常用蛋白质分子量标准参照物.docx

1、常用蛋白质分子量标准参照物十、常用蛋白质分子量标准参照物高分子量标准参照 中分子量标准参物 低分子量标准参照蛋白质Mr蛋白质Mr蛋白质Mr肌球蛋白212 000磷酸化酶B97 400碳酸酐酶31 0003半乳糖苷酶116 000牛血清清蛋白66 200大豆胰蛋白酶制剂21 500磷酸化酶B97 400谷氨酸脱氢酶55 000马心肌球蛋白16 900牛血清清蛋白66 200卵清蛋白42 700溶菌酶14 400过氧化氢酶57 000醛缩酶40 000肌球蛋白（F1）8 100醛缩酶40 000碳酸酐酶31 000肌球蛋白（F2）6 200大豆胰蛋白酶抑制剂21 500肌球蛋白（F3）2 500溶

2、菌酶14 400十一、层析法常用数据表及性质（一） 离子交换纤维素目前常用的离子交换纤维素列于下表DEAE -纤维素形状长度（微米）交换当量（毫克当量/克）蛋白吸附容量（毫克/克）床体积（毫升/克）胰岛素(pH8.5)牛血清清蛋白（pH8.5）pH6.0pH7.5DE-22DE-23DE-32DE-52CM-纤维素CM-22CM-23CM-32CM-52改良纤维性* 同上（除细粒） 微粒性（干粉） 同上（溶胀）改良纤维性同上（除细粒） 微粒性（干粉） 同上（溶胀）1240018400246324631240018400246324631.0 0.11.0 0.11.0 0.11.0 0.10.

3、6 0.060.6 0.061.0 0.11.0 0.1750750850850溶菌酶(pH5.0)6006001,2601,2604504506606607S - y球蛋白(pH5.0)1501504004007.78.36.06.0pH5.07.79.16.86.87.79.16.36.3pH7.57.79.16.76.7* :英国Whatman厂的型号，原来有旧型号如 DE-1，为长纤维性，长度1000微米。还有DE-11 , 纤维性，50250微米，对牛血清清蛋白的吸附容量仅为 130毫克/克。（二）聚丙烯酰胺凝胶的技术数据型号排阻的下限（Mr）分级分离的范围（Mr）膨胀后的床体积（m

4、L/g干凝胶）膨胀所需最少时间（室温，小时）Bio-gel-P-21 6002002 0003.824Bio-gel-P-43 6005004 0005.824Bio-gel-P-64 6001 0005 0008.824Bio-gel-P-1010 0005 00017 00012.424Bio-gel-P-3030 00020 00050 00014.91012Bio-gel-P-6060 00030 00070 00019.01012Bio-gel-P-100100 00040 000100 00019.024Bio-gel-P-150150 00050 000150 00024.024

5、Bio-gel-P-200200 00080 000300 00034.048Bio-gel-P-300300 000100 000400 00040.048注：上述各种型号的凝胶都是亲水性的多孔颗粒，在水和缓冲溶液中很容易膨胀，生产厂为Bio-Rad Laboratories,Rich-mond, California, U. S. A.（三）琼脂糖凝胶的技术数据（琼脂糖是琼脂内非离子型的组分，它在 0 4C, pH 49范围内是稳定的。）名称、型号凝胶内琼脂糖百分含量（W/W ）排阻的下限（Mr）分级分离的范围（Mr）生产厂商Sagavac 10102.5 氷051 M042.5 105S

6、eravac Laboratories,Sagavac 887 X1052.5 1047 X105Maide nhead, En gla ndSagavac662 X1065 M042 X106Sagavac4415 X1062 M0515 106Sagavac22150 XI065 M0515 X107Bio-GelA-0.5M100.5 1051 X1042.5 为06Bio-Rad Laboratories,Bio-GelA-1.5M81.5 106106Bio-GelA-150M1150 XI061 M06150 X106（四）凝胶过滤层析介质的技术数据凝胶过滤介质名称分离范围颗粒大小

