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1、论文被动吸烟对小鼠抗氧化系统的影响第十三届科技创新论文题 目：被动吸烟对小鼠抗氧化系统的影响目录摘要： 31.前言 32.实验材料与方法 42.1材料 42.1.1实验材料 42.1.2实验仪器 52.1.3实验试剂 52.2实验方法 52.2.1材料处理 52.2.2 试剂的配制 52.2.3实验流程 63.实验结果与分析 83.1实验结果 83.2数据统计 93.3结果分析 104.参考文献 10附录 12被动吸烟对小鼠抗氧化系统的影响摘要： 目的研究被动吸烟对小鼠抗氧化系统的影响。方法以小鼠为研究对象，设置实验组和对照组，实验组被动吸入不同时长、不同剂量的卷烟燃烧的烟雾，对照组正常饲养，

2、后将小鼠杀死取血分别测定小鼠血液中超氧化物歧化酶(SOD)的含量及活力与邻苯三酚自氧化速率的线性关系。结论被动吸烟对小鼠抗氧化系统有不良影响。关键词 被动吸烟 小鼠 抗氧化系统 SOD酶 吸光值 邻苯三酚Abstract: Objective To explore the impact of passive smoking on the mice antioxidant system. Method This experiment mainly mice we used as the research model, the treatedl group and the control grou

3、p, were set up to investigate the impact of passive smoking on the mice antioxiant system. Different duration and doses of cigarette burning smoke were given into the treated group. the mice in both group then were killed and taken blood sample for SOD tests. Conclusion Passive smoking has harmful e

4、ffect on the antioxidant system of mice.Keywords passive smoking mice antioxidant system SOD enzyme absorption value pyrogallol1.前言目前国内外对被动吸烟的研究已经深入到较多的方面，如被动吸烟对大鼠肺组织、肺泡灌洗液、血清中NO 及 NOS 的影响1，被动吸烟对大鼠免疫功能及生长发育影响2等，得出大量 NO 可与超氧阴离子反应产生氧化亚硝基阴离子为强氧化剂造成多种疾病发生，从而引起呼吸系统炎症反应，破坏呼吸系统从而导致相应的疾病3-7, 证实被动吸烟可导致血脂升高,

5、严重者最终可能导致动脉粥样硬化,而血糖变化不明显, 可能短时间的被动吸烟还不能引起内分泌功能改变8；同时对抗氧化系统的分析也有些涉及，如人体内的抗氧化体系浅析9，丹参对老年难治性心力衰竭患者氧化_抗氧化系统的作用 实验表明自由基反应的重要产物过氧化脂质,会破坏细胞膜的结构和功能,并与蛋白质交联产生脂褐素(老年斑)或与胶原交联使皮肤出现皱纹等衰老表现10都说明人体内由微量元素参与的抗氧化体系在维护人类健康方面所起的重要作用；老年难治性心力衰竭患者的氧化/抗氧化系统严重失衡,丹参注射液通过消除氧自由基和脂质过氧化物、增强抗氧化物酶活性这一途径,能起到了缓解心力衰竭的作用11-12。但对“被动吸烟”

6、与小鼠“抗氧化系统”二者之间的系统的研究却很少见，又或者被动吸烟对其它动物抗氧化系统的影响的研究几乎没有。本项目的研究有助于人们了解被动吸烟对机体抗氧化系统的危害及其程度，为公共场所禁烟提供理论参考。 2.实验材料与方法2.1材料2.1.1实验材料A.实验专用昆明小鼠，体重（202）g，于南华大学实验动物中心购买。B.相思鸟牌过滤嘴香烟（焦油量11mg、烟气烟碱量0.9mg、烟气一氧化碳量13mg）。C.自制暗箱（24*12*12cm3，暗箱透气孔0.5*6.5cm2共4*3=12条）。2.1.2实验仪器721型紫外分光光度计、离心机、16支离心管、2把镊子、2把解剖刀、2把解剖剪 、8支试管

7、、500ml容量瓶1支、100ml容量瓶1支、20ml容量瓶1支、1ml移液管1根、5ml移液管1根、100ml量筒1支、20ml量筒1支、玻璃棒、胶头滴管、电子分析天平、棕色瓶、吸尔球。2.1.3实验试剂邻苯三酚、Tris、盐酸、重蒸水、NaOH 、PH试纸、酒精、柠檬酸钠。2.2实验方法2.2.1材料处理将买回来的昆明小鼠于适宜的条件下在实验室饲养两到三天，使其适应实验环境。期间观察小鼠是否出现异常，避免发病或感染。适应期结束后，正常小鼠将用于实验。2.2.2 试剂的配制Tris、NaOH、HCl、邻苯三酚a.PH=8.2浓度为50mmol/L的Tris- HCl用电子分析天平称取Tris

