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1、最新沉淀反应第十六章 沉淀反应Chapter 16 Precipitation第一部分 教学内容和要求一、目的要求掌握：凝胶内沉淀试验、免疫浊度分析、免疫电泳法的原理；熟悉：凝胶内沉淀试验、免疫浊度分析、免疫电泳的应用；了解：液相沉淀试验的原理，各种沉淀反应方法的技术要点和影响因素。二、教学内容1。液相沉淀试验：絮状沉淀试验，环状沉淀试验。2。凝胶内沉淀试验：单向琼脂扩散试验，双向琼脂扩散试验。3。免疫电泳技术：免疫电泳，火箭免疫电泳，对流免疫电泳，免疫固定电泳。4。免疫浊度分析技术：透射免疫比浊法，散射免疫比浊法，速率抑制免疫比浊法，免疫胶乳浊度测定法，免疫浊度分析的影响因素和免疫浊度测定法

2、的应用。第二部分 测试题一、选择题（一）单项选择题（A型题）1.Fahey曲线适用于A.小分子抗原，长时间扩散(48小时) B.小分子抗原，短时间扩散(24小时) C.大分子抗原，长时间扩散(48小时) D.大分子抗原，短时间扩散(24小时)E.不论分子大小2.Mancini曲线适用于A.小分子抗原，长时间扩散(48小时) B.小分子抗原，短时间扩散(24小时)C.大分子抗原，长时间扩散(48小时) D.大分子抗原，短时间扩散(24小时)E.不论分子大小3.Mancini曲线A.适用于小分子抗原，扩散时间大于48h B.适用于小分子抗原，扩散时间小于24hC.适用于大分子抗原，扩散时间小于24

3、h D.抗原浓度与沉淀环直径的平方呈线性关系 E.使用半对数坐标纸作图4.Fahey曲线A.适用于大分子抗原，扩散时间大于48h B.适用于小分子抗原，扩散时间大于48hC.适用于大分子抗原，扩散时间小于24h D.抗原浓度的对数与沉淀环直径呈线性关系 E.使用普通坐标纸作图5.单向琼脂扩散试验，抗体与融化琼脂混合的温度A.约37 B.约45 C.约50 D.约60 E.室温6.单向琼脂扩散法可用于A.抗体定性 B.抗体定量 C.抗原定性 D.抗原定量 E.抗体效价滴定7.双向琼脂扩散试验出现多条沉淀线的原因A.抗原抗体过剩 B.抗原抗体相等 C.抗原抗体缺乏 D.抗原抗体不纯 E.抗原抗体分

4、子量不等8.双向琼脂扩散试验测量两种有相关成分的抗原时，沉淀线出现A.二条直线相交叉 B.二条弧线完全融合 C.二条弧线部分融合 D.二条弧线不连接 E.二条相交弧线靠近抗体孔9.双向琼脂扩散试验中，抗原含量较大，反应沉淀线应A.靠近抗原孔 B.靠近抗体孔 C.在两孔之间 D.沉淀线弯向抗原孔 E.呈多条沉淀线10.速率散射比浊法测定的散射信号值产生于A.单位时间内最大量的免疫复合物 B.单位时间内免疫复合物形成的最快时间段C.单位时间内免疫复合物形成的最稳定期 D.抗体过剩期形成的免疫复合物E.小分子不溶性免疫复合物颗粒11.三角孔型模式双向琼脂扩散试验，若沉淀线为二条直线交叉，说明两种受检

5、抗原性质A.完全相同，抗体系双价 B.完全不同，抗体系双价 C.完全相同，抗体单价 D.完全不同，抗体单价 E.部分相同，抗体双价12三角孔型模式双向琼脂扩散试验，若二条沉淀线部分相融，说明两种受检抗原性质A.完全相同，抗体系双价 B.完全不同，抗体系双价 C.完全相同，抗体单价 D.部分相同，抗体单价 E.部分相同，抗体双价13.三角孔型模式双向琼脂扩散试验，若二条沉淀线完全相融，说明两种受检抗原性质A.完全相同，抗体系双价 B.完全不同，抗体系双价 C.完全相同，抗体单价 D.部分相同，抗体单价 E.部分相同，抗体双价14.双向琼脂扩散试验，两种受检抗原的性质完全相同时，沉淀线出现A.二条