7、（卩m）特性/应用pH稳定性工作耐 压(Mpa)最快流速（cm/h）Superdex 30100002444肽类、寡糖、小蛋白等3120.3100Superdex 753000700002444重组蛋白、细胞色素3120.3100Superdex200 0100006000002444单抗、大蛋白3120.3100Superose 650005 X1062040蛋白、肽类、多糖、核酸3120.430Superose 1210003000002040蛋白、肽类、寡糖、多糖3120.730Sephacryl S-100 HR1000 1000002575肽类、小蛋白3110.22039Sephac

8、ryl S-200 HR50002500002575蛋白，如清蛋白3110.22039Sephacryl S-300 HR100001.5 X062575蛋白、抗体3110.22039Sephacryl200008 X1062575多糖、具延伸结构的大分3110.22039S-400 HR子如蛋白多糖、脂质体Sepharose 6 Fast Flow100004 X106平均90巨大分子2120.1300Sepharose 4 Fast Flow6000020 X106平均90巨大分子如重组乙型肝 炎表面抗原2120.1250Sepharose 2B7000040 X10660200蛋白、大分

9、子复合物、病 毒、不对称分子如核酸和 多糖（蛋白多糖）490.00410Sepharose 4B6000020 X10645165蛋白、多糖490.00811.5Sepharose 6B100004 X10645165蛋白、多糖0.0214Sepharose7000040 X10660200蛋白、大分子复合物、病490.00515CL-2B毒、不对称分子如核酸和 多糖（蛋白多糖）Sepharose CL-4B6000020 X10545165蛋白、多糖3130.01226Sepharose CL-6B100004 X10645165蛋白、多糖3130.0230颗粒pH干凝胶溶胀最少最快凝胶过滤

10、介质分离大小特性/应用稳定性溶胀体积平衡时间（h）流速名称范围(卩m)工作（mL/g）室温沸水(cm/h)SephadexG-10700干粉40120213233125SephadexG-15200000),在工业传统应用上具 有重要作用2100.11475QAE SephadexA-501.2mg甲状腺球蛋白80mgHSA干粉40 120批量生产和预处理 用，分离中等大小 的生物分子(30200000)2110.0145SP SephadexC-251.1mg IgG 70mg牛羰合血 红蛋白230mg 核糖核酸酶干粉40 120纯化低分子量蛋 白、多肽、核苷以 及巨大分子(Mr200000

11、),在工业传统应用上具 有重要作用2100.13475SP SephadexC-508mg IgG110mg牛羰合血红蛋白干粉40 120批量生产和预处理 用，分离中等大小的生物分子(30200000)2100.0145DEAESephadexA-251mg甲状腺球蛋白30mg HAS140mg a-乳清 蛋白干粉40 120纯化低分子量蛋 白、多肽、核苷以 及巨大分子(Mr200 000 ),在工业传统应用上 具有重要作用290.11475DEAESephadexA-502mg甲状 腺球蛋白110mg HSA干粉40 120批量生产和预处理 用，分离中等大小的生物分子(Mr200 000),

12、在工作传统应用上具有重要作用290.1145CM SephadexC-251.6mg IgG 70mg牛羰合血 红蛋白190mg 核糖核酸酶干粉40 120纯化低分子量蛋 白、多肽、核苷以 及巨大分子(Mr200 000),在工业传统应用上具 有重要作用6130.13475CM SephadexC-507mg IgG 140mg牛羰合 血红蛋白120mg 核糖核酸酶干粉40 120批量生产和预处理 用，分离中等大小的生物分子(30200000)6100.0145十二、常用缓冲溶液的配制方法1.甘氨酸-盐酸缓冲液（0.05mol/L ）X毫升0.2 mol/L甘氨酸+Y毫升0.2 mol/L H

