最新高效液相色谱仪确认方案汇编.docx

1、最新高效液相色谱仪确认方案汇编一、指导思想：(一)教学重点(3)三角形的外心的性质:三角形外心到三顶点的距离相等.七、学困生辅导和转化措施圆内接四边形的性质: 圆内接四边形的对角互补;增减性：若a0，当x时，y随x的增大而增大。(二)空间与图形（2）经过三点作圆要分两种情况:锐角A的正弦、余弦和正切都是A的三角函数当锐角A变化时，相应的正弦、余弦和正切之也随之变化。8 4.164.22 有趣的图形1 整理复习2高效液相色谱仪（岛津LC2010AHT）确认方案（方案编号：zl-08-2013）1. 确认方案审批表2.概述3.确认目的4.确认范围5.人员职责6.相关文件7.仪器、仪表校验8.确认计

2、划与进度9. 确认步骤9.1运行确认（OQ）9.2性能确认（PQ）10.偏差处理记录11. 确认结果评定与结论12.再确认项目及检查周期13.确认人员培训14.附件1.确认方案审批起草起草部门姓名日期 年 月 日年 月 日年 月 日审核审核部门姓名日期年 月 日年 月 日年 月 日年 月 日年 月 日批准批准部门姓名日期年 月 日年 月 日2.概述2.1设备基本信息 设备名称：高效液相色谱仪 设备型号：LC-2010AHT 国别：日本 厂名：岛津2.2设备系统描述设备结构：LC-2010AHT是主要由4液低压梯度、自动进样器、柱温箱、UV检测部组成的一体型高效液相色谱仪，外接RID-10A型示

3、差检测器、打印机和稳压电源，各部分的操作均可由工作站或液晶控制面板控制。 工作原理：LC-2010AHT检测步骤主要包括流路清洗、色谱柱平衡及检测器平衡、样品处理、自动进样程序设定、自动进样、后处理及数据处理等，LC-2010AHT根据不同色谱柱对样品在色谱柱内的保留时间不同，用流动相将样品通过色谱柱洗脱，再通过适合的检测器对洗脱的样品成份进行分析。 设备用途：低分子量肝素钙及立迈青、小牛血去蛋白提取物及睿保特、干扰素原液、肝素钠和部分原辅料等相关项目的定性、定量分析检验。2.3设备技术参数2.3.1输液泵方式设定输液泵参数时，请参照以下参数表：ISO.方式：参数名称内容设定范围步进初始值备注

4、Method画面FLOW流量0-5.000（ml/min）0.0010参数画面P.MAX压力上限值1.0-37.8（Mpa）0.19.810-385（kgf/cm2）1100142-5477（Psi）1142210-378（bar）198P.MIN压力下限值0-34.3（Mpa）0.100-350（kgf/cm2）10.00-4979（Psi）100-343（bar）10PORT使用的流动相通道的选择1-4111：流动相通道A2：流动相通道B3：流动相通道C4：流动相通道DDEGAS脱气装置ON/OFF控制0.11O:OFFI:ONGRAD.方式参数名称内容设定范围步进初始值备注Method画

5、面FLOW流量0-5.000（ml/min）0.001100A.CONCA液浓度（%）0-100.0（%）0.1100A.CONC不能在Tim Program上使用B.CONCB液浓度（%）0-100.0（%）0.1100C.CONCC液浓度（%）0-100.0（%）0.1100D.CONCD液浓度（%）0-100.0（%）0.1100参数画面P.MAX压力上限值1.0-37.8（Mpa）0.19.810-385（kgf/cm2）1100142-5477（Psi）1142210-378（bar）198P.MIN压力下限值0-34.3（Mpa）0.100-350（kgf/cm2）10.00-49

6、79（Psi）100-343（bar）10B.CURVB液的梯度曲线-101010C.CURVC液的梯度曲线-101010D.CURVD液的梯度曲线-101010DEGAS脱气装置ON/OFF控制0.11O:OFFI:ON2.3.2柱温箱和外围设备设定柱温箱和外围设备的参数时，请参照以下的一览表：参数名称内容设定范围步进初始值备注Method画面OVENT柱温箱温度0（0为OFF）4-60140T.MAX柱温箱温度上限值5-65165EVENTEVENT1、2继电器输出的ON/OFF0、1、2、12100：EVENT1、2都为OFF1：仅EVENT1为ON2：仅EVENT2为ON12：EVEN

