蛋黄中卵磷脂的提取项目报告.docx

1、蛋黄中卵磷脂的提取项目报告序言卵磷脂是过去五十年间既蛋白质、维生素被发现的最重要的营养素。它没有副作用，却在抗击疾病和促进健康方面有着稳定、长远、整体的效果。越来越多的营养学家、药物学家和医学家投身到对卵磷脂的研究中去。越来越多的国际权威研究组织为卵磷脂对人类健康的神奇作用都给予高度的评价！1996年9月在布鲁塞尔召开的卵磷脂国际会议上，赢得了世界营养专家、药物学家和医学家的普遍认同；1997年第七届卵磷脂国际会议曾作出结论：“总结这些研究成果，建议怀孕妇女服用适量的卵磷脂，这对于幼儿的智力发育是很重要的。”1998被联合国粮农组织(FAO)列为世界五大营养食品之一的高度认可1999在美国食品

2、与药物管理委员会（FDA）的批准下，所有的婴儿食谱中都要适量补充卵磷脂。 2001年被美国时代杂志上评选为“二十一世纪最伟大的健康食品”卵磷脂集中存在于脑及神经系统，血液循环系统、免疫系统及心、肝、肺、肾等重要器官。是构成神经组织的重要成分，属于高级神经营养素。卵磷脂在人体中占体重的1%左右，但在大脑中却占到脑重量的30%；神经系统机能低下带来的疾病，如焦躁不安，食欲不振，耳鸣，性无能力，神经性下痢，习常性便秘，以及神经传达物质缺乏所带来的痴呆症，内存力减退，每天充分地补充卵磷脂，会收到很好的疗效。麻省综合医院的J. H.克劳顿博士 啮齿动物口服由大豆卵磷脂合成的磷脂醚丝氨酸能够改善大脑功能，

3、预防老年性痴呆症 日本东京“Yakult Central Institute for Microbiological Research”的研究人员称大豆卵磷脂为天然营养食品，几乎没有什么副作用，每天吃多一点也没有危险。 世界卫生组织（WHO）用卵磷脂饲育怀孕的大鼠，其后代在智力测验（迷宫测试）中，记忆力显著优于未饲育卵磷脂的大鼠的后代。美国北卡罗来纳州DUKE大学心理学教授药学博士沃伦来克 “总结有关卵磷脂的所有研究成果，我们应当特别建议怀孕妇女服用适量的卵磷脂，这对于她们的婴儿的智力发育是很重要的。”北卡罗来纳大学营养学部教授及主任，会议的首席专家，医学博士、药学博士史蒂文泽瑟尔在试管中生长

4、的肝细胞会因为缺乏卵磷脂而死亡。进食缺乏卵磷脂的饮食仅数星期，肝功能就会出现异常，而且患肝癌的比率显著提高。 俄亥俄州州立大学泽瑟尔博士 第一章认识卵磷脂1844年法国人Gohley从蛋黄中发现卵磷脂（蛋黄素），并以希腊文命名为Lecithos（卵磷脂），英文名为Lecithin，也自此揭开了其神秘的面纱。卵磷脂是生命的基础物质，人类生命自始至终都离不开它的滋养和保护。 20世纪30年代，德国及中国东北从黄豆榨油过程中提炼并制造出了大豆卵磷脂。而在70年代，卵磷脂大规模生产成为可能，通过服用卵磷脂补充食物加工过程中的损耗，保持机体健康的方式，在美国、西欧，以及日本都受到青睐。又一个十年后，软胶

5、囊磷脂面世，风靡盛行全球。直至前年，生物提纯技术有了突破性的进展，纯粉末型的大豆卵磷脂出现了，人们抛弃了市场上含油、胆固醇及明胶的胶囊卵磷脂产品，正想购买粉末型的卵磷脂产品。早在1996年9月第七届卵磷脂国际会议上，卵磷脂（大豆磷脂）作为营养品，在增进健康及预防疾病方面所起到的重要的作用得到了医药学家和营养学专家们的普遍认同。1卵磷脂的定义 2卵磷脂的作用及功效目前市上销售的卵磷脂产品，实际上大多是大豆液体磷脂产品，其生物特性和蛋黄卵磷脂基本相似，但却又存在较大的差异。如果以益智健脑为主，选择蛋黄卵磷脂可能较好；如果需要更多地发挥血管清道夫的作用，则选择大豆卵磷脂较好。 美国食品药品监督管理局

