1、常见缓冲液的配方.常用贮液与溶液 1mol/L 亚精胺( Spermidine ): 溶解 2.55g 亚精胺于足量的水中,使终体 积为10ml。分装成小份贮存于-20 Co1mol/L精胺(Spermine ):溶解3.48g精胺于足量的水中,使终体积为10ml。 分装成小份贮存于 -20Co10mol/L 乙酸胺( ammonium acetate ):将 77.1g 乙酸胺溶解于水中,加 水定容至1L后,用0.22um孔径的滤膜过滤除菌。10mg/ml牛血清蛋白(BSA):加100mg的牛血清蛋白(组分V或分子生物学试剂级,无 DNA 酶)于 9.5ml 水中(为减少变性, 须将蛋白加入
2、水中,而不是将水加入蛋白) ,盖好盖后,轻轻摇动,直至 牛血清蛋白完全溶解为止。 不要涡旋混合。加水定容到10ml,然后分装成小份贮存于 -20Co1mol/L二硫苏糖醇(DTT):在二硫苏糖醇5g的原装瓶中加32.4ml水, 分成小份贮存于-20 C。或转移100mg的二硫苏糖醇至微量离心管,加 0.65ml的水配制成1mol/L二硫苏糖醇溶液。8mol/L 乙酸钾( potassium acetate ):溶解 78.5g 乙酸钾于足量的水中, 加水定容到 100ml 。1mol/L氯化钾(KCI):溶解7.46g氯化钾于足量的水中,加水定容到100ml。 3mol/L 乙酸钠( sodi
3、um acetate ):溶解 40.8g 的三水乙酸钠于约 90ml 水 中,用冰乙酸调溶液的 pH至5.2,再加水定容到100ml o0.5mol/L EDTA:配制等摩尔的 Na2EDTA 和 NaOH 溶液(0.5mol/L ),混合 后形成EDTA的三钠盐。或称取186.1g的Na2EDTA?2H2O和20g的NaOH,并溶于水中,定容至 1L 1mol/L HEPES:将 23.8gHEPES 溶于约 90ml 的水中,用 NaOH 调 pH(6.8-8.2 ),然后用水定容至 100ml。1mol/L HCl :加 8.6ml 的浓盐酸至 91.4ml 的水中。25mg/ml I
4、PGT :溶解250mg的IPGT(异丙基硫代-p -D-半乳糖苷)于10ml 水中,分成小份贮存于-20 C。1mol/LMgCl2: 溶解 20.3g MgCl2 ?6H2O 于足量的水中,定容到 100ml 。100mmol/L PMSF :溶解174mg的PMSF (苯甲基磺酰氟)于足量的异丙醇中,定容到10ml。分成小份并用铝箔将装液管包裹或贮存于 -20 C。20mg/ml蛋白酶K (proteinase K):将200mg的蛋白酶L加入到9.5ml 水中,轻轻摇动,直至蛋白酶K完全溶解。不要涡旋混合。加水定容到10ml , 然后分装成小份贮存于 -20C。10mg/mlRnase
5、 (无 DNase) (DNase free RNase):溶解 10mg 的胰蛋白RNA酶于1ml的10mmol/L的乙酸钠水溶液中(pH 5.0 )。溶解后于水浴中煮沸15min,使DNA酶失活。用1mol/L的Tris HCl调pH至7.5,于-20 C贮存。(配制过程中要戴手套)5mol/L氯化钠(NaCI):溶解29.2g氯化钠于足量的水中,定容至 100ml。10N氢氧化钠(NaOH):溶解400g氢氧化钠颗粒于约0.9L水的烧杯中(磁 力搅拌器搅拌) ,氢氧化钠完全溶解后用水定容至 1L。10 %SDS (十二烷基硫酸钠):称取100gSDS慢慢转移到约含0.9L的水的 烧杯中,
6、用磁力搅拌器搅拌直至完全溶解。用水定容至 1L。2mol/L 山梨(糖)醇( Sorbitol ):溶解 36.4g 山梨(糖)醇于足量水中使 终体积为 100ml 。100 %三氯乙酸(TCA):在装有500gTCA的试剂瓶中加入100ml水,用磁力搅拌器搅拌直至完全溶解。 (稀释液应在临用前配制)2.5 % X gal ( 5-溴-4-氯-3-吲哚(3 -半乳糖苷):溶解25mg的X gal于1ml的二甲基甲酰胺(DMF),用铝箔包裹装液管,贮存于-20 C。100 x Denhardt 试剂(Denhardts regent )成分及终浓度 配制 100ml 溶液各成分的用量2%聚蔗糖(
7、 Ficoll, 400 型)2% 聚乙烯吡咯烷酮( PVP-40)2%BSA (组分 V)水 2g2g2g加水至总体积为 100ml依照上表称取各组分,溶于水中定容。过滤除菌及杂质,分装成小份于-20 C贮存。10 x标准DNA连接酶缓冲液(standard DNA ligase buffer )(粘端、平端连接)成分及终浓度 配制 10ml 溶液各成分的用量0.5mol/L Tris-HCl100mmol/L MgCl2100mmol/L DTT 2mmol/L ATP5mmol/L 盐酸亚精胺(可选)0.5mg/ml BSA (组分 V)(可选)水 5ml 1mol/L 贮液1ml 1m
8、ol/L 贮液1ml 1mol/L 贮液200ul 100 mmol/L 贮液50ul 1 mmol/L 贮液0.5ml 10 mg/mL 贮液2.25ml将配制好的缓冲液分装成小份,贮存于 -20 C。100 mmol/L dNTP 溶液( dNTP solutions )可以购买到100mmol/L纯dNTPs贮液,-80 C可贮存至少6个月。10mmol/L dNTP 混合液成分及终浓度 配制 20ul 溶液各成分的用量10mmol/L dATP10mmol/L dCTP10mmol/L dGTP10mmol/L dTTP水 2ul 100 mmol/L dATP 贮液2ul 100 m
