免疫诊断.ppt

1、免疫学诊断免疫学诊断 一、抗原或抗体的检测一、抗原或抗体的检测二、淋巴细胞的测定二、淋巴细胞的测定三、免疫学检测方法的应用三、免疫学检测方法的应用免免免免疫疫疫疫学学学学诊诊诊诊断断断断（一）抗原抗体反应的原理（一）抗原抗体反应的原理免免免免疫疫疫疫学学学学诊诊诊诊断断断断一、抗原或抗体的检测一、抗原或抗体的检测1 1、抗原抗体反应的、抗原抗体反应的、抗原抗体反应的、抗原抗体反应的 特异性特异性特异性特异性（1 1）特异性：基于两）特异性：基于两）特异性：基于两）特异性：基于两 种分子间种分子间种分子间种分子间 的结构互补性和亲和性。的结构互补性和亲和性。的结构互补性和亲和性。的结构互补性和亲

2、和性。（2 2）可逆性）可逆性）可逆性）可逆性（3 3）适适适适宜宜宜宜的的的的条条条条件件件件：电电电电解解解解质质质质、pHpH、温度等温度等温度等温度等2 2、抗原抗体反应的可见性、抗原抗体反应的可见性、抗原抗体反应的可见性、抗原抗体反应的可见性 抗原抗体按适当比例结合，抗原抗体按适当比例结合，抗原抗体按适当比例结合，抗原抗体按适当比例结合，形成肉眼可见的现象。形成肉眼可见的现象。形成肉眼可见的现象。形成肉眼可见的现象。应应 用用1、利用已知抗原检测未知抗体、利用已知抗原检测未知抗体（1）检测病原微生物的相应抗体以辅助诊断疾病：）检测病原微生物的相应抗体以辅助诊断疾病：伤伤寒病、流行性乙

3、型脑炎、寒病、流行性乙型脑炎、AIDS病等。病等。（2）检测自身抗体）检测自身抗体诊断自身免疫病：诊断自身免疫病：SLE、类风类风湿性关节炎等湿性关节炎等2、利用已知抗体检测未知抗原、利用已知抗体检测未知抗原（1）鉴定病原菌：诊断疾病）鉴定病原菌：诊断疾病（2）检测肿瘤相关抗原：检测甲胎蛋白以诊断肝癌）检测肿瘤相关抗原：检测甲胎蛋白以诊断肝癌（3）检测血型抗原、）检测血型抗原、HLA抗原：鉴定血型，亲子鉴定抗原：鉴定血型，亲子鉴定（4）检测药物半抗原：）检测药物半抗原：确认运动员是否服用兴奋剂确认运动员是否服用兴奋剂（二）（二）抗原或抗体的检测方法抗原或抗体的检测方法 凝集反应凝集反应沉淀反应

4、沉淀反应补体参与的抗原抗体反应补体参与的抗原抗体反应免疫标记技术免疫标记技术 （一）（一）凝集反应凝集反应（agglutinationagglutination）颗颗颗颗粒粒粒粒性性性性抗抗抗抗原原原原（红红红红细细细细胞胞胞胞、细细细细菌菌菌菌、乳乳乳乳胶胶胶胶颗颗颗颗粒粒粒粒等等等等）与抗体特异性结合，形成肉眼可见的凝集块。与抗体特异性结合，形成肉眼可见的凝集块。与抗体特异性结合，形成肉眼可见的凝集块。与抗体特异性结合，形成肉眼可见的凝集块。1 1、直接凝集、直接凝集、直接凝集、直接凝集(direct agglutination)(direct agglutination)玻片凝集、试管凝

5、集玻片凝集、试管凝集玻片凝集、试管凝集玻片凝集、试管凝集2 2、间接凝集（、间接凝集（、间接凝集（、间接凝集（indirect agglutinationindirect agglutination）3 3、抗球蛋白试验（抗球蛋白试验（抗球蛋白试验（抗球蛋白试验（CoombsCoombs试验）试验）试验）试验）抗原与单价抗体（不完全抗体）结合不出现凝集块，再抗原与单价抗体（不完全抗体）结合不出现凝集块，再抗原与单价抗体（不完全抗体）结合不出现凝集块，再抗原与单价抗体（不完全抗体）结合不出现凝集块，再加入抗球蛋白后即形成凝集块。加入抗球蛋白后即形成凝集块。加入抗球蛋白后即形成凝集块。加入抗球蛋白

