告知书可以和孕妇资料收集同时进行。需要注意的是孕中期唐氏筛查的最佳时间是孕15周0天到18周0天，本软件可以筛查的

2、孕周时间是14周0天到21周6天。由于唐氏筛查是为随后可能需要的诊断测试服务，而目前很多地方做产前诊断需要排很长时间的队，这很可能耽误后续措施实施的最佳时间。医院可以根据这个情况，适当缩短可以筛查的时间范围，并在孕妇告知书里注明这个原因。二、孕妇资料收集：知情书经孕妇本人签字后，孕妇还需如实提供一些筛查必须数据，并提供一些筛查相关数据。筛查必须数据包括：姓名、出生日期、末次月经信息、B超信息、体重、糖尿病史、人种、吸烟史。相关数据包括夫妇的遗传病史和孕妇的孕产史。其中筛查必须数据一定要准确录入唐氏软件，如果孕妇在唐筛之前还没有做过B超，医生可以建议孕妇在唐筛的同时做第一次B超。其它一些便于医院

3、统计的数据可以根据需要决定是否录入唐氏软件，包括住院号、门诊号、有效联络方式等，软件可以提供大部分信息导出的文件，可用Excel打开。另外，为了表明医院尽到告知义务，如果孕妇不原意做唐筛，最好也让她签字“不筛查”，医院也留一份底。三、检验申请单:医生开具检验申请单，并附上孕妇告知书和孕妇资料。四、采样:检验科医生根据检验申请单采集孕妇静脉全血样本，并在检验申请单中注明采样日期。采集全血样本不少于5ml。唐氏筛查的采血无需空腹，同时也不宜吃太刺激油腻的食物。根据对一些大型医院操作流程的观察，我们发现：1.如果是每天都做唐氏筛查样本，全血可在4冰箱内保存一天。2.如静置半小时到两小时后离心，分离吸

4、出血清后，血清可在4冰箱内保存6天。在吸去上样的血清后，还需要吸取1ml左右的血清保存于-70冰箱，具体保存时间根据各地不同规范在1-3年之间。如果发现全血有肉眼可见脂肪或者溶血现象，请参照贝克曼试剂盒上相关操作处理。五、软件信息输入:操作医生需要在腾程孕期胎儿唐氏征产前筛查软件中准确输入孕妇用于筛查的信息。六、满足仪器操作要求，保证仪器数据质量:用于测试的仪器必须满足仪器所有要求。贝克曼公司的免疫系列分析仪器必须严格按照贝克曼库尔特公司提出的仪器使用规章，仪器保养程序要求，保证仪器的良好性能。仪器性能的维护，详见设备装机时随机配备的仪器操作手册(详见仪器操作手册第8章)。同时必须严格按照(h

5、CG、uE3和AFP)三个项目的试剂说明书来使用试剂，并按照相关定标、质控要求，保证试剂的稳定性，从而确保检测结果的真实可靠。(详见仪器操作手册第六、第七章和试剂说明书)。这里特别需要指出的是质控的一些问题：目前国内没有关于唐氏筛查的统一质控规定，只有按照三个单项来操作。由于唐氏筛查风险计算的敏感性，需要执行较为严格的质控标准，CV值要控制在+/-5%。同时在开展唐氏筛查之前，要在一到两周时间内预先做高中低三个标准各20-30个的质控品来确定靶值，不能以质控品盒上的值作为靶值。需要注意的是，每次质控时，质控品从冰箱取出后放置于常温下的时间最好相当，保证质控结果的稳定。七、软件操作要求;仪器测试

6、结果可以直接传输到腾程孕期胎儿唐氏征产前筛查软件中并显示在“唐氏筛查”界面。当然也可以手动录入，通过综合计算唐氏征的影响因素后可得到该孕妇的唐氏风险度。软件的操作和使用必须严格按照用户手册使用。八、AFP、HCG、uE3三联检测的结果运算:正常孕妇和唐氏征儿孕妇三指标血液浓度的分布经过大样本调查，求得正常孕妇在孕中期(第1421周)各周的AFP，hCG和uE3的血清浓度。各孕妇的血液浓度测定结果会有所不同。若以该孕周正常孕妇的中位值为基准作分母，各孕妇实际测定值作分子，其比值-中位值的倍数(MultiplesofMedian，简称MoM)必然呈现关于1的两侧对称的正态分布。以MoM的对数值作横