13、CI，再加水稀释至 200毫升pHXYpHXY2.05044.03.05011.42.45032.43.2508.22.65024.23.4506.42.85016.83.6505.0甘氨酸分子量 =75.07, 0.2 mol/L甘氨酸溶液含15.01克/升。2.邻苯二甲酸-盐酸缓冲液（ 0.05 mol/L ）X毫升0.2 mol/L邻苯二甲酸氢钾 + 0.2 mol/L HCl，再加水稀释到 20毫升pH(20 C)XYpH(20 C)XY2.254.0703.251.4702.453.9603.450.9902.653.2953.650.5972.852.6423.850.2633.0

14、52.022令邻苯二甲酸氢钾分子量=204.23, 0.2 mol/L邻苯二甲酸氢溶液含 40.85克/升3.磷酸氢二钠-柠檬酸缓冲液pH0.2mol/L0.1mol/LpH0.2mol/L0.1mol/LNa2HPO4柠檬酸Na2HPO4柠檬酸（毫升）（毫升）（毫升）（毫刑2.20.4010.605.210.729.282.41.2418.765.411.158.852.62.1817.825.611.608.402.83.1716.835.812.097.913.04.1115.896.012.637.373.24.9415.066.213.226.783.45.7014.306.413.

15、856.153.66.4413.566.614.555.453.87.1012.906.815.454.554.07.7112.297.016.473.534.28.2811.727.217.392.614.48.8211.187.418.171.834.69.3510.657.618.731.274.89.8610.147.819.150.855.010.309.708.019.450.55Na2HPO4分子量=14.98, 0.2 mol/L 溶液为 28.40 克/升。Na2HPO4-2H2O 分子量 =178.05, 0.2 mol/L 溶液含 35.01 克/升。C4H2O7 H2O

16、 分子量=210.14, 0.1 mol/L 溶液为 21.01 克/升。4 柠檬酸-氢氧化钠-盐酸缓冲液pH钠离子浓度（mol/L ）柠檬酸（克）C6H8O7 H2O氢氧化钠（克）NaOH 97%盐酸（毫升）HCl （浓）最终体积 （刑2.20.2021084160103.10.2021083116103.30.2021083106104.30.202108345105.30.3524514468105.80.4528518610510 106.50.38266156126使用时可以每升中加入 1克克酚，若最后pH值有变化，再用少量 50%氢氧化钠溶液或浓盐酸调节，冰箱保存。5 柠檬酸-柠檬

17、酸钠缓冲液 （0.1 mol/L ）pH0.1 mol/L柠檬酸（毫升）0.1 mol/L柠檬酸钠（毫升）pH0.1 mol/L柠檬酸（毫升）0.1 mol/L柠檬酸钠（毫升）3.018.61.45.08.211.83.217.22.85.27.312.73.416.04.05.46.413.63.614.95.15.65.514.53.814.06.05.84.715.34.013.16.96.03.816.24.212.37.76.22.817.24.411.48.66.42.018.04.610.39.76.61.418.64.89.210.8柠檬酸C6H8O7H20 :分子量210.1

18、4, 0.1 mol/L溶液为21.01克/升。柠檬酸钠Na3 C6H5O7 2H2O :分子量294.12, 0.1 mol/L溶液为29.41克/毫升。6.乙酸-乙酸钠缓冲液(0.2 mol/L )pH（18 C）0.2 mol/LNaAc（毫升）0.3 mol/LHAc（毫升）pH（18 C）0.2 mol/LNaAc（毫升）0.3 mol/LHAc（毫升）2.60.759.254.85.904.103.81.208.805.07.003.004.01.808.205.27.902.104.22.657.355.48.601.404.43.706.305.69.100.904.64.905.105.89.400.60Na2Ac3H2O 分子量 =136.09, 0.2 mol/L 溶液为 27.22 克/升。7磷酸盐缓冲液(1)磷酸氢二钠-磷