微生物与生化药学 问答题.docx

1、微生物与生化药学 问答题微生物与生化药学 问答题第二章 基因工程制药1. 利用基因工程技术生产药物的优点？答：1、大量生产过去难以获得的生理活性蛋白和多肽，为临床使用提供有效的保障；2、 可以提供足够数量的生理活性物质， 以便对其生理、生化和结构进行深入的研究，从而扩大这些物质的应用范围；3、可以发现、挖掘更多的内源性生理活性物质；4、内源生理活性物质在作为药物使用时存在的不足之处，可通过基因工程和蛋白质工程进行改造和去除；5、可获得新型化合物，扩大药物筛选来源。2. 基因工程药物制造的主要步骤？答：目的基因的克隆；构建 DNA 重组体；将 DNA 重组体转移入宿主菌构建工程菌；工程菌的发酵；

2、外源基因表达产物的分离纯化；产品的检验等。3. 化学合成目的基因的先决条件？答：较小的蛋白质或多肽的编码基因可以采用人工化学合成，其先决条件：已知目的基因的核苷酸序列或蛋白质的氨基酸序列，按相应的密码子推导出 DNA 的碱基序列。4. 人工合成基因的限制有哪些？答：1、不能合成太长的基因，5060 个碱基对；2、人工合成碱基对时，遗传密码的简并会为选择密码带来很大的困难：3、费用高。5. 基因工程宿主菌应满足那些要求？目前应用最广泛的宿主菌有哪些？答：1、容易获得较高浓度的细胞；2、能利用廉价易得的原料；3、不致病、不产生内毒素；4、发热量低， 需氧低，适当的发酵温度和细胞形态；5、容易进行代

3、谢调控；6、容易进行 DNA 重组技术操作；7、产物的产量、产率高，产物容易提取。宿主菌可分两大类：1、原核细胞：大肠杆菌、枯草芽孢杆菌、链霉菌；2、真核细胞：酵母菌、丝状真菌、哺乳动物细胞。6. 表达载体须具备哪些条件？常用载体有哪些？答：1、能够在宿主细胞中复制并稳定地保存。2、具多个限制酶切点，但每种切口最好只有 1 个，以便与外源基因连接。3、具有某些标记基因，便于进行筛选。4、所产生的 mRNA 必须有翻译的起始信号。5、具有很强的启动子。6、有很强的终止子。常用载体有：1、细菌细胞的质粒。2、噬菌体载体。7. 真核基因在大肠杆菌中的表达形式？答：有三种形式：(1)融合蛋白的表达形式

4、。（由一段短的原核多肽和真核蛋白结合在一起的蛋白质,称为融合蛋白.。 ）(2)非融合蛋白的表达形式。(3)分泌型表达形式。8. 表达用的酵母菌应满足哪些条件？答：表达用的酵母宿主菌应具备：1 体生长力强.2 菌体内蛋白酶要较弱.3 菌株性能稳定.4 分泌能力强。9.基因工程菌在发酵过程中对发酵罐有哪些要求？答：要提供菌体生长的最适宜条件；培养过程不得污染，保证纯菌培养； 培养及消毒过程中不得游离出异物；不能干扰细菌代谢活动。10.离子交换层析的原理？答：当离子交换剂处于水溶液中时，活性离子可以从活性基因上解离下来，在基质骨架与溶液间自由迁移，并可与溶液间的同性离子，因与活性基因的化学亲和力不同

5、而发生交换，即发生离子交换作用。11.疏水层析的基本原理？答：蛋白质表面多由亲水基团组成，也有一些疏水性较强的疏水区。 在高盐浓度时，蛋白质表面疏水部位的水化层被破坏，暴露出疏水部位，疏水作用增强，与固定相上的疏水基团产生疏水性作用而被吸附；盐浓度降低时蛋白质疏水作用减弱，目的蛋白质被逐步洗脱下来。12.亲和层析的基本原理？答：通过将具有亲和力的两个分子中一个固定在不溶性基质（也称载体）上，利用分子间亲和力的特异性和可逆性，对另一个分子进行分离纯化。（被固定在基质上的分子称为配体，配体与基质共价结合，构成亲和层析的固定相，称为亲和吸附剂。 ）13.凝胶过滤层析的优缺点？答：优点：设备简单、操作