6、（FDA）规定：在婴幼儿奶粉里，必须添加磷脂。 学生、知识分子及中老年人：卵磷脂能增强大脑活力，消除大脑疲劳，增强记忆力，提高学习工作效率。而且能修复受损伤的脑细胞，预防老年性痴呆症的发生。 长期饮酒、营养过剩及脂肪肝患者：每日服用10-15克卵磷脂，3-5个月后，血脂指标可恢复到正常水平。 糖尿病患者：每天食用20克以上的大豆卵磷脂，糖尿病人的恢复速度是相当明显的，很多病人可不必再注射胰岛素。对糖尿坏疽及动脉硬化等并发症患者，更为有效。 胆结石患者：每天坚持服用大豆卵磷脂，不仅能防止胆结石形成，而且还可以不同程度地分解、消除已形成的胆结石。 爱美的女士：卵磷脂是一种天然解毒剂，能分解体内的毒

7、素。通过增加血红素，为皮肤提供充分的水和氧气等营养，使皮肤变得光滑柔润 便秘人群：卵磷脂可以促进肠胃血液循环及肠胃蠕动，有助于预防及改善便秘蛋黄卵磷脂被誉为与蛋白质、维生素并列的三大营养素。属胚胎卵磷脂、有效成分含量高、更易被人体吸收，是大豆卵磷脂升级换代的产品。具有健脑益智、保护心脑血管、提高记忆力、预防老年痴呆、保护肝脏等功效。3产品选择与辨别大豆卵磷脂和蛋黄卵磷脂:目前市上销售的卵磷脂产品，实际上大多是大豆液体磷脂产品，其生物特性和蛋黄卵磷脂基本相似，但却又存在较大的差异。黄豆大约含0.51的磷脂，而卵磷脂只有磷脂的12-15%的含量。就是说，每克大豆中卵磷脂的含量只有0.0075克-0

8、.015克。如果每天需要摄取7.5克大豆卵磷脂，就得吃12千克黄豆。而蛋黄卵磷脂的含量较高。提纯产品更容易达到高纯度，根据使用的要求不同，含量从40%-95%都有，但是价格相对来说随着纯度的提高越高，一般医药用卵磷脂可以达到98%。二者的比较如下：由大豆萃取出来的磷脂含有磷脂酰胆碱（PC）、磷脂酰乙醇胺（PE）、磷脂酰肌醇（PI）和磷脂酸（PA）等；而蛋黄萃取出来的磷脂只包含PC和PE。在比较蛋黄卵磷脂与大豆卵磷脂中可发现，蛋黄卵磷脂的PC含量较高，但其必需脂肪酸却比较低。由于PC是神经递质乙酰胆碱的重要来源，蛋黄卵磷脂防治老年性痴呆较好；而必需脂肪酸为人体的新陈代谢所必需，故大豆卵磷脂的生理

9、活性较广。因此，不宜武断地下结论，大豆卵磷脂和蛋黄卵磷脂哪个更好。应根据身体的需要来选择，如果以益智健脑为主，选择蛋黄卵磷脂可能较好；如果需要更多地发挥血管清道夫的作用，则选择大豆卵磷脂较好。磷脂酰胆碱为主不饱和脂肪酸，功效主要是调节血液中脂肪的浓度，软化血管。从而降低因为血脂稠引起的高血压，同时可以很好的改善人的皮肤，使皮肤细腻光滑，磷脂酰胆碱的生理学上主要功效是为脑细胞提供营养，从而增强记忆，增强智力。对市场上众多品牌的卵磷脂保健品，很多消费者会感到难以选择，如何才能买到高品质的产品也是大家很关心的问题。首先，要看产品的外包装是否正规。是否明确提出了单位产品中卵磷脂的含量，含量高低也是决定

10、价格高低和品质高低的主要因素。进口保健品产品标签的说明书部分，必须有中文说明，而且要符合卫生部的规定，尤其是对产品的功效成分含量、保健作用、适宜人群和服用方法及服用量都必须有详细说明。同时还要注意产品的有效期，尤其是在夏季，由于卵磷脂不耐热，超过有效期或产品密封不良，其功效成分含量会大大降低，不能达到预期的保健效果。其次，要选择售后服务好的品牌。由于含有卵磷脂成份较高的食品不是普通食品，虽然没有任何副作用，但是服用后的反应因人而异。如果没有提供专业健康咨询，很可能造成消费者在服用过程中，因使用原因造成事倍功半的结果。第三，看产品本身。最好的卵磷脂产品是提取自鸡蛋中的，因此如果卵磷脂食品的原料来

