凝集反应.ppt

1、人民卫生出版社人民卫生出版社免疫学检验免疫学检验人民卫生出版社人民卫生出版社第十三章第十三章 凝集反应凝集反应人民卫生出版社人民卫生出版社1.1.凝集反应概念、特点及类型。凝集反应概念、特点及类型。2.2.直接凝集反应原理、方法类型及临床应用。直接凝集反应原理、方法类型及临床应用。3.3.间接凝集反应原理、方法类型及临床应用。间接凝集反应原理、方法类型及临床应用。4.4.抗球蛋白试验原理、方法类型及临床应用。抗球蛋白试验原理、方法类型及临床应用。5.5.冷凝集试验的原理和临床应用。冷凝集试验的原理和临床应用。本章要点本章要点人民卫生出版社人民卫生出版社返回总目录返回总目录目录目录 概述概述1第

2、一节第一节 直接凝集反应直接凝集反应2第二节第二节 间接凝集反应间接凝集反应3第三节第三节 抗球蛋白试验抗球蛋白试验4第四节第四节 冷凝集试验冷凝集试验5小结小结6人民卫生出版社人民卫生出版社 早在早在18961896年，年，WidalWidal就利用伤寒病人的血清与伤寒杆就利用伤寒病人的血清与伤寒杆菌发生特异性凝集的现象，有效地诊断伤寒病。菌发生特异性凝集的现象，有效地诊断伤寒病。至至19031903年，年，LandsteinerLandsteiner在特异性血凝现象的基础上在特异性血凝现象的基础上发现了人类发现了人类ABOABO血型，并于血型，并于19301930年获得了诺贝尔医学年获得了

3、诺贝尔医学奖。奖。概述概述人民卫生出版社人民卫生出版社一、概念一、概念 细菌、红细胞等颗粒性抗原与相应抗体结合后，在适细菌、红细胞等颗粒性抗原与相应抗体结合后，在适当电解质存在下，形成肉眼可见的凝集现象。当电解质存在下，形成肉眼可见的凝集现象。颗粒性抗原还包括可溶性抗原（或抗体）与载体颗粒颗粒性抗原还包括可溶性抗原（或抗体）与载体颗粒(O(O型人红细胞、绵羊红细胞、聚苯乙烯胶乳、炭粒等型人红细胞、绵羊红细胞、聚苯乙烯胶乳、炭粒等)结合成的致敏颗粒。结合成的致敏颗粒。人民卫生出版社人民卫生出版社二、特点二、特点1.1.抗原分子大，介质中成均匀的颗粒悬液。抗原分子大，介质中成均匀的颗粒悬液。2.2

4、.抗原抗体复合物以抗原为主。抗原抗体复合物以抗原为主。3.3.试验时稀释抗体。试验时稀释抗体。4.4.效价报告抗体的稀释度。效价报告抗体的稀释度。人民卫生出版社人民卫生出版社三、主要技术类型三、主要技术类型人民卫生出版社人民卫生出版社第一节第一节 直接凝集反应直接凝集反应 细菌、红细胞等颗粒抗原，在适当电解质参与下可细菌、红细胞等颗粒抗原，在适当电解质参与下可直接与相应抗体结合出现凝集，称为直接与相应抗体结合出现凝集，称为直接凝集反应直接凝集反应（direct agglutinationdirect agglutination）。）。凝集反应中的抗原称为凝集原（凝集反应中的抗原称为凝集原（ag

5、glutinogenagglutinogen），），抗体称为凝集素（抗体称为凝集素（agglutininagglutinin）。）。常用的凝集试验有玻片法和试管法两种。常用的凝集试验有玻片法和试管法两种。人民卫生出版社人民卫生出版社一、玻片凝集试验一、玻片凝集试验+人民卫生出版社人民卫生出版社临床应用临床应用:1.1.菌种鉴定菌种鉴定2.2.血清学分型血清学分型3.3.血型鉴定血型鉴定方法评价方法评价:1.1.操作简单、快速操作简单、快速2.2.敏感度低敏感度低3.3.定性检测定性检测人民卫生出版社人民卫生出版社 二、试管凝集试验二、试管凝集试验在试管内颗粒性抗原直接与抗体结合，在电解质在试管

6、内颗粒性抗原直接与抗体结合，在电解质的作用下，出现肉眼可见的凝集现象。的作用下，出现肉眼可见的凝集现象。人民卫生出版社人民卫生出版社为半定量试验方法，在微生物学检验中常用已知菌为半定量试验方法，在微生物学检验中常用已知菌液与一系列稀释的受检血清混合，保温后观察每管液与一系列稀释的受检血清混合，保温后观察每管内抗原凝集程度，通常以产生明显凝集现象的最高内抗原凝集程度，通常以产生明显凝集现象的最高稀释倍数作为血清中抗体的效价，亦称为滴度。稀释倍数作为血清中抗体的效价，亦称为滴度。人民卫生出版社人民卫生出版社临床应用：临床应用：1.1.肥达试验肥达试验Widal testWidal test2.2.

