病理生理学实验指导.docx

1、病理生理学实验指导病理生理学实验指导 汪思应 郑红 邓松华 安徽医科大学基础医学院病理生理教研室 一，概论1二，病理生理实验大体操作方式2三，实验性肺水肿3四，兔小肠浇灌的水肿模型复制3五，缺氧4六，再吸入式缺氧5七，钾代谢障碍5八，失血性休克5九，喜树碱诱导细胞凋亡6十，急性左心衰竭7十一，急性右心衰8十二，病例讨论肝性脑病8十三，病例讨论急性肾功能不全9十四，病例讨论MODS10十五，病理生理学实验教学大纲11十六，病理生理学教学大纲12概 论病理生理学（Pathophysiology）是一门联系基础医学和临床医学的重要桥梁学科之一。它在理论课程中要紧介绍了在致病因素作用下机体的性能代谢：

2、发生何种改变（即临床病症及体征）；为何发生改变（即临床病症及体征显现的机制）；这些改变的规律性及与疾病的关系；预防和处置这些改变的机理（即疾病防治方法的原理）。因此，病理生理学是一门理论性科学。同时它又是一门实验性科学。病理生理学的实验方式有两种，即临床研究和动物实验研究。临床研究的结果虽能直接应用于患者，但有专门大的局限性。因此，病理生理学要紧采取动物实验研究方式。在动物身上复制各类疾病或病理进程，作为人类相应疾病的模型。实验者可操纵或改变实验条件，以研究疾病的病因、发病环节、发病机制等。还可用于疾病的实验性预防、医治及新型药物和医治手腕的开发研究等。人类疾病动物模型的复制有很多方式。大致归

3、纳为以下几种：从自然界当选择发病动物（如选择生长有肿瘤的鼠、狗等）作为疾病动物模型。但该动物模型个体间不同专门大，且发病条件及病程等不易操纵，已很少被直接采纳。现要紧用经人工选择培育的不同品系的发病动物如由Okamoto和Aoki选育成功的SHR大鼠，其成年后100%发生高血压，经常使用作自发性高血压的动物模型。我国天津医学院培育成功的津白-小鼠，成年后易发生乳腺癌等; 依照疾病发生缘故来复制疾病的动物模型。如用二乙基亚硝胺、二甲基偶氮苯来复制大鼠肝癌动物模型；我室张载福教授用盲肠结扎穿孔法造成小鼠腹腔感染来复制全身性炎症反映综合症（SIRS）的动物模型；依照疾病发生机制复制动物模型。如本指导

4、顶用大剂量快速输液提高家兔肺毛细血管流体静压以复制的实验性肺水肿模型，动脉操纵性放血造成的失血性休克模型。依照疾病的发生环节复制疾病的动物模型。本室将Lewis肺癌(Lewis lung carcinoma, LLC)接种小鼠足掌复制的肿瘤自发肺转移模型，将LLC及B16黑色素瘤（B16 Melanoma,B16M）细胞直接注入小鼠眼球后静脉所复制的肿瘤血道转移模型。转基因动物(Transgenic Animal)或基因敲除( Gene Knock-out)复制疾病动物模型。要紧用于遗传性疾病、重要基因功能的研究。一，病理生理的实验目的病理生理学实验课的要紧目的是：通过教学实验指导学生初步把握

5、人类疾病动物模型复制的大体方式；通过典型临床病例的课堂讨论，培育学生分析病例的能力，为临床思维和临床决策打下基础；帮忙学习者锻炼操作技术、验证和温习理论知识；通过实验与课堂讨论的具体环节，使学生初步具有进行医学研究与临床思维所必备的“严肃的科学态度、周密的科学方式和严谨的科学作风”等。二，病理生理学实验课的要求 实验前认真温习实验有关理论及预习实验指导，了解实验的大致情形; 专心听取指导教师对实验内容的讲解，熟悉实验的具体方式及操作规程; 领取并检查实验器材和药品是不是齐全; 小组成员应有分工，但同时应注意合作，使每人都能取得应有的技术训练。 实验时每人应确立严谨、实事求是的科学态度，正规和准