6、直线相交叉 B.二条弧线完全融合 C.二条弧线部分融合 D.二条弧线不连接 E.二条相交弧线靠近抗体孔15.双向琼脂扩散试验，两种受检抗原的性质完全不同时，沉淀线出现A.二条直线相交叉 B.二条弧线完全融合 C.二条弧线部分融合 D.二条弧线不连接 E.二条相交弧线靠近抗体孔16.双向琼脂扩散试验中，抗体含量较大，反应沉淀线应A.靠近抗原孔 B.靠近抗体孔 C.在两孔之间 D.沉淀线弯向抗原孔 E.呈多条沉淀线17.比较两种抗原异同时，常选用的双向琼脂扩散试验的模式为A.单孔型 B.双孔型 C.三角孔型 D.双排孔型 E.梅花孔型18.滴定抗血清效价时，常选用的双向琼脂扩散试验的模式为A.单孔

7、型 B.双孔型 C.三角孔型 D.双排孔型 E.梅花孔型19.散射比浊法的特异性好于透射比浊法，其原理是A.散射比浊法的入射光波长较短 B.检测点接近光源 C.IC的体积大D.IC的折射率大 E.避免了杂信号的影响20.测定半抗原或药物，常用A.透射免疫比浊法 B.终点散射比浊法 C.速率散射比浊法 D.速率抑制免疫比浊法 E.免疫胶乳浊度测定法21.单向琼脂扩散试验是将A.抗体混入琼脂板内，然后打孔加入抗原 B.抗原混入琼脂板内，然后打孔加入抗体C.抗原与抗体均不混入琼脂板内，而是在一定位置打孔后，分别加入D.抗原与抗体均不混入琼脂板内，而是在一定位置打孔后，分别加入，再进行电泳E.抗体混合

8、琼脂板内，然后打孔加入抗原，再进行电泳22.哪种沉淀试验常用于两种抗原的性质分析A.单向扩散试验 B.环状沉淀试验 C.双向扩散试验 D.絮状沉淀试验 E.对流免疫电泳23.对于血清中数种蛋白质抗原成分的分析，常可采用A.免疫电泳法 B.双向扩散试验 C.单向扩散试验 D.火箭免疫电泳 E.对流免疫电泳24.免疫电泳（IEF）是A.区带电泳与双向免疫扩散相结合的技术 B.电泳与单向免疫扩散相结合的技术C.电泳与双向免疫扩散相结合的技术 D.区带电泳与免疫沉淀反应相结合的技术E.电泳与环状沉淀反应相结合的技术25.免疫电泳法常用于A.IgG定量测定 B.抗原组分鉴定 C.IgG类别鉴定 D.抗原

9、分子量测定 E.抗体效价测定26.免疫电泳的结果，主要是观察A.沉淀环的直径 B.沉淀弧的长短 C.沉淀峰的高低 D.沉淀线的数目、形状和位置E.沉淀弧的方向27.对流免疫电泳是A.定向加速的单向扩散试验 B.定向加速的双向扩散试验 C.区带电泳与双向免疫扩散相结合的技术D.区带电泳与免疫沉淀反应相结合的技术 E.电泳与环状沉淀试验相结合的技术28对流免疫电泳中,抗体向阴极移动原因是A.抗体带正电 B.抗体带负电 C.电渗作用 D.电泳作用 E.抗原与抗体的相互吸引29.火箭免疫电泳的火箭峰呈圆形是因为A.琼脂凝胶的电渗过大 B.电泳时间未达终点 C.抗原为IgG类蛋白质 D.加样速度慢E.抗

