常见缓冲液的配方.docx

1、常见缓冲液的配方.常用贮液与溶液 1mol/L 亚精胺( Spermidine ): 溶解 2.55g 亚精胺于足量的水中，使终体 积为10ml。分装成小份贮存于-20 Co1mol/L精胺(Spermine ):溶解3.48g精胺于足量的水中，使终体积为10ml。 分装成小份贮存于 -20Co10mol/L 乙酸胺( ammonium acetate ):将 77.1g 乙酸胺溶解于水中，加 水定容至1L后，用0.22um孔径的滤膜过滤除菌。10mg/ml牛血清蛋白(BSA):加100mg的牛血清蛋白(组分V或分子生物学试剂级，无 DNA 酶)于 9.5ml 水中(为减少变性， 须将蛋白加入

2、水中，而不是将水加入蛋白) ，盖好盖后，轻轻摇动，直至 牛血清蛋白完全溶解为止。 不要涡旋混合。加水定容到10ml，然后分装成小份贮存于 -20Co1mol/L二硫苏糖醇(DTT):在二硫苏糖醇5g的原装瓶中加32.4ml水， 分成小份贮存于-20 C。或转移100mg的二硫苏糖醇至微量离心管，加 0.65ml的水配制成1mol/L二硫苏糖醇溶液。8mol/L 乙酸钾( potassium acetate )：溶解 78.5g 乙酸钾于足量的水中， 加水定容到 100ml 。1mol/L氯化钾(KCI):溶解7.46g氯化钾于足量的水中，加水定容到100ml。 3mol/L 乙酸钠( sodi

3、um acetate )：溶解 40.8g 的三水乙酸钠于约 90ml 水 中，用冰乙酸调溶液的 pH至5.2，再加水定容到100ml o0.5mol/L EDTA:配制等摩尔的 Na2EDTA 和 NaOH 溶液(0.5mol/L )，混合 后形成EDTA的三钠盐。或称取186.1g的Na2EDTA?2H2O和20g的NaOH，并溶于水中，定容至 1L 1mol/L HEPES:将 23.8gHEPES 溶于约 90ml 的水中，用 NaOH 调 pH（6.8-8.2 ），然后用水定容至 100ml。1mol/L HCl :加 8.6ml 的浓盐酸至 91.4ml 的水中。25mg/ml I

4、PGT :溶解250mg的IPGT（异丙基硫代-p -D-半乳糖苷）于10ml 水中，分成小份贮存于-20 C。1mol/LMgCl2: 溶解 20.3g MgCl2 ?6H2O 于足量的水中，定容到 100ml 。100mmol/L PMSF :溶解174mg的PMSF （苯甲基磺酰氟）于足量的异丙醇中，定容到10ml。分成小份并用铝箔将装液管包裹或贮存于 -20 C。20mg/ml蛋白酶K （proteinase K）:将200mg的蛋白酶L加入到9.5ml 水中，轻轻摇动，直至蛋白酶K完全溶解。不要涡旋混合。加水定容到10ml , 然后分装成小份贮存于 -20C。10mg/mlRnase

5、 （无 DNase） （DNase free RNase）:溶解 10mg 的胰蛋白RNA酶于1ml的10mmol/L的乙酸钠水溶液中（pH 5.0 ）。溶解后于水浴中煮沸15min，使DNA酶失活。用1mol/L的Tris HCl调pH至7.5，于-20 C贮存。（配制过程中要戴手套）5mol/L氯化钠（NaCI）:溶解29.2g氯化钠于足量的水中，定容至 100ml。10N氢氧化钠（NaOH）:溶解400g氢氧化钠颗粒于约0.9L水的烧杯中（磁 力搅拌器搅拌） ，氢氧化钠完全溶解后用水定容至 1L。10 %SDS （十二烷基硫酸钠）：称取100gSDS慢慢转移到约含0.9L的水的 烧杯中，

6、用磁力搅拌器搅拌直至完全溶解。用水定容至 1L。2mol/L 山梨（糖）醇（ Sorbitol ）：溶解 36.4g 山梨（糖）醇于足量水中使 终体积为 100ml 。100 %三氯乙酸（TCA）:在装有500gTCA的试剂瓶中加入100ml水，用磁力搅拌器搅拌直至完全溶解。 （稀释液应在临用前配制）2.5 % X gal （ 5-溴-4-氯-3-吲哚（3 -半乳糖苷）：溶解25mg的X gal于1ml的二甲基甲酰胺（DMF）,用铝箔包裹装液管，贮存于-20 C。100 x Denhardt 试剂（Denhardts regent ）成分及终浓度 配制 100ml 溶液各成分的用量2%聚蔗糖（

7、 Ficoll， 400 型）2% 聚乙烯吡咯烷酮（ PVP-40）2%BSA （组分 V）水 2g2g2g加水至总体积为 100ml依照上表称取各组分，溶于水中定容。过滤除菌及杂质，分装成小份于-20 C贮存。10 x标准DNA连接酶缓冲液（standard DNA ligase buffer ）（粘端、平端连接）成分及终浓度 配制 10ml 溶液各成分的用量0.5mol/L Tris-HCl100mmol/L MgCl2100mmol/L DTT 2mmol/L ATP5mmol/L 盐酸亚精胺（可选）0.5mg/ml BSA （组分 V）（可选）水 5ml 1mol/L 贮液1ml 1m