6、确的技术操作耐心、细致地观看实验中显现的每一个现象；而且要准确、及时、客观地记录。整个实验进程都不得敷衍、马虎和主观臆测; 必需伴随整个实验进程进行科学思维，力求了解每一个步骤和每一个现象的意义; 要注意尽可能减少对实验动物的没必要要损伤; 爱惜实验器材，利用药品应注意节约。 实验后认真整理和分析实验结果; 仪器和药品用完后要清点，并放回原处。应清洗者必需及时清洗干净。每一个实验组，应维持自己桌面的清洁，每次下课后，打扫、整理好实验室; 按时完成实验报告，交教师评阅。 三，病理生理实验报告应书写的项目和内容 1，姓名、班次、组别、日期。 2，实验名称。 3，实验目的及原理。 4,实验动物及材料

7、：包括种类、数量、性别、体重。 5,实验的具体步骤：简要写出要紧实验方式。 6,实验结果。依如实验目的将原始记录系统化、层次化。其表达方式有：表达式：用文字将观看到的、与实验目的有关的现象客观地加以描述，描述时需要有时刻概念与顺序。表格式：能够较为清楚地反映观看内容，有利于彼此对照。每一图表应说明必然的中心问题。图表应由学生自己设计。表内的项目及计量单位应填明。曲线式：实验中描记的血压、呼吸等曲线应写于实验报告中。书写时，须依照原始的描记图，取其明显转变的有关各段连接而成。 7,实验结果分析或讨论。由于实验指导中的每一个实验，都通过编写单位反复试做，结果靠得住。同窗所做实验，次数虽少，假设与这

8、结果大体一致，即可作为分析的依据。讨论要包括：运用所学理论，讨论和说明实验结果，论证明验目的。实验结果提示了哪些新问题。若是显现“异样现象”，应加以分析。 8,结论：依如实验结果简腹地写明。 (汪思应)实验一 大体实验操作训练实验目的1.了解病理生理学动物实验的大体用途、技术；2.把握气管、颈动脉、静脉及股动脉插管，输液及血压测量技术。药品和器材 生理盐水（%NaCl），%NaCl、%肝素、普鲁卡因。小动物手术器械一套（每套大号止血钳各两把，中号采止血钳两把，弯直小号止血钳各两把，有齿镊各一把，眼科剪和镊各一把，组织剪和粗剪各一把，手术刀片的刀柄一副）、粗细缝线各一卷，2ml和5 ml和30

9、ml注射器（第6号针头），标本架（弹簧夹）一个，搪瓷搪瓷碗（25 ml）和方盘各一个。实验动物家兔，体重 kg。要紧内容病理生理学教学经常使用实验动物简介 病理生理学实验研究采纳何种动物，是决定研究成功与否的一个重要问题。一样应针对实验目的，依照各类实验动物疾病模型的体会，一一考虑下述一系列问题：所要求的大体模型可否复制成功，成功率大小，采纳的方式和所观看指标是不是简单易行，实验结果稳固一致的程度如何，动物是不是便于治理，所取得的实验结果和人的临床情形相较相似性的大小，需花费的人力、物力、财力等。只有对这些因素进行综合考虑，比较以后，才能确信采纳何种动物较为适合。在教学上，不但要考虑以上这些问

10、题，还应考虑教学成效，才能知足实验的目的和要求。 病理生理学实验经常使用的动物有：兔、大白鼠、小白鼠、狗等。它们和人一样，都属于哺乳类动物。它们的生理特性与人接近。现将病理生理学实验经常使用的动物用途简介如下：（一）家兔 家兔能用于复制许多病理进程和疾病，如：水肿、炎症、电解质紊乱、酸碱平稳紊乱、出血性休克、DIC、肺癌、动脉粥样硬化、高脂血症、心律失常、慢性肺心病、慢性肺动脉高压、肺水肿、肝炎、胆管炎、阻塞性黄疸、肾性高血压、肾小球肾炎、急性肾功能衰竭等。 特点：价钱较低，性温顺，易饲养，繁衍率高，容易选到调剂类似的对照组兔。因此，当实验中必需用较大动物时，经常使用家兔；在血液循环方面，家兔

11、血管虽较狗略细，但很容易做到直接描记颈动脉压、股动脉压、肺小动脉契压、中心静脉压等。兔的心血管系统性能较猫、狗为差，用来观看血压反映不如狗。手术时，兔易发生反射性衰竭，血压反映不稳固，故给兔做手术时，动作要轻。兔的减压神经是独立走向的，便于观看减压神经对心、血管系统的作用。家兔心脏在离体情形下，搏动好久，是观看有害因子对哺乳类动物心脏直接作用较适合的一个模型。离体兔耳，又可作为观看有害因子对血管直接作用的一个模型；家兔适用于研究发烧、解热药和检查致热源；消化系统方面：家兔系草食动物，消化系统与人类相差较远，缺乏呕吐反射，因此不能用家兔作消化系统方面的研究；其他：家兔对组织胺不灵敏，对注射组织胺