9、mol/L dCTP 贮液2ul 100 mmol/L dGTP 贮液2ul 100 mmol/L dTTP 贮液12ul20 PEG 8000/2.5M NaCl成分及终浓度 配制 10ml 溶液各成分的用量质量浓度为 20聚乙二醇2.5mol/L 氯化钠水 20g50ml 5 mol/L 氯化钠 或 14.6g 固体氯化钠补足 100ml加聚乙二醇于含有氯化钠的烧杯中,加水至终体积 100ml ,用磁力搅拌器搅拌溶解。20 XSSC成分及终浓度 配制 1L 溶液各成分的用量300mmol/L 柠檬酸三钠(二水)3mol/L 氯化钠水 88.2g175.3g补足 1L溶解柠檬酸三钠(二水)和
10、氯化钠于约 0.9L 水中,加几滴 10N NaOH 溶 液调 pH 为 7.0,用水补足体积至 1L。DEPC (焦碳酸二乙酯)处理水加100ul DEPC于100ml水中,使 DEPC的体积分数为 0.1 %。在37 C温浴至少12h,然后在15 psi条件下高压灭菌20min,以使残余的DEPC 失活。DEPC会与胺起反应,不可用 DEPC处理Tris缓冲液。甲酰胺( deionized formamide )直接购买或加 Dowex XG8 混合树脂于装有甲酰胺的玻璃烧杯中,用磁力搅拌器轻轻搅拌1h,可去除甲酰胺中的离子。经 Whatman 1号滤纸过滤 除去树脂后分成小份,充氮气于-
11、80 C贮存(防止氧化)。磷酸缓冲液( phosphate buffer )按照下表所给定的体积, 混合 1 mol/L 的磷酸二氢钠(单碱) 和 1mol/L 磷 酸氢二钠(双碱)贮液,获得所需 pH 的磷酸缓冲液。配制 1 mol/L 的磷 酸二氢钠(NaH2PO4?H2O)贮液:溶解 138g于足量水中,使终体积为 1L;1mol/L 磷酸氢二钠(Na2HPO4)贮液:溶解142g于足量水中使终体积 为 1L。1mol/L 磷酸二氢钠( ml) 1mol/L 磷酸氢二钠( ml) 最终 pH 值8778508151236.068562556551045039033028015018522
12、52653153754354905506106707206.16.26.3 6.46.56.66.76.86.97.07.17.2TE (用于悬浮和贮存 DNA)成分及终浓度 配制 100ml 溶液各成分的用量10mmol/L Tris HCl1mmol/L EDTA水 1ml 1mol/L Tris-HCI (pH7.4-8.0 , 25 C)200ul 0.5 mol/L EDTA (pH 8.0 )98.8mlTris 缓冲液( Tris-HCl buffer )将121g的Tris碱溶解于约0.9L水中,再根据所要求的 pH (25 C下)加一定量的浓盐酸( 11.6N) ,用水调整终
13、体积至 1L。浓盐酸的体积( ml) pH 8.614 2128.53846566671.376 9.08.88.68.48.28.07.87.67.47.2二.电泳缓冲液、染料和凝胶加样液电泳缓冲液50 X Tris-乙酸(TAE)缓冲液成分及终浓度 配制 1L 溶液各成分的用量2mol/L Tris 碱1mol/L 乙酸100 mmol/L EDTA水 242g57.1 ml 的冰乙酸( 17.4 mol/L )200ml 的 0.5 mol/L EDTA ( pH 8.0 )补足 1L5X Tris-硼酸(TBE)缓冲液成分及终浓度 配制 1L 溶液各成分的用量445 mmol/L Tr
14、is 碱445 mmol/L 硼酸盐10 mmol/L EDTA水 54g27.5g 硼酸20 ml 的 0.5 mol/L EDTA (pH 8.0)补足 1L染料1溴酚蓝( bromophenol blue )加 1g 水溶性钠型溴酚蓝于 100ml 水中,搅拌或涡旋混合直到完全溶解1二甲苯青 FF( xylene cyanole FF )溶解1g二甲苯青FF于足量水中,定容到100ml。10mg/ml 的溴化乙锭( ethidium bromide )小心称取 1g 溴化乙锭,转移到广口瓶中,加 100ml 水,用磁力搅拌器搅拌直到完全溶解。用铝箔包裹装液管,于 4 C贮存。凝胶上样液(
15、 gel loading solutions )6 X碱性凝胶上样液(室温贮存)成分及终浓度 配制 10ml 溶液各成分用量0.3 N 氢氧化钠6 mmol/L EDTA18 聚蔗糖( 400 型)0.15 溴甲酚绿0.25 二甲苯青 FF水 300ul 10N 氢氧化钠120ul 0.5mol/L EDTA ( pH8.0 )1.8g15mg25mg补足到 10ml6 X聚蔗糖凝胶上样液(室温贮存)成分及终浓度 配制 10ml 溶液各成分用量0.15 溴酚蓝0.15 二甲苯青 FF5 mmol/L EDTA 15 聚蔗糖( 400 型)水 1.5ml 1 溴酚蓝1.5ml 1 二甲苯青 FF100ul 0.5mol/L EDTA ( pH8.0 )1.5g补足到 10ml6X溴酚
copyright@ 2008-2022 冰豆网网站版权所有
经营许可证编号:鄂ICP备2022015515号-1