细菌学检验总结.docx

1、细菌学检验总结细菌学检验重点(选择20个20分，填空52个26分，名词解释6个18分，简答6个24分，论述1个12分)注：以下内容主要是老师的红字部分，可能看的过程有些吃力，大家结合课件和书本看哈，帮助理解，不过老师说 过考点重点在红字部分的第一章细菌学实验的基本要求1、 实验室生物安全(Laboratory biosafety):实验室的生物安全条件和状态不低于容许水平，可避免实验室人员、来访 人员、社区及环境受到不可接受的损害，符合相差法规、标准等对实验室生物安全责任的要求。2、 生物安全防护基本要求实验室生物安全防护(biosafety protection for laboratori

2、es)-实验对象：致病的微生物及其毒素-综合措施：实验室设让建造、个体防护设施、工作及操作程序和规程等-确保：实验室工作人员不受实验对象侵染，周围环境的生物安全。实验室生物安全通用原则积极防止操作者在污染的环境中接触生物危害物；主动封闭生物危害材料产生之源，防止从操作部位向周围环境释放；尽量减少生物危害材料向周围环境意外释放所造成的后果。3、 实验室必须设有专职的生物安全负责人实验室负责人为实验室生物安全的第一责任人。生物安全等级生物安全防护实验室根据所处理的微生物及英毒素的危害程度分为四级。-实验室生物安全防护要求：一级最低，四级最高4、 在主实验室合理设置清洁区、半污染区和污染区5、 各级

3、生物防护实验室特点一级生物安全防护实验室(BSL:L/P1):适用于对健康成年人已知无致病作用的微生物，如用于敎学的普通 微生物实验室等。二级生物安全防护实验室(BSL叨P2 )实验室结构和设施、安全操作规程、安全设备适用于对人或环境具有中等潜在危害的微生物。在处理危险度2级或更高危险度级别的微生物时，在实验室门上应标有国际通用的生物危害警告标志。三级生物安全防护实验室(BSL3/P3)：适用于主要通过呼吸途径使人传染上严重的甚至是致死疾病的致病微 生物及其毒素，通常已有预防传染的疫苗。四级生物安全防护实验室(BSL-4/R4 ):适用于对人体具有高度的危险性，通过气溶胶途径传播或传播途径 不

4、明，目前尚无有效的疫苗或治疗方法的致病微生物及英毒素。6、 控制措施安全设备和个体防护是实验室工作人员与致病微生物及英毒素直接接触的一级屏障所有可能使致病微生物及其毒素溅出或产生气溶胶的操作，都必须在生物安全柜内进行。7、 生物安全柜(BSC) biosafety cabinet(概念、分级及特点)具备气流控制及高效空气过滤装置的操作柜，可有效降低实验过程中产生的有害气溶胶对操作者和环境的 危害。(净化排气)根据生物安全防护水平的差异，生物安全柜可分为I、u、m级3种类型。 实验室应按要求分别配备I、II、hi级生物安全柜。I级生物安全柜：外部空气保证工作人员不受侵害，但不保证实验对象不受污染

5、。II级生物安全柜：经髙效过滤器净化的无涡流的单向流空气既保证工作人员不受侵害，也保证实验对象不受污染；m级生物安全柜：经髙效过滤器净化的无涡流的单向流空气8、 生物安全柜和超净工作台的区别超净工作台：保护样品，不保护操作者和环境 生物安全柜：保护操作者、环境以及实验材料正压、简单 负压、复杂不能以净化工作台代替生物安全柜，反之则可以。9、 标准的细菌等微生物操作要求实验室负责人工作人员洗手、工作区域不允许吃/喝/抽戴护目镜或而罩、食物储存禁止口吸吸管、减少飞溅物/气溶胶、工作台表而的去污/火活、废物去污后处理10、 注：高压蒸汽灭菌：负责消毒者不准离开消毒室。制备培养基无菌操作.、使用酒精灯