12、并非产生血压下降，乃至显现升压反映；因此，对家兔注射大量组织胺，并非能造成过敏性休克模型。 实验用家兔体重必需千克以上。（二）小鼠小鼠能用于复制许多病理进程和疾病，如：水肿、炎症、缺氧、多种癌、肉瘤、白血病、多种传染病、慢性气管炎等。特点：小鼠是实验室最经常使用的一种动物，价钱低廉，便于大量繁衍，对动物实验同种、纯种、性别和年龄的要求，比较容易知足，生活条件也容易操纵。因此只要符合实验要求，应尽可能采纳。它适合于需要大量动物的实验，容易知足统计学的要求。例如：胰岛素、促肾上腺皮质激素的生物效价测定，毒物半致死量的测定；小鼠对许多疾病有易感性，因此适用于研究这种疾病，例如：血吸虫病、疟疾、流感、

13、脑炎等病。小鼠的纯种品系甚多，每系有其独特的生物特性，对某些疾病易感，例如：C3HA系对癌瘤灵敏，C58系那么抗癌；因此，纯系小鼠普遍应用于各类肿瘤的研究；当研究指标要紧为组织学专门是电镜观看时，应用小鼠因器官较小，可节约人力、物力。例如：用于研究慢性气管炎时肺的转变；小鼠具有发达的神经系统，能应用于复制神经官能症模型；小鼠对外界环境适应性差，不耐冷热，经不起饥饱，比较娇嫩；因此，做实验时要耐心细致，动作要轻，不然会干扰实验结果。实验用小鼠经常使用品系有昆明种小鼠、BALB/C、C57BL/6等,必需6-8周龄，18-20克。可依如实验要求选择性别。（三）大白鼠大白鼠能用于复制许多病理进程和疾

14、病，如：水肿、炎症、缺氧、休克、DIC、心肌梗塞、肝炎、肾性高血压、各类肿瘤等。特点：大白鼠和小白鼠相似，便于大量繁衍、对动物实验同种、纯种、性别和年龄的要求，比较容易知足，生活条件也容易操纵，适合于需要大量动物而小白鼠不能知足实验要求时，如：中断亚硝胺口服或胃肠道外给药能诱发大白鼠食道癌，而在小白鼠那么很少引发食道癌；因此，在这种情形下，采纳大白鼠较为适合；大白鼠较小白鼠体大，对需要作大体型的实验，用大白鼠较为适合，例如：可用于直接记录血压，其血压反映较家兔为宜，大白鼠可用于研究休克，DIC时血液循环转变，大白鼠后肢可用作肢体血管灌流实验，其心脏可用作离体心脏实验，从大白鼠胸导管采取淋巴能研

15、究疾病时淋巴的转变；大白鼠无胆囊，因此，经常使用大白鼠胆管搜集胆汁，进行疾病时胆汁功能研究；大白鼠的垂体-肾上腺系统功能很发达，经常使用作应急反映和肾上腺、垂体等内分泌功能实验，大白鼠的高级神经活动发达，因此，也普遍用于神经官能症的研究。大白鼠经常使用品系有SD、Wister，经常使用6-8周龄，体重250克的大鼠。 动物的缉捕和固定及其他操作方式 动物的缉捕和固定是进行动物实验的大体操作之一，实验者应当把握娴熟，第一，应付动物的一样习性有所了解，然后依其习性的不同，采纳相应温顺的方式，迅速将其固定在便于实验操作和观看记录的体位。下面介绍几种经常使用动物的缉捕和固定方式。（一）家兔的缉捕和固定

16、,颈部手术、股动脉分离及插管 1，家兔的缉捕和固定： 家兔习性温顺，除脚爪锐利应幸免被其抓伤，较易捕捉，缉捕时切忌以手提兔耳。拖沓四肢或提拿腰背部。正确的方式是用右手抓住其项背部皮毛，轻提动物，再以左手托住其臀部，使兔的体重要紧落在左手掌心。家兔的固定，依不同的实验需要，经常使用兔盒固定或兔台固定。我室采纳兔台固定：在需要观看血压、呼吸和进行颈、胸、腹部手术时，应将家兔以仰卧位固定于兔手术台上，固定方式是，先以四条宽的布带做成活的骗局，别离套在家兔的四肢腕或踝关节上方，抽紧布带的长头，将兔仰卧位放在兔台上，再将兔头固定器固定。然后将两前肢放平直，把两前肢的系带从背部交叉穿过，使对侧的布带压住本