6、后即形成凝集块。用于检测抗用于检测抗用于检测抗用于检测抗RhRh抗体以诊断新生儿溶血性贫血。抗体以诊断新生儿溶血性贫血。抗体以诊断新生儿溶血性贫血。抗体以诊断新生儿溶血性贫血。乳胶颗粒乳胶颗粒乳胶颗粒乳胶颗粒红细胞红细胞红细胞红细胞类风湿因子检测类风湿因子检测类风湿因子检测类风湿因子检测妊娠试验妊娠试验妊娠试验妊娠试验间接凝集间接凝集直接凝集直接凝集（二）沉淀反应（二）沉淀反应（precipitationprecipitation）1 1、单向免疫扩散（、单向免疫扩散（、单向免疫扩散（、单向免疫扩散（single single immunodiffusionimmunodiffusion）：）

7、：）：）：常用于测定常用于测定常用于测定常用于测定IgGIgG、IgMIgM、IgAIgA、C3C3、C4C4等。等。等。等。可溶性抗原可溶性抗原可溶性抗原可溶性抗原（免疫球蛋白、细胞裂解物、组织浸液（免疫球蛋白、细胞裂解物、组织浸液（免疫球蛋白、细胞裂解物、组织浸液（免疫球蛋白、细胞裂解物、组织浸液等）与相应抗体结合，等）与相应抗体结合，等）与相应抗体结合，等）与相应抗体结合，形成不溶性免疫复合物，出现不形成不溶性免疫复合物，出现不形成不溶性免疫复合物，出现不形成不溶性免疫复合物，出现不透明的沉淀物。多在半固体琼脂凝胶上进行，形成白色透明的沉淀物。多在半固体琼脂凝胶上进行，形成白色透明的沉淀

8、物。多在半固体琼脂凝胶上进行，形成白色透明的沉淀物。多在半固体琼脂凝胶上进行，形成白色的沉淀。的沉淀。的沉淀。的沉淀。沉淀环沉淀环沉淀环沉淀环抗体混于琼脂凝抗体混于琼脂凝抗体混于琼脂凝抗体混于琼脂凝胶中制板胶中制板胶中制板胶中制板环的环的环的环的直径与抗原直径与抗原直径与抗原直径与抗原含量成正相关含量成正相关含量成正相关含量成正相关2 2、双向免疫扩散（、双向免疫扩散（、双向免疫扩散（、双向免疫扩散（douledoule immunodiffusionimmunodiffusion）：）：）：）：常用于抗常用于抗常用于抗常用于抗原或抗体的定性检测、组成和两种抗原相关性分析。原或抗体的定性检测、

9、组成和两种抗原相关性分析。原或抗体的定性检测、组成和两种抗原相关性分析。原或抗体的定性检测、组成和两种抗原相关性分析。一致一致一致一致部分一致部分一致部分一致部分一致不一致，有多种成分不一致，有多种成分不一致，有多种成分不一致，有多种成分3 3、免疫电泳（、免疫电泳（、免疫电泳（、免疫电泳（immunoelectrophoresisimmunoelectrophoresis）常用于血清蛋白种类分析，以观察常用于血清蛋白种类分析，以观察常用于血清蛋白种类分析，以观察常用于血清蛋白种类分析，以观察IgIg的异常增多或缺失。的异常增多或缺失。的异常增多或缺失。的异常增多或缺失。如骨髓瘤及性联低丙种球

10、蛋白血症的诊断如骨髓瘤及性联低丙种球蛋白血症的诊断如骨髓瘤及性联低丙种球蛋白血症的诊断如骨髓瘤及性联低丙种球蛋白血症的诊断4 4、免疫比浊法（、免疫比浊法（、免疫比浊法（、免疫比浊法（immunonephelomtryimmunonephelomtry）：）：）：）：快速简便。用快速简便。用快速简便。用快速简便。用于血清于血清于血清于血清IgGIgG、IgAIgA、IgMIgM、补体补体补体补体C3C3、C4C4含量测定含量测定含量测定含量测定 （三）补体参与的抗原抗体反应（三）补体参与的抗原抗体反应1 1、50%50%补体溶血试验（补体溶血试验（补体溶血试验（补体溶血试验（CH50CH50测

11、定）测定）测定）测定）血清总补体量测定血清总补体量测定血清总补体量测定血清总补体量测定2、补体结合试验、补体结合试验(complement fixation test)：检测抗原或抗体。检测抗原或抗体。原理：用已知的指示系统检测试验系统是否结合补体进行诊断原理：用已知的指示系统检测试验系统是否结合补体进行诊断试验原理试验原理试验原理试验原理？检测系统：待测样品检测系统：待测样品检测系统：待测样品检测系统：待测样品和已知抗原（或抗体）和已知抗原（或抗体）和已知抗原（或抗体）和已知抗原（或抗体）指示系统：指示系统：指示系统：指示系统：SRBCSRBC和溶血素和溶血素和溶血素和溶血素溶血溶血溶血溶血