8、0.16g，于100ml烧杯中用重蒸水溶解至80ml，调节PH值为8.2，最后于容量瓶中定容至100ml。b.10mmol/L HCl量取36%的盐酸0.1ml定容至100ml。c.50mmol/L邻苯三酚称取邻苯三酚粉末0.126g，用10mmol/L HCl溶解，定容至20ml，于棕色瓶中避光保存。2.2.3实验流程前期准备a.将小鼠均分为两组：对照组和实验组。对照组分为三组（每组4只）；实验组同样分为三组（每组4只）：吸烟3天、吸烟6天和吸烟9天，实验组小鼠需每天用卷烟烟雾处理；其它情况均与对照组小鼠相同，对照组小鼠在正常情况下饲养。b.点烟在自制的暗箱中进行，可将小鼠放入相对封闭的纸盒

9、中，纸盒三面开孔，小孔规格为24*12*12cm3，香烟点燃插入孔中，点烟时，待一支香烟燃尽后再点第二支，以此类推，三组均为每天5支烟，但持续时间不同，吸烟3天组（组）持续点烟3天，吸烟6天组（组）持续点烟6天，吸烟9天组（组）持续点烟9天。于实验周期的3、6、9天分别取实验组和对照组小鼠血液进行SOD 等酶的测定。实验过程a.邻苯三酚自氧化速率的测定（见下表1），组别 HCl (ml) Tris-HCl (ml) 邻苯三酚（ml）对照组 0.02 2.98 实验组 0.01 2.98 0.01 表1 邻苯三酚自氧化速率测定，各试剂的用量如下：于325nm处比色，扫描时间为4min，实验组得到

10、的曲线即为邻苯三酚自氧化速率的标准曲线(见图1)。图1 邻苯三酚自氧化速率曲线b.血样采集将实验用到的器皿消毒，配制好抗凝剂，抗凝剂与血液以1：4的比例最为适宜。断头取血法将血液收集在加有抗凝剂的试管中，边摇动试管，后静置5min，在2500r/min的条件下离心8min，取上清液备用。c.实验记录被动吸烟各组小鼠血液中SOD酶活性与邻苯三酚自氧化速率的测定按表2进行，同样于325nm处比色，扫描时间为4min。表2 各实验小组所需的试剂用量组别 Tris-Hcl(ml) Hcl(ml) SOD(ml) 邻苯三酚（ml）对照组 2.98 0.01 0.01 2.98 0.01 0.01 2.9

11、8 0.01 0.01 2.98 0.01 0.01 d.统计学处理 实验的吸光度用平均值标准差(s)表示13，实验数据的处理方法采用方差分析统计学处理，t检验。3.实验结果与分析3.1实验结果由表3可见:每一实验组内，同一时间段的小鼠血液所测得的吸光度是基本一致的，而不同时间段所测得的吸光值是有一定变化的，且变化的随吸烟时长的不同而不同，说明实验的设计是符合要求的。表3 不同时长烟雾对吸光度（即SOD酶活性）的影响时间（s）测定值（组）平均值标准差均值的标准误xi1xi2xi3xi400.3490.350.3510.350.350000.0008160.000408300.3280.3290

12、.330.3310.329500.0012910.000645600.3060.3050.3050.3060.305500.0005770.000289900.2850.2830.2830.2840.283750.0009570.0004791200.2630.2610.2620.2620.262000.0008160.0004081500.2410.240.2410.240.240500.0005770.0002891800.220.2190.220.2210.220000.0008160.0004082100.210.2020.2050.2070.206000.0033670.001683

13、2400.2030.1960.1990.2010.199750.0029860.001493时间（s）测定值（组）平均值标准差均值的标准误xi1xi2xi3xi400.3650.3640.3660.3630.364500.0012910.000645300.3310.330.330.3310.330500.0005770.000289600.2960.2960.2970.2960.296250.0005000.000250900.2610.260.2610.260.260500.0005770.0002891200.2260.2260.2260.2250.225750.0005000.0002

14、501500.1920.1920.1910.1910.191500.0005770.0002891800.1580.1570.1580.1570.157500.0005770.0002892100.1510.150.1510.150.150500.0005770.0002892400.1390.140.1410.140.140000.0008160.000408时间（s）测定值（组）平均值标准差均值的标准误xi1xi2xi3xi400.3780.3770.3760.3780.377250.0009570.000479300.3280.3280.3290.3290.328500.0005770.

15、000289600.2770.2780.2790.280.278000.0008160.000408900.2320.2310.2310.2320.231500.0005770.0002891200.1810.180.1810.1810.180750.0005000.0002501500.1330.1340.1350.1360.134500.0012910.0006451800.1220.1230.1240.1230.123000.0008160.0004082100.1190.1180.1190.1190.118750.0005000.0002502400.1080.1060.1070.10