17、侧的前肢，将四肢别离系在兔台的木桩上。练习耳缘静脉注射。2，家兔颈部手术、股动脉分离及插管：家兔称重固定于兔台后，剪去其颈部兔毛，在取普鲁卡因皮下浸润麻醉，沿颈正中切开颈部皮肤约，分离皮下筋膜组织，可见三块肌肉：即颈正中的胸骨舌骨肌，双侧的胸锁乳突肌。在胸锁乳突肌外缘与皮瓣交壤处是颈外静脉，钝性分离滑腻一侧颈外静脉，在下面穿两条线，结扎颈外静脉远心端，在近心端靠近结扎处剪一小口插入静脉导管（静脉导管连接静脉输液装置，注意排除管道的气体），结扎固定，打开静脉输液装置的螺旋夹，若是输液畅通时，即调整螺旋夹使液体维持5-10滴/分钟以维持插管通畅。分离开胸骨舌骨肌，其下方是气管，分离并“倒T型”切开

18、气管，插入气管插管及结扎。预备描计呼吸。在气管的左右后方，各有一条与交感神经、迷走神经伴行的颈动脉，分离颈动脉并穿线两条，结扎颈动脉远心端，用动脉夹夹住近心端，在近心端靠近结扎处剪一小口插入动脉导管（动脉导管内充含肝素的生理盐水，并与血压计相连，血压计压力140mmHg左右），结扎并固定导管，松开动脉夹可测量血压。剪去一侧腹股沟兔毛，触摸股动脉搏动以确信其位置，在%普鲁卡因皮下浸润麻醉下，沿股动脉走行方向切开皮肤，分离皮下组织，在股动脉隐窝处找出并警惕分离出股动脉，穿线两条，结扎股动脉远心端，用动脉夹夹住近心端，在近心端靠近结扎处剪一小口插入动脉导管（动脉导管与50mL注射器相连，并用肝素抗凝

19、），结扎并固定导管，松开动脉夹可放血。（二）大白鼠的缉捕和固定 大白鼠牙齿锋利，要提防被其咬伤，从鼠笼内缉捕时右手最好带手套，抓住其尾巴，提出置于实验台上，以左手拇指和食指、中指抓住两耳后项背部皮肤，将鼠固定在左手掌中，右手进行操作，也可张开左手之虎口，敏捷地从背部插向腋下，使食指位于左前肢前，拇指、中指位于左前肢以后，一把抓住，右手进行操作，如操作时刻较长，可参照家兔固定方式将其固定在大白鼠固定板上。（三）小鼠的捕捉和固定 小鼠较大白鼠温和，虽也要提防被其咬伤手指，但勿需带手套捕捉。可先用右手抓住鼠尾提起，置于鼠笼或实验台上，用左手的拇指和食指抓住小鼠两耳后项背部皮肤，将鼠体置于左手心中，拉

20、直后肢，以无名指及小指按住鼠尾。同时右手可手持注射器作小鼠腹腔等注射。 （汪思应）实验二 实验性肺水肿目的要求1.复制实验性肺水肿2.结合理论把握肺水肿的表现及其发生机理实验原理 大剂量快速输液致使兔肺毛细血管流体静压升高，肺组织液生成大于回流，引发肺水肿的发生。实验动物家兔，体重 kg。药品及器材%普鲁卡因，肾上腺素,生理盐水（%NaCl）,常规小动物实验用器材。步骤及观看一 实验组1.取兔一只，称体重后仰卧固定于兔台上、剪去颈部被毛，在1%普鲁卡因局麻下切开颈部皮肤，按常规操作，分离气管和一侧颈外静脉，在下面穿一线。切开气管，插入气管插管。预备描计呼吸。把静脉导管连接静脉输液装置，注意排除

21、管道的气体。结扎颈外静脉远心端，在近心端靠近结扎处剪一小口插入静脉导管，结扎固定，打开静脉输液装置的螺旋夹，若是输液畅通时，即拧紧螺旋夹。2.描计一样正常呼吸，并用听诊器听肺的呼吸音，然后输入37生理盐水（输入总量按100-120ml/kg,输记速度为180-200滴/分）待滴注快要完毕当即从输液瓶中加入稀释肾上腺素生理盐水（按肾上腺素kg体重）。3.紧密观看呼吸改变和气管插管是不是有粉红色泡沫液体流出，并用听诊器听诊肺部有无湿性罗音显现，当证明肺水肿显现时，那么夹住气管，处死动物，打开胸腔，用线在气管分叉处结扎（避免肺水肿液流出）在结扎处上方切断气管，警惕把心脏及其血管分开，（勿损伤肺）把肺