7、T1、2都为ONEVENT3EVENT3继电器输出的ON/OFF0.110仅限选择板设定时O:OFFI:ONEVENT4EVENT4继电器输出的ON/OFF0.110仅限选择板设定时O:OFFI:ONEVENT5EVENT5继电器输出的ON/OFF0.110仅限选择板设定时O:OFFI:ONSMPLE.C试样冷却器调温0.11仅限LC-2010CO:OFFI:ON2.3.3 UV-VIS检测器设定UV-VIS检测器的参数时，请参照以下的一览表：参数名称内容设定范围步进初始值备注Method画面WAVE波长1190-600（nm）1254注意：DUAL=1时，必须使用190WAVE、WAVE23

8、70或371WAVE、WAVE600。不能进行WAVE=190、WAVE2=600等设定参数画面WAVE2波长2190-600（nm）1254LAMP灯（ON/OFF）0、111O:OFFI:ONDUAL2波长方式的设定0、110O:SINGLEI:DUALAUXRNG1AUX量程116131:0.5（AU/V）2:1（AU/V）3:2（AU/V）4:4（AU/V）5:1.25（AU/V）6:2.5（AU/V）RESP响应110141:0.5（AU/V）2:1（AU/V）3:2（AU/V）4:4（AU/V）5:1.25（AU/V）6:2.5（AU/V）POL极性-1、1-1：-1：+SVLVL

9、溶剂再循环阀切换水平值010.00010.0000溶剂再循环阀硬连接时显示。CELL.T池调温设定0、1、210：OFF1:LOW(40)2:HIGH(50)3.确认目的为确认LC-2010AHT高效液相色谱仪检测数据准确可靠，性能稳定，特制订本确认方案，对LC-2010AHT高效液相色谱仪进行确认。4.确认范围本方案适用于LC-2010AHT高效液相色谱仪的运行和性能确认。5.人员职责成员人员职责验证专员负责对现场监控，协助编制验证方案、验证报告，对验证结果进行收集并交验证小组编写验证报告；监督验证过程按验证方案执行QC人员负责确认用对照品、样品及其它消耗性备品的准备，负责备品、备件的保存，

10、负责设备仪器的操作，负责记录各种测试结果。负责收集各项确认、试验记录， 负责起草仪器使用、维护保养的标准操作规程。QC经理负责组织确认方案和确认报告的起草，方案经批准后组织实施培训，对确认结果进行分析评价。QA经理负责验证方案和报告的审核，负责对验证过程实施监督，负责对偏差作出处理意见质量部经理审核批准确认方案、报告，对确认偏差进行分析并审核批准解决方案。对最终确认结果进行评价。 验证小组审核、批准确认方案，确认报告。为编写方案的人员提供指南，为执行方案提供时间表。包括：必须人员的大概数量，所要求的时间长度，如何进行分析等。审阅和检验必要的标准操作程序。评估所有的测试结果，对确认偏差进行分析及

11、提出解决方案，并组织施。6.相关文件中国药典2010年版二部中华人民共和国国家计量检定规程液相色谱仪（JJG705-2002）高效液相色谱法标准操作规程高效液相色谱仪使用维护规程高效液相色谱柱使用维护规程注射用低分子量肝素钙标准操作规程岛津LC-2010AHT高效液相色谱仪操作说明书文件检查记录见附件一7. 仪器、仪表校验 验证前对验证过程中涉及到的仪器仪表等检验仪器进行确认，保证其在有效期内。仪器、仪表校验见附件二8. 确认计划与进度运行确认（OQ）：从 2013 年 02月 01日到2013年02 月28日性能确认（PQ）：从 2013 年 04月 01日到2013 年04 月30日9.

