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1、室内检验员专业技术知识之重量活力等测定室内检验员专业技术知识之重量、活力等测定第十二章 重量测定第一节 概述一、种子千粒重的含义种子重量测定是指测定一定数量种子的重量,通常是指测定1000粒种子的重量,即千粒重。种子千粒重是指种子质量标准规定水分的1000粒种子的重量,以克为单位。千粒重测定原则是从充分混合的净种子中随机数取一定数量的种子,称其重量。第一节 概述二、千粒重测定目的和意义1.种子千粒重反映种子的饱满程度,是种子质量的指标之一。2.根据千粒重,可以做到精量播种,节约用种。3.千粒重是作物产量构成的要素之一。第二节 测定程序一、测定方法分为百粒法、千粒法和全量法三种。二、百粒法测定程

2、序1.数取试样:从净度分析后充分混合的净种子中,随机数取试验样品8个重复,每个重复100粒。2.试样称重:8个重复分别称重,小数位点保留位数与净度分析中的规定相同。3.检查重复间的容许变异系数,计算实测千粒重。4.换算成规定水分下的千粒重。5.结果报告。第二节 测定程序三、千粒法测定程序1.数取试样:从净度分析后充分混合的净种子中,随机数取试验样品2个重复,大粒种子每个重复500粒,中小粒种子每个重复1000粒。2.试样称重:2个重复分别称重,小数位点保留位数与净度分析中的规定相同。3.检查重复间的容许变异系数,计算实测千粒重. 两份重量的差数与平均数之比不能超过去5%,否则再做一份重复,直至

3、达到要求.取差数最小的两份重复平均数来计算千粒重。4.换算成规定水分下的千粒重。p1525.结果报告。第二节 测定程序四、全量变法测定程序1.数取试样:数取净度分析后的全部净种子的种子总粒数。2.试样称重:小数位点保留位数与净度分析中的规定相同。3.换算成规定水分下的千粒重。4.结果报告。第十四章 生活力的四唑测定实际工作中如种子贸易时常需要在短时间内掌握种子批的生活力状况，如果种子处于休眠状态则难以通过发芽测定得到结果。种子生活力测定可以满足这一需要，四唑测定可以测定出休眠种子样品的生活力百分率。四唑测定方法于1942年由德国的G. Lakon教授发明，第2次世界大战期间传入美国。随着四唑测

4、定技术的发展，ISTA(国际种子检验协会)于1950年成立四唑测定技术委员会，致力于种子四唑测定技术的发展。2003年出版ISTA四唑测定工作手册，列有120种农业和122种林业种、属的四唑测定方法。 第一节 概述一、生活力概念种子生活力（seed viability）是种子发芽的潜在能力或种胚具有的生命力。第一节 概述二、种子生活力测定的意义1. 可以测定休眠种子的生活力2.快速预测种子发芽能力种子贸易中，常因时间紧迫，不可能采用正规的发芽试验来测定发芽力，这是因为发芽试验所需的时间更长。林木种子可用生活力代替发芽力。第一节 概述三、四唑染色测定的原理在种子组织活细胞内脱氢酶的作用下，无色的

5、氯化三苯基四氮唑，接收活种子代谢过程中呼吸链上的氢，在活细胞里变成还原态的红色、稳定、不扩散的三苯基甲 月替(Triphenyl Formazam)。可根据四唑染成的颜色和部位，区分种子红色的有生活力部分和无色的死亡部分。2，3，5-氯化三苯基四氮唑 三苯基甲月替 (无色) (红色)第一节 概述种子有无生活力主要取决于胚和(或)胚乳(或配子体)坏死组织的部位和面积的大小，而不一定在于颜色的深浅。颜色的差异主要是将健全的、衰弱的和死亡的组织判别出来。根据以上理由和所用指示剂，把这种测定称为“局部解剖图形的四唑测定”(topographical tetrazolium test)。这就是说，是根据

