Empower3网络版系列高效液相色谱的日常使用和维护保养.docx

1、Empower3网络版系列高效液相色谱的日常使用和维护保养1目的规范本实验室Empower3网络版系列高效液相色谱的日常使用和维护保养，保证仪器的正常运转，确保检测工作的顺利进行。2范围适用于本实验室Empower3网络版系列高效液相色谱系统的日常使用和维护。3职责实验员：实验员负责Empower3网络版系列高效液相色谱系统的日常使用和维护。仪器维护人员：监督实验员对Empower3网络版系列高效液相色谱系统的日常使用和维护。实验室主管：监督本操作规程的实施。4内容4.1系统组成本系统由Waters e2695分离单元、Waters2998二极管阵列检测器、计算机、WatersEmpower3

2、色谱工作站和数据库服务器组成。各部件均有电源插头。Waters e2695分离单元包括四元梯度洗脱的溶剂输送系统，四通道在线真空脱气机，可容纳120个进样瓶的自动分离单元，柱温箱，内置的柱塞杆密封垫清洗洗脱，溶剂瓶托盘，显示器，用户界面。4.2开机4.2.1依次打开数据服务器、Waters e2695分离单元、Waters2998二极管阵列检测器、计算机、WatersEmpower3色谱工作站的插头电源。4.2.2依次打开数据服务器设备电源，登录服务器。4.2.3 Waters e2695分离单元、Waters2998二极管阵列检测器、计算机的设备开关。4.2.4连接Waters e2695分

3、离单元后，约1分钟会进入自动校验，约三分钟内各部件的初始化完成，待主屏幕上方标题区出现“ldle”时，仪器进入待命状态。4.3溶剂管路系统的准备4.3.1流动相脱气待流动相准备齐全，放入流动相托盘中，按【Menu/Status】,进入“Status（1）”屏幕界面。4.3.2灌注当色谱仪管路中没有溶剂或系统中有空气时，按干灌注(Dry Prime),注入流动相，否则，进行湿灌注（Wet Prime）以排除气泡。干灌注：按主控制面板【Menu/Status】,进入“Status（1）”界面，按【Direct Function】，选择【Dry Prime】，择溶剂通道，如Open A，选【Dura

4、tionlli】按数字键，输入5分钟，按“Continue”，待限定时间结束后，重复操作，使所需要的通道注满流动相。湿灌注：“Status（1）”界面，选择溶剂通道，输入100%，按【Direct Function】，选择【Wet Prime】，点击【OK】，根据界面提示设置流速【FLOW Rate】（一般为5 ml/min），设置脱气时间【Time】（一般为5 min），选确认脱气，待脱气结束候，重复上述操作，灌注其他溶剂通道。4.4样品管理系统的准备4.4.1冲洗自动进样器在“Status（1）”界面，光标选“Composition”,输入流动相的组成。按【Direct Function】

5、，光标选“Purge injector”，按【Enter】，显示“Purge injector”界面，输入“Sample Loop Volumes 6.0”，光标下移“Compression Check，按任意数字键，按【OK】。4.4.2冲洗进样针在主控制面板下，按【Diag】，显示“Diagnostics”界面，按【Prime Ndl Wash】，显示“Prime Needie Wash”界面，按【start】,半分钟内见溶剂从废液排放口流出。按【Close】、【Exit】，返回主控制界面。4.4.3冲洗柱塞杆密封垫在主控制面板下，按【Diag】，显示“Diagnostics”界面，按【P

6、rime Seal Wash】，显示“Prime Seal Wash”界面，按【Start】，半分钟内见溶剂从废液排放口流出。按【Half】、【Close】、【Exit】，返回主控制界面。4.5进样盘装置的使用打开进样盘舱门，控制面板显示“Door is Open”，进样盘取出（分为A、B、C、D、E盘），把进样瓶放入样品盘，把样品盘放入转盘，按【Next】,直至所有样品装盘完毕，关好舱门。4.6色谱柱平衡打开柱温箱，换上需要使用的色谱柱和流动相，进入“Status（1）”显示界面，选择通道、设置流速（由低升高）、柱温，按【Enter】开始注入流动相，通常约1530分钟，色谱柱可达到平衡，可以