6、、火菌吸管.10倍递增稀释.无菌操作；三三制：稀释三级，每一稀释度用三个平行平板：取供试液加注于平皿时，供试液须充分混匀。培养基倾注于平皿：45-C+1-C.整个操作过程应在lh内完成、无菌检验.第二章、细菌学检验基本技术 临床样本的釆集与送检样本采样时间采样方法注意事项血脅髓发病早期、急性期或成人10mL儿童35ml；秤髓1样本切勿冰箱存放；无菌操作；症状典型时2mL废弃物髙压灭菌。尿液9中段尿防杂菌污染，无菌操作。尽快送检，晨起不得加防腐剂或消毒剂。粪便急性期脓血、黏液的粪便；絮状物； 直肠拭子无菌采样；新鲜；立即送检痰 上呼吸道 样本晨间 无限制自然咳痰、支气管镜、 胃内采痰法等：漱口：

7、鼻咽拭子立即送检或4C保存。1、食品样本采集原则根据检验目的、食品特点、批量、检验方法、微生物的危害程度等确定采样方案。随机采样i代表性 无菌操作，防污染。（外源性污染、样本变质和细菌生长）食物中毒时，采集可疑食物样本。2、食品样本采集种类大样、中样、小样。-大样：一整批样本。-中样：从样本各部分所取得的混合样本，一般为200g-小样：分析用，检样，25g。注：检验结果报告后，剩余样品或同批样品不进行微生物项目的复检3、 细菌的形态结构检査法借助显微镜，对细菌形态、大小、排列、结构进行直接观察。-在细菌检验中极其重要，是细菌分类和鉴定不可缺少的组成部分。样本中有无细菌及其大致的数量。(细菌的形

8、态、大小、排列、结构和染色反应性。培养物是否为纯种。普通光学显微镜(pmxlOOO =)细菌染色样本；弱光下用于不染色样本活菌的运动情况暗视野显微镜(”m： 50倍)不染色样本活菌的形态相差显微镜：活体细胞的外形和运动方式；细胞内部某些细微结构及这些结构的数量4、 不染色检査：主要用于观察细菌的动力-有鞭毛的细菌为真正运动- 无鞭毛的细菌则为布朗运动(即分子运动)染色检査细菌染色一显微镜观察。常用的细菌染料：人工合成带苯环的染料，色基+助色基单纯染料：苏丹染料酸性染料：伊红、酸性品红、刚果红等碱性染料：美蓝、孔彼绿、甲紫和碱性复红等复合染料：姬姆萨染料、瑞氏染料等/5、 单染色法：用一种染料染

9、色，使齐种细菌均染成同一颜色。操作简单，易于使用。只能显示细菌的形态及大小。如用美蓝或稀释石炭酸复红等6、 复染色法：用两种以上染料染色细菌，显示细菌形态大小，鉴别细菌种类-鉴别染色法:革兰染色法、抗酸染色法-Grams染色操作步骤：初染、媒染、脱色、复染-抗酸染色法：抗酸菌：分枝杆菌/分枝菌酸。一般不易着色，一旦染上色后又不易被盐酸洒精脱色。经过加热和延长染色时间来促使抗酸菌着色。步骤：初染、脱色、复染7、 负染色法：背景着色而细菌本身不着色。细菌荚膜常用墨汁负染色法配合单染色法(如美蓝)，背景呈黑色，菌体染成蓝色，荚膜不着色，包绕在菌体 周围成为一层透明的空圈。该法具有快速、经济、简便易行

10、、高度反差、分辨率高的特点。8、 培养基的种类一一按物理性状分液体培养基：增菌、作生化试验等半固体培养基：观察细菌的动力、分类鉴泄、保存菌种及噬菌体效价滴左等。琼脂用量为%-1%固体培养基：主要用于分离培养：平板、斜面、高层及髙层斜而；琼脂用呈:为2%9、 培养基的种类一一按用途分基础培养基(basic medium)营养培养基(nutrient medium)增菌培养基(enrichment medium)选择性培养基(selective medium)鉴别培养基(differential medium) &用培养基(dedicated medium)10增菌培养基：多为液体。t目的菌，J杂

