用生物制品企业角度看我国SPF鸡质量控制现状.docx

1、用生物制品企业角度看我国SPF鸡质量控制现状从兽用生物制品企业角度看我国SPF鸡质量控制现状2011年l0月第21卷第10,11期中国比较医学杂志CHINESEJ0URNALOFCOMPARATIVEMEDICINEOctober,2011Vo1.21NO.10.11从兽用生物制品企业角度看我国SPF鸡质量控制现状何海蓉,王正春,刘文峰,刘玉云,张勇强(1.中国牧工商集团总公司研究院,北京100070;2.乾元浩生物股份有限公司,北京100070)【摘要】SPF鸡和鸡胚是兽用生物制品生产和检验环节的主要原材料,直接影响到产品质量和检验结果,2010年版中国兽药典(三部)附录生产,检验用动物标准

2、明确要求,用于禽类制品毒种制备与鉴定,病毒活疫苗生产与检验,灭活疫苗检验的鸡和鸡胚应符合国家无特定病原体(SPF级)动物标准.SPF鸡的质量控制包括遗传,微生物,环境和营养四个方面,本文主要从兽用生物制品生产企业的角度,分析国内SPF鸡质控指标,结合禽用活疫苗生产和检验实践,提出对SPF鸡质量控制的思考和建议.【关键词】SPF鸡;质量控制;兽用生物制品企业【中图分类号】R332【文献标识码】A【文章编号】16717856(201I)10,11-0099-05doi:10.3969/j.issn.1671.7856.2011.10,11.022VeterinaryBioproductsEnter

3、prisesViewOnCurrentSituationoftheQualityControlofSPFChickeninChinaHEHaitong,WANGZhengehun,LIUWenfeng,LIUYu.yun,ZHANGYong.qiang(1.ResearchInstituteofChinaAnimalHusbandryGroup,Beijing100070,China;2.QYHBiotechCompanyLimited,Beijing100070,China)【Abstract】Resultsofqualitycontroltestandeventhequalityofthe

4、productsaredirectlyaffectedbySPFchickensandSPFembryos,whicharethemainrawmaterialsofproductionandqualityinspectioninveterinarybiologicalproducts.ChickensandembryosmustmeetthenationalSPFanimalstandardsrequirementfromtheanimalstandardsinproductionandinspectionintheveterinarypharmacopoeiaofthePeopleSRep

5、ublicofChina(2010),intheseedlotsandbiologicalproductspreparationandqualityinspection.ThequalitycontrolofSPFchickenincludesfourtests,namelyinheritance,microorganism,environmentandnutritionrespectively.ThecurrentstandardsforqualitycontrolofSPFchickensarereviewedintheperspectiveofbioproductsenterprises

6、.Inthisarticle,criticalideasandpracticalproposalsforqualitycontrolofSPFchickensbasedonthepracticeofproductionandqualityinspectinpoultrylivevaccinearepresented.【Keywords】SPFchicken;Qualitycontorl;Veterinarybioproductsenterprises随着我国畜牧养殖业的发展,规模化,集约化养殖水平不断提高,对于高品质疫苗的需求日益增加,促使我国兽用生物制品行业迅猛发展,兽用生物制品企业数量不断

7、增加,在所有兽用生物制品企业跨过农业部GMPf-I槛后,产品品质的提升成为企业关注的重点.近年来,禽用活疫苗污染REV,ALV等蛋传外源病毒的现象时有发生,企业在进行疫苗外源病毒质量控制的过程中逐渐将关注点聚焦到制备禽用活疫苗的主要原材料SPF种蛋的纯净性方面.对于SPF鸡的微生物质量控制,世界各国根作者简介】何海蓉(1969一)女,博士,研究方向:预防兽医.E?mail:hehrcahg.tom.ca.1O0中国比较医学杂志2011年10月第2l卷第10,11期ChinJCompMed,October2011,Vo1.21.No.10,11据不同国情都制订了相应的标准.1SPF鸡的质量标准1

8、.1国内外标准SPF鸡是指饲养于屏障系统或隔离系统等可控环境中,无国内外(尤其是国内)流行的鸡主要传染病,具有良好的生长和繁殖性能的鸡群.根据疫病的流行情况,危害程度,控制难度及检测水平,不同国家在不同时期对特定病原的含义(即SPF鸡的质量标准)也在不断的发展和完善,如SPAFAS公司最初只检测9个项目,而目前最多检测31个项目.国家质量技术监督局1999年11月10日颁布中国SPF鸡国家标准,并从2000年4月1日起实施(该标准2008年修订,2009年5月1日起实施修订版),标准共10个,即GB/T17998.2008,GB/T17999.12008,GB/T17999.22008,GB/