6、种子胚和活营养组织局部解剖染色部位及颜色状况，鉴定种子胚的死亡部分，查明种子死亡的原因。第一节 概述四、四唑测定适用的范围收获后需马上播种的种子；具有深休眠的种子；发芽缓慢的种子；要求估测发芽潜力的种子。另外，也适用于测定发芽末期个别种子的生活力，特别是怀疑有休眠时；测定已萌发种子，或收获期间存在的不同类型和/或加工的损伤（热害、机械损伤或虫蛀等）种子；解决发芽试验中存在的问题，如不清楚不正常幼苗产生的原因或怀疑杀菌剂的处理效果等。第一节 概述五、四唑测定方法的特点四唑测定是一种世界公认、广泛应用、实用方便、省时快速、结果可靠的种子生活力检验方法。具体地说具有以下几个特点：1.原理可靠，结果准

7、确。如能正确使用四唑测定方法，四唑测定结果与发芽率误差一般不会超过3%5%。2.不受休眠限制。3.方法简便、省时快速。4.成本低廉。四唑测定也有其缺陷：如对种子检验员经验和技能要求较高；结果不能提供休眠的程度；处理种子不会像发芽试验能反映药害情况。第二节 试剂的配制和仪器设备一、试剂的配制1四唑溶液2磷酸缓冲液3乳酸苯酚透明液采用乳酸苯酚透明液，是使小粒豆类和牧草种子经四唑染色后使种皮、稃壳或胚乳变为透明,以便透过这些部分清楚地观察其胚主要构造的染色情况。第二节 试剂的配制和仪器设备二、仪器和设备四唑测定的主要仪器设备与发芽试验设备相同，可采用其设备：如电热恒温箱或发芽箱、冰箱。四唑测定需配备

8、的小器具有：种子切割工具如解剖刀或刀片、小针、切割垫板等；种子预湿需要纸、毛巾、烧杯等器具；染色时，要准备有盖的不同规格的染色盘、棕色加液器、镊子、吸管等；观察器具如体视显微镜或放大镜；以及保护器具如手套、眼睛保护镜、废液处理容器等。第三节 四唑测定程序一、试验样品的来源数取 试验样品来源必须是净种子。净种子可以从净度分析后的净种子中随机数取，也可以从送验样品中直接随机数取。一般随机数取100粒种子，24个重复或少于100粒的若干副重复。如果是测定发芽末期休眠种子的生活力，则可单用试验末期的休眠种子。委托检验可以直接从经充分混合的种子样品中随机数取种子。第三节 四唑测定程序二、种子预处理在正式

9、测定前，对所测种子样品需经过预处理（预措预湿），其主要目的是使种子加快和充分吸湿，软化种皮，方便样品准备和促进活组织酶系统的活化，以提高染色的均匀度、鉴定的可靠性和正确性。第三节 四唑测定程序预措-是指在种子预湿前除去种子的外部附属物和在种子非要害部位弄破种皮，如水稻种子需脱去内外稃壳，豆科硬实种子刺破种皮等，但须注意，预措不能损伤种子内部胚的主要构造。绝大多数种子不须进行预措处理，但有一些种子在预湿前要进行预措处理。预湿是四唑染色测定的必要步骤。预湿方法目前常用的有以下两种方法：第三节 四唑测定程序1缓慢润湿缓慢润湿是按种子发芽试验所采用方法，将种子放在纸床上或纸巾间，让其缓慢吸湿。该法适用

10、于那些直接浸在水中容易破裂和损伤的种子，以及已经劣变的种子或过分干燥的种子。缓慢润湿可采用下面两种方法：纸卷或纸间预湿纸床上预湿第三节 四唑测定程序2水中浸渍水中浸渍是将种子完全浸入水中，种子吸水快、均匀，并可缩短预湿时间。该法适用于种子直接浸入水中不会造成组织破裂损伤，并不会影响鉴定结果的种子种类，包括水稻、小麦、大麦、燕麦、黑麦草、黑麦、玉米等，详见表14-l。浸种温度一般采用2030或30水温。第三节 四唑测定程序三、染色前的样品准备为了使四唑溶液快速和充分渗入种子的全部活组织，加快染色反应和正确鉴定胚的主要构造，大多数种子在染色前必须采用适当的方法使胚的主要构造和(或)活的营养组织暴露