11、源于鸡蛋，品质自然优越，但价格也会较高；目前市场上出售的许多卵磷脂胶囊大部分来源于大豆或大豆的下脚料，因此品质参差不齐，高品质的大豆磷脂胶囊类保健品应该是棕色、澄清、透明、无任何沉淀或杂质，胶囊光滑，如果颗粒与颗粒之间有轻微粘连，略微摇晃即可分开，属于正常现象。如果打开包装后发现瓶内有液体渗出，或胶囊颗粒粘连在一起，不能完整地分开或有拉丝现象，那么这种卵磷脂产品属于劣质产品第二章提取卵磷脂1卵磷脂的特性（实验提取原理）卵磷脂主要存在于蛋黄中，含量为10%左右。卵磷脂溶于乙醚、乙醇、甲醇、三氯甲烷等脂肪溶剂中，但不能溶解于丙酮，也不溶解于水，它的亲水性很强，能在水中膨胀而生成乳状液和胶体溶液，卵

12、磷脂也能与酸、碱和其他盐类如氯化镉等相结合。卵磷脂一般为淡黄色，但由于卵磷脂分子中含有不饱和脂肪酸，所以很容易氧化而逐渐由淡黄色变为棕褐色。卵磷脂在空气中易被氧化，同时它能与蛋白质及其他物质生成化合物，所以卵磷脂一般很难得到结晶状态，而是无晶性物质。2实验准备 熟鸡蛋若干 烧杯（500ml*1 250ml*1 1000ml*1 100ml*2） 玻璃棒 研钵 胶头滴管 蒸发皿 离心管 抽滤瓶 布氏漏斗 试管夹 离心机 抽滤机 95%乙醇溶液 10ml量杯*2氯仿溶液 丙酮溶液 50ml量杯*1 托盘天平 电炉3实验步骤1)取清水煮的熟鸡蛋一个，剥开取蛋黄于研钵中研细2)加入10ml 95%乙醇

13、研磨，再加入10ml 95%乙醇充分研磨3)用抽滤机减压过滤，滤渣经充分过滤干后，移入研钵中4)向滤液中加入10ml 95%乙醇，研磨、减压过滤5)抽滤结束后，合并两次滤液，将其移入蒸发皿内6)将蒸发皿置于沸水溶液上蒸去乙醇至干，得到黄色油状物7)冷却后，加入5ml氯仿，搅拌使油状物完全溶解8)加入15ml丙酮，搅拌，在离心管中有磷脂折出9)加丙酮将离心管调平衡10)平衡调节完成后用离心机进行第一次离心操作，6000r/10min11)取出离心管，将管中上清液倒入废液桶，在沉淀中再次加入丙酮12)调平衡，进行二次离心，8000r/10min13)再次将离心管中上清液倒入废液桶内，所得沉淀即产品

14、卵磷脂14)将产品放入冰箱中冷藏，待检测4提取流程图 蛋黄（含蛋白质，脂肪，卵磷脂，脑磷脂等） 乙醇提取 提取液 残渣（蛋白质，脑磷脂等） 乙醇溶液 蒸去乙醇 油状物（脂肪，卵磷脂） 氯仿 氯仿溶液 丙酮 氯仿丙酮溶液 沉淀（卵磷脂）第三章卵磷脂的检测检测原理 1)三甲胺的检验 取干燥试管一支，加入少量提取的卵磷脂以及25mL 氢氧化钠溶液，放入水浴中加热15min，在管口放一片红色石蕊试纸，观察颜色有无变化，并嗅其气味。将加热过的溶液过滤，滤液供下面检验。2)不饱和性检验 取干净试管一支，加入10滴上述滤液，再加入12滴3% 溴的四氯化碳溶液，振摇试管，观察有何现象产生。3)磷酸的检验 取干

15、净试管一支，加入10滴上述滤液和510滴95%乙醇溶液，然后再加入510滴钼酸铵试剂，观察现象；最后将试管放入热水浴中加热510min，观察有何变化。4)甘油的检验 取干净试管一支，加入少许卵磷脂和0.2g 硫酸氢钾，用试管夹夹住并先在小火上略微加热，使卵磷脂和硫酸氢钾混熔，然后再集中加热，待有水蒸气放出时，嗅有何气味产生。A.水解法1.实验器材 大试管 布氏漏斗 胶头滴管 试管夹 烧杯（一套） 量杯 电炉 抽滤机 蒸馏水 滤纸 ph试纸 20%NaOH 10%醋酸铝 1%硫酸铜 硫酸 硝酸 碘化秘钾2.实验步骤1水解：（1）取一支干燥大试管，加入提取的产品卵磷脂 （2）加入5ml 20%氢氧

