western转膜条件.docx

1、western转膜条件western转膜条件蛋白来源：RAW264。7 总蛋白蛋白名称(可保密）:一些转录因子蛋白分子量:4070 KDWB用膜类型、孔径:0.45 NC转膜方式（恒压、恒流）：湿转 恒流400 mA转膜时间：6090 minPS。其实吧，以我的经验来看，除非目的蛋白特别小，或者特别大，不然转膜时间真的不是那么重要，曾经因为失误，转了15 min就拆下来了，但从丽春红染色来看，跟平常实验也没有太大的区别。蛋白来源：内皮细胞 总蛋白蛋白名称（可保密）：occludin & AKT蛋白分子量：65 KD & 56 KDWB用膜类型、孔径：0。45 PVDF转膜方式(恒压、恒流）：湿

2、转 恒压 100 V转膜时间：6070 min设备名字是“BioRad mini”。蛋白来源：乳鼠心肌细胞和成年鼠心肌组织 总蛋白和核蛋白蛋白名称（可保密):保密蛋白分子量：65 KD & 55 KDWB用膜类型、孔径：PVDF（预先用甲醇处理)转膜方式（恒压、恒流）:半干转 恒压 12 V转膜时间:30-40 min设备:“Bio-Rad mini”建议:最开始做过湿转（过夜的那种),太费事费时,效果也不如半干转.蛋白来源：293T细胞蛋白名称（可保密）:蛋白分子量：95 KD 35 KDWB用膜类型、孔径:PVDF转膜方式（恒压、恒流）:湿转 恒压 90 V110 V，控制电流不要超过30

3、0 mA.转膜时间：70 min蛋白来源：肿瘤手术标本蛋白名称(可保密)：转录因子蛋白分子量：33 KDaWB用膜类型、孔径：PVDF膜转膜方式(恒压、恒流):350 mA 恒流转膜时间：150 min转膜设备：湿转 BioRad说明:相同条件曾用于数个3070 KDa的蛋白，都能成功转上，不过没有试缩短时间效果如何；实验时没为转膜条件苦恼,倒是电泳时胶的浓度及时间根据不同分子量而有区别。蛋白来源：成纤维细胞蛋白名称（可保密):smad3蛋白分子量：54 KDaWB用膜类型、孔径：PVDF膜转膜方式（恒压、恒流）:350 mA 恒流转膜时间：150 min转膜设备：湿转 BioRad蛋白来源：

4、胰腺癌细胞蛋白名称（可保密):蛋白分子量:16 KDa and 42 KDaWB用膜类型、孔径：PVDF膜转膜方式（恒压、恒流）：120 V 恒压转膜时间：90 min转膜设备：湿转 Bio-Rad蛋白来源：大鼠血管平滑肌细胞蛋白名称（可保密）：保密蛋白分子量:72 KD，42 KD 和22 KDWB用膜类型、孔径：一般的PVDF膜转膜方式（恒压、恒流)：湿转，恒流一张膜0.26 A，两张膜0。3 A。转膜时间:90 min设备：“BioRad mini建议：转膜缓冲液最多用3次，最好现用现配，我们用的没有加SDS,转的时候最好能用冰块一类的东西降一下温，这样转的效果要好一些,转的时候一定要把

5、三明治每层之间的气泡除去，同时使滤纸大于膜,膜大于胶，以免烧坏电极.蛋白来源：大鼠PBMC蛋白名称（可保密）：保密蛋白分子量：55 KDWB用膜类型、孔径：0。22的PVDF膜转膜方式（恒流）：湿转转膜时间：60-90 min设备：“BioRad mini”建议：转膜液用过两三次之后转膜效果就很差了 其它按照常规就好了其实0。22的膜一般不怕转过头 以我们的经验，转膜时间、电压其实也有很大范围的调整 ，并不是非要固定于哪一个最合适，曾经做过一张膜转，17 KD的和170 KD的，按照170 KD的条件,17 KD的转膜也很好的。蛋白来源：人非小细胞肺癌细胞系蛋白名称（可保密）：保密蛋白分子量：