7、坐标，以相应的频率(该浓度的孕妇例数)作纵坐标，即可绘制成一条分布曲线，即正常孕妇的相应分布曲线。计算MoM实际是将妊娠各周的三个指标运算进行了归一化。九、计算各指标测值的唐氏儿发生的似真率(Likelihoodratio，简称LR)孕妇的唐氏风险是由两部分组成，孕妇年龄风险和三个筛查指标得到拟真率。孕妇的每个测试结果都会除以该孕周的中位数，得到MoM值，然后在根据一些诸如体重、人种、是否多胎、是否糖尿病等因素进行矫正，(矫正也可理解为对中位数进行矫正然后再把测试结果除以矫正后的中位数，当然结果是一样的)得到的是矫正后的中位数。这三个矫正后的中位数就是带入统计分布中的数据，得到一个三个指标的拟

8、真率。拟真率的范围也在1的两边，例如一个很明显的唐氏高危指标指标AFP0.5MoM，hCG2.0MoM，uE30.5MoM，其三个指标的拟真率大约为27，乘以一个1/1000左右的年龄(对照前面年龄风险表格大约为29岁的年龄)，最终的怀有唐氏儿的风险在1/35左右，肯定是筛查高风险范围内。例如一个很明显的唐氏低危指标AFP1.0MoM，hCG1.0MoM，uE31.0MoM，其三个指标的拟真率大约为1/8，乘以一个1/250左右的年龄(对照前面年龄风险表格大约为37岁的年龄)，最终的怀有唐氏儿的风险在1/2000左右，肯定是筛查低风险范围内。十、筛查程序：十一、发报告前复核要求:报告单交付孕妇

9、前必须复核，建议复核内容包括测试结果和孕妇个人信息，如有问题及时纠正，完全正确后核对者签名。如果孕妇在拿到报告后对孕周有疑义，医生应该在和孕妇沟通的情况的同时，计算另一孕周的结果，最后发哪张报告由医生根据2个孕周的可信程度判定。若筛查结果为唐氏风险度高人群应及时召回，进行遗传咨询。十二、数据回访以及高风险度报告的处理:临床医生对唐氏和18三体高风险的孕妇必须建议羊水穿刺，开放性脊柱裂则通过后面的B超(彩超)做进一步的观察。医院需要对在本院做唐氏筛查的孕妇的最终妊娠结局进行跟踪，如果是本院羊水穿刺或出生的，则与产科沟通得到结果，如果去了别的医院，则希望通过电话回访的手段，得到结果。结果可以录入软

10、件，也可以单独记录真阳性和假阴性。由于目前唐氏筛查开展的医院比较广泛，而能够进行产前诊断的医院比较少，希望那些只能开展产前筛查的医院能有一家固定转诊的产前诊断中心，同时与诊断中心保持一定的联系和沟通。十三、假阴性情况的处理:假阴性情况极为少见，但并不代表不会发生。如果出现假阴性，医院首先要检查该孕妇筛查时，自身流程是否有问题。医院需要保留筛查过程中的文件包括告知书、孕妇信息采集、检验申请单、筛查结果、当次筛查的质控，保存的样本等。-70保存时间根据各地规范需超过该孕妇的婴儿出生时间1-3年。同时请把该样本的分析结果发送给软件供应商。以上十三项注意事项必须严格遵守，不遵守此操作规范的部门或个人将

