PCR自测题.docx

1、PCR自测题PCR自测题一、名词解释1.PCR 2.变性3.退火4.延伸5.逆转录PCR6.停滞效应7.共享引物PCR8.多重PCR9.反向PCR10.原位PCR11.LCR二、单项选择题1PCR反响中，所设计引物的长度一般为 A510核苷酸 B. 1530核苷酸 C. 30个核苷酸C 引物设计时GC含量在引物中一般为4555D 按经历，引物自身存在的连续互补序列一般不超过3个碱基E 两个引物之间不应存在互补序列，尤其防止3端的互补重叠F 引物的3端可以游离而不影响PCR反响的进展6. 以下关于PCR的说法正确的选项是A PCR的模板可以是DNA也可以是RNAB PCR的模板必须从组织细胞中别

2、离出来C PCR反响的特异性取决于引物和模板DNA的结合位点。D PCR反响初期，目的DNA片断的增加呈指数扩增。E PCR反响一般需要含102105拷贝的模板7以下关于PCR反响条件错误的选项是B PCR缓冲液中参加二甲基亚砜有利于破坏模板的二级构造，提高反响的特异性。C Mg浓度过高会降低TaqDNA酶的活性，Mg浓度过低又会使酶催化非特异性扩增增强。D 4种dNTP应以等摩尔浓度配制，以减少错配误差。E 引物浓度一般为0.5-1umol/L8. PCR反响时应设立哪种对照A. 阴性对照B. 阳性对照C. 试剂对照D. 以上答案都正确9. 逆转录反响体系包括B. RNA模板，四种dNTPC

3、. RNA酶抑制剂D. 适宜的缓冲液体系E. 逆转录酶F. 寡聚胸腺嘧啶核苷酸引物10. 有关PCR的模板说法正确的选项是 ( )A. 模板可以是DNA也可以是RNAB. 大多数PCR反响中对DNA模板纯度要求不高C. 模板用量低D. 标本处理的根本要求是除去杂质11. 以下有关RT-PCR反响的说法你认为正确的有( )A. 反响体系一般有20l B. 反响体系中有缓冲液, 四种dNTP, MgCl2, DTT, 牛血清白蛋白, Oligo(dT)引物RNA模板和逆转录酶C. 逆转录于42进展,随后即进展PCRD. RT-PCR的最终反响过程依然是以DNA为模板的PCR反响12. PCR的产物

4、累积的特征是( )B. 反响初期,目的DNA片断呈指数扩增C. PCR进展到一定时间出现反响中的停滞效应D. 到达平台期的的PCR循环数取决于反响体系中酶的耗竭程度E. PCR平台期的出现多数不可防止F. 到达平台期时假设扩增目的DNA片断缺乏,可继续参加模板,酶和缓冲液进展PCR反响13. 有关Mg2+在PCR中的作用说法不正确的选项是( )A. Taq DNA 酶的活性维持需要Mg2+B. Taq DNA酶的活性与反响体系中的Mg2+总浓度有关C. Mg2+过低,酶催化非特异性扩增增加D. Mg2+过高会降低酶的活性E. 总量应低于dNTP的量, 常用1.5mmol/L14. PCR中使用

5、的底物dNTP应该是( )A. 使用前应将pH值调至7.0-7.5B. dNTP浓度高可以加快反响速度,但却增加了出错率C. 降低反响速度可以提高反响特异性D. PCR中, 4种 dNTP必须按一定比例配制E. Mg2+会与dNTP结合,应注意二者浓度之间的关系15. Taq DNA酶的特点是( )A. 75-80时具有最高的聚合酶活性B. 活性的维持需要Mg2+的参与C. Taq DNA酶和klenow片断一样具有校正功能D. Taq DNA酶的忠实性很高E. 具有类似末端转移酶的活性16. 有关引物的说法正确的选项是( )A. 引物浓度一般为0.1-1.5mol/LB. 引物与模板的的比至

6、少为108:1C. 引物浓度过高会引起错配和非特异扩增,降低扩增效率D. 引物Tm值位于55-80较理想17. PCR反响温度应该是( )A. 为使DNA变性完全,变性温度越高,时间越长越好B. 按模板DNA的复杂程度来调整变性温度和变性时间C. 于反响管中参加1-2d 石蜡油防止反响液的蒸发D. 温度越高时间越长, dNTP破坏增加,对PCR反响产生不利影响18.有关退火温度正确的选项是( )A. 引物与模板退火温度一般在45-55B. 退火温度过低,使非特异扩增增加C. 退火温度过高, PCR扩增含量下降D. 退火时间一般为1-2分钟E. Tm值的允许X围内,应该选择较低的退火温度19.延