10、原含量过低30.火箭免疫电泳的火箭峰呈纺锤状A.琼脂凝胶的电渗过大 B.电泳时间未达终点 C.抗原为IgG类蛋白质D.加样速度慢 E.抗原含量过高31.火箭免疫电泳的火箭峰基底过宽A.琼脂凝胶的电渗过大 B.电泳时间未达终点 C.抗原为IgG类蛋白质D.加样速度慢 E.抗原含量过高32.采用放射免疫自显影技术进行火箭电泳可使火箭电泳技术A.大大缩短实验时间 B.简化试验步骤 C.大大提高抗原定量的敏感度D.由定性试验变成定量试验 E.大大提高试验的准确性33.与免疫固定电泳最类似的沉淀试验是A.免疫电泳 B.火箭电泳 C.对流电泳D.交叉免疫电泳 E.火箭电泳+放射免疫自显影技术34.火箭免疫

11、电泳终点应A.火箭峰呈云雾状 B.火箭峰呈圆形 C.火箭峰尖而清晰 D.火箭峰顶部与基底同宽E.火箭峰呈纺锤状35.速率散射比浊法之所以能比传统的沉淀反应试验大大地缩短时间，主要是因为A.在抗原抗体反应的第一阶段判定结果 B.不需复杂的仪器设备C.使用低浓度的琼脂或琼脂糖 D.反应的敏感度高E.速率散射比浊法反应速度快36.透射免疫比浊法A.测定光线通过反应混合液时，被其中IC反射的光的强度B.测定光线通过反应混合液时，被其中IC折射的光的强度C.测定光线通过反应混合液时，被其中IC吸收的光的强度 D.测定光线通过反应混合液时，透过的光的强度E.测定光线通过反应混合液时，透射光的强度37.散射

12、免疫比浊法检测的原理A.测定光线通过反应混合液时，被其中IC反射的光的强度B.测定光线通过反应混合液时，被其中IC折射的光的强度 C.测定光线通过反应混合液时，被其中IC吸收的光的强度D.测定光线通过反应混合液时，透过的光的强度E.测定光线通过反应混合液时，透射光的强度（二）多项选择题（X型题）1.凝胶内沉淀试验常用的凝胶有A.琼脂 B.琼脂糖 C.葡聚糖 D.聚丙烯酰胺 E.羧甲基纤维素2.Mancini曲线A.适用于大分子抗原 B.扩散时间大于48h C.抗原浓度与沉淀环直径的平方呈线性关系D.使用普通坐标纸作图 E.IgM测定3.Fahey曲线A.适用于小分子抗原 B.扩散时间小于24h

13、 C.抗原浓度的对数与沉淀环直径呈线性关系D.使用半对数坐标纸作图 E.IgM测定4.双向琼脂扩散试验可用于A.抗原或抗体的定量 B.鉴定抗原或抗体的纯度 C.分析抗原或抗体的相对分子量D.分析抗原的性质 E.抗体效价的滴定5.鉴定抗原或抗体纯度时，可选用的双向琼脂扩散试验的模式为A.单孔型 B.双孔型 C.三角孔型 D.双排孔型 E.梅花孔型6.测定未知抗原或抗体时，可选用的双向琼脂扩散试验的模式为A.单孔型 B.双孔型 C.三角孔型 D.双排孔型 E.梅花孔型7.双向琼脂扩散试验中，双孔型模式常用于A.定量抗原或抗体 B.测定未知抗原或抗体 C.检查抗原或抗体的纯度 D.比较两种抗原的异同

14、E.滴定抗血清的效价8.免疫浊度测定的条件A.反应体系中必须始终保持抗体过量 B.全自动免疫浊度仪应具有抗原过量监测功能C.H型抗体是免疫比浊的理想试剂 D.适量的PEG6000可以缩短终点法的反应时间E.适量的PEG6000可以增加速率法的反应峰值9.根据Rayleigh方程，散射免疫比浊法具有如下特点A.入射光波长越小，散射光越强 B.散射光强度与IC的浓度呈正比 C.散射光的强度与IC的体积呈正比 D.散射光强度随焦点至检测器距离的平方和而下降 E.抗体过剩时散射光信号最强10.免疫胶乳浊度测定法的特点A.为一种带载体的免疫比浊法 B.吸附有抗体的胶乳颗粒，遇相应抗原时可发生凝集C.光线

