农药残留检测技术(课件).ppt

1、农药残留快速测定技术江阴市农产品质量检测中心江阴市农产品质量检测中心20132013年年5 5月月滥用“神农丹”种姜 2012年 2011年 2010年农残快速测定方法及仪器介绍农残快速测定方法及仪器介绍n一、农药残留简述n二、快速检测方法及相关仪器n三、农残速测仪介绍一、农药残留简述一、农药残留简述1 1、农药残留相关名词、农药残留相关名词n农药分类农药分类无机化合物（无机化合物（目前使用目前使用较多的品种有硫悬浮剂、较多的品种有硫悬浮剂、波尔多液等。波尔多液等。）化学合成农药化学合成农药生物源农药生物源农药矿物源农药矿物源农药有机合成化合物有机合成化合物动物源农药（如动物毒素、动物源农药（

2、如动物毒素、昆虫性引诱剂等）昆虫性引诱剂等）植物源农药（如植物源农药（如植物内源激植物内源激素、素、植物源昆虫植物源昆虫激素等激素等）微生物源农药（井冈霉素、微生物源农药（井冈霉素、白僵菌、苏云金杆菌等）白僵菌、苏云金杆菌等）有机氯类有机氯类有机磷类有机磷类拟除虫菊酯类拟除虫菊酯类氨基甲酸酯类氨基甲酸酯类杂环类化合物杂环类化合物其它（苯氧羧其它（苯氧羧酸类、脲类化酸类、脲类化合物）合物）n农药残留：农药残留：农药使用后残存在生物体、农副产品农药使用后残存在生物体、农副产品和环境中的微量农药原体、有毒代谢物、降解物和环境中的微量农药原体、有毒代谢物、降解物和杂质的总称。以和杂质的总称。以mg/k

3、gmg/kg、ugug/kg/kg、ngng/kg/kg表示。表示。n农药残留的危害：农药残留的危害：农药若大量残留在农副产品表农药若大量残留在农副产品表面会引起人的神经传导阻碍、神经麻痹甚至引起面会引起人的神经传导阻碍、神经麻痹甚至引起死亡。死亡。n最大残留限量：最大残留限量：在农副产品中农药残留的法定最在农副产品中农药残留的法定最高允许浓度，又称最高残留限量，以每千克农副高允许浓度，又称最高残留限量，以每千克农副产品中农药残留的毫克数（毫克产品中农药残留的毫克数（毫克/千克）表示。千克）表示。n我国违禁农药：我国违禁农药：666DDT666DDT、毒鼠强、甲胺磷、甲基、毒鼠强、甲胺磷、甲基

4、对硫磷、对硫磷、久效磷、磷胺等高毒农药全面对硫磷、对硫磷、久效磷、磷胺等高毒农药全面禁止使用禁止使用2 2、国家农药残留速测检测标准、国家农药残留速测检测标准nNY/T 448-2001 NY/T 448-2001 蔬菜上有机磷和氨基甲酸酯类蔬菜上有机磷和氨基甲酸酯类农药残毒快速检测方法农药残毒快速检测方法nGB/T 5009.199-2003 GB/T 5009.199-2003 蔬菜中有机磷和氨基甲蔬菜中有机磷和氨基甲酸酯类农药残留量的快速检测酸酯类农药残留量的快速检测二、二、快速检测方法及相关仪器1 1、速测卡法（纸片法）、速测卡法（纸片法）胆碱酯酶可催化靛酚乙酸酯（红色）水解为乙酸与靛

5、酚（蓝色），有机磷或氨基甲酸脂类农药对胆碱酯酶有抑制作用，使催化、水解、变色的过程发生改变，由此可判断出样品中是否有高剂量有机磷或氨基甲酸酯类农药的存在。2 2、酶抑制率法（分光光度法）、酶抑制率法（分光光度法）在一定条件下，有机磷和氨基甲酸酯类农药对胆碱酯酶正常功能有抑制作用，其抑制率与农药的浓度呈正相关。正常情况下，酶催化神经传导代谢产物（乙酰胆碱）水解，其水解产物与显色剂反应，产生黄色物质，用分光光度计在412nm处测定吸光度随时间的变化值，计算出抑制率，通过抑制率可以判断出样品中是否有高剂量有机磷或氨基甲酸酯类农药的存在。目前使用的快速检测仪器目前使用的快速检测仪器仪器原理：酶抑制率法