7、外斐氏试验外斐氏试验Weil-Weil-felix testfelix test3.3.交叉配血试验交叉配血试验方法评价：方法评价：1.1.半定量试验半定量试验2.2.操作简便、快速操作简便、快速3.3.敏感度不高敏感度不高4.4.可有假阳性可有假阳性人民卫生出版社人民卫生出版社第二节第二节 间接凝集反应间接凝集反应 将可溶性抗原或抗体吸附于颗粒性载体表面，将可溶性抗原或抗体吸附于颗粒性载体表面，然后与相应的抗体或抗原反应，在电解质的作用下，然后与相应的抗体或抗原反应，在电解质的作用下，出现肉眼可见的凝集现象。出现肉眼可见的凝集现象。人民卫生出版社人民卫生出版社一、载体一、载体 RBCRBC

8、聚苯乙烯胶乳聚苯乙烯胶乳 载体的种类载体的种类 离子交换树脂离子交换树脂 活性炭活性炭 明胶颗粒明胶颗粒人民卫生出版社人民卫生出版社载体的条件：载体的条件：1.1.不溶于水，理化性质稳定且无化学和免疫学活性。不溶于水，理化性质稳定且无化学和免疫学活性。2.2.大小均匀，密度与介质相近。大小均匀，密度与介质相近。3.3.能直接吸附和通过偶联剂牢固结合抗原抗体。能直接吸附和通过偶联剂牢固结合抗原抗体。人民卫生出版社人民卫生出版社二、方法类型二、方法类型 根据致敏载体用的是抗原或抗体以及凝集反应的根据致敏载体用的是抗原或抗体以及凝集反应的方式不同，间接凝集反应可分为方式不同，间接凝集反应可分为4 4

9、类类:1.1.正向间接凝集试验正向间接凝集试验 2.2.反向间接凝集试验反向间接凝集试验 3.3.间接凝集抑制试验间接凝集抑制试验 4.4.协同凝集试验协同凝集试验人民卫生出版社人民卫生出版社人民卫生出版社人民卫生出版社人民卫生出版社人民卫生出版社人民卫生出版社人民卫生出版社人民卫生出版社人民卫生出版社三、间接血凝试验三、间接血凝试验抗原致敏抗原致敏红细胞红细胞红细胞红细胞+抗原抗原抗原致敏红抗原致敏红细胞凝集细胞凝集抗体抗体人民卫生出版社人民卫生出版社四、胶乳凝集试验四、胶乳凝集试验 胶乳凝集试验也是间接凝集反应，因所用的胶乳凝集试验也是间接凝集反应，因所用的载体颗粒为聚苯乙烯胶乳而得名。载

10、体颗粒为聚苯乙烯胶乳而得名。人民卫生出版社人民卫生出版社胶乳凝集抑制试验检测胶乳凝集抑制试验检测HCGHCG：标本中加入相应量的标本中加入相应量的HCGHCG抗体，抗体与尿中抗体，抗体与尿中HCGHCG结结合，再加入合，再加入HCGHCG胶乳抗原，本应凝集反应受到抑制，说胶乳抗原，本应凝集反应受到抑制，说明尿中含明尿中含HCGHCG，妊娠反应阳性。，妊娠反应阳性。人民卫生出版社人民卫生出版社第三节第三节 抗球蛋白试验抗球蛋白试验抗球蛋白试验由抗球蛋白试验由CoombsCoombs于于19451945年建立，故又称为年建立，故又称为CoombsCoombs试验，是检测抗红细胞不完全抗体的经典试验

