32讲 微生物的培养与应用.docx

1、32讲 微生物的培养与应用第32讲微生物的培养与应用最新考纲1.微生物的分离和培养。2.培养基对微生物的选择作用。3.某种微生物数量的测定。4.微生物在其他方面的应用。考点一微生物的实验室培养（5年12考）【知识回顾1】培养基（1）培养基的成分：各种培养基的具体配方不同，但一般都含有 、 、 、 ，此外还要满足微生物生长对 、 、 的要求。例如，培养乳酸菌时需要添加 ，培养霉菌时需要将PH调至 ，培养细菌时需要将PH调至 ，培养厌氧微生物时需要提供 条件。（2）培养基的类型及作用类型功能实例按形态分按功能分（3）培养基的制备步骤： 。解析：溶化灭菌倒平板【知识回顾2】无菌技术获得纯净的培养物，

2、关键是 。1、请填写下表并背诵比较条件结果常用方法实例消毒 灭菌此外，实验室里还用 或 进行消毒。如，接种室、接种箱、工作台等可以 ，在照射前适量喷洒 可以增强消毒效果。【知识回顾3】微生物的分离纯化培养实验实例大肠杆菌的纯化培养1、基础知识：两个基本步骤： 和 菌落的概念： 。纯化的目的： 纯化的方法： 和 。菌种的保藏方法： （临时保藏） 和 （长期保藏） 2、注意事项：（1）倒平板注意：烧瓶口一条缝倒置（2）平板划线注意：灼烧后冷却第一次灼烧目的第二次灼烧目的划线方法一条缝，别划破对照试验（3）稀释涂布注意：移液管 混匀 均匀涂布，火焰附近 对照试验 系列稀释操作步骤（请画图）【跟踪训练

3、1】下图甲、乙是微生物接种常用的两种方法，请思考：（1）图甲是利用法进行微生物接种，图乙是利用法进行微生物接种。这两种方法所用的接种工具分别是和；对这两种接种工具进行灭菌和消毒的方法依次是和酒精消毒。（2）接种操作为什么一定要在火焰附近进行？ _。（3）右图是采用上述接种方法接种后培养的效果图解，其接种方法是（填“图甲”或“图乙”）。【跟踪训练2】（2017全国卷，37）某些土壤细菌可将尿素分解成CO2和NH3，供植物吸收和利用。回答下列问题：（1）有些细菌能分解尿素，有些细菌则不能，原因是前者能产生。能分解尿素的细菌不能以尿素的分解产物CO2作为碳源，原因是 但可用葡萄糖作为碳源，进入细菌体

4、内的葡萄糖的主要作用是_（答出两点即可）。（2）为了筛选可分解尿素的细菌，在配制培养基时，应选择（填“尿素”“NH4NO3”或“尿素NH4NO3”）作为氮源，不选择其他两组的原因是_。（3）用来筛选分解尿素细菌的培养基含有KH2PO4和Na2HPO4，其作用有_（答出两点即可）。KH2PO41.4 gNa2HPO42.1 gMgSO47H2O0.2 gFeCl30.1 gX1 g维生素微量琼脂15 g【变式】回答下列有关微生物培养与应用的问题：（1）题表是筛选异养型细菌的培养基配方。从物理性质上看该培养基属于培养基，其中成分X除了为目的菌提供能源外，还能提供。制备该培养基的一般操作顺序是计算称

5、量灭菌，对培养基进行灭菌的常用方法是。（2）如图A、B是纯化微生物培养的两种接种方法，C、D是接种后培养的效果。某同学接种培养后获得图C所示效果，则其采用的接种方法是（中填“A”或“B”）；接种时可能的失误操作是。（3）微生物强化采油是利用某些微生物能降解石油、增大石油的乳化度、降低石油黏度的原理，通过向油井中注入含微生物的水来提高采油率的新技术。为筛选和纯化该类微生物，应向培养基中添加作为唯一碳源；培养一段时间后在菌落周围形成降油圈，此时选取就可获得高效菌株。考点二微生物的筛选和计数（5年7考）【知识回顾1】实验（一）土壤中分解尿素的细菌的分离与计数1、基本知识自然环境中找到目的菌的方法？实

6、验室中筛选目的菌的方法？尿素分解菌能分解尿素的原理？如何鉴别某菌是否能分解尿素？请以本试验为例，解析选择培养基和鉴别培养基本实验的培养基配方？稀释涂布平板法能够统计样品中活菌数目的原因？用此方法统计的结果比实际数目少，请分析。设置对照的目的？如何设置对照？重复实验的目的？如何重复实验？2、试验目的3、实验流程土壤取样制备培养基涂布与培养菌落计数【知识回顾2】对分解纤维素的微生物的初步筛选1、基本知识纤维素酶如何选择培养？如何鉴别？本实验的培养基配方？纤维素酶的测定方法？其他事项见【知识回顾1】2、实验流程【跟踪训练1】（2017江苏卷，31）苯酚及其衍生物广泛存在于工业废水中，对环境有严重危害