6、方便、样品回收率高、实验重复性好、不改变样品生物学活性。缺点：分辨率较低，尤其是相对分子质量相近的分子之间。第三章 细胞工程制药1.动物细胞的生理特点？答：1 细胞分裂周期长（动物细胞分裂所需时间一般为 1248h。 ） 。2 细胞生长需贴附于基质，有接触抑制现象。3 二倍体细胞寿命有限（异倍体细胞系寿命长） 。4 对生长环境要求敏感。5 培养基要求高。6 合成的蛋白质有修饰。2.动物细胞培养时加入血清的作用机制？答：提供基本营养物质； 提供激素和各种生长因子；提供贴附因子和伸展因子；对培养中的细胞起到某些保护作用；提供 PH缓冲物质，调节培养基 PH；影响培养系统中的某些物理特性如：剪切力、

7、黏度、渗透压和气体传递速度等。3.无血清培养基的优点？答：优点：可避免血清批次间的质量变动，提高细胞培养和实验结果的重复性。避免血清对细胞的毒性作用和血清源性污染； 避免血清组分对实验研究的影响；有利于体外培养细胞的分化；可提高产品的表达水平并使细胞产品易于纯化。（缺点：主要表现为细胞的适用范围窄，细胞在无血清培养基中易受某些机械因素和化学因素的影响，培养的保存和应用不如传统的合成培养基方便。 ）4.动物细胞大规模培养的方法有哪些？答：根据培养细胞的种类：原代细胞培养和传代细胞培养。根据培养基的不同：液体培养和固体培养。 根据生产实际：贴壁培养、悬浮培养和贴壁-悬浮培养（假悬浮培养） 。5.动

8、物细胞悬浮培养的优缺点？答：优点：适用的细胞较广；容易更换培养液； 容易采用灌流培养的方式使细胞达到高密度。缺点：操作比较麻烦； 培养条件不易均一；传质、传氧较差；不能有效监测细胞的生长；需要合适的贴附材料和足够的面积； 扩大培养比较困难，投资大。6.动物细胞贴壁培养的优缺点？答：优点：操作简单，培养的体积大、成本低；培养条件比较均一； 传质、传氧较好；传代时无需消化分散； 容易扩大培养规模。缺点：由于细胞体积较小，难采用灌流培养，细胞密度较低7.动物细胞包埋或微囊培养的优点？答：包埋在在体内的细胞可以获得保护，避免了剪切力的损害。可以获得较高的细胞密度，一般都在 107108 个/ml 以上

9、。可以使产品浓缩在微囊内，利于下游产物的纯化。可以采用多种生物反应器进行大规模培养。8.动物生物反应器的作用、类型及应满足哪些条件？答：应满足的条件：材质无毒；结构的传质、传热和混合性能；密封性好；参数能自动检测和调控；长期连续运转；内面光滑、无死角；拆装、清洁、维修和消毒；设备成本。动物生物反应器的作用：是给动物细胞的生长代谢提供一个最优化的环境，从而使其在生长代谢过程中产生出最大量、最优质的所需产物。反应器类型：搅拌罐式反应器、气升式生物反应器、中空纤维式生物反应器、透析袋或膜式生物反应器和固定床或流化床式生物反应器。第四章抗体工程制药1.免疫导向疗法为什么没有成功？从哪些方面可以对单克隆

10、抗体进行改造？答： 阻碍： A 单克隆抗体的均是鼠源性抗体， 应用于人体可内可产生人鼠源抗体， 加速了排斥反应， 在人体内的半衰期只有 5-6h，难以维持有效药物的作用靶组织时间。B完整的抗体份子 Ig 分子质量过大，难以穿透实体肿瘤组织，达不到有效的治疗浓度。改造：A降低单克隆抗体的免疫原性。 B降低单克隆抗体的相对分子质量（1）人-鼠嵌合抗体：由人抗体的恒定区与鼠源单抗的可变区融合得到。（2）.改型抗体：把鼠抗体的 CDR 序列移植到人抗体的可变区内，所得到的抗体（3）小分子抗体小分子抗体包括：Fab、 Fv 或 ScFv 、 单域抗体、 最小识别单位。这些部位都可以改造。2.单克隆抗体的