12、确认步骤9.1运行确认：9.1.1 准备： 用0.22m滤膜滤过纯化水500ml。 将管路滤头都放在已过滤的纯化水中，查看废液收集瓶有是否有足够容量。 查看电源是否通电。 仪器网络、管路是否联接好。9.1.2 开机确认： 自检：打开HPLC电源开关，仪器进入自检程序，自检通过标明仪器的各部件正常。 紫外检测器与工作站联接：打开计算机，当仪器自检通过后，打开LCsolution工作站，打开紫外通道，仪器会发出一声“滴”响声，工作站界面显示绿色Ready字样，表明工作站与主机联接正常。 示差检测器与工作站联接：打开示差检测器及连接器，打开工作站示差通道，工作站界面显示绿色Ready字样时，表明示差

13、检测器与工作站联接正常。 打印机与工作站联接：打开工作站中任意一份数据，添加到报告模板中，点击打印，查看打印机是否能正常打印数据报告。 紫外工作站对仪器的控制：点击排气、清洗程序按钮，查看仪器是否能按照设定程序进行排气、清洗管路；点击柱温箱控制按钮，查看柱温箱温度显示是否能正常升温；点击泵控制按钮，查看泵是否能正常开启；点击基线归零按钮，查看基线是否能归零。 示差工作站对示差检测器的控制：点击检测池冲洗按钮【RID(检测器A)R.流速开/关】，查看示差检测器上冲洗灯（R flow）是否亮起；点击检测器平衡按钮【平衡RID(检测器A)】，查看工作站中基线是否出现平衡峰；点击检测器归零按钮【检测器

14、A零点】，查看工作站中基线是否能归零。9.1.3 Auto Validation9.1.3.1 确认项目： 波长准确性检查 D2灯能量检查 输液稳定性的检查 调温精确度的检查 吸光度的准确度的检查 UV-VIS检测器基线漂移的检查 UV-VIS检测器基线噪声的检查 压力极限的检查9.1.3.2仪器与设备：名称型号/规格编号是否在有效期内阻尼管/228-18871-91/9.1.3.3 测试条件：流动相：已过滤的纯化水检测器：紫外检测器，波长为250nm柱温：35 流速：1.0ml/min 9.1.5.4测试方法和步骤：将A、B、C、D流路放入纯化水中。 装入阻尼管。 选择输液方式（梯度洗脱），

15、设定流动相流速、紫外检查波长、柱温。 色谱柱、检测器平衡。 按液晶控制面板上VP键，显示VP/TOP界面。在VP/TOP界面上按F3VALID键，选择第3项，按Enter键，显示Auto Validation 界面。 按F1START键，Auto Validation开始，流路B开始清洗。 等待清洗结束，切换至下一界面，依次开始波长准确度检查、D2灯能量检查、输液稳定性的检查、调温精确度的检查、吸光度的准确度的检查、UV-VIS检测器基线漂移和噪声的检查、压力极限的检查。 结果检查：检查结束，输入界面右显示的各检查项目的编号（数字键），可显示检查结果。实验所需试药及试液制备记录见附件三Auto

16、 Validation记录见附件四高效液相色谱仪运行确认记录见附件五运行确认合格之后要填写阶段运行确认表见附件六9.2性能确认：考察仪器运行的可靠性、主要运行参数的稳定性和结果的重现性。9.2.1 流量准确度：9.2.1.1仪器与设备：秒表、阻尼管。9.2.1.2 测试条件：流动相：已过滤的纯化水柱温：35 9.2.1.3测试方法和步骤：分别设定流速为0.2ml/min，0.5ml/min，1.0ml/min等值进行校验，这些流速覆盖了实验室使用的流速范围。待流速稳定后，在流动相流出口处分别用已称定重量的称量瓶准确收集流动相，用秒表计时10分钟，不同流速各测量3次，称量完成后用天平称定称量瓶和

17、水的总重，计算得出流速是否准确。合格标准流量设定值(ml/min)0.20.51.0RSD （%）应小于3%3%2%9.2.1.4合格标准：流量准确度确认记录见附件七9.2.2 进样量准确度：9.2.2.1仪器与设备：1.5ml试样瓶（HPLC专用）、天平、1000l移液器。9.2.1.2 测试方法：使用装入试样（已过滤纯化水）的1.5ml试样瓶，测定进样量为50l的10次注入动作的注入前和注入后的重量，由重量差计算进样量准确度。9.2.1.3测试步骤： 在工作站上设定运行方法的运行时间为3分钟。 用移液器移取1000l已过滤纯化水，加入到1.5ml试样瓶中，用天平精密称定。 将试样瓶置于样品