16、80.107250.0009570.000479根据各实验组的平均值，我们可以得到图2。图2 不同时长烟雾处理后的邻苯三酚氧化速率变化曲线3.2数据统计a.3天组（组）的小鼠血样与邻苯三酚发生反应的过程中，随着时间的变化，吸光值下降的最慢；6天组（组）的小鼠血样与邻苯三酚发生反应的过程中，随着时间的变化，吸光值下降的较快；9天组（组）的小鼠血样与邻苯三酚发生反应的过程中，随着时间的变化，吸光值下降的最快。b.比较、和邻苯三酚自氧化曲线可知：血液中确实含有SOD酶系，且SOD酶影响了邻苯三酚氧化的速率。3.3结果分析三组小鼠的血样与邻苯三酚发生反应，所得曲线的斜率逐渐增大，说明三组小鼠中SOD酶

17、的含量或活力不同，根据邻苯三酚自氧化法测定SOD酶含量和活力的原理不难得出：3天组的小鼠血液中SOD酶系的含量或活力是最大的，6天组次之，9天组小鼠的血液中SOD酶的含量或活力最小。被动吸入的卷烟烟雾中含有大量的自由基，会大大消耗血液中的抗氧化酶系（如SOD酶），这样就导致血液中SOD酶的含量减少；并且吸入的卷烟烟雾越多，SOD酶等就消耗的越多，含有SOD酶的血样与邻苯三酚发生反应时，吸光值随时间的变化就下降的越快。了解这一规律后，对我们在公共场所宣传禁烟可以提供一定的理论基础，还可以应用到人的医疗保健方面，尽可能的减少和避免慢性疾病的产生，延缓人体的衰老。同时，为今后在这方面的研究提供一定的

18、依据。4.参考文献1 张翊玲，张旭华.被动吸烟对大鼠肺组织、肺泡灌洗液、血清中NO及 NOS 的影响 J.广东医学,2011, 32(3):296-298.2 姜艳霞, 吕士杰, 王程,等. 被动吸烟对大鼠免疫功能及生长发育影响J. 中国公共卫生 ,2010, 26 (1):86-87.3 杨丹蕾，徐永健，张珍祥，等 吸烟大鼠一氧化氮合酶和一氧化氮的变化J 中国病理生理杂志，2003，19( 9) : 1185 11884 庞宝森, 王辰, 翁心植, 等.被动吸烟致大鼠肺损伤及其对细胞因子的影响 J. 中华预防医学杂志, 2000, 34( 2): 104- 105.5 黄旭梅，徐耕，金国栋，

19、等 吸烟者内皮型一氧化氮合酶基因G894T 多态性与冠心病的相关性研究J 全科医学临床与教育，2008，6( 3) : 207 2106 宁艳，贾崇奇，刘同涛，等 内皮型一氧化氮合酶基因与年龄、吸烟的交互作用J 中国公共卫生，2006，22( 2) : 188 1897 CHAN YEUNG M，DIMICH WARD H Respiratory health effectsof exposure to environmental tobacco smokeJ Respirology，2003，8( 2) : 131 1398 何耀, 姜斌, 万志恒, 等. 被动吸烟对不吸烟女性血脂和血液流变

20、学指标的影响 J. 中华流行病学杂志, 2007, 25( 12): 1167-1170.9 史宝忠. 人体内的抗氧化体系浅析 N. 晋东南师范专科学校学报,2002年4月第19卷第2期.10 燕瑞,易艳萍.微量元素与抗衰老J.微量元素与健康研究,1999,16(4):7173.11 丁大值.红参对充血性心力衰竭的疗效及其作用机理的研究J .中国中西医结合杂志,1995 ,15 (6) :325.12 杨振平,徐雏音.难治性心力衰竭的病理生理J .中国急症医学,1990 ,10 (2) :43.13 孟祥丽,曲凤玉,赵玉佳,等. 天门冬纳米制剂对小鼠抗氧化系统的影响N.中国野生植物资源, 20

21、05 ,24(2):49-53.附录附表1 3天组样本均值与标准差单个样本统计量N均值标准差均值的标准误VAR0000140.350000.0008160.000408VAR0000240.329500.0012910.000645VAR0000340.305500.0005770.000289VAR0000440.283750.0009570.000479VAR0000540.262000.0008160.000408VAR0000640.240500.0005770.000289VAR0000740.220000.0008160.000408VAR0000840.206000.003367

22、0.001683VAR0000940.199750.0029860.001493附表2 6天组样本均值与标准差单个样本统计量N均值标准差均值的标准误VAR0000140.364500.0012910.000645VAR0000240.330500.0005770.000289VAR0000340.296250.0005000.000250VAR0000440.260500.0005770.000289VAR0000540.225750.0005000.000250VAR0000640.191500.0005770.000289VAR000074.157500.0005770.000289VAR

23、0000840.150500.0005770.000289VAR0000940.140000.0008160.000408附表3 9天组样本均值与标准差单个样本统计量N均值标准差均值的标准误VAR0000140.377250.0009570.000479VAR0000240.328500.0005770.000289VAR0000340.278000.0008160.000408VAR0000440.231500.0005770.000289VAR0000540.180750.0005000.000250VAR0000640.134500.0012910.000645VAR0000740.123000.0008160.000408VAR0000840.118750.0005000.000250VAR0000940.107250.0009570.000479附图实验用离心机小鼠饲养过程中（组图）