22、掏出，用滤纸吸去肺表面的水分后称取肺重，计算肺系数，用排水法测肺体积。然后肉眼观看肺大体的改变，并切开肺，观看肺水肿和正常肺组织切片。 肺系数=肺重（克）/兔体重（千克） 正常肺系数二 对照组 与实验组大体相同，除不加肾上腺素外。 注意事项1.实验兔和对照兔的输记速度应大体一致，输液不要太快，以操纵在180-200滴/分为宜。2.解剖掏出肺时，注意勿损伤肺表面和挤压肺组织，以避免水肿液流出，阻碍肺的数值。 （郑红、汪思应）参考实验一 兔小肠浇灌的水肿模型复制实验目的1学会小肠浇灌标本的制作。2了解毛细血管压，胶体渗透压，晶体渗透压在水肿发生中的作用。实验目的 利用血管机械阻断与否，使局部组织液

23、生成增加或减少。药品和器材 生理盐水（%NaCl），%NaCl、%肝素、普鲁卡因。小动物手术器械一套（每套大号止血钳各两把，中号采止血钳两把，弯直小号止血钳各两把，有齿镊各一把，眼科剪和镊各一把，组织剪和粗剪各一把，手术刀片的刀柄一副）、粗细缝线各一卷，2ml和5 ml和30 ml注射器（第6号针头），标本架（弹簧夹）一个，搪瓷碗（25 ml）和搪瓷方盘各一个。实验动物 家兔，体重 kg。实验步骤（一）兔小肠灌流标本的制作1.取家兔一只，称重后背位固定于兔板，1%普鲁卡因局部麻醉后，自剑突下做腹部正中切口约，打开腹腔，用温盐水纱布覆盖切口及周围皮毛。2.在左腹侧腔将小肠轻轻牵出，并一侧（使动脉

24、位于静脉之上）。找到肠系膜前动、静脉（相当于人的肠系膜上A、V），管径较细，色红且有搏动的一根为动脉，另一根为静脉。3.在靠近肠系膜前动脉的根部用小弯止血钳分离动脉约 cm，分离时注意不要损伤动脉的分支。然后穿两根细线备用。4.自耳缘静脉注射%肝素 ml/kg，1-2分钟后结扎肠系膜前动脉的近心端，向远心方向插入细塑料管约。扎牢后，将此线在细塑料管上再做一次结扎以防脱落。5.于动脉插管结扎线下第一根动脉分支的上方，动脉和静脉之间穿一根粗线将肠管和静脉一并结扎，然后在第一根分支的上方再穿一线将肠管单独结扎，并从两扎线间将肠管和静脉切断。注意标本侧的静脉是游离的，其内的液体能够自由流出。6.自扎线

25、处开始向下排空小肠约 cm，在小肠 cm和离动脉插管5 .0cm的血管处穿两根粗线，将肠管和血管一并结扎两次，然后在两结扎线间剪断，最后沿图中虚线所示游离标本。7.将标本悬挂在标本架上，在肠游离缘上支肠长垂直剪3-4个小口，以肠腔内容物能流出为度。8.以5 ml注射器吸取生理盐水，经动脉插管冲去血管中的血液，该标本即可用于浇灌。（二）灌流装置的预备。（三）灌流: %NaCl; 中分子右旋糖苷灌流, 25 cm水柱压力加压灌流; %NaCl灌流;% NaCl灌流;100 cm水柱压力加压灌流。结果与讨论 （郑红、汪思应）实验三 缺 氧实验目的：1，在动物身上复制缺氧性、血液性等缺氧模型；2，并观

26、看缺氧动物呼吸，活动状态、皮肤及内脏颜色的转变，分析不同类 型缺氧的发病机理；3，观看麻醉、年龄等因素对缺氧耐受性的阻碍。实验原理： 人为制造小白鼠处于密闭环境，由于不断用氧，使其吸入气体氧分压下降，复制小鼠低张性缺氧动物模型，腹腔注射亚硝酸盐、吸如CO复制小鼠等张性缺氧动物模型。实验动物：小白鼠（18-22g,雌性或雄性）。药品器材：碳酸氢钠、甲酸、浓硫酸、5%亚硝酸钠、1%美兰、10%乌拉坦，%氰化钾、生理盐水、凡士林、25 ml广口瓶、一氧化碳发生装置、手术剪子、镊子、30 ml、5 ml及1 ml注射器、氧气袋。1.低张性低氧血症：取体重相似，性别相同的小白鼠三只别离装入三个广口瓶内，