6、大于250 kDWB用膜类型、孔径:millipore PVDF膜 0。45 um转膜方式（恒压、恒流）：湿转,恒流0.3A。转膜时间:180min设备：“Bio-Rad ”建议：电转保持电压在70 V以上，保持低温，如果电压低过70就需要换缓冲液了。蛋白来源：白血病细胞蛋白名称（可保密）：保密蛋白分子量:28 KDWB用膜类型、孔径：0。45的NC膜转膜方式（恒流）：湿转，90 min，0。25 A设备：“Bio-Rad ”建议：海绵厚度要合适，一次转磨用的海绵太薄，导致三明治没夹紧,转膜后拿出来一看,marker都变得七扭八歪。但是有前辈说垫的海绵太厚可能将胶压断，没经历过，不知道是不是会

7、有这种情况。蛋白来源：肿瘤细胞蛋白名称（可保密)：磷酸化蛋白蛋白分子量：10-200 KDaWB用膜类型、孔径：millipore PVDF膜 0.45 um转膜方式(恒压、恒流）：120 v 恒压转膜时间:120 min转膜设备:湿转 BioRad建议：转膜缓冲液只用2次,基本都转上，5%BSA封闭，减少背景。蛋白来源：胰腺细胞蛋白名称(可保密）:*蛋白分子量:90130 KDaWB用膜类型、孔径：PVDF膜转膜方式（恒压、恒流）：250 mA 恒流转膜时间:150 min转膜设备：湿转蛋白来源:原核表达蛋白名称（可保密)：保密蛋白分子量：38 KDWB用膜类型、孔径：0。45 NC转膜方式

8、(恒压、恒流）:湿转 恒压：100 V转膜时间：120 min蛋白来源：心脏蛋白名称（可保密)：蛋白分子量：220 kDa,130 kDa，70 kDa，41kDaWB用膜类型、孔径:PVDF转膜方式（恒压、恒流）：恒压转膜时间：70 v120 min，180 min,56 h转膜设备：伯乐湿转建议改进方向（可选）:40 kDa一下，70 v ,6090 min足够,40-70 kDa 90-120 min即可。70-120 kDa ，70 v,120-180 min足够，120180 kDa ，180-240 min，180 kDa以上建议6 h。蛋白来源:卵巢癌细胞膜蛋白蛋白名称（可保密）

9、：蛋白分子量：53 KDWB用膜类型、孔径：PVDF膜 0.45 um转膜方式（恒压、恒流)：恒压转膜时间:80 V 100 min转膜设备：湿转 Bio-Rad蛋白来源：人宫颈癌HELA细胞总蛋白蛋白名称（可保密)：actin蛋白分子量：42WB用膜类型、孔径：PVDF膜 0。45 um转膜方式（恒压、恒流）:恒压转膜时间：50 4 h转膜设备:湿转 BioRad蛋白来源：脑组织蛋白名称(可保密）：蛋白分子量：16 KD、27 KD、32 KD、42 KDWB用膜类型、孔径:PVDF 0。22 um转膜方式（恒压、恒流）：半干转 恒流 1 mA/cm2或2 mA/cm2转膜时间：不定转膜设备

10、：北京六一仪器建议：我共做了六个蛋白，所以总在想节约时间的方式。在 预试时我会观察电压数与转膜效率的关系,所以我不会按时间来定何时转完，而是按电压来定.通过染胶来确定电压数与转移蛋白分子量上限的关系。这样有的5分 钟就转完了，不用多浪费时间。并且六一的半干转膜仪随着使用次数的增多,效率也会下降，所以时间和转膜效率（尤其是使用后期)的关系并不稳定，单纯依靠时 间有时会有问题。蛋白来源:CHO cell蛋白名称（可保密）：酶原蛋白分子量:40 KDWB用膜类型、孔径：0.22的PVDF膜（Biorad）转膜方式（恒压)：100 V，湿转，转膜时间：60 min。设备：Tanon（上海天能）建议：1