11、出来。第三节 四唑测定程序1不须样品准备种皮渗水性良好的豆类种子，在四唑溶液里染色时，就能随着四唑溶液的渗入而吸胀，并在染色后剥去种皮就可正确鉴定，这类种子不须样品准备。2沿胚纵切3近胚纵切第三节 四唑测定程序4上半粒纵切5斜切种子6剥去种皮7横切胚轴和盾片8平切果种皮和胚乳，暴露出胚的构造9穿刺或切开胚乳10切去种子基端11横切胚乳图14-1 一些常见作物种子的准备示意图1禾谷类和禾本科牧草种子通过胚和约在胚乳四分之三处纵切。2燕麦属(Avena)和禾本科牧草种子靠近胚部横切。3禾本科牧草种子通过胚乳末端部分横切和纵切。4禾本科牧草种子刺穿胚乳。5通过子叶末端一半纵切，如莴苣属(Lactuc

12、a)和菊科(Asteraceae)中的其他属。6纵切面表明似上述第5种方式进行纵切时的解剖刀部位。7。沿胚的旁边纵切伞形科(Apiaceae)中的种和其他具有直立胚的种8针叶树种子沿胚旁边纵切。9在两端横切，打开胚腔，并切去小部分胚乳(配子体组织)o第三节 四唑测定程序四、四唑染色四唑溶液必须完全淹没种子，溶液不能直接露光，因为光线可能使四唑盐类还原而降低其浓度，影响染色效果。按表14-1（GB/T 3543.7-1995表1）的要求，将经过样品准备或不须准备的规定数量种子分别放入四唑溶液里染色。小粒种子可用直径6cm培养皿，大、中粒种子可用9cm培养皿或更大的容器，特别细小的种子可包在滤纸内

13、，分别放入容器里。然后加入适宜浓度的四唑溶液，移置一定温度的恒温箱内进行染色反应。第三节 四唑测定程序五、鉴定前处理为了确保鉴定结果的正确性，还应将已染色的种子样品，加以适当的处理，再进一步使胚的主要构造和活的营养组织明显地暴露出来，以便观察鉴定。1不须处理，直接观察适用于染色前已进行样品准备的整个胚、摘出的胚中轴、纵切或横切的胚等样品。因为这些种子胚的主要构造已暴露在外面，所以不须附加处理，就可直接观察鉴定。第三节 四唑测定程序2轻压出胚，观察鉴定3扯开营养组织，暴露出胚4切去一层营养组织，暴露出胚和活营养组织5沿胚中轴纵切，暴露胚的构造6沿种子中线纵切，暴露出胚和活营养组织第三节 四唑测定

14、程序7剥去半透明的种皮或种子组织，暴露出胚8切去切面碎片或掰开子叶，暴露出胚9剥去种皮和残余营养组织，暴露出胚10乳酸苯酚透明液的应用加入24滴乳酸苯酚透明液，适当摇晃，使其与种子良好接触，38恒温箱保持3060min，经清水漂洗或直接观察。第三节 四唑测定程序六、观察鉴定一般鉴定原则是，凡是胚的主要构造及有关活营养组织染成有光泽的鲜红色，且组织状态正常的，为有生活力种子。凡是胚的主要构造局部不染色或染成异常的颜色和光泽，并且活营养组织不染色部分已超过二分之一，或超过容许范围，以及组织软化的，完全不染色或染成无光泽的淡红色或灰白色，且组织已软化腐烂或异常、虫蛀、损伤的均为无生活力种子。图14-

15、2 玉米种子四唑染色图谱1.有生活力胚全染成深红色。2.有生活力仅盾片两端少部不染色。3.有生活力-仅盾片先端及胚芽鞘先端及少部不染色4.有生活力胚芽鞘先端不染色.5.有生活力胚芽鞘先端及胚根顶端23以下不染色，种子根区染色6.无生活力胚根大部不染色，已波及种子根区。7.无生活力胚芽全不染色。8.无生活力胚轴不染色。9.无生活力盾片与胚轴连接处不染色。10.无生活力盾片两端不染色部份已超过12。11.无生活力盾片12以上不染色。12.无生活力胚全不染色。图14-3 水稻种子四唑染色图谱1.有生活力胚全染成深红色（不染部分属胚芽鞘和盾片间隙）。2.有生活力盾片先端染色稍浅。3.有生活力-盾片先端