7、开始进样，采集数据。5 Empower3软件的应用4.7.建立数据采集方法4.7.1.登录双击电脑显示屏上的“Empower”快捷图标，出现Empower登录界面，输入用户名和密码。单击高级界面，选择选择允许运行界面为“Pro界面”，点击确定，然后选择待选定的操作项目以及相应色谱系统（处理服务器），单击确定，进入“Empower3”控制界面。4.7.2编辑仪器方法和方法组4.7.2.1采集栏单击“方法组编辑向导”。4.7.2.2选择“新建”选项。4.7.2.3弹出仪器方法编辑器。4.7.2.4单击“W2690/5”，弹出2695编辑界面。4.7.2.5根据需要内容编辑流量、温度、溶剂、启用通道

8、（其他内容默认）。4.7.2.6点击W2998，弹出“2998PDA检测器”编辑界面,将灯开启。4.7.2.7采集3D数据，在通用栏中选择启用3D数据，输入检测波长的范围。4.7.2.8采集2D数据，点击“2D通道”，最多可同时采集8个不同波长的通道的数据。4.7.2.9点击“文件”，选择“另存为”，输入仪器方法名称，点击“保存”;点击“文件”，选择“退出”。4.7.2.10在被选项中选择所需的仪器方法名称，点击“下一步(N)”。4.7.2.11在下拉菜单中选择所需的处理方法和报告方法(如果没有合适的方法选择“无处理”、“无报告”)，点击下一步。4.7.2.12输入方法组名称，单击“完成”。4

9、.8进样4.8.1单进样:点击，进入定义单进样参数编辑界面，输入样品名、功能、方法组、进样瓶号、进样体积、运行时间，等参数，点击“进样”。4.8.2使用样品组方法进样4.8.2.1选择“运行样品”，进入样品列表，输入进样瓶位置、样品名称、进样体积、进样次数、功能（样品进样、标准进样）、方法组/报告或导出方法、运行时间等参数。4.8.2.2点击“文件”，选择“样品组方法另存为（A）”。4.8.2.3点击样品界面的绿色按钮，运行“样品组方法”。4.8建立处理方法4.8.1建立2D数据处理方法4.8.1.1主界面单击“浏览项目”键，选择目标项目，目标仪器，在“样品组”中选择目标样品组。4.8.1.2

10、在样品组上点击鼠标右键选择“查看相关通道”，样品组在单个通道中显示。4.8.1.3选择定最低浓度的标样,点击鼠标右键,选择下拉菜单中的查看,会显示未处理的色谱图形。4.8.1.4点击处理方法向导快捷键,选择创建新处理方法,点击确定。4.8.1.5确认处理类型为LC,积分方式可选择为传统,再点击使用处理方法向导,选择确定。4.8.1.6常按鼠标左键,选择色谱图上最窄峰。(注:在色谱图区域方可以放大某个需要监测的峰。点击鼠标右键全视图可以还原色谱图。)，点击下一步。4.8.1.7在色谱图的积分界面选择一段典型基线作为积分的阈值，点击下一步。4.8.1.8常按鼠标左键,在基线上设置积分的起止时间点。

11、4.8.1.9建议选择最小峰高,选择所要积分的高度最小峰(或键入相应数值)。小于此峰高90%的峰将不被积分。点击下一步。4.8.1.10定量方法选择面积,组分信息选择含量,校正类型选择线性。点击下一步。4.8.1.11跨通道内标样界面点击否。4.8.1.12因为选择的是标样,点击峰1可以看到一个下拉菜单选择相应的组分名称或者键入运行样品相应的名称。添加组分名称相匹配的标准含量,然后点击下一步。4.8.1.13如果是多点校正样品，跳过添加含量的窗口直接点击下一步。(单点校正可在这里添加含量)。4.8.1.14选择外标法。4.8.1.15选择单一内标样,需要在下拉菜单中选择或键入内标相应的名称,然