11、。 转膜液现用现配,用完倒掉。2。 转膜时间，电压可以适当调整。分子量大或者小一些的蛋白,采用此条件一样转膜效率很高。蛋白来源：Hepg2蛋白名称（可保密）：EGFR蛋白分子量：170kdWB用膜类型、孔径：pvdf 0。45转膜方式（恒压、恒流）:24V转膜时间：2个半小时转膜设备：伯乐半干转蛋白来源：肝癌细胞蛋白名称：HIF1蛋白分子量：120 kDWB用膜类型、孔径：NC膜转膜方式(恒压）:80伏,湿转转膜时间:150分钟设备：“Bio-Rad mini”建 议：湿转，转膜液特别重要，否则会导致电压或者电流不稳影响转膜条带。转膜均现配先用，不重复利用。转膜时间一般是150分钟，80伏恒压

12、。经李春红染 色，靠近蛋白胶的一侧膜上蛋白染色深，膜另外一面染色浅，说明蛋白未转过.该湿转条件自己做过的蛋白分子量范围:17036 kD。蛋白来源：心肌细胞总和膜蛋白名称（可保密）：蛋白分子量：128 KD，100,60，55，43 KDWB用膜类型、孔径:NC膜 0。2 um转膜方式（恒压、恒流）：恒压转膜时间:70 V 200 min转膜设备：湿转 BioRad建 议：转膜液最好现配现现用，或配成母液，最好不重复使用，70 V电压下，电流约154 mA。甲醇可以加到150 ml.对大分子量如200 KD转膜时间延长6-8 h。蛋白来源：肺脏蛋白名称（可保密):ICAM1蛋白分子量：8511

13、0 KDWB用膜类型、孔径：0.22NC转膜方式（恒压、恒流）：湿转 恒流 300 mA转膜时间：120 min设备名字 Bio-Rad mini一抗用的santa cruz 1 mL包装的。 比例调整到1:800做出很好的条带。效价会一直降低的。去年做的这个指标,今年夏天做就不行了。蛋白来源：成纤维细胞蛋白名称(可保密）：蛋白分子量：16 KDaWB用膜类型、孔径：0.2 um PVDF膜转膜方式（恒压、恒流)：0.2 A恒流转膜时间:65 min转膜设备：湿转 Bio-Rad蛋白来源:成纤维细胞蛋白名称（可保密）：蛋白分子量:28 KDaWB用膜类型、孔径：0.2 umPVDF膜转膜方式（

14、恒压、恒流）：0。25 A恒流转膜时间:60 min转膜设备:湿转 BioRad蛋白来源：人肿瘤细胞蛋白名称（可保密）：保密蛋白分子量：80 KDWB用膜类型、孔径：0.45 um PVDF膜转膜方式（恒压、恒流）：半干转移系统恒流，勿超过0。85 mA/cm2，同时转多张膜电流需累加（串联）转膜时间：6090 min设备：Bio-Rad其实有些东西并不是非常严格的，要转移的目的蛋白分子量小，那么转移的时间就短一些，反之，则长一点;蛋白量充足，可以多转一会，蛋白量较少，则要少转一下，免得蛋白穿膜而过到了滤纸上而前功尽弃。蛋白来源：人和鼠肝癌细胞总蛋白、胞浆、胞核蛋白蛋白名称（可保密）:*蛋白分

15、子量：17-116 kdWB用膜类型、孔径：PVDF膜 0.45 um转膜方式（恒压、恒流)：恒流 200 mA转膜时间:3 h转膜设备：湿转 北京六一 24D mini蛋白来源：CO COS7 293T蛋白名称（可保密）：保密蛋白分子量:80 72 56 52 48 25 18KDWB用膜类型、孔径：0。45 um PVDF膜转膜方式（恒压、恒流)：湿转 90 V 电流约为230280 mA之间.两张膜串联叠加。转膜时间:40 min设备：Bio-Rad 法码西亚蛋白来源：人肿瘤细胞蛋白名称（可保密）:磷酸化蛋白蛋白分子量：3060 KDaWB用膜类型、孔径:pall NC膜 0.45 um