11、制备流程及方法。流程：将有用抗原免疫过的淋巴细胞与骨髓瘤用 PEG 进行杂交融合。把融合的细胞在 HAT 培养基上选择出来。将选择后的整合细胞分散，培养成杂交瘤细胞。使能产生单克隆抗体的杂交瘤细胞克隆化。杂交瘤细胞抗体的性状的鉴定。单克隆抗体的大量制备，一是在培养液中大更是繁殖，二是注入纯系小鼠腹腔中大量繁殖。单克隆抗体的纯化。制备方法：体内诱生法和体外法。3.动物体内诱生法制备单克隆抗体的优缺点答：优点：简单，比较经济，所得单克隆抗体量较多且效价较高，可有效地保存杂交瘤细胞株和分分离已污染的杂菌的杂交瘤细胞株。缺点：小鼠腹水中混有来自小鼠的多种杂蛋白，给纯化带来难度。4.鼠源性单克隆抗体改造

12、后的抗体类型及各自的特点？答：人-鼠嵌合抗体：保持鼠源性单克隆抗体的抗原结合特异性，但对人免疫原性大幅下降了。改型抗体：鼠源性单克隆抗体的互补决定区（ CDR 区）序列替换人的 Ig 分子中的 CDR 序列。基本消除免疫原性。小分子抗体：Fa b 将 I的重链在铰链区的 C 端裂解，获得两个完全相同的抗原结合片段。才铰链区和二硫键相连。有完整的生双价抗体活性，相对分子质量减少为三分之一，排斥反应也降低，人体内很稳定。Fv 含有 L 链和 Fd 链一半的 N 端可变区。有完整的抗体相似的结能力，相对分子质量减少为六分之一。单链抗体 scFv：单链易改造；体内半衰期短，免疫原性低；稳定性低，重轻链

13、之间的分子间作用力弱；功能单一，只能与一种抗原特异性结合；亲和力低，稳定性差，体内清除过快。域抗体：只由一个 CDR 构成。5多功能抗体的优点。答：具有高亲和力性能，由于具有多个结合价，可同时与细胞膜上相邻的两个或多个靶抗原结合，与肿瘤细胞表面抗原的多价结合有利于肿瘤的影像分析及治疗。6.有应用价值的多功能抗体应具备有哪些特征。能高选择性，高亲和性地同靶抗原或肿瘤相关抗原结合。在血循环中，与效应细胞或细胞毒触发分子有较低亲和力。应为人源化抗体，最大限度地减少人抗鼠蛋白的排斥反应，使得复给药不受限制。分子应大小适中，既能渗透到肿瘤组织内部，又能保证适当的滞留时间。7.抗体导向酶-前药疗法中酶和前

14、药有哪些要求？答： （1）对酶的要求：活化酶最好来自非哺乳动物，而人体内不存在相应的类似物，以保证高度的特异性。酶还能通过化学交联与单抗结合，在较长的一段时间内保持稳定性和活性。（2）对前药的要求：前药本身应无活性或活性很低，只能被相应的酶活化为高度扩散性的小分子，以实现在肿瘤组织内的广泛分布和杀伤肿瘤细胞。而且前药还 应具有极短的生物半衰期，避免重新进入循环产生非特异性毒性。第六章 酶制药工程1.用微生物生产酶制剂的优点：答： （1）微生物种类多，品种齐全（2）微生物生长繁殖快，生长周期短，产量高（3）培养方法简单，原料来源丰富，价格低廉，经济效益高，并可以通过控制培养条件来提高酶的产量（4

15、）微生物具有较强的适应性和应变能力2.优良的产酶菌株应满足哪些要求：答：1 繁殖快，产酶量高，酶的性质应符合使用要求，最好是产生胞外酶的菌，2 不是致病菌，在系统发育上与病原体无关，也不产生有毒物质，3 产酶性能稳定，不易变异退化，不易感染噬菌体，4 能利用廉价的原料，发酵周期短，易于培养3.固定化酶的优点：答：1 可以较长时间内多次使用，酶的稳定性高。2 反应后，酶与底物和产物易于分开，易于纯化，产品质量高。3 反应条件易于控制。4 酶的利用率高。5 比水溶性酶更适合于多酶反应。4.物理吸附法制备固定化酶的优缺点：答：优点：操作简单，可选用不同电荷和不同形状的载体，固定化过程和纯化过程同时实