16、及胚芽鞘先端不染色4.无生活力胚根全不染色.5.无生活力胚芽先端、胚芽鞘及盾片先端染色较浅。6.有生活力胚全染成红色。7.有生活力盾片全部染色，胚根胚芽鞘部分染色较浅。8.无生活力盾片全不染色。9.无生活力胚大部分染色较浅。10.无生活力胚全不染色。图14-4 棉花种子四唑染色图谱1.有生活力染色后将子叶分开的胚可见两片子叶及怔根均染成红色。2.有生活力胚全染成深红色 3.无生活力胚根中段不染色。4.无生活力子叶关键部位不染色。5.无生活力子叶基部不染色。6.无生活力胚根中部很长一段不染色。7.无生活力胚根先端不染色，子叶内部大部染色很浅。8.无生活力子叶大部不染色。9.无生活力胚全不染色。图

17、14-5 番茄种子四唑染色图谱1.有生活力胚全染色。2.无生活力胚根基部及子叶先端不染色或染色很淡。3.无生活力一子叶基部不染色。4.无生活力子叶大部染色很淡。5.无生活力子叶全不染色。6.无生活力胚根先端明显不染色。7.无生活力胚的中段，包括胚轴及与之相连的胚根及子叶均不染色8.无生活力胚全不染色。图14-6 辣椒种子四唑染色图谱1.有发芽力胚全染色。2.有发芽力片子叶顶端约12不染色，另一片全染色。3.无发芽力胚根先端不染色，子叶中部有一小段染色很浅。4.无发芽力子叶中段不染色。5.无发芽力子叶全不染色。6.无发芽力子叶基部端不染色。7.无发芽力胚多处不染色。8.无发芽力胚全不染色。图14

18、-7 油菜种子四唑染色图谱1、2.有生活力胚全染成深红色。3.有生活力-子叶顶端有小于1/3不染色4.无生活力胚根先端及侧面有大于直径1/4的不染色.5.无生活力胚根基部不染色，子叶极小部分不染色6.无生活力胚根一侧约1/2不染色。7.无生活力胚根大部分不染色。8.无生活力子叶与胚轴相连处不染色。9.有生活力外方一枚子叶非关键部位部分不染色。10.无生活力外方一枚子叶染色很浅。11.无生活力仅子叶的一部分染成浅红色，其余全部不染色。12.无生活力胚全不染色。case第十四章第十五章 活力测定种子活力(seed vigor)是种子质量的重要指标之一,也是反映种用价值的主要组成部分,与种子田间出苗

19、质量密切相关。活力的测定经过几十年的研究，已经取得了重大进展。在美国和欧洲，活力测定应用已经很普遍，许多种子公司把活力测定作为常规的检测项目。第一节 概述一、种子活力的概念和定义种子活力不像种子发芽率那样是一个单一的测定特性，而是描述种子出苗不同方面（包括田间和贮藏期间）的综合特性。第一节 概述2004年出版的国际种子检验规程将活力定义为：“种子活力是指在广泛的环境条件下，决定可接受发芽率的种子批的活性和性能那些特性的综合表现”。并作了进一步的阐述，种子活力不是一种简单的测定概念，而是一种能表达如下有关种子批性能多种特性的综合概念：（1）种子发芽和幼苗生长速率和整齐度；（2）种子在不利环境条件

20、下的出苗能力；（3）贮藏后，特别是能保持发芽力的性能。高活力种子批即使在不适宜的环境条件下，仍具有良好性能的潜力。第一节 概述二、种子活力的重要意义1高活力种子的生产优越性种子活力是种子重要的品质，高活力种子具有明显的生长优势和生产潜力。(1)提高田间出苗率。(2)抵御不良环境条件。第一节 概述(3)增强对病虫、杂草的竞争能力。 (4)抗寒力强，适于早播。(5)节约播种费用。(6)增加作物产量。(7)提高种子耐藏性。可见，高活力种子对农业生产具有十分重要的意义。第一节 概述三、活力、生活力和发芽力的区别及关系1种子生活力是指种子发芽的潜在能力或种胚具有的生命力，通常用供检样品中活种子数占样品总