16、转膜方式（恒压、恒流）：恒流 0.851 mA/平方厘米膜转膜时间：60-90 min转膜设备： 北京六一 半干转建议：转膜缓冲液用新鲜配制的，可先配成2倍的母液,转膜液的多少会影响电转的效率，一般将吸水纸润湿即可，不要和膜一起浸泡，这样效果很好。蛋白来源：人肝癌肿瘤细胞蛋白名称（可保密）：notch蛋白分子量：60120 KDaWB用膜类型、孔径：pall NC膜 0。45 um转膜方式（恒压、恒流）：恒流 0。3 A转膜时间：20度冰柜120 min转膜设备： 湿转 Bio-Rad建议：转膜缓冲液用新鲜配制的,可先配成10倍或5倍的母液,保持低温是转膜效果的一个保证，这样效果很好。蛋白来源

17、:胶质瘤细胞总蛋白和核蛋白蛋白名称(可保密）：蛋白分子量：18 KDa 、36 KDa、55 KDa、98 KDaWB用膜类型、孔径:NC膜 PALL转膜方式（恒压、恒流)：0。35 恒流转膜时间：60 min转膜设备：湿转 BioRad mini转缓液的配制有点讲究。如果蛋白大于一百多，一般加入SDS，时间延长结果会更好些。由于，目前试验的蛋白就都不大,所以，我们都采用不加SDS的转缓液，跑出来的条带也很整齐、干净。蛋白来源大肠癌205蛋白名称（可保密)：保密蛋白分子量:92 kd，43 kdWB用膜类型、孔径：0。45pvdf转膜方式（恒压、恒流）：恒压转膜时间：90 min转膜设备：湿转

18、，天能.蛋白来源:大鼠脑组织蛋白名称（可保密）：BDNF（28 KDa)、Bactin（42 KDa）、LaminB(72 KDa)，以及磷酸化蛋白(保密 43 KDa）WB用膜类型、孔径：PVDF（0.45)膜转膜方式（恒压、恒流）：300 mA 恒流转膜时间:60 min转膜设备：湿转 BioRad Mini转膜缓冲液:25%甲醛 觉得这个浓度的甲醛可以有效降低电转的热量，而且使膜对蛋白的吸附效果较好，Marker转到膜上很鲜艳。 用立春红染色效果也很好.蛋白来源:表达产物蛋白名称（可保密）：蛋白分子量：29 KDaWB用膜类型、孔径：PVDF转膜方式(恒压、恒流)：0.3 A 恒流转膜时

19、间：80 min转膜设备: 湿转 Bio-Rad蛋白来源：cell lysate, culture medium蛋白名称(可保密)：蛋白分子量:15-50 kDWB用膜类型、孔径：NC,PVDF， 0.45 um转膜方式（恒压、恒流):恒压, semidry转膜时间：about 2h is ok if the protein is small and the voltage can keep 100 V， if not increase to 34 h。转膜设备： BioRad蛋白来源：肺脏、肝脏等.蛋白名称(可保密）：actin蛋白分子量：43 kDWB用膜类型、孔径：NC膜PALL 0.2

20、2 um转膜方式（恒压、恒流):湿转 恒流 200 mA转膜时间:4560 min设备名字 Bio-Rad mini用的santa cruz 分装和整装的都可以。效价一般1：1000-1：3000左右，可稳定较长一段时间。蛋白来源肺脏蛋白名称(可保密）：保密蛋白分子量：19 kd，35 kdWB用膜类型、孔径：0。2pvdf转膜方式（恒压、恒流)：恒流250转膜时间：150 min转膜设备:湿转 BioRad mini蛋白来源：大鼠血管蛋白名称(可保密）：保密蛋白分子量：140 kdWB用膜类型、孔径：0。45pvdf转膜方式(恒压、恒流）：恒流，200 mA转膜时间：210 min转膜设备:

21、湿转，北京六一蛋白来源：心肌蛋白名称(可保密）:蛋白分子量：90 kDa，70 kDa，12。6 kDaWB用膜类型、孔径：NC转膜方式(恒压、恒流）：恒压转膜时间:70 v 240 min，120 min,60 min转膜设备:伯乐湿转蛋白来源:脑蛋白名称（可保密)：保密蛋白分子量：16 KD 60 KDWB用膜类型、孔径：16的用0.22的PVDF,60的用0.45的NC转膜方式（恒压、恒流)：20 V转膜时间：16的30 min，60的90 min转膜设备：BioRad 半干蛋白来源:子宫内膜癌组织蛋白名称（可保密）：蛋白分子量：156。8WB用膜类型、孔径：NC膜转膜方式（恒压、恒流）

22、：恒流400mA转膜时间：90 min转膜设备：湿转 BioRad蛋白来源：真核表达蛋白名称（可保密）:(多种，30个以上）蛋白分子量:40-200 kDWB用膜类型、孔径：PVDF转膜方式（恒压、恒流)：恒压100 V（电流在280 mA至350 mA之间）转膜时间：60 min（M100kD），60100min (100kDM200kD)转膜设备：湿转蛋白来源：大鼠肾脏蛋白名称（可保密）：保密蛋白分子量：130 kDWB用膜类型、孔径：0.45NC膜 PALL转膜方式（恒压、恒流)：湿转 恒流 350 mA转膜时间:120min设备名字 Bio-Rad mini一抗用的sigma 羊抗大鼠

23、，0.2 mL包装的，打折后价格3000多,有些贵哦。比例调整到1：1500左右条带可，用BSA封闭。但是背景稍高。蛋白来源:脑组织蛋白名称(可保密)：蛋白分子量：38 KDaWB用膜类型、孔径：PVDF膜，转膜方式（恒压、恒流)：80 v恒压转膜时间:180 min转膜设备：湿转 Bio-Rad mini蛋白来源：真核表达蛋白名称（可保密）：蛋白分子量：约35 kD（双亚基）WB用膜类型、孔径：0。22 um PVDF转膜方式（恒压、恒流）：恒流200 mA转膜时间：60 min转膜设备：湿转Bio-rad,天能，六一转膜时间其实不需要那么长的，转膜没转上一般原因不在这里，可能是转膜液的原因

24、：有些蛋白SDS可能影响其与膜的结合，还原型电泳因巯基乙醇的原因也可能导致后面的抗体不结合（这是我最近的经验教训），还有一抗的选择很重要，一定要选识别线性表位的抗体，才能用于做WB.蛋白来源：细菌蛋白蛋白名称（可保密）:全部的可溶性蛋白蛋白分子量：11170 KDWB用膜类型、孔径：0。45 NC转膜方式（恒压、恒流）：湿转 恒流300 mA转膜时间：80 min蛋白来源： 骨肉瘤细胞蛋白名称（可保密):蛋白分子量： 72 kDaWB用膜类型、孔径： PVDF膜（0。45 um）转膜方式（恒压、恒流): 半干转 恒流200 mA转膜时间: 2030 min转膜设备：BioRad 型号忘了,就是

25、有4个插孔的电泳仪.建议改进方向：低温很重要,新鲜的电转液也很重要。蛋白来源：骨肉瘤CELL LINE蛋白名称（可保密）:Beta actin蛋白分子量:42 kDaWB用膜类型、孔径:Nitrocellulose Membrane 0.2 um Pore Size （Invitrogen）转膜方式（恒压、恒流):湿转,恒压22 v转膜时间：90 min转膜设备:Xcell Sure Lock Minicell （Invitrogen)建议改进方向:转膜过程冰水浴，保持低温，Transfer Buffer重复使用。蛋白来源：肾瘤细胞蛋白分子量：39 kDaWB用膜类型、孔径:Nitrocell