11、承担所有后果及责任。贝克曼ACCESS2化学发光仪产筛项目操作规程一激活项目：对于新开展的项目，首先要“激活项目”：主屏幕F8设置F2测试把要激活的项目打勾退出二装载消耗品装载试剂：主屏幕F3消耗品F1装载试剂扫描试剂条码打开试剂仓盖后放入试剂盒F1完成卸载试剂：主屏幕F3消耗品F2卸载试剂打开试剂仓盖后取出试剂盒F1完成装载反应管：主屏幕F3消耗品F4装载RV管打开反应管仓盖放入整包的RV管关上黑色仓盖，往下压打开黑色仓盖，取出支架关上仓盖F1完成更换废物袋：主屏幕F3消耗品F6更换废物袋取出废物袋，换上新的袋子F1完成更换发光底物：主屏幕F3消耗品F5更换发光底物扫描底物的条码信息换上新的

12、试剂盒F1完成三定标定标液信息输入：主屏幕F5定标F5定标液设置F1添加定标液逐条扫描定标液条码F1完成定标步骤：主屏幕F1样本管理输入架子号F3测试请求F6请求定标选取所需定标液F1完成F1装载架子放入架子等待样本架扫描确认后，点击“运行”查看定标结果：主屏幕F5定标选取要查看的项目F2查看结果四样本编程单个样本编程：主屏幕F1样本管理输入架子号F3测试请求输入相应的标本号选取要做的项目F1装载样本架放入架子等待样本架扫描确认后，点击“运行”批量样本编程：主屏幕F1样本管理输入架子号F3测试请求输入相应的标本号选取要做的项目光标移到下一个位置F8更多选项F1启动批量生成自动生成样本ID号：主

13、屏幕F1样本管理输入架子号F3测试请求输入相应的标本号选取要做的项目光标移到下一个位置F8更多选项F2启动自动ID生成五、结果查询主屏幕F2结果查询六、清除标本机上架子清除：主屏幕F1样本管理选取需要取出的架子F6处理扫描完成后取出架子F1清除（F2不清除，仅移到机外）机外架子清除：主屏幕F1样本管理选取需要取出的架子F7清除七日清洗：主屏幕F1样本管理输入架子号F4保养请求选取“日清洁”F1完成按要求放入清洗液后，按F1装载样本架放入架子等待样本架扫描确认后，点击“运行”特殊清洗：主屏幕F1样本管理输入架子号F4保养请求选取“特殊清洁”F1完成按要求放入清洗液后，F1装载样本架放入架子等待样

14、本架确认后，点击“运行”系统检测：主屏幕F1样本管理输入架子号F4保养请求选取“系统检测”F1完成按要求放入检测液后，F1装载样本架放入架子等待样本架确认后，点击“运行”地贫血常规筛查检验标准操作规程（1）标本用EDTA-K20.2ul抗凝静脉血1ml。门诊血标本检测用SYSMEXXS-800I和SYSMEXXT-4000I，病房血标本检测用SYSMEXXE-2100I血球分析仪。（2）试剂及仪器SYSMEXXS-800I五分类血球分析仪及配套试剂，质控用SYSMEX原装全血质控品，SYSMEXXT-4000I五分类血分析仪及配套试剂，质控用SYSMEX原装全血质控品。SYSMEXXE-210

15、0I五分类血分析仪及配套试剂，质控用SYSMEX原装全血质控品。（3）操作1） 门诊：a) 收到血常规标本后，查看核对检验项目，姓名和条码号，立即编号。b) 血标本在XS-800I和XT-4000I上检测。c) 对于中间细胞比较多的应当手工涂片染色分类，对于血小板等图形不好或结果异常较大的应手工复查。d) 结果核对后，在半小时内报告。2） 病房：a) 采集血常规标本后，立即编号，试管加盖后放于专用试管架上放入仪器进样区域。b) 血标本在SYSMEXXE-2100I上机检测。c) 对于分类图形不好的结果应当手工涂片染色分类，对于血小板等结果图形不好或结果异常较大的应手工复查。（复查条件）结果核对