21、数的百分率表示。种子发芽力是指种子在适宜条什下（检验室控制条件下）长成正常植株的能力，通常用供检样品中长成正常幼苗数占样品总数的百分率，即发芽率表示。第一节 概述国际种子检验规程指出，在下列6种情况下，如果鉴定正确，生活力测定和发芽率测定的结果基本是一致：无休眠、无硬实或通过适宜的预处理破除了休眠和硬实；没有感染或已经过适宜的清洁处理；在加工时未受到不利条件或贮藏期间未用有害化学药品处理；尚未发生萌芽；在正常或延长的发芽试验中未发生劣变；发芽试验是在适宜的条件下进行的。第一节 概述种子活力简单地说就是指高发芽率种子批间在田间表现的差异。由此可见，种子活力是比发芽率更敏感的指标，在高发芽率的种子

22、批中，仍然表现出活力的差异。通常高发芽率的种子具有较高活力，但两者不存在正相关。关于活力和发芽之间的关系,Isely已于1957年以图解形式表示（见图15-1）。第二节 种子活力测定方法分类和要求一、活力测定方法的分类种子活力测定方法的种类多达数十种。其分类的方法归纳起来不外乎直接法和间接法两类。直接法是在检验室条件下模拟田间不良条件测定田间出苗率的方法，如低温处理是模拟早春播种期的低温条件；砖砂（砾）试验是模拟田间板结土壤或粘土地区的条件。间接法是在检验室内测定与田间出苗率（活力）相关的种子特性的方法，如测定某些生理生化指标（酶的活性、呼吸强度等）及测定生化劣变处理后的发芽率（加速老化试验、

23、人工劣变试验等）。第二节 种子活力测定方法分类和要求现将ISTA和AOSA推荐和建议的活力测定方法及种类简介如下：1ISTA活力测定方法（活力测定力法手册，1995版）第二节 种子活力测定方法分类和要求第一类是推荐种子活力测定方法，也是目前国际种子检验规程已经列入的方法，包括两种方法：电导率测定（conductivity test）、加速老化测定（accelerated ageing test）。这两种推荐方法已基本上标准化，将在下面作详细的介绍。第二节 种子活力测定方法分类和要求第二类是建议的种子活力测定方法，包括七种不同类型的方法：冷冻测定（cold test）；低温发芽测定（cool g

24、ermination test）；人工控制劣变试验（controlled deterioration test）；复合逆境活力测定（complex stressing vigor test）；希尔特纳试验（hiltner test）；幼苗生长测定（seedling growth test）包括幼苗测量和幼苗评定，幼苗测量包括幼苗生长测定和幼苗生长速率测定，幼苗评定包括卷纸法和砂法；四唑测定（tetrazolium test）包括剖面四唑法和糊粉层四唑测定两种方法。第二节 种子活力测定方法分类和要求2AOSA(种子分析者协会)活力测定方法（活力测定手册）AOSA于1983年颁发了活力测定手册，该

25、手册也包括两类的方法。第一类是广泛应用的方法：幼苗生长和评定试验（幼苗活力分级、幼苗生长速率测定发芽末期幼苗长度和干重）；逆境试验（包括加速老化试验、低温试验、冷发芽试验）；生化试验（包括四唑法和电导率法）。第二类是推荐应用的方法：幼苗生长和评定试验；逆境试验（包括砖砂试验、渗透逆境试验即高渗试验）；生化测定（包括呼吸测定、谷氨酸脱羧酶（GADA）活性测定、ATP含量测定）。AOSA 所列方法较多，其中有六种测定方法与ISTA规定的方法基本相同。第二节 种子活力测定方法分类和要求二、选用活力测定方法的原则和要求1选用原则根据当地土壤气候条件选用适宜的方法，如低温试验适合早春播种季节低温气候条件