26、ulose Membrane 0。2 um Pore Size (Invitrogen）转膜方式（恒压、恒流）：湿转 恒压100 v转膜时间：50 min蛋白来源：MCF7蛋白名称（可保密）：蛋白分子量:70 kDaWB用膜类型、孔径：PVDF膜（GE)转膜方式(恒压、恒流)：湿转 100伏转膜时间：60 min转膜设备：伯乐小转膜仪蛋白来源:pichia 分泌表达蛋白名称（可保密）：细胞因子等蛋白分子量:17到30 kDaWB用膜类型、孔径：millipore PVDF 0.45 um转膜方式（恒压、恒流）:湿转 恒压：100 V转膜时间：60 min这个条件除了100 KDa的预染make

27、r转的不好，剩下的条带都非常清晰。正向前面ycwzq说的，感觉时间不是很重要，只要蛋白别太小或太大，在一个比较宽的时间和电压范围都能转上。当然这些还有一个重要的影响因素就是所用的蛋白转印缓冲液。所以建议把自己用的转印缓冲液的配方也贴上，便于分析交流。我先说我的吧,是大师兄师姐的配方，我用了感觉还不错，但是100 KDa以上的转的不好。蛋白转印缓冲液pH8。2：Tris碱1。93 g，甘氨酸9 g,甲醇200 ml，加水定容至1000 ml。蛋白来源： 大鼠坐骨神经蛋白名称（可保密)：蛋白分子量： 30 kDaWB用膜类型、孔径: PVDF膜（0。2 um)转膜方式（恒压、恒流）： 湿转 恒流3

28、00 mA转膜时间： 45 min转膜设备: Bio-Rad蛋白来源：小鼠胚胎成纤维蛋白名称(可保密）:蛋白分子量：36 KDa、55 KDaWB用膜类型、孔径：PVDF膜 0.45转膜方式（恒压、恒流)：0。3 A 恒流转膜时间：60 min转膜设备: 湿转 BioRad mini垫子变薄时，可用三层纤维垫，也没问题。蛋白来源：小鼠前列腺癌细胞蛋白名称（可保密）:P53 P21 RAD51 GAPDH蛋白分子量：53 KDa、21 KDa、37 KDa、36 KDaWB用膜类型、孔径：PVDF膜 0.45转膜方式(恒压、恒流）：恒压110 v转膜时间：60 min转膜设备： 湿转 BioRa

29、d mini蛋白来源：HEK293总蛋白蛋白名称（可保密）：*蛋白分子量:200KDWB用膜类型、孔径:PVDF膜 0。2 um （用甲醇预先处理)转膜方式（恒压、恒流）：恒压 25 V转膜时间:过夜 （1620 hours）转膜设备：biorad mini蛋白来源:人前列腺癌细胞蛋白名称（可保密）:*蛋白分子量:40 KDWB 用膜类型、孔径：PVDF膜 0.45 um (用甲醇预先处理）转膜方式(恒压、恒流）:恒压 20 V， 限制最高电流0。3 A。转膜时间:过夜 (16-20hours)转膜设备:biorad semidry蛋白来源：组织蛋白名称（可保密)蛋白分子量：42 KDaWB用膜类型、孔径：PVDF膜(0。22)转膜方式（恒压、恒流）:350 mA 恒流转膜时间：6090 min转膜设备:湿转 BioRad蛋白来源：E.Coli BL21蛋白名称（可保密）：蛋白分子量:4 kdWB用膜类型、孔径：PVDF 0。22 um转膜方式(恒压、恒流）：恒压15 v转膜时间：O/N转膜设备: BioRad Mini 湿转转膜