8、ol/L 贮液1ml 1mol/L 贮液200ul 100 mmol/L 贮液50ul 1 mmol/L 贮液0.5ml 10 mg/mL 贮液2.25ml将配制好的缓冲液分装成小份，贮存于 -20 C。100 mmol/L dNTP 溶液（ dNTP solutions ）可以购买到100mmol/L纯dNTPs贮液，-80 C可贮存至少6个月。10mmol/L dNTP 混合液成分及终浓度 配制 20ul 溶液各成分的用量10mmol/L dATP10mmol/L dCTP10mmol/L dGTP10mmol/L dTTP水 2ul 100 mmol/L dATP 贮液2ul 100 m

9、mol/L dCTP 贮液2ul 100 mmol/L dGTP 贮液2ul 100 mmol/L dTTP 贮液12ul20 PEG 8000/2.5M NaCl成分及终浓度 配制 10ml 溶液各成分的用量质量浓度为 20聚乙二醇2.5mol/L 氯化钠水 20g50ml 5 mol/L 氯化钠 或 14.6g 固体氯化钠补足 100ml加聚乙二醇于含有氯化钠的烧杯中，加水至终体积 100ml ，用磁力搅拌器搅拌溶解。20 XSSC成分及终浓度 配制 1L 溶液各成分的用量300mmol/L 柠檬酸三钠（二水）3mol/L 氯化钠水 88.2g175.3g补足 1L溶解柠檬酸三钠（二水）和

10、氯化钠于约 0.9L 水中，加几滴 10N NaOH 溶 液调 pH 为 7.0，用水补足体积至 1L。DEPC （焦碳酸二乙酯）处理水加100ul DEPC于100ml水中，使 DEPC的体积分数为 0.1 %。在37 C温浴至少12h，然后在15 psi条件下高压灭菌20min，以使残余的DEPC 失活。DEPC会与胺起反应，不可用 DEPC处理Tris缓冲液。甲酰胺（ deionized formamide ）直接购买或加 Dowex XG8 混合树脂于装有甲酰胺的玻璃烧杯中，用磁力搅拌器轻轻搅拌1h，可去除甲酰胺中的离子。经 Whatman 1号滤纸过滤 除去树脂后分成小份，充氮气于-

11、80 C贮存（防止氧化）。磷酸缓冲液（ phosphate buffer ）按照下表所给定的体积， 混合 1 mol/L 的磷酸二氢钠（单碱） 和 1mol/L 磷 酸氢二钠（双碱）贮液，获得所需 pH 的磷酸缓冲液。配制 1 mol/L 的磷 酸二氢钠（NaH2PO4?H2O）贮液：溶解 138g于足量水中，使终体积为 1L;1mol/L 磷酸氢二钠（Na2HPO4）贮液:溶解142g于足量水中使终体积 为 1L。1mol/L 磷酸二氢钠（ ml） 1mol/L 磷酸氢二钠（ ml） 最终 pH 值8778508151236.068562556551045039033028015018522

12、52653153754354905506106707206.16.26.3 6.46.56.66.76.86.97.07.17.2TE (用于悬浮和贮存 DNA)成分及终浓度 配制 100ml 溶液各成分的用量10mmol/L Tris HCl1mmol/L EDTA水 1ml 1mol/L Tris-HCI (pH7.4-8.0 , 25 C)200ul 0.5 mol/L EDTA (pH 8.0 )98.8mlTris 缓冲液( Tris-HCl buffer )将121g的Tris碱溶解于约0.9L水中，再根据所要求的 pH (25 C下)加一定量的浓盐酸( 11.6N) ，用水调整终

13、体积至 1L。浓盐酸的体积( ml) pH 8.614 2128.53846566671.376 9.08.88.68.48.28.07.87.67.47.2二.电泳缓冲液、染料和凝胶加样液电泳缓冲液50 X Tris-乙酸（TAE）缓冲液成分及终浓度 配制 1L 溶液各成分的用量2mol/L Tris 碱1mol/L 乙酸100 mmol/L EDTA水 242g57.1 ml 的冰乙酸( 17.4 mol/L )200ml 的 0.5 mol/L EDTA ( pH 8.0 )补足 1L5X Tris-硼酸(TBE)缓冲液成分及终浓度 配制 1L 溶液各成分的用量445 mmol/L Tr

14、is 碱445 mmol/L 硼酸盐10 mmol/L EDTA水 54g27.5g 硼酸20 ml 的 0.5 mol/L EDTA (pH 8.0)补足 1L染料1溴酚蓝( bromophenol blue )加 1g 水溶性钠型溴酚蓝于 100ml 水中，搅拌或涡旋混合直到完全溶解1二甲苯青 FF( xylene cyanole FF )溶解1g二甲苯青FF于足量水中，定容到100ml。10mg/ml 的溴化乙锭( ethidium bromide )小心称取 1g 溴化乙锭，转移到广口瓶中，加 100ml 水，用磁力搅拌器搅拌直到完全溶解。用铝箔包裹装液管，于 4 C贮存。凝胶上样液（

15、 gel loading solutions ）6 X碱性凝胶上样液（室温贮存）成分及终浓度 配制 10ml 溶液各成分用量0.3 N 氢氧化钠6 mmol/L EDTA18 聚蔗糖（ 400 型）0.15 溴甲酚绿0.25 二甲苯青 FF水 300ul 10N 氢氧化钠120ul 0.5mol/L EDTA （ pH8.0 ）1.8g15mg25mg补足到 10ml6 X聚蔗糖凝胶上样液（室温贮存）成分及终浓度 配制 10ml 溶液各成分用量0.15 溴酚蓝0.15 二甲苯青 FF5 mmol/L EDTA 15 聚蔗糖（ 400 型）水 1.5ml 1 溴酚蓝1.5ml 1 二甲苯青 FF100ul 0.5mol/L EDTA （ pH8.0 ）1.5g补足到 10ml6X溴酚