16、化钠溶液 （3）放入沸水浴中10min用玻璃棒加以搅拌，使卵磷脂水解 （4）进行冷却（5）用抽滤机进行过滤，抽滤纸上有白色沉淀2.脂肪酸的检测：（1）取滤纸上的沉淀于试管中（2）加滴20%NaOH与水5ml，用玻璃棒使其溶解（3）用抽滤机过滤得澄清液（4）用硝酸酸化（5）用胶头滴管加入两滴10%醋酸铅，观察清液变浑浊，液体中有絮状物出现3.甘油的检测：（1）取一支试管，加入1%CuSO4 1ml于试管中，滴加2滴20%NaOH溶液（2）振摇，溶液呈蓝色，有些许絮状物（3）加入1ml水解液（4）振摇，溶液稍许浑浊，颜色变深4.胆碱的检测：（1）加入1ml水解液于试管中（2）滴加硫酸酸化，以pH试

17、纸试之（3）加入1滴碘化铋钾溶液，观察得溶液呈淡黄色且有絮状物B. 薄层层析法（薄层色谱法）薄层层析法简称TLC法，是过去儿十来发展起来的一种重要分析方法，具有设备简单、快速、吸附剂和展开剂选样灵活、适合于小样分析、分析结果直观等优点.基于TLC法的以上特点以及卵磷脂产品的特性，本文尝试用TLC法对卵磷脂产品纯度进行定性分析1 仪器与试剂1.1仪器与设备 方形层析缸，20 cm x 20 cm玻璃板，烘箱，真空泵，250 um固定厚度涂布器.1. 2 试剂与材料1.2.1展开剂 所用展开剂组成中各物质的体积分数比为氯仿:甲醇:醋酸:水=25: 15: 4: 2.1.2.2 显色剂 将40. 1

18、1g三氧化钼加入到1L 12. 5 mol/L硫酸溶液中，加热至沸，使三氧化钼完全溶解于硫酸中.称取1. 78 g钼粉加入到500mL上述硫酸溶液中，加热至微沸,15 min后进行冷却，滤去不溶物，将此溶液和上述硫酸溶液等体积混和，此混合液称为备用液，在冰箱中可保存儿个月.取1份备用液加2份水和3份乙醇，即制成显色剂，此显色剂应现用现配.1.2.3 自制粗卵磷脂 用鸡蛋黄制得粉状粗卵磷脂.1.2.4 自制卵磷脂 将上述自制粗卵磷脂用低级醇分提，醇溶液通过硅胶层析柱，然后用氯仿一甲醇混和液进行梯度洗脱，可获得外观为淡黄色的蜡状卵磷脂.1.2.5 标准品 卵磷脂标准品由美国Sigam。公司生产，其

19、中卵磷脂的质量白分含量不低于97%。以上所用试剂均为分析纯，水为蒸馏水.2 实验部分2.1 制板称取20g孔径为6 nm的硅胶60,用45 mL 1mol/L的碳酸钠溶液稀释，置于研钵中研磨，调成均匀的糊状物，用涂布器将糊状物均匀地铺在玻璃板上，铺完后于室温下风十，使用前在110烘箱中活化.2. 2 点样 用毛细竹在层析板距下端2. 5 cm处点三个样，分别为自制卵磷脂粗样品、自制卵磷脂样品和标准品，样点的间距为3 cm. 2. 3 展开 将展开剂置于层析缸中平衡30 min，使溶剂的蒸气压在层析缸中达到平衡，然后放入层析板，溶液自下而上在层析板上展开，上升速度约6 cm/h当展开到层析板高度

20、的3/ 4处即可取出，置室温下干燥.2. 4 显色 将显色剂均匀地喷雾在层析板上，可立即看到有蓝色斑点出现. 3 结果与讨论3. 1 薄层色谱图 三种样品的薄层色谱图如图1，其Rf值见表1,从薄层色谱图可知自制粗卵磷脂样品有4个斑点.为进一步确定斑点是什么物质，分别采用茚三酮试剂、Dragendorffs试剂、氢氧化铵一三氯化铁试剂、硝酸沛铵试剂、氯化铁一磺基水杨酸试剂等显色剂对斑点进行了多次显色试验.综合各显色试验结果，可以初步得知自制粗卵磷脂主要含有磷脂酞乙醇胺、磷脂酸和肌醇磷酷二种杂质. 表1 3种样品的R/值Rf值 0. 11 0.25 0.36 0. 35 0.26 0. 28A为肌