12、后点击下一步。4.8.1.16选择多重内标需要输入所有内标的名称。4.8.1.17为处理方法命名,点击完成。色谱图界面会显示该处理方法应用后的色谱结果,包括积分。4.8.1.18如需为积分方法添加积分事件,鼠标右键点击色谱图窗口,选择添加积分事件。积分事件所示功能会立刻应用于处理方法中。4.8.1.19编辑处理方法的高级功能需要选择快捷键。有任何更改均需再次保存处理方法。4.8.1.20点击峰表底部可预览2D通道和峰。4.8.1.21点击“浏览项目”键,选择“通道”或“样品组”标签栏,右键点击目标样品组或通道并选择处理。4.8.1.22在处理界面,选择使用指定的处理方法,选择相应的处理方法名称

13、,点击清除校正,选择校正并定量。4.8.1.23点击确定,数据处理,产生结果。可在结果栏中查看。4.8.2建立3D数据处理方法4.8.2.1点击“浏览项目”键,在“样品组”中选择目标样品组。4.8.2.2在样品组上点击鼠标右键选择查看相关通道,样品组中各个数据在单个通道中显示。4.8.2.3选择定量最低浓度的标样,点击鼠标右键,选择下拉菜单中的查看。4.8.2.4在预览界面选择“轮廓线”标签栏,会显示未处理的轮廓图。4.8.2.5从处理或右键下拉菜单中选择提取色谱选项。4.8.2.6键入所需要提取的波长,按回车键,得到该波长的色谱图。4.8.2.7点击处理方法快捷键,选择创建新处理方法,确认处

14、理类型为PDA,积分方式可选择为传统,再点击使用处理方法向导,点击确定。4.8.2.8常按鼠标左键,选择色谱图上最窄峰。(注:在色谱图区域内可以放大某个需要监测的峰。点击鼠标右键选择全视图可以还原色谱图。)4.8.2.9在色谱图的积分界面选择一段平滑的基线作为积分的阈值,点击下一步。4.8.2.10常按鼠标左键,在基线上选取积分的起止时间点。4.8.2.11建议选择最小峰高,选择所要积分的高度最小峰(或键入相应数值)。小于此峰高90%的峰将不被积分。点击下一步。4.8.2.12定量方法选择面积,组分信息选择含量,校正类型选择线性。点击下一步。4.8.2.13跨通道内标样界面点击否。4.8.2.

15、14因为选择的是标样,点击峰1可以看到一个下拉菜单选择相应的组分名称或者键入运行样品相应的名称。添加组分名称相匹配的标准含量,然后点击下一步。4.8.2.15如果是多浓度点的一组标样,跳过添加含量的窗口直接点击下一步。(单一浓度可以在这里添加含量)。4.8.2.16选择外标法。4.8.2.17选择内标法单一内标样校正,需要在下拉菜单中选择或键入内标相应的名称,然后点击下一步。4.8.2.18选择多重内标需要输入所有内标的名称。4.8.2.19 PDA纯化及匹配选项。4.8.2.20为处理方法命名,点击完成。色谱图界面会显示该处理方法应用后的色谱结果,包括积分。4.8.2.21在“文件”下拉菜单中选择“另存为”方法组,将该处理方法存入方法组。(注: 3D数据必须用方法组处理。)4.8.2.22如需为积分方法添加积分事件,鼠标右键点击色谱图窗口,选择添加积分事件。积分事件所示功能会立刻应用于处理方法中。4.8.2.23编辑处理方法的高级功能需要选择快捷键。4.8.2.24点击“浏览项目”键,选择“通道”或“样品组”标签栏,右键点击目标样品组或通道并选择处理。4.8.2.2