16、后，签发报告单。（4）结果分析1.地贫筛查阳性结果判断：MCV82fl，MCH27pg。2.地贫血常规筛查阳性，需要做血红蛋白电泳进一步确认。SYSMEXXT-4000i血液分析仪标准操作规程1.分析参数和方法学名称SysmexXT-4000i提供40项可报告参数的结果，各检测参数和方法见表1。表1.SysmexXT-4000i各检测参数和方法参数首字母缩写检测方法白细胞WBC流式细胞计数红细胞RBC鞘流DC检测方法血红蛋白HGBSLS血红蛋白检测法红细胞比积HCTRBC累积脉冲高度检测法平均红细胞体积MCV由RBC和HCT算出平均红细胞血红蛋白量MCH由RBC和HGB算出平均红细胞血红蛋白浓

17、度MCHC由HCT和HGB算出血小板PLT鞘流DC检测方法中性粒细胞百分比NEUT%流式细胞计数淋巴细胞百分比LYMPH%单核细胞百分比MONO%嗜酸性粒细胞百分比EO%嗜碱性粒细胞百分比BASO%中性粒细胞数NEUT#淋巴细胞数LYMPH#单核细胞数MONO#嗜酸性粒细胞数EO#嗜碱性粒细胞数BASO#红细胞分布宽度标准差RDW-SD根据红细胞直方图算出红细胞分布宽度变异系数RDW-CV根据红细胞直方图算出血小板分布宽度PDW根据血小板直方图算出平均血小板体积MPV根据血小板直方图和PLT算出大血小板比率P-LCR根据血小板直方图算出血小板压积PCT根据血小板直方图算出网织红细胞百分比RET

18、%流式细胞计数网织红细胞数RET#幼稚网织红细胞比率IRF低荧光强度网织红细胞比率LFR中荧光强度网织红细胞比率MFR高荧光强度网织红细胞比率HFR光学血小板计数PLT-O网织红细胞血红蛋白含量RETHe未成熟粒细胞百分比IG%未成熟粒细胞数IG#白细胞数体液WBCBF流式细胞计数红细胞数体液RBCBF单个核细胞比例体液MN单个核细胞数体液MN多个核细胞比例体液PMN单个核细胞数体液PMN2.试剂2.1稀释液（CELLPACK）2.2白细胞分类溶血素（STROMATOLYSER-4DL）2.3白细胞分类染液（STROMATOLYSER-4DS）2.4血红蛋白溶血素（SULFOLYSER）2.5

19、清洁剂（CELLCLEAN）2.6网织红细胞稀释液（RETSEARCH-Dilution）3.操作步骤开机：3.1按以下顺序打开电源：1)打印机，2)信息处理装置（IPU），3)主机（信息处理装置程序的登录屏幕出现以后）。3.2开启信息处理装置（IPU）。3.2.1WindowsVista（操作系统）启动。以“XT”用户自动登录到WindowsVista系统。3.2.2显示XT-4000i应用程序登录对话框。3.2.3输入用户名及密码，然后点击“确定”。3.3主机电源打开后，按以下顺序执行操作：自检、主机控制程序下载、机械部件和液流部件初始化、流动池清洗、等待温度稳定和本底检查。本底检查通过后

20、即可进入检测。3.3.1开机后先做质控，质控通过后进行样本检测。3.3.2以进样架模式进行样本分析3.3.3确保仪器处于准备就绪状态。READYLED应点亮。3.3.4双击菜单屏幕上的“控制器”图标。显示控制器菜单。3.3.5双击控制器菜单上的“进样器标本号”图标，或点击工具栏的“进样器”按钮。3.3.7输入标本ID编号，或使用条码扫描自动读ID号。3.3.8核查第一个管架编号和标本管位置号。如果需要更改，点击需要更改的项目然后输入数值。3.3.9检查随选设置。如果需要更改设置，点击相应的“Discrete”进行设置。3.4将标本管放入标本架，然后将标本架放在进样器右侧的架槽中。可以一次性装载