16、现，酶失活后载体仍可以再生。缺点：最适吸附酶量五规律可循，对不同的载体和不同酶的吸附条件不同，吸附量和酶活力不一定成平行关系，同时载体与载体之间结合力不强，酶易于脱落，导致酶活力下降并污染产物。5.共价结合法制备固定化酶的优点和缺点;答：酶以共价键结合于载体上即将酶分子上非活性部位功能团与载体表面反应基团进行共价结合的方法。优点：酶与载体结合牢固，稳定性好，缺点： 条件苛刻， 操作复杂， 而且采用了比较强烈的反应条件， 会引起酶蛋白的高级结构的变化，破坏活性中心，所以往往不能得到比活高的固定化酶，甚至底物的专一性等酶的性质也会发生变化。6.酶固定化过程中选择载体的依据以及载体需满足哪些条件：答

17、：依据：1 酶促反应的性质 ；2 底物类型； 3 固定化方法。载体需满足的条件：1.固定化过程中不引起酶变反性 。2.对酸碱有一定的耐受性。 3 有一定的机械强度 4.有一定的亲水性和良好的稳定性。 5.有一定的疏松网状结构， 颗粒均匀。 6.共价结合时具有可活化基团。 7.有耐受酶和微生物细胞的能力。8.廉价易得。7.固定化细胞的优点和缺点：优点：1.无需进行酶的分离纯化。2.细胞保持酶的原始状态，固定化过程中酶的回收率高。3.细胞内酶比固定化酶稳定性更高。4.细胞内酶的辅酶因子可以自动更生。5.细胞本身含多酶体系，可催化一系列反应。6 抗污染能力强。缺点：1.利用的仅是细胞内酶，而细胞多种

18、酶的存在，会形成不需要的副产物。2.细胞膜.细胞壁和载体都存在着扩散限制作用。3.载体形成的孔隙大小影响高分子底物的通透性。8.固定化酶和细胞的生物反应器类型：答：1.间歇式搅拌罐反应器。2.连续流动脚步罐反应器。3.填充床反应器。4.流化床反应器。5.循环反应器。6.连续流动脚步罐超滤膜反应器。7.其他反应器。9.有机相中酶催化反应的优点:答：1.增加流水性地位或产物的溶解度。2.热力学平衡向合成方向移动。3.可抑制有水参与的副反应。4.酶不溶于有机介质，易于回收再利用。5.容易从低沸点的溶解中分离纯化产物。6 酶的热稳定性提高，pH 的适应性扩大。7.无微生物污染。8.能测定某些在水中不能

19、测定的常数。9.固定化酶的方法简单，可以只沉积在载体表面1生物技术制药分为哪些类型？生物技术制药分为四大类：（1） 应用重组 DNA 技术(包 括基因工程技术、蛋白质工程技术)制造的基因重组多肽，蛋白质类治疗剂。（2） 基因药物，如基因治疗剂，基因疫苗，反义药物和核酶等（3） 来自动物、植物和微生物的天然生物药物（4） 合成与部分合成的生物药物2生物技术制药具有什么特征？（1）分子结构复杂（2）具有种属特异性（3）治疗针对性强，疗效高（4）稳定性差（5）基因稳定性（6）免疫原性（7）体内的半衰期短（8）受体效应（9）多效性（10）检验的特殊性3.生物技术制药中有哪些应用？应用主要有：（1） 基

20、因工程制药：包括基因工程药物品种的开发，基因工程疫苗，基因工程抗体，基因诊断与基因治疗， 应用基因工程技术建立新药的筛选模型，应用基因工程技术改良菌种，产生新的微生物药物，基因工程技术在改进药物生产工艺中的应用，利用转基因动植物生产蛋白质类药物（2） 细胞工程制药：包括单克隆抗体，动物细胞培养，植物细胞培养生产次生代谢产物（3） 酶工程制药（4） 发酵工程制药4.影响目的的基因在大肠杆菌中表达的因素有哪些？（1）外源基因的计量（2）外源基因的表达效率：a、启动子的强弱 b、核糖体的结合位点 c、SD 序列和起始密码的间距 d、密码子组成（3）表达产物的稳定性（4）细胞的代谢负荷（5）工程菌的培

21、养条件5.质粒不稳定分为哪两类，如何解决质粒不稳定性？质粒不稳定分为分裂分为分裂不稳定和结构不稳定。质粒的分裂不稳定是指工程菌分裂时出现一定比例不含质粒的子代菌的现象；质粒的结构不稳定是 DNA 从质粒上丢失或碱基重排，缺失所致工程菌性能的改变。提高质粒稳定性的方法如下：（1） 选择合适的宿主细菌（2） 选择合适的载体（3） 选择压力（4） 分阶段控制培养（5） 控制培养条件（6） 固定化6.影响基因工程菌发酵的因素有哪些？如何控制发酵的各种参数？影响因素：（1） 培养基（2） 接种量（3） 温度（4） 溶解氧（5） 诱导时机的影响（6） 诱导表达程序（7） PH 值7.什么是高密度发酵？影响