18、架1（左侧）的1号位置上。 按液晶控制面板上VP键，显示VP/TOP界面；在VP/TOP界面上按F3VALID键，选择第2项，按Enter键，显示Performance Cheek 界面，输入数字10，按Enter键，显示Injection Vol界面。 输入称定的试样瓶+1ml水的重量数值，按Enter键；按F2EXIT，开始注入，切换至下一画面。 等待注入完毕，取出试样瓶，用天平精密称定剩余重量。 输入剩余重量数值；按F2EXIT，计算进样量准确度，显示是否合格的判定。9.2.1.4合格标准：2%以下。进样量准确度确认记录见附件八9.2.3 温度准确度：9.2.3.1仪器与设备：温度计、秒

19、表。9.2.3.2测试方法和步骤：将一经过校验的温度计放入柱温箱（水银头紧密接触加热块），分别设定柱温箱温度为30，35，40等值进行校验，这些温度覆盖了实验室使用的柱温范围。待测温仪指示温度稳定后，记录温度显示值，每隔10分钟测一次，每个温控点测定1小时，求出平均值。设定值与平均值之差为设定值误差T，6次测量值中最大值与最小值之差为控温稳定性误差Tc。9.2.3.3合格标准：可接受标准温度设定值 ()303540温度设定值误差 |T|2控温稳定性误差 TC 1温度准确度确认记录见附件九9.2.4 紫外检测器的基线漂移与噪声9.2.4.1仪器与设备：阻尼管。9.2.4.2测试条件： 流动相：已

20、过滤的纯化水 检测器：紫外检测器，波长为250nm柱温：35 流速：1.0ml/min 9.2.4.3 测试方法：在基线稳定后测定30分钟的基线漂移和5分钟的基线噪声。9.2.4.4 测试步骤： 将阻尼管安装好，将流动相装入。 按液晶控制面板上VP键，显示VP/TOP界面。在VP/TOP界面上按F3VALID键，选择第2项，按Enter键，显示Performance Cheek 界面。 输入数字9，按Enter键，显示Drift/Noise界面。 按F2EXIT，在流量1ml/min，温度40，波长250nm上调温开始，切换至下一画面。 等待基线达到稳定状态（约1小时），基线稳定时，切换至下一

21、画面。 开始自动测定漂移，测定30分钟的基线漂移后，切换至下一画面。 按F2EXIT时，漂移测定消除，开始噪声测定。 测定5分钟的基线噪声后，切换至下一画面。 按F2EXIT时，噪声测定消除，显示漂移/噪声的测定结果是否合格的判定。 按F4SAVE记录测试结果。9.2.4.4合格标准：测试项目可接受标准UV-VIS检测器基线噪声小于0.0210-3AUUV-VIS检测器基线漂移小于0.510-3AU/h紫外检测器的基线漂移与噪声确认记录见附件十9.2.5 示差折光检测器的基线漂移与噪声9.2.5.1仪器与设备：阻尼管。9.2.5.2测试条件： 流动相：已过滤的纯化水 检测器：示差折光检测器柱温

22、：35 流速：1.0ml/min9.2.5.3 测试方法：在基线稳定后测定30分钟的基线漂移和5分钟的基线噪声。9.2.5.4测试步骤：将阻尼管安装好，将流动相装入，开启泵，缓慢增加流动相流速至1.0ml/min。待系统平衡后，调整基线在图谱的中部位置，记录基线30分钟。以图谱显示的刻度值或灵敏度与积分仪的匹配关系，计算基线噪声和漂移值。基线噪声为峰峰噪声，选择最大的噪声做为基线噪声。计算方法：基线噪声图谱单位距离对应的RIU噪声峰峰间的垂直距离。漂移值为30分钟内噪声的最高值和最低值之间垂直距离L对应的RIU。计算方法：漂移值图谱单位距离对应的RIUL/0.5h。9.2.5.5合格标准： 测