21、多达5个标本架3.41在进样器中放置标本架后，点击进样器标本编号对话框中的“启动进样器”核查管架编号/试管位置确认对话框中的管架编号和试管位置号。然后点击“确定”当所有的标本管已移至进样器左侧的架槽时，READYLED点亮。将标本架放置于进样器右侧架槽的分析通道的最右侧的位置。按START（启动）开关开始分析。3.5标本检测：为了验证手动与自动模式，每日随机取2份新鲜血标本进行close与open模式结果比对，以close为靶值（close-open）/close来计算偏移（CV%）符合比对要求，以上检测通过后进行病人3.6样本检测。操作中注意个人安全，如标本需打开盖子，应戴好防护镜口罩或在有

22、机玻璃挡板后打开。3.7每日保养：正常开机、压缩机防逆流瓶液体检查、背景检测通过、温度报警、工作时间（h）、使用情况、关机正常记录在XT-4000i使用维护记录。3.8关机程序：双击菜单屏幕上的“控制器”图标。显示控制器菜单。双击控制器菜单的“关机”图标。显示关机对话框。将CELLCLEAN放在手动取样针上；然后在该状态按START（启动）开关。READYLED闪烁，并且蜂鸣器发出响声，表示正在吸入中。此时，不可移开CELLCLEAN容器。当READYLED熄灭，并且蜂鸣声停止时，取出CELLCLEAN。开始执行主机关机程序。主机关机程序结束后，关机对话框关闭，关机对话框中将出现“请关闭仪器电

23、源”信息。3.9月保养或需要时进行的维护（根据操作说明书部分由维护工程师完成）3.9.1清洗标本旋转阀。3.9.2清洗手动冲洗杯。3.9.3清洗标本旋转阀托盘。3.9.4清洗穿刺进样器托盘3.9.5清洗RBC检测器孔。3.9.6去除光检测器盒中流动池内的空泡。3.9.7清洗光检测器盒中的流动池。4.质控4.1质控品：Sysmex（高、中、低值3个水平）储存条件：28（每日须复核一次冰箱温度）。使用期限：质控开瓶后20天。4.2质控频率：每天开机后在标本检测前进行一次质控品的分析（每种质控品均做）。质控频度验证每年一次，由岗位操作员完成。4.3质控操作：从冰箱中取出质控品，使用前检查有效期及状况

24、（如极度溶血或失效，应及时更换）,在室温环境下（1830）静置25分钟。保持瓶子直立状态在双掌中轻轻滚动10次，将其颠倒再滚动10次，再将质控品上下颠倒10次混匀至红细胞完全混合，在质控模式下进行检测。4.4失控时应采取的措施：质控结果超出期望值时，需查找原因，检查质控品是否在有效期内，过期或近过期需更换新的质控品,检查试剂情况，是否需更换。再检查仪器的各项参数是否在控，如各项检查操作后质控仍失控则联系工程师，责任人需通知组长。与此同时联系急症病人相关医生，如为急诊标本及时送往门急诊化验室检测。直至质控通过，开始做标本。4.5每次失控必须分析原因，记录处理过程并签名。失控记录夹入指定的文件夹内

25、保存，保存期为二年。4.6更换批号后靶值设定：取开始20次QC结果，计算均值，为靶值，靶值应落在厂商提供的范围内，以累计6个月CV%均值（或近两个月CV%较大值），通过均值乘以CV%=1SD,质控范围设定为2.7SD。由组长或组长指定人员负责计算。定期打印质控曲线，曲线上注明使用质控品的批号和效期.所有室内质控打印及记录夹入指定的文件夹内保存，保存期为二年。西比亚毛细管血红蛋白电泳操作规程一 项目名称血红蛋白毛细管电泳（CAPILLARYSHEMOGLOUBIN(E)）二 检验方法名称流动液体毛细管高压液相电泳。三 方法学原理CAPILLARYS系统运用毛细管中液相电泳的原理，带电分子在具有特

26、殊PH值的碱性缓冲液中通过其电泳迁移率而被分离开，这个分离也要依赖于电解质的PH和电渗流。CAPILLARYS系统可同时进行7个标本的血红蛋白量化分析，标本的溶血稀释和注入通过在毛细管阳极末端吸入完成，接着在高电压下蛋白质进行分离，并在毛细管的阴极端于415nm吸光率下直接检测血红蛋白。四 方法学溯源自1930年由Tiselius发现了移界电泳（movingboundaryeectrophoresis），而后，这种技术的各种局限性已逐渐被区带电泳（zoneelecrrophoresis）所克服，CAPILLARYS系统已经发展到将该项技术完全自动化，并具有快速分离和良好的分辩性。目前该方法已被