7、伸温度应有如下特点( )A. 一般为72B. PCR延伸时间越长, 产物的得率越高C. Taq DNA酶在延伸温度时有较高的酶活性D. PCR延伸时间根据待扩增片断的长度而定20.PCR循环次数设定时应注意( )B. 应由最初靶分子浓度而定C. 理论上20-25个循环后, PCR产物累积达最大值D. PCR的循环次数一般为25-30次E. 循环次数过多时会引起停滞效应21.PCR样品制备时应注意( )B. 应有专门的区域制备模板C. 提取DNA样品和RNA样品时要带手套且经常更换D. 纯化样品对污染有极大的影响E. 普通分子克隆工具不能用做样品的处理和靶序列F. 提取核酸所用的试剂要求新鲜配制

8、或者适当储存未经使用的试剂.22.操作中应该注意( )A. 使用的溶液应该没有核酸,核酸酶B. 试剂水都是高质新鲜蒸馏水C. 工具(枪头,试管) 都是一次性并且高压灭菌D. 应有专门的操作区E. 试剂应该分装保存23. PCR反响总为阴性时应该( )A. 增加Taq DNA酶的浓度B. 增加靶DNA的量C. 增加扩增循环或者降低退火温度D. 提纯样品E. 取10l扩增液再行PCR24. PCR反响出现非特异产物时,应该采取的措施是( )A. 增加退火温度B. 降低Taq DNA酶浓度C. 减少退火及延伸时间D. 减少引物浓度E. 减少扩增循环次数25.PCR可以广泛应用于( )A. 遗传性疾病

9、的基因诊断B. 检测癌基因C. 检测病原微生物D. 法医鉴定E. DNA序列测定26.对RNA的体外扩增过程,描述正确的选项是( )A. 分为循环相和非循环相B. 也具有变性,复性,延伸三步C. 反响体系中含有dNTP和NTP两种类型的核苷酸D. 反响中含有两种特异性引物E. 待测RNA作为模板进入循环相27.RNA-PCR技术的特点为( )A. 扩增效率高B. 扩增时间短C. 特异性不强D. 需严防DNA的污染28.以下说法错误的选项是( )C. RNA-PCR中, 非循环反响与循环反响不处在同一反响体系D. RNA-PCR中,扩增产物以2的指数递增E. 反响温度一般为37-42, 时间一般

10、为30分钟到1小时F. RNA-PCR需采用25个循环到达需要量G. 依赖于逆转录酶, RnaseH和T7RNA聚合酶共同作用29. 利用PCR技术测序有以下哪几种方法( )A. 双链直接测序B. 基因扩增转录测序C. 不对称PCR产生单链测序D. 双链克隆后测序四、填空题1. PCR反响体系含有，。2. PCR反响的根本过程为 , ,3. 引物与模板的退火温度一般为，延伸温度一般为4. PCR循环次数一般设定为，过多的循环次数会导致的出现。5. ，可用于LCR产物的检测。6. 引物3端最正确碱基选择是和。7. PCR的标本处理的根本要求是8. PCR的反响体系一般选用。9. PCR反响的缓冲

11、液提供了PCR反响与常用的为10. PCR的反响体系中，Mg2的浓度一般保持在,常用的是11. TaqDNA聚合酶具有，缺乏因此无。12. 在变性过程中，为防止反响液的蒸发，可在反响管中参加13. PCR反响时应设立以下实验对照：, , .14. 定量PCR必须设立五、简答题1、简述PCR反响的根本步骤。2、简述PCR模板的种类及制备方法。3、简述PCR产物的积累规律。4、简述PCR的根本反响。5、简述PCR实验应注意的事项。6、简述连接酶链反响的根本原理。7、简述RNA体外扩增的特点。六、论述题1、试述PCR的根本原理及引物设计原那么。2、试述PCR技术的特点。3、试述PCR反响条件的优化。

12、4、试述PCR的主要类型及其工作原理。参考答案及题解一、名词解释1、PCR: 即聚合酶链式反响。在模板，引物，4种dNTP和耐热DNA聚合酶存在的条件下，特异性地扩增位于两段序列之间的DNA区段地酶促合成反响。2、变性：于PCR反响体系中，通过加热使温度至95左右，使DNA双螺旋的氢键断裂，形成单链DNA作为反响模板。3、退火： PCR反响中，经变性后将温度降至引物的TM值左右或以下，引物与DNA模板互补区域结合，形成杂交链的过程。4、延伸：当反响体系温度升至70左右时，TaqDNA聚合酶催化以引物为起始点的53延伸反响，形成新生DNA链。5、逆转录PCR：以mRNA为原始模板进展的PCR反响