26、，不适合于早春温暖地区，再如砖砂试验适用于粘土地区或雨后土壤板结情况，不适用于土壤较为疏松地区，欧洲土壤粘重应用砖砂试验较多，而美国则很少应用，仅作为推荐方法。根据作物的特性选用适宜的方法。如低温试验和冷发芽法适用发芽期间耐寒性较差的喜温作物，如玉米、大豆等，不适用于耐寒性较强的作物，如大麦、小麦、油菜等。又如电导率测定是豌豆种子的典型测定方法，其测定结果与田间出苗率高度相关，但对其他作物种子并非适合，其测定结果与田间出苗相关性较差。第二节 种子活力测定方法分类和要求2选用要求节约费用，仪器设备不能太昂贵；简单易行，测定技术不太复杂，易于推广；快速省时，短期内可获得测定结果；结果准确，能真实反

27、映一批种子的活力水平，且与田间出苗率有良好相关；重演性好，在同一检验室不同检验人员或在不同检验室能获得比较一致的结果。第二节 种子活力测定方法分类和要求三、活力测定方法的基本要求1试样种子试验样品来源必须是净种子。净种子可以从净度分析后的净种子中随机数取，也可以从送验样品中直接随机数取。除委托检验外，所需种子数和重复必须随机从种子批的有代表性样品的净种子部分中数取。方法和试验条件活力测定方法各不相同，具体的方法和使用仪器及试验条件将在本章以后各节中加以说明。第二节 种子活力测定方法分类和要求对照样品活力测定需要比标准发芽试验更加严格的试验条件控制，因此，种子活力测定的检验室需要制备对照样品。设

28、置对照样品的目的是为活力测定结果提供一致性的内在质量控制。对照样品的结果差异反映了试验条件（如温度、种子水分或其他因素）的微小变异，而会导致明显影响结果的可靠性。第二节 种子活力测定方法分类和要求4结果计算与表示将在本章以后各具体方法中节中加以叙述给出其详细程序。5结果报告填报采用本章第三节和第四节规定的程序，将活力测定结果，填报在检验报告“其他测定”栏内。同时结果还须附有检测方法的说明，包括必要时测定方法及条件包括时间、温度和种子水分等信息。第三节 加速老化试验一、原理加速老化试验(accelerated ageing test，以下简称AA测定)是根据高温(4045)和高湿(100相对湿度

29、)能导致种子快速劣变这一原理进行测定。高活力种子能忍受逆境条件处理，劣变较慢；而低活力种子劣变较快，长成较多的不正常幼苗或者完全死亡。AA测定最早是由Delouehe等(1973)创造的用来预测许多种的种子寿命。经过多年的发展，目前AA测定主要用于两方面，一是预测田间出苗率二是预测耐藏性第三节 加速老化试验二、适用范围与局限性国际种子检验规程所规范的AA测定法适用于大豆种子；ISTA手册指出该法也适用于许多其他种，详见表15-2所列的种。AA测定结果也是可以控制的。AOSA和ISTA用大豆种子核准试验表明在试验室间有很大的一致性，并证实AA发芽试验与田间出苗的关系。现在也有足够证据证实用该试验

30、能取得重演性结果。因此，AOSA现在认为作为大豆试验的方法已经标准化，可以推荐。但是必须按本节所规定的程序和仪器进行操作，在温度控制、样品大小或老化时间的小量改动会引起最后水分和(或)发芽率的变化。第三节 加速老化试验三、仪器和药品老化外箱：推荐应用水套培养箱，保持恒温(41土0.3)。如果没有水套培养箱，其他有加水的加热培养箱也可。使用这些培养箱，水应在外箱内，以防凝结。水掉在内箱盒上，会在盖内产生凝结，提高种子水分，降低发芽率，增加发霉。因此，当外箱有大量凝结水时，当心保护内箱在老化期间的小水点积累。外箱通常不需要很准确的温度控制，需要附加控制保持温度均匀。老化内箱：老化内箱为带盖的塑料盒，大小为11.0cm11.0cm 3.5cm，内有一个网架盘10.0cml0.0cm03cm(网孔为1418)。老化内箱可以购买，也可以自制（见图15-3）。注意盖不应密封（见图15-3）。第三节 加速老化试验天平：感量为0.001g。水：去离子水或蒸馏水。带刻度的容量杯：刻度从0至100mL，从标准的容量器或有50mL刻度的容器准确量取40mL水。铝盒(供种子水分测定)。