15、可以透过均匀分散的胶乳颗粒 D.两个以上胶乳颗粒凝聚时，可使透过光减少E.适用于免疫胶乳浊度法的胶乳颗粒直径应稍大于入射光的波长二、填空题1.免疫沉淀反应是 与 特异性结合，在适当条件下出现沉淀物的现象。2.棋盘格法，又称方阵法， 和 同时稀释，可一次完成 和 的滴定，并找出最适比。3.单向琼脂扩散是待测抗原从含有定量 的 内自由向周围扩散，抗原抗体特异性结合，在两者比例合适的部位，形成 。4.Mancini曲线适用于大分子抗原的测定，在一定范围内，沉淀环随时间延长而扩大，抗原浓度与 呈线性关系，常用 坐标纸作图。5.Fahey曲线适用于小分子抗原的测定，在一定范围内，沉淀环随时间延长而扩大，

16、沉淀环直径与 呈线性关系，常用 坐标纸作图。6.双向琼脂扩散试验可对抗原或抗体的存在、含量和相对分子量进行分析，沉淀线靠近抗原孔指示 较大；靠近抗体孔、则指示 ；不出现沉淀线则表明 。7.免疫电泳是将 与 相结合的一种免疫化学分析技术。8.火箭电泳是 与 相结合的免疫技术。9.对流免疫电泳是 与 相结合的免疫技术。10.对流免疫电泳中，抗体流向负极，是因为 ， 速度小于 速度。11.免疫浊度测定的基本原理是抗原抗体在特殊缓冲液中快速形成 ,使反应液出现 ，并可根据其推算出抗原或抗体的量。12.根据Rayleigh方程，散射比浊法中的散射光强度与入射光波长成 比，与粒子的浓度和体积成 比。13.

17、速率散射比浊法是测定单位时间内免疫复合物形成的 的散射信号值，此时的散射信号最强，速率散射信号值最大。14.免疫胶乳浊度测定的原理与透射比浊法相似。载体为大小适中、均匀的胶乳颗粒，其直径应稍 入射光波长，目前多用 nm的胶乳颗粒。15.免疫浊度测定的基本原则之一是，反应体系中必须始终保持 过量。为此，掌握抗体的浓度是关键。三、名词解释1沉淀反应（precipitation） 2.凝胶内沉淀试验(gel phase precipitation) 3.免疫电泳(immunoelectrophoresis，IEP) 4.对流免疫电泳(counter immunoelectrophoresis，CIE

18、P) 四、问答题1.决定抗原抗体最佳配比的方法有几种?2.简述单向免疫扩散试验的基本原理和技术要点。3.在双向免疫扩散试验中，如何判定结果?4.在双向免疫扩散试验中，如何分析抗原或抗体相对分子量大小?5.免疫电泳技术的优点是什么？免疫电泳有哪些用途？6.对流免疫电泳时，抗体为什么流向负极？7.简述火箭免疫电泳的原理和主要用途。8.免疫浊度测定的基本原理是什么？有哪些类型？9.散射免疫比浊法的基本原理是什么？10.速率散射比浊法中的“速率”是指什么？11.速率散射比浊法中，测定的是单位时间内什么时间段的散射信号值？12.免疫浊度测定的反应体系中，为什么必须始终保持抗体过量?13.全自动免疫浊度测

19、定仪均具有抗原过量的自动监测功能，其设计的基本原理是什么？第三部分 参考答案与题解一、选择题（一）单项选择题（A型题）1.B 2.C 3.D 4.D 5.C 6.D 7.D 8.C 9.B 10.B 11.B 12.E 13.A 14.B 15.A 16.A 17.C 18.E 19.E 20.D 21.A 22.C 23.A 24.A 25.B 26.D 27.B 28.C 29.B 30.C 31.D 32.C 33.A 34.C 35.A 36.C 37.B（二）多项选择题（X型题）1.ABCD 2.ABCDE 3.ABCD 4.BCDE 5.BD 6.BD 7.BC 8.ABDE 9.