6、（分光光度法）仪器原理：酶抑制率法（分光光度法）使用此方法的仪器有：深圳安鑫宝WTWT系列系列农药残留速仪长春吉大小天鹅GDYN-110SBGDYN-110SB农残速测仪上海博纳CL-BIIICL-BIII八通道八通道残留农药测定仪 等特点：特点：特点：特点：精确度高、稳定性强精确度高、稳定性强精确度高、稳定性强精确度高、稳定性强易于操作易于操作易于操作易于操作三、农残速测仪介绍（一）原理（一）原理 农药对胆碱酯酶（检测试剂）的活性有抑制作用，这样就抑制了胆碱酯酶催化显色剂水解发生显色反应，通过对显色反应的测定来实现农药残留量的测量。由此可判定果品蔬菜样品中的残留农药的含量。正常情况：底物底物

7、+胆碱酯酶胆碱酯酶-水解水解胆碱胆碱 胆碱胆碱+显色剂显色剂 黄色溶液黄色溶液（二）抑制率计算方法（二）抑制率计算方法 通过测定果蔬中的残留农药使乙酰胆碱酯酶活性变化的程度来测定样品果蔬中的此类残留农药毒性，仪器测定的残留农药大小用“抑制率”来表示。抑制率是农药对酶抑制程度的显示指标，其计算方式为:I=(A0-At)/A0)100 I 抑制率 A0 对照的吸光度值 At 样品溶液的吸光度值（三）（三）GB/T 5009.199-2003GB/T 5009.199-2003方法方法介绍介绍1 1、配试剂、配试剂 缓冲液、酶试剂、显色剂、底物均按照仪器自带的使用说明书的要求配制而成（所用水为蒸馏水

8、或纯净水）。除缓冲溶液可常温放置，其他试剂配置后必须0-4避光保存，使用前冷却至室温，保存期不宜过长，一般现配先用。2 2、实验操作实验操作空白样操作步骤及要求：空白样操作步骤及要求：n取2.5ml缓冲溶液加入试管中（记录）。n分别加入0.1ml酶液（记录），0.1ml显色剂（记录）至试管中。n摇匀后于37放置15min（计时）。n加入0.1ml底物（记录）至试管中摇匀，此时检液起显色反应，应立即立即放入仪器比色池中检测。n注意比色皿光面毛面的放置方向。按对照检测对照检测键，3min后记录空白样的AC值。样品样的操作步骤及要求：样品样的操作步骤及要求：取样步骤及要求：取样步骤及要求：n称取菜样

9、1g要求一种菜样要从不同植株取样，从叶片部位取（果实蔬菜用刀顺皮削下），剪成1cm左右见方碎片，混匀后用镊子称取1g（记录），放入烧杯或提取瓶中（编号）。n取5ml缓冲溶液加入编好号的样品瓶中（记录）。n用手或借助仪器振荡1-2min（计时）。n振荡完成后静置3-5min（计时）。n试管中加入2.5ml样品提取液。n再分别加入0.1ml（100ul）酶液，0.1ml显色剂至各样品样的试管中。n摇匀后于37放置15min（计时）。n各样品样中加入0.1ml底物摇匀。n最后将每个试管中的样品液倒入比色皿中，迅速迅速放入仪器中，按样品检测样品检测键，3min后记录实验结果。3 3、结果的判定、结果的

10、判定 结果以酶被抑制的程度（抑制率）表示。当蔬菜样品提取液对酶的抑制率50%时，样品为阳性结果农药残留超标。抑制率在50%左右为可疑样品，超标样品、可疑样品需要重复检验2次以上。4 4、注意事项、注意事项1、仪器开机之后最好预热10分钟以上。开机、关机之间间隔1分钟以上。2、配试剂需按照说明进行操作。3、实验要求的蒸馏水可以用纯净水代替，但是不能用矿泉水，天然饮用水。4、酶液、显色剂与底物切忌长时间室温下放置，用后应立即放入冷藏室内（0-4）。5、提取液可以放置常温下保存。（从冰箱中拿出的酶液要等他恢复到室温才能使用，不然会导致酶的活性不够，酶的活性最适温度37摄氏度）。5、韭菜、生姜、葱、蒜、辣椒等刺激性气味蔬菜中，含有对酶活性有影响的物质，容易产生假阳性。处理这类样品时，可采取整株蔬菜浸泡。6、避免交叉污染，每次取不同的样品，清洗采样器具。7、先做对照检测，再做样品检测。对照样品吸光度值AC应该在如下区间：实验室温度在25 C以上时在0.30.8之间；实验室温度在10 C以下时在0.20.8之间）。空白的作用除了对照作用之外，还可以判断试剂是否失效，如果加入底物的时候比色皿中液体立刻变成深黄，或者加入底物之后试剂不变黄，说明试剂已经失效。祝 工作愉快 身体健康谢谢！