12、阴性；不溶血阴性；不溶血阴性；不溶血阴性；不溶血阳性阳性阳性阳性补体补体补体补体 用用用用标记物标记抗体或抗原标记物标记抗体或抗原标记物标记抗体或抗原标记物标记抗体或抗原进行抗原抗体反应借以提高免进行抗原抗体反应借以提高免进行抗原抗体反应借以提高免进行抗原抗体反应借以提高免疫学诊断的敏感性疫学诊断的敏感性疫学诊断的敏感性疫学诊断的敏感性荧光素荧光素荧光素荧光素 ：异硫氰酸荧光素（黄绿异硫氰酸荧光素（黄绿异硫氰酸荧光素（黄绿异硫氰酸荧光素（黄绿色荧光）、藻红蛋白、色荧光）、藻红蛋白、色荧光）、藻红蛋白、色荧光）、藻红蛋白、罗丹明罗丹明罗丹明罗丹明（红色荧光）（红色荧光）（红色荧光）（红色荧光）放

13、射性同位素：放射性同位素：放射性同位素：放射性同位素：125125I I、131131I I酶：酶：酶：酶：辣根过氧化物辣根过氧化物辣根过氧化物辣根过氧化物酶、硷性磷酸酶酶、硷性磷酸酶酶、硷性磷酸酶酶、硷性磷酸酶免疫荧光检测法（免疫荧光检测法（免疫荧光检测法（免疫荧光检测法（IFAIFA）放射免疫检测法（放射免疫检测法（放射免疫检测法（放射免疫检测法（RIARIA）酶免疫检测法（酶免疫检测法（酶免疫检测法（酶免疫检测法（EIAEIA）（四）免疫标记技术（四）免疫标记技术液相（液相（液相（液相（ELISAELISA）、）、）、）、固相（免疫组化技术）固相（免疫组化技术）固相（免疫组化技术）固相（

14、免疫组化技术）免疫荧光技术免疫荧光技术间接法间接法双抗夹心法双抗夹心法竞争法竞争法E:辣根过氧化酶辣根过氧化酶 HRPS:底物底物 二氨基联苯胺二氨基联苯胺 DAB/邻苯胺邻苯胺酶联免疫吸附试验（酶联免疫吸附试验（enzyme linked immunosorbent assay,ELISA法法）双抗夹心法双抗夹心法双抗夹心法双抗夹心法酶联免疫吸附试验（酶联免疫吸附试验（酶联免疫吸附试验（酶联免疫吸附试验（e enzyme nzyme l linked inked i immunommunos sorbentorbent a assay,ssay,ELISAELISA法法法法）间接间接间接间接

15、ELISAELISA 抗抗抗抗细胞因子的抗体包被细胞因子的抗体包被细胞因子的抗体包被细胞因子的抗体包被（1 1）（2 2）（3 3）（4 4）抗原包被抗原包被抗原包被抗原包被用于效应细胞分泌的单一细胞因子的测定，也可测定分泌用于效应细胞分泌的单一细胞因子的测定，也可测定分泌用于效应细胞分泌的单一细胞因子的测定，也可测定分泌用于效应细胞分泌的单一细胞因子的测定，也可测定分泌特异抗体的特异抗体的特异抗体的特异抗体的B B细胞的频数。细胞的频数。细胞的频数。细胞的频数。灵敏度达灵敏度达灵敏度达灵敏度达pgpg水平。常用于微量物质测定，如胰岛素、水平。常用于微量物质测定，如胰岛素、水平。常用于微量物质

16、测定，如胰岛素、水平。常用于微量物质测定，如胰岛素、生长激素、甲状腺素、孕酮等激素、吗啡、地高辛等药生长激素、甲状腺素、孕酮等激素、吗啡、地高辛等药生长激素、甲状腺素、孕酮等激素、吗啡、地高辛等药生长激素、甲状腺素、孕酮等激素、吗啡、地高辛等药物以及物以及物以及物以及IgEIgE等。等。等。等。放射免疫检测法（放射免疫检测法（RIA）竞争法竞争法竞争法竞争法能能能能分离分子大小不同的蛋白质并确定其分子量，常用于检测分离分子大小不同的蛋白质并确定其分子量，常用于检测分离分子大小不同的蛋白质并确定其分子量，常用于检测分离分子大小不同的蛋白质并确定其分子量，常用于检测多种病毒的抗体或抗原，如抗多种病毒的抗体或抗原，如抗多种病毒的抗体或抗原，如抗多种病毒的抗体或抗原，如抗HIVHIV抗体的检测。抗体的检测。抗体的检测。抗体的检测。免疫印迹法免疫印迹法免疫印迹法免疫印迹法 二、淋巴细胞的测定二、淋巴细胞的测定（一）淋巴细胞的分离与类型鉴定（一）淋巴细胞的分离与类型鉴定1 1 1 1、淋巴细胞的分离：外周血葡聚糖、淋巴细胞的分离：外周血葡聚糖、淋巴细胞的分离：外周血葡聚糖、淋巴细胞的分离：外周血葡