27、观看小白鼠正常活动情形，呼吸频率（次/10秒），深度、皮肤和口唇的颜色，然后塞紧瓶塞，记录时刻，以后每三分钟重复观看上述指标一次（如有其他转变那么随时记录）直到动物死亡为止。动物尸身在实验做完后，依次打开腹腔，比较血液或肝脏颜色。2，麻醉对机体耐受缺氧的阻碍：体重相近的小白鼠两只，其中一只腹腔内注入%乌拉坦10g。别离放在广口瓶中，塞紧瓶塞后，开始记时。以下步骤同实验1。3，年龄对机体耐受缺氧的阻碍：取1只成年鼠和一只新生红皮鼠，同放在一个广口瓶（红皮小鼠放入一小青霉素瓶中）盖紧瓶塞，观看小鼠活动等情形，记录生存时刻。4，亚硝酸的中毒缺氧：取体重相近小鼠3只，甲鼠腹腔内注射%亚硝酸钠 ml，乙

28、鼠在注射亚硝酸钠后（同剂量），再注射1%美兰 ml，丙鼠腹腔内注射生理盐水 ml对照。观看各鼠呼吸、皮肤颜色和全身活动，存活时刻。5，一氧化碳中毒缺氧：取小鼠两只，观看正常活动，口唇、鼻、尾部皮肤颜色，呼吸频率。取1只小鼠放入250 ml广口瓶内，用注射器抽10 ml一氧化碳注入瓶内，当即盖上瓶盖，注意动物行为状态和皮肤颜色转变，呼吸频率。待小鼠痉挛摔倒时，迅速打开瓶盖，掏出小鼠并进行通氧等急救方法，观看恢复情形；另一只小鼠重复CO中毒实验，但不进行抢救，身后进行解剖，观看皮肤、内脏和血液的颜色。 6，请自己设计一实验，观看环境温度对小鼠缺氧耐受性的阻碍（附于实验报告中）。（汪思应、郑红）参考

29、实验二 再吸入式缺氧实验目的：1在动物身上复制乏氧性缺氧模型；2并观看缺氧动物血氧指标转变，分析不同类型缺氧的发病机理；实验原理： 人为制造家兔处于密闭环境，使其吸入气体氧分压下降，复制家兔低张性缺氧动物模型，并观测血氧指标的转变。实验动物：家兔，体重 kg。药品器材：生理盐水（%NaCl），%NaOH、%肝素、普鲁卡因。小动物手术器械一套（每套大号止血钳各两把，中号采止血钳两把，弯直小号止血钳各两把，有齿镊各一把，眼科剪和镊各一把，组织剪和粗剪各一把，手术刀片的刀柄一副）、粗细缝线各一卷，2ml和5 ml和30 ml注射器（第6号针头），标本架（弹簧夹）一个，搪瓷碗（25 ml）和搪瓷方盘各

30、一个，氧气袋，血压计，血红素测定装置等。实验步骤：1，称重后背位固定于兔台上，手术部位去毛。2，1%普鲁卡因局麻下，切开颈部正中皮肤约5-8 cm，分离气管并作气管插管，于气管双侧分离颈总A穿线备用。3，局麻下，切开腹股沟部皮肤，分离一侧股动脉，穿线备用。4，耳缘V注入肝素kg(500u/ml),使全身肝素化。5，侧颈总A做动脉插管结扎固定并与血压描计相连。气管插管与呼吸描计相连，股A内插入通针头的细塑料管，结扎备用。6，描计正常呼吸曲线（包括血压曲线）。以另一侧颈总A行夹闭反射。7，自股A放血数滴于表面器皿上测动物HB含量。8，用吸管吸取%NaOH10-20 ml于再吸入式缺氧瓶内，塞紧瓶塞。将瓶之A端与气管插管之侧管相连，使兔的呼吸只能与缺氧瓶水柱压记相通，当即记录开始缺氧时刻，缺氧进程中，不断摇动缺氧瓶，使兔呼出气之CO2充分为NaOH所吸收。9，意动物血压及呼吸转变，当血压降至原水平1/2时，当即自股动脉采血（开始几滴血液弃去），测定HB含量，并行颈A夹闭反射。10，血压降至20mmHg时，停止缺氧，观看其恢复