11、菌。营养成分+抑制物质选择性增菌培养基；非选择性增菌培养基%NaCl肉汤：金葡増菌11鉴别培养基；几种细菌由于对培养基中某一成分的分解能力不同，其菌落的生长特征（颜色、形状等）不同而被区分开。+某些特定的化学物质鉴别和区分不同细菌12、 制备培养基的一般程序调配溶化；娇正pH：过滤澄淸；分装；灭菌：检左13、 平板划线接种法平板划线接种法是常用的细菌分离培养方法使样本或培养物中混杂的多种细菌分开成长为单个菌落，并根据菌落的形态和特征，挑选所需的单个菌落, 经移种获得纯种细菌，不同的细菌在平板上所形成的菌落有英固有的形态特征，可以作为细菌鉴定的依据之一。14、 平板划线方法分区划线接种法；曲线/

12、连续划线接种法；棋盘格划线接种法：放射法：四格法：平板涂布接种法15、 分区划线接种法：多用于含菌数量较多样本的细菌分离16、 半固体培养基：可用于观察细菌动力和保存菌种。17、 菌落：细菌经一立时间培养后，在固体培养基表面所形成的，肉眼可见的物体（群落）。18、 菌落特征菌落形状；大小：mm；表面性状；边缘情况：颜色；透明度；质地；粘度：乳化性.等19、 细菌在鉴定培养基上的特征溶血特征：卵黄；蛋白：色素；气味在血平板上的溶血特征a溶血：狭窄的草绿色的半透明区域B溶血：完全透明淸楚的宽带 Y溶血：看不到溶血带的溶血卵黄琼脂中的反应：检查细菌是否产生卵磷脂酶和脂酶卵磷脂酶：降解卵黄，菌落周围岀

13、现沉淀环脂酶：出现“珍珠包膜”蛋白水解作用：在菌落周国出现淸晰的环。色素水溶性色素溶在培养基中，使培养基着色， 绿脓色素、荧光色素等：脂溶性色素则使细菌菌落着色。 金黄色匍萄球菌的金黄色菌落。气味假单胞菌属细菌一匍萄汁气味：变形杆菌一巧克力烧焦的臭味：链球菌一地窖里的殆臭： 梭菌一粪臭、腐败味：产黑色素类杆菌属细菌一辛辣味20、 细菌的生化反应试验不同的细菌一-不同的酶系统一一不同的新陈代谢产物一一产物不同的生化特性一一鉴别细菌的类别21、 糖发酵试验结果判断反应现象结果描述酸性变色、有气泡分解XX糖产酸、产气酸性变色、无气泡分解XX糖产酸、不产气培养基不变色不分解XX糖22、 甲基红（MR）

14、试验:检査细菌发酵匍萄糖产生并保持稳定的酸性终末产物和克服体系缓冲作用的能力。-分解匍萄糖一丙酮酸一乳酸、乙酸、甲酸等一培养基的pHCV +甲基红指示剂一红色：阳性：-分解匍萄糖一产酸少一培养基pH较髙+甲基红指示剂一黄色：阴性。23、 A半乳糖昔酶试验：预测细菌发酵乳糖的能力。B-半乳糖昔酶：一种能把乳糖水解成葡萄糖和半乳糖的酶。发酵乳糖的大肠菌类能产生B-半乳糖昔酶-渗透酶（P）和B半乳糖昔酶（G）24、 靛基质（昭|喙）试验分解：蛋白淼中的色氨酸一U引喙引味+二甲氨基苯甲醛一玫瑰臥啾红色）25、 硫化氢试验分解：含硫氨基酸一H2SZS+铅或铁离子一黑色硫化物。26、 触酶试验过氧化氢酶又

15、称触酶，可使细菌代谢过程中的过氧化氢分解为水和氧。27、 血浆凝固酶试验金黄色葡萄球菌可产生凝固酶，使血浆中的纤维蛋白原转变为纤维蛋白，附着于细菌表面，产生凝固。玻片法：与细胞壁结合的凝固酶试管法：菌体生成后释放于培养基中的游离凝固酶28、 血清学鉴定serological identity：确怎致病菌的种或型未知纯种细菌+已知特异性抗体常用方法：玻片凝集试验、免疫荧光、协同凝集、对流免疫电泳、酶免疫、间接血凝、乳胶凝集29、 血淸学诊断辅助诊断：抗原性较强的病原菌和病程较长的传染病。抗体有无及其抗体效价变化-已知的细菌/特异性抗原+特异抗体常用方法：试管凝集试验。-直接凝集试验、显微镜凝集试