22、高密度发酵的因素有哪些？可采取哪些方法来实现高密度发酵？高密度发酵：是指培养液中工程菌的菌体浓度在 50gDCW/L 以上，理论上的最高值可达 200gDCW/L影响因素： （1）培养基 （2）溶氧浓度 （3）PH (4)温度 （5）代谢副产物实现高密度发酵的方法：（1） 改进发酵条件：a、培养基 b、建立流加式培养基 c、提高供养能力（2） 构建出产乙酸能力低的工程菌宿主菌：a、阻断乙酸产生的主要途径 b、对碳代谢流进行分流 c、限制进入糖酵解途径的碳代谢流 d、引入血红蛋白基因（3） 构建蛋白水解酶活力低的工程化宿主菌8.分离纯化常用的色谱分离方法有哪些?它们的原理是什么?方法有离子交换色

23、谱、疏水色谱、反相色谱、亲和色谱、凝胶过滤色谱及高压液相色谱。（1） 离子交换色谱 IEC：是以离子交换剂为固定相，依据流动相中的组分离子与交换剂上的平衡离子进行可逆交换时的结合力大小的差别而进行分离的一种层析方法。（2） 疏水层析 HIC：是利用蛋白质表面的疏水区与固定相上疏水性基团相互作用力的差异，对蛋白质组进行分离的层析方法。（3） 亲和层析 AC： 是利用固定化配体与目的蛋白质之间的非常特异的生物亲和力进行吸附 ， 这种结合既是特异的，又是可逆的，改变条件可以使这种结合解除。（4） 凝胶过滤层析：以多孔性凝胶填料为固定相，按分子大小对溶液中各组分进行分离的液相层析方法。9.对由基因重组

24、技术所获得的蛋白质药物进行鉴定时，常做哪些项目分析？基因工程药物质量控制主要包括以下几点：产品的鉴别，纯度，活性，安全性，稳定性和一致性项目分析主要有：（1） 生物活性测定（2） 理化性质鉴定（3） 蛋白质含量鉴定（4） 蛋白质纯度分析（5） 杂志检测（6） 稳定性考察（7） 产品一致性的保证10.离体培养的动物细胞分为哪些类型?分为三类：（1） 贴壁细胞：细胞生长必须有可以贴附的支持物表面，细胞依靠自身分泌的培养基中提供的贴附因子才能在该表面上生长增殖。（2） 悬浮细胞：细胞的生长不依赖支持物表面，可在培养液中悬浮状态生长（3） 兼性贴壁细胞：既可 贴附于支持物表面生长，又在悬浮生长。11.

25、常用的培养动物细胞的培养基的种类有哪些？（1）天然培养基（2）合成培养基（3）无血清培养基12.如何进行动物细胞大规模培养？大规模培养的方法：（1） 悬浮细胞（2） 贴壁细胞（3） 贴壁悬浮细胞：a、微载体培养 b、包埋和微囊培养 c、结团培养大规模培养的操作方式：（1） 分批式操作（2） 半连续式操作（3） 灌流式操作13.动物细胞生物反应器必须具备哪些基本要求？有哪些类型？特定是什么？动物细胞反应器具备的基本要求：（1） 制造生物反应器所采用的一切材料，尤其是与培养基，细胞直接接触的材料，对细胞必须是无毒性的。（2） 生物反应器的结构必须使之具有良好的传质、传热和混合的性能（3） 密封性良

26、好，可避免一切外采的不需要的微生物污染。（4） 对培养基环境中多种物理化学参数能自动检测和调节控制，控制的精度高 ，而且能保持环境质量的均一。（5） 可长期连续运转，这对于培养动物细胞的生物反应器显得尤其重要。（6） 容器加工制造时要求内面光滑，无死角，以减少细胞或微生物的沉积。（7） 拆装，连结和清洁方便，能耐高压蒸汽消毒，便于操作维修（8） 设备成本尽可能低。反应器类型及特点：（1） 搅拌罐式生物反应器：主要用于是悬浮细胞培养，微载体培养，微囊和巨载体培养以及结团培养（2） 气升式生物反应器：气体通过装在罐底的喷管进入 反应器的导流管，致使该部液体的密度小于导流管外部的液体形成循环流。（3