20、ABCD 10.ABCD二、填空题1.可溶性抗原、 相应抗体。2.抗原、 抗体、 抗原、 抗体。3.抗体、 凝胶、 沉淀环。4.扩散环直径的平方、 普通。5.抗原浓度的对数、 半对数。6.抗体含量、 抗原含量较高、 无对应的抗原和抗体。7.电泳、 双向免疫扩散。8.电泳、 单向免疫扩散。9.电泳、 双向免疫扩散。10.抗体分子量大、 电泳、 电渗。11.免疫复合物、 浊度。12.反、 正。13.最快时间段14.小于、 200。15.抗体。三、名词解释1. 沉淀反应：沉淀反应是指可溶性的抗原和抗体特异性结合后，所形成的复合物以沉淀的形式出现。2.凝胶内沉淀试验：又称凝胶扩散，是将可溶性抗原与相应

21、抗体分别放入凝胶内进行扩散，两者在比例合适的位置形成肉眼可见的沉淀线或沉淀环。3.免疫电泳：是凝胶电泳和凝胶扩散相结合。在电场作用下，位于琼脂凝胶中的抗原样品因各组分的电泳迁移率不同而彼此分开形成不同的区带。电泳结束后，在琼脂板中间所挖的长形槽内加入相应的抗血清，由于经电泳分离后的各种抗原成分在琼脂中呈放射状扩散，而抗体呈直线扩散，因而形成的沉淀线多呈弧状。4.对流免疫电泳：是在电场作用下的免疫双扩散。抗原向阳极移动，而抗体向阴极移动，在一定时间内，相向移动的抗原和抗体在两孔间相遇，在浓度比例适当处形成沉淀线。四、问答题1.（1）抗原稀释法：将可溶性抗原作一系列倍比稀释，然后向各管中加入一定浓

22、度的适量抗血清，37反应后，产生的沉淀量随抗原量变化而不同，以沉淀物最多的管为最适比例管。（2）抗体稀释法：是将恒定量抗原与不同倍比稀释的抗体反应，出现沉淀物最多的管为抗体最适比例管。（3）棋盘格法：亦称方阵法。抗原抗体同时稀释，可一次完成抗原和抗体的滴定，并找出抗原、抗体的最适比。是前二法的结合。2.（1）原理：待测抗原从局部含有定量抗体的凝胶内自由向周围扩散，抗原抗体特异性结合，在两者比例合适的部位，形成白色沉淀环，沉淀环的大小与抗原的浓度呈正相关。（2）技术要点：将抗体和热融化琼脂（约50）混合，倾注成平板。待凝固后在琼脂板上打孔，孔中加入已稀释的抗原液，和不同浓度的抗原标准品，置37温

23、箱，2448h后观察孔周围沉淀环。量取沉淀环直径，通过抗原标准品，计算待测抗原的浓度。3.双向免疫扩散中，出现沉淀线，表明存在相应的抗原、抗体，不出现沉淀线则表明缺乏抗原或抗体。沉淀线的形成是根据抗原抗体两者比例所致，沉淀线靠近抗原孔，提示抗体含量高；靠近抗体孔，提示抗原含量较多。4.抗原或抗体在琼脂内扩散的速度受分子量影响。分子量大，则抗原抗体扩散慢、扩散圈小、局部浓度较大，因此形成的沉淀线弯向分子量大的一方。如二者分子量相等，则形成直线。抗体多为IgG，分子量约150 000，据此可粗略估计未知抗原的分子量。5.（1）优点：免疫电泳技术是将免疫扩散和电泳相结合的一种免疫学分析技术，既有抗原

24、抗体反应的高度特异性，又有电泳分离技术的快速、灵敏和高分辨力，广泛应用于生物医学领域。（2）用途：纯化抗原或抗体的成分分析，分析其纯度；正常及异常体液中蛋白质成分的分析，如无丙种球蛋白血症、冷球蛋白血症、多发性骨髓瘤、白血病、系统性红斑狼疮、肝病等病人的血清蛋白成分的分析，多发性骨髓瘤血清M蛋白的检测和鉴定；免疫后不同抗体组分的动态变化研究。6.大部分蛋白质抗原在碱性溶液中带负电荷，电泳时从负极向正极泳动，而抗体IgG分子量大，暴露的极性基团较少，在缓冲液中解离的也少，向正极的泳动速度较慢，电泳时由电渗引向负极的液流速度超过了IgG向正极的泳动，带动抗体流向负极，使抗原和抗体定向对流并发生反应