27、大多数人认为是介于传统的区带电泳和液相色谱之间的技术方法。五 仪器5.1.型号：SEBIACAPILLARYS（PN1220或PN1222）5.2.分析和计算参数：5.2.1.处理量：80-100个样本/小时5.2.2. 所需样本量：100ul5.2.3. 检验时间：20分钟5.2.4. 重复性：有良好的重复性5.2.5. 电泳参数：电压3.59000V电流3.5200mA功率090W六 准备6.1.蒸馏水或去离子水在SEBIACAPILLARYS的全自动系统中进行毛细管电泳时冲洗毛细管用。建议在使用前先用0.45m的过滤器将蒸馏水或去离子水过滤一次。为了防止微生物的繁殖，请每天更换蒸馏水或去

28、离子水。如需要长期保存，可加入3.5l/dl的ProClin300。注意：当充填水罐时，建议先用大量的蒸馏水或去离子水冲洗罐。6.2.缓冲液（含碱性缓冲液PH9.4）若缓冲液是储藏在2至8，建议在使用前将试剂放置于室温下，一旦缓冲液瓶打开并安置在CAPILLARYS系统上时，缓冲液可保持稳定状态最多2个月。6.3.浓缩的冲洗液必须用蒸馏水或去离子水稀释成700ml。在做血红蛋白电泳之前和之后冲洗毛细管。6.4.分别将一个过滤器转动固定到缓冲液、冲洗液、蒸馏水或去离子水瓶的管子末端的连接器上，用蒸馏水或去离子水冲洗连接器和管子。使用过的过滤器必须用清水冲洗过后才能丢弃。七 样本的采集和保存7.1

29、.使用抗凝血的新鲜标本来进行分析，采血应按照临床实验检测要求进行。7.2.将红细胞在28下静置沉淀数小时或将血标本离心5000转/分，5分钟。7.3.小心尽可能地弃去血浆。不要使用覆盖在红细胞上厚度超过3mm血浆的标本，若试管中的血浆厚度超过3mm将会影响到分析结果。7.4.注意：标本置于冰箱内（28）可保存一周。若需要长时间保存，则依照以下程序在采集8小时内清洗红细胞，并将标本冷冻在-80环境中，可保持稳定最长3个月时间。具体程序：抗凝血离心5000转/分，5分钟，弃去血浆，用10倍体积的生理盐水洗涤红细胞两次（每次洗涤后均要离心处理），冰冻前去除红细胞上层多余的生理盐水并震荡混匀。血红蛋白

30、（Hb）在28下可发生降解反应。当在28下保存超过7天，在电泳图谱将会出现一个比HbA更阳极端的被称之为HbA3的额外片段，在靠近HbS带附近会出现一个微弱的片段，并且如果出现HbC，则在HbA2更阳极端可出现不会干扰到A2的一个片段。当保存超过10天，可在红细胞中观察到聚集的粘状物，在分析前必须弃去这些粘状物。八 操作步骤8.1.开机，启动CAPILLARYS仪器和电脑。8.2.启动“PHORESYS”软件，输入用户名和密码后，按确定（电脑自动向其加载和交换信息，并运行自检，初始化程序。）联机成功，进入待工作状态，显示“READY”。可开始电泳操作。8.3.在仪器提示，按其要求填写试剂有效期、代码（冲洗液的有关信息在70ml浓缩试剂瓶标签上可以查到），并调整图象中液位高度。CAPILLARYS系统具有试剂自动监控功能，当需要更换某种试剂时，系统将有信息提示。更换试剂时要注意罐和接口的色码相符。请仔细阅读CAPILLARYS仪器操作手册。8.4.选择好“HEMOGLOBIN(E)”分析程序，然后