27、） 中空纤维式生物反应器： 占地空间小， 产品产量、 质量高， 生产成本低， 不能重复使用， 不能耐高压蒸汽灭菌，需用环氧乙烷或其它消毒剂灭菌，难以取样检测。（4） 透析袋或膜式生物反应器：可使细胞达到高密度 ，又可随意组合进行操作，对产品进行浓缩纯化。（5） 固定床或流化床生物反应器：结构简单，装填材料易得。14.什么是单克隆抗体？单克隆抗体有哪些不足？单克隆抗体：是针对一个抗原决定簇的抗体，又是单一的 B 淋巴细胞克隆产生的抗体。不足：（1） 单克隆抗体均是鼠源性抗体， 应用于人体内可产生人抗鼠抗体， 加速了排斥反应， 在人体内半衰期只有 5-6h ，难以维持有效药物作用靶组织时间。（2）

28、 完整的抗体分子，即 Ig 的相对分子质量过大，难以穿透实体肿瘤组织，达不到有效治疗浓度。15 如何制备杂交瘤细胞？将两个细胞 （例如 B 淋巴细胞和骨髓瘤细胞）通过诱导融合形成杂交细胞，具体操作时为了提高成功率会用多个细胞同时杂交，然后筛选出目的细胞，再进行细胞培养使其有丝分裂而增值，得到大量目的细胞（杂交瘤细胞）。16基因工程抗体有哪些类型？其特性和制备方法有什么不同？基因工程抗体主要包括嵌合抗体、人源化抗体、完全人源抗体、单链抗体、双特异性抗体等。（1）嵌合抗体 嵌合抗体（ chimeric atibody ）是最早制备成功的基因工程抗体。它是由鼠源性抗体的 V 区基因与人抗体的 C 区

29、基因拼接为嵌合基因， 然后插入载体， 转染骨髓瘤组织表达的抗体分子。 因其减少了鼠源成分， 从而降低了鼠源性抗体引起的不良反应，并有助于提高疗效。（2）人源性抗体 是将人抗体的 CDR 代之以鼠源性单克隆抗体的 CDR ，由此形成的抗体，鼠源性只占极少， 称为人源化抗体。（3）完全人源化抗体 采用基因敲除术将小鼠 Ig 基因敲除，代之以人 Ig 基因，然后用 Ag 免疫小鼠，再经杂交瘤技术即可产生大量完全人源化抗体。（4） 单链抗体 是将 Ig 的 H 链和 L 链的 V 区基因相连， 转染大肠杆菌表达的抗体分子， 又称单链 FV （ single chain fragment of vari

30、able region,sFv ）。 SFv 穿透力强，易于进入局部组织发挥作用。（5）双特异性抗体 将识别效应细胞的抗体和识别靶细胞的抗体联结在一起，制成双功能性抗体，称为双特异性抗体。如由识别肿瘤抗原的抗体和识别细胞毒性免疫效应细胞（ CTL 细胞、 NK 细胞、 LAK 细胞）表面分子的抗体（ CD3 抗体或 CD16 抗体）制成的双特异性抗体，有利于免疫效应细胞发挥抗肿瘤作用。17.抗体治疗药物有哪些？（1）放射性同位素标记的抗体治疗药物（2）抗癌药物偶联的抗体药物（3）毒素偶联的抗体药物18.抗体诊断试剂有哪些类型？（1）血清学鉴定用的抗体试剂（2）免疫标记用的抗体试剂（3）导向诊断药物（4）CD 单克隆抗体系列19. 单克隆抗体制备的基本原理与过程？有什么意义？原理：B 淋巴细胞在抗原的刺激下，能够分化、增殖形成具有针对这种抗原分泌特异性抗体的能力。B 细胞的这种能力和量是有限的，不可能持续分化增殖下去，因此产生免疫球蛋白的能力也是极其微小的。将这种 B 细胞与非分泌型的骨髓瘤细胞融合形成杂交瘤细胞， 再进一步克隆化， 这种克隆化的杂交瘤细胞是既具有瘤的无限生长的能力， 又具有产生特异性抗体的 B 淋巴细胞的能力， 将这种克隆化的杂交瘤细胞进行培养或注入小鼠体内即可获得大量的高效价、 单一的特异性抗体。