16、验、沉淀试验、乳胶凝集试验、ELISA、免疫荧光试验等。- |-急性期和恢复期双份血淸样本，恢复期的抗体效价比急性期升高4倍或4倍以上。30、 细菌毒素的检测方法外毒素-细菌外毒素的免疫血淸（抗体）+被检细菌培养物滤液（抗原）-细菌外毒素（抗原）+被检患者血淸-动物试验内毒素-家兔热原试验，卷试验,免疫学方法、生物学方法、化学发光法、流式细胞术、高效液相色谱31、 鲨试验（limulus test, LT）:定量及半定量检测细菌内毒素;血液中含有一种独特的有核变形红细胞，红细胞裂解物+内毒素凝胶32、 细菌数量的测定：物理计数法；生物计数法物理计数法细菌总数计数法：利用工具和仪器对样本中的细菌

17、进行讣数，其结果表示样本中的所有细菌(活菌+死菌)。Breed 计数法：Direct microscopic count比浊管计数法：细菌悬液的浊度与菌数成正比分光光度计测左法：吸光度同细菌总数成正比生物计数法活菌计数法：利用各种培养方法检测样本中细菌的数目，计数培养基上生长的菌落数=样本中活菌数、半泄量计数法：倾注平板法：旋管计数法：滴液计数法：琼脂表而计数法：膜滤过计数法；微菌落快速计数法；最可能数(MPN)的估计33、L型细菌检査 Lforms bacterium： 一种细菌通过变异而产生的细胞壁缺陷型。-必须在高渗溶液中方能存活，并失去原有形态而变成圆球形或多形性。-致病第四章、细菌的

18、分型及其检验技术1、 细菌分型一传统方法仅进行病原的菌种鉴定是不够的，需要进一步的分型诊断血清学分型；生物化学分型：噬菌体分型；细菌素分型；耐药谱分型；质粒图谱分型;PCR技术；染色体酶切物脉冲 场凝胶电泳分型2、 噬菌体的作用具有高度特异性(种、型)一种噬菌体只能裂解一种或与该种相近的细菌，故可用于细菌的分类鉴定。用己知型噬菌体鉴泄细菌，可对细菌进行分型。3、 毒性噬菌体：Virulent Phage：能在宿主菌细胞内复制、增殖，产生许多子代噬菌体，最终裂解细菌。4、 温和噬菌体：Temperate Phage：与宿主菌的染色体整合，随细菌DNA的复制而复制，随细菌的分裂而传代，不产生子代噬

19、菌体。5、 噬菌斑(plaque)在液体培养基中，噬菌体可使浑浊的菌液变为澄淸：在固体培养基上，噬菌体对宿主菌细胞的裂解作用可使菌落溶解，导致在带菌琼脂平板上产生空斑，易于 观察，称噬菌斑(plaque)o6、 噬菌体的效价测定噬斑形成单位(pfu)的测定：若将噬菌体按一定倍数稀释，通过噬斑计数，可测左一立体积内的噬斑形成 单位(plaque forming units, pfu)数目，即噬菌体的数目。7、 细菌素分型技术 细菌素(bactericin)：某些细菌产生的蛋白质类抗菌物质，这种物质只对产生菌亲缘关系近的细菌有抗菌作用, 而对产生菌本身不敏感。细菌素是蛋白质，质粒控制，多处于抑制状

20、态。细菌素的应用主要是细菌的分型和流行病学调查，是血淸学分型的补充。8、 药敏试验(drug susceptibility test)-在体外测定抗菌药物抑制或杀死细菌能力的试验。-抗菌药物：具有杀菌或抑菌活性的抗生素和化学合成药物。9、 药敏试验方法 纸片法：测左抑菌环大小，其结果以敏感、中度敏感、中介度、耐药表示。稀释法：找出能抑制细菌生长的最小抑菌浓度(MIC)或最小杀菌浓度(MBC)表示。E 试验(E-test)：最小抑菌浓度MIC：在特定环境下孵育24小时，可抑制某种微生物岀现明显增长的最低药物浓度。最小杀菌浓度MBC：杀死 (降低3个数量级)的供试微生物所需的最低药物浓度10、 纸