25、，出现肉眼可见的沉淀线。7.（1）原理：火箭免疫电泳是将单向免疫扩散和电泳相结合的技术。抗原在电场作用下，在含有适量抗体的琼脂糖凝胶中向正极泳动，逐渐形成梯度浓度，在抗原抗体比例适当时形成沉淀，随着抗原量的减少，沉淀带越来越窄，形成火箭峰样沉淀，峰形高低与抗原量呈正相关。用已知量标准抗原作对照，绘制标准曲线，根据检测样品沉淀峰的高度可算出待测抗原的含量。（2）主要用途：抗原蛋白定量，如IgA、IgG、IgM和sIgA检测；C3、C4及其裂解产物检测；AFP等检测。8.（1）基本原理：免疫浊度测定是将液相内的沉淀试验与现代光学仪器和自动分析技术相结合的一项分析技术。当可溶性抗原与相应的抗体特异结

26、合，在二者比例合适、并有一定浓度的电解质存在时，可以形成不溶性的免疫复合物，使反应液出现浊度。这种浊度可用肉眼或仪器测知，并可通过浊度推算出复合物的量，即抗原或抗体的量。（2）类型：按测量方式可分为透射免疫比浊法和散射免疫比浊法。按测定速度可分为速率比浊法和终点比浊法。9.沿水平轴照射的一定波长的光，在通过溶液时，光线可被其中的免疫复合物粒子颗粒折射，发生偏转，产生散射光。根据Rayleigh散射方程，散射光强度与粒子（免疫复合物）的浓度和体积成正比，通过测量散射光的强度，可计算出待测抗原的浓度。10.所谓速率是指单位时间内抗原与抗体反应的速度。抗原与抗体结合形成免疫复合物的速度，在每个单位时

27、间内是不相同的，在抗体过量的情况下，随着反应时间的延长，免疫复合物的总量逐渐增加，通常在25s时出现一个反应最快的速率峰。峰值与抗原量呈正相关。11.速率散射比浊法是测定单位时间内免疫复合物形成的最快时间段（而不是测定免疫复合物的最大量及最稳定期）的散射信号值，此时因抗体量大于抗原量，形成的免疫复合物为小分子不溶性颗粒，产生的散射信号最强，形成的速率散射信号值最大。12.抗原和抗体的比例是浊度形成的关键因素，抗原和抗体必须在一个适当的浓度才会出现最高结合率。当抗原过量时，由于钩状效应，形成的免疫复合物分子小，而且会发生再解离，使浊度下降，光散射减少。当反应液中抗体过量时，免疫复合物的形成随着抗

28、原量的增加而递增，光散射的强度也随之递增，因此，免疫浊度测定的反应体系中必须始终保持抗体过量，以保证免疫复合物的生成量与浊度的改变一致，这是免疫浊度测定的基本原则。13.在抗体过量的前提下，待测抗原在反应液中与抗体快速反应形成稳定的小复合物颗粒，产生散射光信号，该信号随复合物的增加和时间的延长(在抗体过量阶段)而动态性增强，形成速率峰值信号。在规定时间内反应介质中的抗体应将待测抗原全部结合，无游离抗原存在，此时再次加入已知的相应抗原，该抗原与剩余游离抗体结合反应形成复合物，可出现第二个速率峰值信号，表明第一次速率峰值信号是由全部的待测抗原产生，可以此速率峰值计算待测抗原的量。如再次加入已知相应抗原后不出现第二速率峰值信号，说明反应介质中已无游离抗体存在，第一速率峰值信号是由部分待测抗原产生，其测定结果有不准确因素，提示应将待测样本进一步稀释，重新进行检测，以获取检测全部抗原的真实浓度，保证检测的准确性。 (高荣升)