7、。小明同学准备依据下图操作步骤，从处理废水的活性污泥中分离筛选酚降解高效菌株。请回答下列问题：（1）酚降解菌富集培养基含有蛋白胨、K2HPO4、MgSO4、苯酚和水，其中可作为碳源的有。（2）将采集到的样品接种培养，苯酚用量应随转接次数增加而逐渐，以达到富集酚降解菌的目的。若上图平板中菌落过于密集，应进一步，以便于菌落计数与分离。制备平板培养基时除了需要水、营养物质外，还必须添加。（3）下图为连续划线法示意图，在图中（填图中序号）区域更易获得单菌落。（4）采用比色测定法（使用苯酚显色剂）检测降解后的废水中苯酚残留量。先制作系列浓度梯度并进行显色反应，下表中15 号比色管的苯酚浓度应分别为。管号

8、123456苯酚浓度/（mgL1）1如果废水为50 mg/L苯酚溶液，降解后约有21% 的苯酚残留，则需将残留液稀释（填序号：51020）倍后，再进行比色。【跟踪训练2】（2016全国卷，39）空气中的微生物在重力等作用下，可以一定程度地沉降。某研究小组欲用平板收集教室空气中的微生物，以了解教室内不同高度空气中微生物的分布情况。实验步骤如下：配置培养基（成分：牛肉膏、蛋白胨、NaCl、X、H2O）；制作无菌平板；设置空白对照组和若干实验组，进行相关操作；将各组平板置于37 恒温箱中培养一段时间，统计各组平板上菌落的平均数。回答下列问题：（1）该培养基中微生物所需的氮来源于。若要完成步骤，该培养

9、基中的成分X通常是。（2）步骤中，实验组的操作是_。（3）若在某次调查中，某一实验组平板上菌落平均数为36个/平板，而空白对照组的一个平板上出现了6个菌落，这种结果说明在此次调查中出现了现象。若将30（即366）个/平板作为本组菌落数的平均值，该做法（填“正确”或“不正确”）。【跟踪训练3】（2016四川卷，10）图甲是从土壤中筛选产脲酶细菌的过程，图乙是脲酶基因转录的mRNA部分序列。（1）图中选择培养基应以为唯一氮源；鉴别培养基还需添加作指示剂，产脲酶细菌在该培养基上生长一段时间后，其菌落周围的指示剂将变成色。（2）在5个细菌培养基平板上，均接种稀释倍数为105的土壤样品液0.1 mL，培

10、养一段时间后，平板上长出的细菌菌落数分别为13、156、462、178和191。该过程采取的接种方法是，每克土壤样品中的细菌数量为108个；与血细胞计数板计数法相比，此计数方法测得的细菌数较。（3）现有一菌株的脲酶由于基因突变而失活，突变后基因转录的mRNA在图乙箭头所示位置增加了70个核苷酸，使图乙序列中出现终止密码（终止密码有UAG、UGA和UAA）。突变基因转录的mRNA中，终止密码为，突变基因表达的蛋白质含个氨基酸。【限时训练30分钟】1、金黄色葡萄球菌是一种具有高度耐盐性的微生物，可引起人类肺炎、肠炎等疾病。金黄色葡萄球菌在血平板（培养基中添加适量血液）上生长时，可破坏菌落周围的红细

11、胞，使其褪色。下图为定性检测鲜牛奶中是否存在金黄色葡萄球菌的操作流程，请回答相关问题： （1）从培养过程分析，金黄色葡萄球菌可进行呼吸。 （2）7.5%NaCl肉汤培养基为微生物提供的营养成分包括水和无机盐、，用7.5%NaCl肉汤培养基进行选择培养的主要目的是_。 （3）在血平板上进行平板划线接种时，为什么在操作的第一步以及每次划线之前都要灼烧接种环？ _。 （4）在制备血平板时需将pH调节至（填“微酸性”或“微碱性”）后灭菌，待培养基冷却后，再加入适量血液。 （5）经多次规范操作、重复实验，血平板上均出现的菌落，初步证明鲜牛奶中存在金黄色葡萄球菌，但鲜牛奶供应商仍认为此菌并非鲜牛奶所携带，

12、因此，要对本操作进行完善，完善的方案是_。2、“土壤中分解尿素的细菌的分离与计数”实验的流程：土壤取样样品稀释取样涂布微生物的培养观察并记录结果计数。在做该实验时，甲同学在对应106倍稀释的培养基中筛选得到250个菌落，但是其他同学在相同的稀释倍数下筛选得到160个菌落，请分析并回答有关问题： （1）实验流程中“样品稀释取样涂布”所用的方法称之为；利用该方法成功统计菌落数目的关键是_。 （2）要判断甲同学实验结果出现差异的原因需要设置对照，设置对照的主要目的是_。有人认为甲同学的实验结果出现差异的原因是培养基被杂菌污染了，应如何设置对照实验？ _。若甲同学的实验结果出现差异的原因是培养基中混入