21、片扩散法是国际上推荐使用的标准实验方法；细菌耐药谱分析中最常用的方法。原理：将含定虽抗菌药物纸片贴在已接种待测细菌的琼脂平板表而，培养后，形成一个透明抑菌环。 抑菌环的大小反映待测菌对该药物的敏感程度，与MIC成反比。%麦氏比浊度=lX108cfu/ml结果判断：针对抑菌环直径测量值报告敏感、中介或耐药。-敏感：被测细菌所引起的感染可以用常用剂量的该抗菌药物治愈。-中介(I)-耐药(R)：被测细菌不能被常用剂量抗菌药物抑制，或具有特左耐药机理，临床治疗效果不佳。11、 肉汤稀释法原理:将药物按一泄规律用M-H肉汤稀释成一系列浓度后，与一泄量的细菌作用，经培养后立量测立英MIC, 反映细菌的药物

22、敏感性。 校正麦氏比浊标准，1 : 200 稀释(1 : 10x1 : 20)o (5xl05cfu/ml)(结果判定：无肉眼可见细菌生长的药物最低浓度即为该待测菌MIC。12、 琼脂稀释法原理：将待测菌接种于含不同浓度药物的琼脂平板上，经培养后观察菌落的生长情况，以能抑制细胞生长 的最低药物浓度为该菌的MIC。第五章、细菌的分类与命名P911、 细菌分类等级-种是细菌分类的基本单位，将生物学性基本相同的细菌群体归成一个菌种：-性状相近、关系密切的若干菌种组成一个菌属：I2、 细菌DNA中G+C mol/%测定细菌DNA中G+C mol%含量不同是细菌的一个重要遗传特征。单一菌种中许多不同菌株

23、的G + Cmol%平均值极为接近或者是一致的。3、 细菌命名细菌的科学名称(学名)为生物双需式。属名+种名(+人名、地名)。斜体-属名在前，需词，首字母大写-种名在后，形容词，小写_属名可用第一个字母代表-M. tuberculosisf结核分枝杆菌)、S. typhi(伤寒沙门菌) 常见的细菌也可用习惯通用俗名-tuberculosis(结核杆菌)、typhoid bacillus(伤寒杆菌)泛指某一属细菌：属名+ sp(菌种species)-Mycobacterium sp. Salmonella sp亚种的名称：属名+种名+亚种一 Klesbsiella penumoniae subs

24、pecies pneumoniae中文译名则种名在前，属名在后。4、细菌分类系统：伯杰氏鉴立细菌学手册第七章、消毒学试验技术1、 消毒学试验原理：将试验微生物眾蕊于消毒因子（物理、化学、生物学），作用预定的时间之后，检查试验的微生物是否 被杀灭或抑制。主要目的：检査一种消毒剂或消毒方法是否能达到杀灭或消除病原微生物的要求。2、 消毒disinfection :杀火或淸除传播媒介上病原微生物，使英达到无害化的处理。灭菌：杀火或淸除传播媒介上一切微生物（包括病原体和非病原体的繁殖体和芽胞）的处理。3、 微生物学检验：中和试验、定性/量杀菌试验、病毒灭活试验、能量试验、现场试验等4、 消毒药械鉴定测

25、试的项目消毒剂消毒器械理化性能检验有效成分含呈:；pH：金属腐蚀性（杀菌因子强度或浓度；金属腐蚀性微生物学检验微生物杀灭模拟现场试验与现场试验实验室杀灭微生物 模拟现场和现场试验其他稳左性试验（安全性试验（电器、毒理）5、 菌片：用于测怎各种消毒剂、消毒器械与方法对不同物品上微生物的杀火作用。6、 残留消毒剂的去除方法：化学中和法（称中和剂法）、过滤冲洗法、稀释法等 中和剂法：在消毒剂与微生物作用到达规立时间的终点时，取样加于适宜种类和浓度的中和剂中，将残留 消毒剂迅速中和，使其不再持续抑制或杀灭微生物的方法。中和剂：能及时中止消毒剂的杀微生物作用本身及苴与消毒剂的反应产物对微生物无抑制或杀灭