23、试项目可接受标准基线噪声：510-7RIU基线漂移：510-6RIU/h示差折光检测器的基线漂移与噪声确认记录见附件十一9.2.6 梯度浓度准确度：9.2.6.1测试条件： 流动相：已过滤的纯化水 柱温：35 流速：1.0ml/min9.2.6.2 测试方法：因日常检测仅用二泵，另两泵用于清洗，因此仅检验二泵的流量比。将泵编号，分别为A、B、C、D，A、B泵用于实验，C、D泵用于清洗。测定20分钟内A、B泵按1：1的比例消耗已过滤纯化水的重量，计算RSD值。9.2.6.3测试步骤：设定A流动相和B流动相的比例为1：1，流速为1.0 ml/min。取两个100ml烧杯，标记编号A、B，分别装入约

24、60ml已过滤的纯化水，用天平称定总重量。将A、B泵头分别放入已称定重量的装有已过滤的纯化水的烧杯中，开启泵开关，并同时计时20分钟。20分钟后，关闭泵开关，分别称定剩余纯化水和烧杯的重量。计算RSD值。9.2.6.4合格标准：小于2%梯度浓度准确度确认记录见附件十二9.2.7 分析的重复性：9.2.7.1测试条件： 色谱柱：凝胶柱（型号：TSKgel-G2000SWXL） 流动相：2.84%硫酸钠溶液检测器：紫外检测器（234nm）；波长示差折光检测器柱温：35 流速：0.5ml/min9.2.7.2葡萄糖醛酸溶液（5mg/ml）制备：称取葡萄糖醛酸约10mg，加流动相2000l溶解，制成每

25、1ml约含5mg葡萄糖醛酸的溶液。 9.2.7.3 测试方法：分别用紫外和示差检测器来检测葡萄糖醛酸的紫外和示差的吸收值，通过紫外和示差峰的保留时间、峰面积和峰高的相对标准偏差来确认系统的重现性。9.2.7.4 测试步骤：按色谱条件，照高效液相色谱仪使用维护规程和注射用低分子量肝素钙标准操作规程操作，单次进样测定6次，记录紫外和示差的色谱图，计算各峰的保留时间、峰面积和峰高的相对标准偏差。9.2.7.5 合格标准：保留时间的相对标准偏差小于0.5%；峰面积的相对标准偏差小于1.0%；峰高度的相对标准偏差小于1.0%；分析的重复性确认记录见附件十三高效液相色谱仪性能确认记录见附件十四10.偏差处

26、理记录确认过程中如有偏差，应将发生的偏差记录在偏差处理记录中，并根据偏差处理记录修改验证或确认的方案，最终报告应包括偏差列表和对偏差的处理。偏差处理记录见附件十五11.确认结果评定与结论质量管理部负责收集各项确认、试验结果记录，起草确认报告，报验证委员会。验证委员会负责对确认结果进行综合评审，做出确认结论。确认结果分析及评价见附件十六12.再确认项目及检查周期质量管理部负责根据设备仪器情况，确定再确认项目及周期，报验证小组审核。再确认项目及检查周期见附件十七13.确认人员培训 在本方案经过批准后，本验证小组组长对该方案进行培训，以保证方案顺利实施，并做好培训记录。培训记录见附件十八14、附件附

27、件一：文件检查记录附件二：仪器、仪表校验附件三：实验所需试药及试液制备记录附件四：Auto Validation记录附件五：高效液相色谱仪运行确认记录附件六：阶段运行确认表附件七：流量准确度确认记录附件八：进样量准确度确认记录附件九：温度准确度确认记录附件十：紫外检测器的基线漂移与噪声确认记录附件十一：示差折光检测器的基线漂移与噪声确认记录附件十二：梯度浓度准确度确认记录附件十三：分析的重复性确认记录附件十四：高效液相色谱仪性能确认记录附件十五：偏差处理记录附件十六：确认结果分析及评价附件十七：再确认项目及检查周期附件十八：培训记录附件一：文件检查记录文件/资料名称文件编号存放地点文件确认结果高效液相色谱法标准操作规程SOP-ZL-t-T-56-V6.0质量部符合规定 不符合规定高效液相色谱仪使用维护规程SOP-SB-zl-59-V6.0质量部符合规定 不符合规定高效液相色谱柱使用维护规程SOP-ZL-t-T-91-V6.0质量部符合规定 不符合规定注射用低分子量肝素钙标准操作规程SOP-ZL-c-L-01-V6.6质量部符合规定 不符合规定检查人