11、，是检测抗红细胞不完全抗体的经典方法。方法。CoombsCoombs利用抗球蛋白抗体作为第二抗体，连接结利用抗球蛋白抗体作为第二抗体，连接结合在红细胞表面抗原的不完全抗体，使红细胞凝合在红细胞表面抗原的不完全抗体，使红细胞凝集。常用试验方法有直接抗球蛋白试验和间接抗集。常用试验方法有直接抗球蛋白试验和间接抗球蛋白试验。球蛋白试验。人民卫生出版社人民卫生出版社一、直接抗球蛋白试验一、直接抗球蛋白试验 人民卫生出版社人民卫生出版社直接抗球蛋白试验既可用玻片法定性测定，也可用试管法作半定量分析。常用于新生儿溶血症、自身免疫性溶血性贫血和医源性溶血性疾病等的检测。人民卫生出版社人民卫生出版社二、间接抗

12、球蛋白试验二、间接抗球蛋白试验人民卫生出版社人民卫生出版社此试验可用于检测母体Rh（D）抗体，以便及早发现和避免新生儿溶血症的出现。可用于对红细胞不相容输血所产生的血型抗体进行检测。还可对某些细菌、立克次体感染后产生的不完全抗体进行检测。人民卫生出版社人民卫生出版社第四节第四节 冷凝集试验冷凝集试验 冷凝集试验是用于检测血清中冷凝集素的方法。冷凝集试验是用于检测血清中冷凝集素的方法。冷凝集素（冷凝集素（cold agglutinincold agglutinin）是冷反应型抗红）是冷反应型抗红细胞抗体，具有较强的凝集红细胞的作用，属于细胞抗体，具有较强的凝集红细胞的作用，属于IgMIgM型抗体

13、，可存在于正常人血清中，但是正常人型抗体，可存在于正常人血清中，但是正常人血清抗红细胞抗原的血清抗红细胞抗原的lgMlgM冷凝集素效价比较低。冷凝集素效价比较低。人民卫生出版社人民卫生出版社冷凝集试验可协助诊断肺炎支原体感染引起的肺炎，可用于辅助诊断冷凝集素综合征、传染性单核细胞增多症、疟疾、肝硬化、淋巴瘤及多发性骨髓瘤等。冷凝集试验是传统的实验方法，但是其敏感度和特异性不强。人民卫生出版社人民卫生出版社小小 结结方法类型方法类型原理原理临床用途临床用途方法评价方法评价玻片凝集试验玻片凝集试验抗原与抗体在玻片上直接反应抗原与抗体在玻片上直接反应 血型的鉴定、菌种诊血型的鉴定、菌种诊断或分型断或

14、分型简便、快速，敏感度低，简便、快速，敏感度低，多用于定性试验多用于定性试验试管凝集试验试管凝集试验抗原与系列倍比稀释的血清在抗原与系列倍比稀释的血清在试管内反应试管内反应交叉配血、辅助诊断交叉配血、辅助诊断伤寒和斑疹伤寒伤寒和斑疹伤寒操作简单，敏感度不高，操作简单，敏感度不高，为半定量试验为半定量试验间接凝集试验间接凝集试验抗原（抗体）致敏载体，检测抗原（抗体）致敏载体，检测标本中相应抗体（抗原）标本中相应抗体（抗原）检测病原微生物和自检测病原微生物和自身免疫病相关抗体身免疫病相关抗体操作简单、快速，敏感操作简单、快速，敏感度和特异性高度和特异性高间接凝集抑制间接凝集抑制试验试验抗原致敏载体

15、检测是否存在与抗原致敏载体检测是否存在与致敏抗原相同的抗原致敏抗原相同的抗原绒毛膜促性腺激素绒毛膜促性腺激素(HCG)(HCG)的检测的检测灵敏度高于上面间接凝灵敏度高于上面间接凝集试验集试验协同凝集试验协同凝集试验抗体致敏金黄葡萄球菌颗粒作抗体致敏金黄葡萄球菌颗粒作为诊断试剂检测抗原为诊断试剂检测抗原适用于细菌的直接检适用于细菌的直接检测测操作简单、快速，便于操作简单、快速，便于推广应用推广应用抗球蛋白试验抗球蛋白试验利用抗球蛋白抗体连接结合在利用抗球蛋白抗体连接结合在红细胞表面抗原的不完全抗体，红细胞表面抗原的不完全抗体，使红细胞凝集使红细胞凝集新生儿溶血症、自身新生儿溶血症、自身免疫性溶血性贫血、免疫性溶血性贫血、医源性溶血性疾病等医源性溶血性疾病等是检测抗红细胞不完全是检测抗红细胞不完全抗体的经典方法抗体的经典方法人民卫生出版社人民卫生出版社