21、醇磷脂; B为磷脂酰胆碱；C为磷脂酸;D为磷脂酰乙醇胺，图1 3种样品的薄层色谱图1.自制粗卵磷脂; 2自制卵磷脂; 3标准品 从图1及表1可以看到，自制卵磷脂与进口卵磷脂具有相近的斜值，一者均为1个斑点，目无拖尾现象.为了进一步检验自制卵磷脂是否含有其他组分，笔者进行了一次层析展开，并采用了上述多种显色剂对斑点进行显色试验，结果仍为一个斑点.由此可以推断，自制卵磷脂产品的纯度基本上达到进口产品的纯度. 3. 2 样品的处理及取量 本试验在由氯仿一甲醇一水组成的混合液进行溶样后，点样展开时斑点扩散现象较严重.这可能是因为展开剂极性太强，同时影响吸附剂的活性.故建议采用氯仿一甲醇混合液溶样最佳，

22、样品用量20 mg，点样体积10 uL，原点直径约2 mm时，分辨率较高. 4 结论采用本方法可以简单、快速、直观地判断自制卵磷脂是否含有其他组分，样品纯度是否达到了要求.这是一种初步判断卵磷脂纯度的有效方法，在生产及科研过程中较为实用.如果要进一步确定卵磷脂产品中卵磷脂的含量，可以结合光密度扫描法、定磷法等方法对产品进行定量分析.5薄层层析法注意事项：5.1铺板 铺板用的匀浆不宜过稠或过稀：过稠，板容易出现拖动或停顿造成的层纹；过稀，水蒸发后，板表面较粗糙。匀浆配比一般是硅胶G:水=1：23，硅胶G:羧甲基纤维素钠水溶液=1:2。研磨匀浆的时间，根据经验来定，与空气湿度有关，一般通过拿起研棒

23、时匀浆下滴的情况来判断，越稠越难下滴。匀浆的稀稠除影响板的平滑外，也影响板涂层的厚度，进一步影响上样量。涂层薄，点样易过载；涂层厚，显色不那么明显。通常，板的质量对薄层鉴别的影响不是很大，影响最大的是展开剂的配制和展开系统的饱和。 5.2点样 尽量用小的点样管。如果有足够的耐性，最好只用1微升的点样管。这样，点的斑点较小，展开的色谱图分离度好，颜色分明。样品溶液的含水量越小越好，样品溶液含水量大，点样斑点扩散大。样品溶液的溶剂一般是无水乙醇、甲醇、氯仿、乙酸乙酯。点好样的薄层板用电吹风的热风吹干或放入干燥器里晾干。 5.3展开剂配制 选择合适的量器把各组成溶剂移入分液漏斗，强烈振摇使混合液充分

24、混匀，放置，如果分层，取用体积大的一层作为展开剂。绝对不应该把各组成溶液倒入展开缸，振摇展开缸来配制展开剂。混合不均匀和没有分液的展开剂，会造成层析的完全失败。各组成溶剂的比例准确度对不同的分析任务有不同的要求，尽量达到实验室仪器的最高精确度，比如：取1ml的溶剂，应使用1ml的单标移液管，移液管应符合计量认证要求，尽管多数时候这不是必须的。 5.4展开系统的饱和 一般使用的是双槽的展开缸，一槽用来放展开剂，另一槽可加入氨水或硫酸。把待展开的板放入两槽间的平台，斜架着，盖上展开缸的盖子。让展开剂的蒸气充满展开缸，并使薄层板吸附蒸气达到饱和，防止边沿效应，饱和时间在半个小时左右。展开时难免要打开

25、盖子把薄层板放入展开剂中，不过对薄层板与蒸气的吸附平衡影响不大，当然动作应该尽量轻、快。 5.5温湿度的控制 温湿度对薄层影响都很大。不冻结的前提下，通常温度越低分离越好，较难的分离需在低温下分离，例如人参皂苷。湿度的影响，估计主要是影响薄层板的吸附能力，导致选择性（容量因子）的变化，湿度应根据实际情况确定。温度控制使用空调器或冰柜，湿度控制是通过在另一展开槽放置相应浓度的硫酸。 显色 5.6喷显色剂显色最重要是有好的雾化器。第四章卵磷脂的应用前景卵磷脂除了本身就具有较高的营养价值以外，还因为它具有分散性、柔软性和防氧化性的功能，也是一种优良的乳化剂、稳定剂和分散剂，所以被广泛应用于食品、医药等行业。1、在食品中的应用 乳化剂抗氧化剂 发泡剂 催长剂 2、医药工业中应用 防治动脉硬化症 改善脂肪代谢 防止肝功能障碍 速效健脑作用