26、作用，对培养基无不良影响。7、中和试验操作方法 -1.用PBS将指示菌制成5x1055xl06cfu/ml悬液。-2.将消毒剂用火菌蒸憾水配制成3种不同浓度，在不加中和剂的情况下，测知该消毒剂lOmin抑杀指示菌以 上的最低有效浓度。-3.取消毒剂lOmin抑杀指示菌的最低有效浓度与待选择中和剂进行试验，选出中和剂种类并依据等当量中和 原则，调整中和剂浓度，选出试验浓度的消毒剂使用中和剂的浓度,-4.中和剂选择试验时，先将消毒剂与中和剂溶液混合，制成中和产物溶液，再分组进行。试验分组-消+菌：消毒剂对试验菌有无杀灭或抑制能力。-（消+菌）+中：残留消毒剂被中和后受到消毒剂作用后的试验菌是否能恢

27、复生长。-中+菌：中和剂是否抑菌。-（消毒剂+中和剂）+菌液：中和产物，或未被完全中和的残留消毒剂对试验菌的生长繁殖是否有影响。-稀+菌：菌数对照。-稀+中+培养：阴性对照。8、 消毒剂定性消毒试验：测定受消毒因子作用后的样本有无细菌生长的试验方法。试验方法-5xlO55xl06cfu/mL 的菌悬液。-火菌试管10,标号。每管：火菌蒸馅水，202C水浴。+消毒液，倍比稀释，至第9管。第10管中不加消 毒液作对照。-加菌悬液于各管中，混匀并记录各管加菌时间，使菌药混合液中含菌量均105-106cfu/mLo-各管分別于加菌后4个不同间隔时间，取+中和剂内，中和lOmin后，取出加入营养肉汤管内

28、。-将接种细菌的肉汤管放37C培养48h,观察初步结果，无菌生长管继续培养至第7天。试验重复5次。 结果判定若肉汤管混浊，则表示有菌生长，记为阳性，以（+）表示。若培养至第7天，肉汤管澄清，则表示无菌生长，记为阴性，以（一）表示。对难以判定的肉汤管，取0. ImL接种于营养琼脂平板，用火菌L棒涂匀，放37C培养48h,观察菌落形态; 并做涂片染色镜检，判断是否有指示菌生长。有指示菌生长记为阳性。5次试验，均无指示菌生长表示达到灭菌。9、 消毒剂定量消毒试验：测定受消毒因子作用后，样本残存微生物数量的试验方法，以杀灭率表示结果。用于对消毒剂杀灭效果的评价。原理：将一龙量的细菌悬液或菌片（载体），

29、眾露于设讣浓度的消每液中，作用至规定时间后，取细菌与消毒 液的混合物或取出载体，与中和剂反应，终I上消毒剂的继续作用，并接种于营养琼脂平板，培养之后，计 数菌落。以存活的菌落数与最初加入的菌数比较，计算出杀灭率，或杀火效果（germicidal effect, GE）。10、 悬液定量杀菌试验活菌培养计数消毒液：浓度为待测浓度的倍实验用菌悬液：（1x1085xl08）cfu/ml菌+干扰，混匀，20rC水浴5min, +消毒液，迅速混匀并立即计时。.待菌药相互作用至预上时间，分別吸取菌药混合液加于经火菌的中和剂中，振荡混匀。11、 定量杀菌试验的评价规定在产品说明书指定的最低浓度与最低作用时间，重复试验3次。在悬液左量杀灭试验中，各次的杀灭对数值均N，可判泄为消毒合格一12、 破坏效果判定以S/NV作为HBsAg抗原性破坏合格标准。-S是消毒因子作用后被检样品或阳性对照样品平均每分钟脉冲数（cpm）值或光密度（0D）值。-N是试验中阴性对照样品平均cpm值或0D值。细菌学检验各论一般性思考题：1、 xxx x菌的培养特征如何（增菌、选择性平板）2、x x x x菌的形态与染色有何特点。3. xx xx菌的生化特性有哪些其中最有特点的是哪个项目，如何利用这个项目，诊断某细菌是否是x x X X菌。4、XXXX菌的分型特点是什么致病菌检测的一般思路2副溶血性弧菌 是一种海洋细