13、。6、停滞效应：PCR中后期，随着目的DNA扩展产物逐渐积累，酶的催化反响趋于饱和，DNA扩增产物的增加减慢，进入相对稳定状态，即为停滞效应，又称平台期。7、共享引物PCR：利用3条引物扩增两种不同的DNA序列，其中一条引物与两种待扩增序列都互补，它与另两条引物分别组成两对PCR引物，此种PCR常用于细菌学鉴定，确定同一种属细菌的不同种类。8、多重PCR：在一次反响中参加多对引物，同时扩增一份DNA样品中不同序列的PCR过程。9、反向PCR：利用连接酶将一段未知序列两端连接成环状，利用单一限制酶原点切开序列，据序列的碱基顺序设计3端和5端引物扩增未知序列。10、原位PCR：以组织固定处理细胞内

14、的DNA或者RNA作为靶序列，进展PCR反响的过程，不必从组织细胞中别离模板DNA或RNA。11、LCR：连接酶链反响，又称连接酶扩增反响，是以DNA连接酶将某一DNA链的5磷酸与另一相邻链的3羟基连接为根底的循环反响, 特点是能准确分析基因序列中的单个碱基突变。二、单项选择题1、B PCR的引物设计长度一般为1530个核苷酸，过短影响PCR特异性而过长却会提高相应的退火温度，并使延伸温度TaqDNA聚合酶的最适温度，影响产物的生成2、C 含量过低，反响的特异性不高。但是含量太高又会使引物的Tm值升高，不利于PCR反响的进展3、D 引物的3端碱基是延伸的起点，必须与模板严格配对结合，但是5端的

15、的碱基可以游离，而不影响引导新生DNA链合成4、A5、C TaqDNA聚合酶活性与反响体系中的游离Mg2+浓度相关6、D LCR是以DNA连接酶将某一DNA链的5磷酸与另一相邻链的3羟基连接为根底的循环反响, 特点是能准确分析基因序列中的单个碱基突变7、A 原位PCR不必从组织细胞中别离模板DNA或RNA,经扩增后，大局部产物留在细胞内，再可以结合原位杂交或者PCR标记引物的显色技术而广泛应用于组织胚胎学和肿瘤学的研究8、C Tm4G+C2A+T9、B TaqDNA聚合酶缺乏35外切酶活性，因而没有校正功能10、C 锚定PCR首先通过别离细胞的总RNA或mRNA，逆转录生成cDNA，后在cDN

16、A3末段加上poly尾。再通过poly锚定引物和与cDNA特异配对的引物共同进展PCR扩增11、B 多重PCR可以扩增一份DNA样品中的不同序列，因此可以检测是否存在某些基因片段的缺失和突变。12、B PCR反响中，四种dNTP必须等摩尔浓度配制，以减少反响的错配率并提高使用效率。13、C Taq DNA聚合酶具有末端转移酶的功能, 能催化dNTP加到DNA的3-OH端, 但对dNTP的聚合能力不同, 对dATP的聚合能力高于其他三种核苷酸,故而PCR的产物末端总是带有两个A.14、D PCR扩增位于两个特异性引物之间的DNA片断, 扩增的特异性由引物特异性来决定. PCR反响本身符合酶促反响

17、动力学, 是一种酶促反响15、C Taq DNA聚合酶具有良好的热稳定性, 广泛应用于PCR反响.16、C PCR反响的特异性由引物的特异性决定, 它特异地扩增位于两个引物间的DNA片断.17、C LCR需要设计两对引物, ,采用DNA连接酶,将某一DNA链的5磷酸与另一链的3羟基连接.它并不具有PCR的高度敏感性.三、多项选择题1.A B 在Tm值允许的X围内，选择偏高的退火温度可以减少引物和模板的非特异性结合，提高PCR反响的特异性；退火时间一般选择30秒1分钟，足以使引物和模板结合完全2.A B C D 隔离不同的操作区, 分装试剂，减少重复取样所致的误差, 严格实验操作污染, 设立实验对照3.A B4.A B C D E5.B C DA PCR的引物设计长度一般为1530个核苷酸，过长会提高相应的退火温度，并使延伸温度TaqDNA聚合酶的最适温度，影响产物的生成。引物的3端碱基是延伸的起点，必须与模板严格配对结合6. A C D E 原位PCR无需从组织细胞中别离模板7.B DB Mg浓度过低会降低TaqDNA酶的活性，