HIV抗体检测技术规程.ppt

1、HIV抗体检测实验室技术规程天津市CDC HIV确证中心实验室 郑敏娜2013.6.25 HIVHIV病毒感染人体过程及免疫学机制病毒感染人体过程及免疫学机制o明确明确HIV感染者（诊断）感染者（诊断）n控制传播控制传播n及早医学干预及早医学干预n血液筛查血液筛查o流行病学调查、高危人群监测流行病学调查、高危人群监测o开展开展VCT的基础的基础o职业保护职业保护HIV抗体检测在艾滋病防治中的作用抗体检测在艾滋病防治中的作用主要内容oHIV抗体检测的相关规范性文件oHIV抗体检测的方法和注意事项oHIV抗体确证实验的相关规程和结果解释o目前我市HIV筛查实验室中存在的问题HIV抗体检测的相关规范

2、性文件o医疗机构临床实验室管理办法卫医发200673号 o全国艾滋病检测工作管理办法卫疾控发2006218号 o全国艾滋病检测技术规范(2009年版)HIV抗体检测的相关规范性文件o全国艾滋病检测工作管理办法卫疾控发2006218号 o检测工作要求第十二条艾滋病检测实验室应在规定的职能范围内开展检测工作，遵守国家法律、法规和有关规范。检测技术及程序应符合全国艾滋病检测技术规范的要求。HIV抗体检测的方法和注意事项oHIV抗体检测的主要方法金标准o包括初筛实验和确证实验 p初筛实验:p试剂必须经国家食品药品监督管理局注册批准，在有效期内的，批批检合格p敏感性和特异性好：p方法包括：ELISA，化

3、学发光法和快速检测法（免疫层析，颗粒凝集等方法）p样本：血清、血浆；干血斑；唾液；尿液 HIV抗体检测的方法和注意事项快速免疫层析明胶颗粒凝集法（PA）HIV ELISA试剂质量评估：http:/ 在有效期内使用o试验操作试验操作 形成良好的操作习惯形成良好的操作习惯：加样时应将所加物加在ELISA板孔的底部，避免加在孔壁上部，并注意不可溅出，不可产生气泡。严格按试剂说明书操作严格按试剂说明书操作:空白孔不加样品和酶标试剂 操作过程中集中精力操作过程中集中精力：避免加样错误注意事项注意事项o保证实验室温度，室温过低有可能造成吸光度值偏低。o ELISA试验的敏感性很高，如果操作不当很容易出现非

4、特异性反应。在操作过程中，尤其应注意洗涤过程。洗涤彻底可减少假阳性的机会。o进行ELISA试验时，必须用酶标仪进行测定，不得目测结果。使用酶标仪时，要避免酶标孔内产生气泡，影响判读结果。ELISA操作中的注意事项操作中的注意事项o试剂准备试剂准备o加样加样o温育温育o洗板洗板o显色显色o比色比色操作示范请看教学片操作示范请看教学片ELISA试验假阳性产生原因？o样品加错位置，标本搞错样品加错位置，标本搞错o洗板机设置不当，洗板时洗涤液溢出，污染其它孔洗板机设置不当，洗板时洗涤液溢出，污染其它孔o洗板机内部管道有真菌生长洗板机内部管道有真菌生长o实验中，实际孵育时间过长，温度过高实验中，实际孵育

5、时间过长，温度过高o待测标本溶血或含有血细胞。待测标本溶血或含有血细胞。o待测标本长菌或其它原因混浊。待测标本长菌或其它原因混浊。o其它原因：其它原因：与试验操作无关与试验操作无关HIV抗体筛查和复检的流程与2004版检测规范的不同报告HIV抗体检测阴性HIV感染产妇所生婴幼儿的抗体检测HIVHIV抗体确证实验的相关规程和结果解释抗体确证实验的相关规程和结果解释o复检阳性或一阴一阳的样本 确认实验 送确认前，应核对身份，补充个人信息（姓名，身份证号等）填写”HIV抗体复检检测单”样本“三级包装”第一层：带盖的试管第二层：防水，防漏第三层：包装箱（内附缓冲材料）HIV抗体确认实验o包括：免疫印迹

6、实验免疫印迹实验(WB)条带免疫试验条带免疫试验(LIA)免疫荧光试验免疫荧光试验(IFA)放射免疫沉淀试验放射免疫沉淀试验(RIPA)HIV抗体确认实验结果抗体确认实验结果a 强阳性对照（强阳性对照（HIV-1和和HIV-2）b弱阳性对照（弱阳性对照（HIV-1）c阴性对照阴性对照d典型的典型的HIV-2血清阳性反应血清阳性反应 a b c d a b c dgp160gp160gp120gp120 p66 p66p55p55p51 p51 gp41gp41p39p39 p31 p31P24P24p17p17 血清对照血清对照血清对照血清对照HIV-2HIV-2特异带特异带特异带特异带HIV

7、抗体确认实验结果抗体确认实验结果HIV抗体确证实验的流程HIV抗体检测的样本保存o用于抗体和抗原检测的血清和血浆样本：1周内 2-8保存 1周-20 保存o筛查阳性样本：送确证o筛查阴性样本：根据具体情况，至少1-2个月o确证样品：保存10年以上目前我市HIV筛查实验室中存在的问题o实验室布局不合理，没有严格分区；没有标识 应设严格分区（污染区、半污染区和洁净区）；生物安全标应设严格分区（污染区、半污染区和洁净区）；生物安全标识识o个别实验室设备不全，没有安全柜o仪器没有定期校准 酶标仪酶标仪/洗板机、加样器，温度计，高压灭菌器，生物安全柜洗板机、加样器，温度计，高压灭菌器，生物安全柜每年校准

8、，每季度期间核查每年校准，每季度期间核查o没有HIV实验室生物安全管理制度和SOP 实验活动的基本依据，必须建立，每年应进行检查修订，并实验活动的基本依据，必须建立，每年应进行检查修订，并有记录有记录目前我市HIV筛查实验室中存在的问题o没有质控记录：很多实验室都有o人员流动性大，经培训的专业技术人员严重不足，部分人员未经专业技术培训就上岗 保证实验室负责人和主要技术 人员的稳定，两年一培训，考核合格，持证两年一培训，考核合格，持证上岗上岗o实验室技术人员生物安全意识淡薄 增强安全意识，做好防护，保护自身安全o实验室原始记录不规范，缺乏可溯源性 应体现加样步骤和位置；试剂厂家、批号、效期，检测

9、人和复核人应体现加样步骤和位置；试剂厂家、批号、效期，检测人和复核人目前我市HIV筛查实验室中存在的问题o复检阳性结果的报告问题 筛查实验阴性直接出报告；复检后为阳性或一阴一阳的样本报告为“HIV抗体代确证”，用“HIV抗体复检检测单”进行报告o送错样本 认真核对样本，补充个人信息，必要时采集第二份血o质控品的使用时限 -20 有效期内均可使用；解冻后的1周内用完o送检样本包装不合格，没有送检单（HIV复检检测单）o阴性样本的保存问题 建议至少保存建议至少保存1-21-2月月HIV确证结果的反馈、解释和报告o一般5个工作日出具结果，国家规范是10天o第一时间上传到网报系统o结果查询电话24333419oHIV-1抗体检测不确定结果的解释