13、了其他含氮物质，又该如何设置对照实验？。若两者的细菌数目大致相等，则说明甲同学的培养基中混入了其他含氮物质。（3）在细菌分解尿素的反应中，细菌产生的酶可将尿素分解成为氨。为进一步鉴定得到的细菌是否可以分解尿素，可在培养基中加入指示剂，若该指示剂变红，则可初步鉴定该细菌可以分解尿素。3、秸秆含有大量的纤维素，是可再生的自然资源，科学利用秸秆能缓解人类面临的能源危机。下图是利用小麦秸秆来生产工业酒精的流程图，请回答相关问题：（1）通常采用酶解法来处理小麦秸秆，纤维素酶是一种复合酶，至少包括等三种组分。 （2）若要测定样液中纤维素分解菌的数量，可在显微镜下用直接计数。若要测定其活菌数量，可选用法进行

14、计数。用上述方法测定纤维素分解菌的数量时，实际活菌数比测得的菌落数多，原因是 _。若实验组每个平板中的菌落数都超过了300，应对样本菌液进行处理。（3）由糖液发酵产生酒精。所依赖的微生物主要是，酒精是在该微生物的（填场所）中产生的。4、为研究“某品牌酸奶中乳酸菌数量及其对抗生素耐药性情况”，某同学进行了如下实验。请分析回答下列问题：（1）配制的细菌培养基除了含有水、碳源、氮源和无机盐等主要营养成分外，还应加入适量的和琼脂。在培养基各成分溶化与灭菌之间，要进行的操作是。为避免培养皿污染，需将培养皿呈状态放置。（2）接种微生物的方法有很多，上图中过程所示的方法为。用该方法统计样本菌落数后，所得数据

15、需要乘以10n后，才可表示乳酸菌的数量（单位：个/mL），这里的n。用该方法统计样本菌落数时，同时需要做A、B、C三个培养皿，原因是_。（3）为了检测乳酸菌对抗生素的敏感性，取该单菌落适当稀释，接种于固体培养基表面，在37 培养箱中培养24 h，使其均匀生长，布满平板。将分别含有A、B、C三种抗生素的滤纸片均匀置于该平板上的不同位置，培养一段时间后，含A的滤纸片周围出现透明圈，说明该致病菌对抗生素A（填“敏感”或“不敏感”）；含C滤纸片周围的透明圈比含A的小，且透明圈中出现了一个菌落，在排除杂菌污染的情况下，此菌落很可能是_。5、常见的酿酒酵母只能利用葡萄糖而不能利用木糖来进行酒精发酵，自然界

16、中某些酵母菌能分解木糖产生酒精，科学家欲从果园的葡萄上或土壤中分离这种酵母菌，操作如下： （1）制备酵母菌培养基要进行倒平板操作，待平板冷凝后，要将平板倒置，其主要原因是_。获得纯净培养物的关键是_。（2）纯化菌株时，通常使用的划线工具是。在第二次及以后划线时，总是从上一次的末端开始划线，这样做的目的是_。划线的某个平板培养后，第一划线区域的划线上都不间断地长满了菌落，第二划线区域的第一条线上无菌落，其他划线上有菌落。造成划线无菌落可能的操作失误是_。（3）将自然界中采集到的葡萄带回实验室，用无菌水将葡萄皮上的微生物冲洗到无菌的三角瓶中，然后将瓶中的液体用涂布器涂布接种于以木糖为唯一的固体培养

17、基上，在适宜的条件下培养一段时间，获得能利用木糖的多个酵母菌。实验中所用培养基按功能属于培养基。（4）若要检测土样中的酵母菌含量，应采用法。在接种前，随机取若干灭菌后的空白平板培养基先行培养了一段时间，这样做的目的是_。然后，将1 mL土壤溶液分别稀释10倍和100倍，每种稀释度各在3个平板上分别接入0.1 mL稀释液，经适当培养后，6个平板上的菌落数分别为59、57、58、2、7和5，据此可得出每升土壤溶液中的活菌数为个。6、下表是某同学列出的分离并计数土壤中微生物培养基的配方，据此回答下列问题：KH2PO41.4 gNa2HPO42.1 gMgSO47H2O0.2 g葡萄糖10.0 g尿素1.0 g琼脂15.0 g（1）制备培养基时，将上述物质溶解并用蒸馏水定容至1 000 mL后，还要进行和。（2）从功能上看，该培养基属于培养基，细菌能利用培养基中的氮源是由于能合成。（3）用稀释涂布平板法统计样本菌落数时，（填“需要”或“不需要”）设置对照组（即不接种进行培养），原因是_。（4）某同学在3个培养基上分别涂布稀释倍数为106的土壤样液0.1 mL，培养一段时间后，其菌落数分别为180、220、320个，则每毫升原土壤样液中上述微生物的数量为，此方法测定的活菌数比实际活菌数少的原因为_。