9、T17999.32008,GB/T17999.42008,GB/T17999.52008,GB/T17999.6-2008,GB/T17999.7-2008,GB/T17999.82008,GB/T17999.9-2008),标准规定:我国SPF鸡应不含l9种病原微生物,包括禽腺病毒,产蛋下降综合症,禽脑脊髓炎病毒,禽流感病毒,多杀性巴氏杆菌,禽呼肠孤病毒,禽白血病,禽贫血病毒,鸡痘病毒,鸡副嗜血杆菌,传染性支气管炎病毒,传染性法氏囊病病毒,传染性喉气管炎病毒,鸡马立克氏病病毒,鸡败血支原体,鸡滑液囊支原体,鸡新城疫病毒,网状内皮增生症病毒,鸡白痢沙门氏菌.国外主要控制16种病原微生物,即1种

10、细菌(鸡白痢沙门氏菌),2种支原体(鸡败血支原体,鸡滑液囊支原体)和l3种病毒(禽腺病毒,产蛋下降综合症,禽脑脊髓炎病毒,禽流感病毒,禽呼肠孤病毒,禽白血病,鸡痘病毒,传染性支气管炎病毒,传染性法氏囊病病毒,传染性喉气管炎病毒,鸡马立克氏病病毒,鸡新城疫病毒,网状内皮增生症病毒).SPF鸡的微生物控制种类,没有国际统一的标准,但有国际共识,每个国家根据自己的实际情况确定需要控制的病原微生物种类.各国标准不仅数量不同(美国21种,法国l6种,El本22种,澳大利亚16种,欧洲l9种),而且检测项目也不完全一致.目前国际上公认的标准是USDA和欧洲药典(EPC).我国的SPF鸡微生物质量标准主要是

11、参照美,日,澳的标准,并结合我国鸡病流行的实际情况而制定的,从疫病监测的项目来看,介于美国SPAFAS公司的标准蛋和保险蛋之间,从疫病检测的微生物种类来看,中国的SPF鸡微生物质量标准已完全接近国际水平.1.2我们的看法中国的SPF鸡国家标准规定不含19种病原微生物,2010版中国兽药典(三部)附录外源病毒检验法规定,采用鸡检验法检测的病毒血清抗体有l2种,可以看出现行的SPF鸡质量标准应该能够满足活疫苗纯净性和检验动物易感性的要求.但从我们检测国内SPF种蛋情况看,部分SPF鸡场提供的SPF种蛋出现禽呼肠孤病毒,禽脑脊髓炎病毒,鸡白痢沙门氏菌卵黄抗体阳性.说明尽管有与国际接轨的SPF鸡微生物

12、质量控制标准,但SPF鸡微生物控制实际状况并不乐观.这就迫使兽用生物制品企业去研究检测SPF种蛋中病毒卵黄抗体的方法来监测SPF种蛋质量.另国外尽管存在禽贫血病毒(CAV)感染现象,但是美国,法国等一些国家未将其列入国标,而是单列,例如美国和欧盟允许鸡场根据实际情况,提出自己的企业标准.如美国SPAFAS公司将SPF种蛋分为三个等级:标准蛋,保险蛋和研究蛋.标准蛋(standardegg)检测21个项目,主要用于美国国内疫苗的生产;保险蛋(premiumegg)检测28个项目,主要用于出口;研究蛋(researchegg)检测31个项目,主要用于特殊疫病的科学研究,这样也提示在中国是否可以根据

13、SPF鸡不同用途单列一些检测项目达到既降低检测成本又具有标准的实际可操作性.1.3建议1.3.1鉴于SPF鸡检测种类越多,成本越高,参照发达国家的做法,建立切实可行的针对SPF鸡的最低国家标准,根据不同的使用对象,提出不同的检测标准和要求.1.3.2对SPF种蛋实行分级制度,满足不同层次SPF种蛋的需求.在签订SPF种蛋供应合同时,明确列出SPF种蛋控制的病原微生物种类及检测方法和结果,让使用者心中有数;1.3.3建立SPF种蛋质量控制行业标准,可以先从市场反应较大,严重威胁禽用活疫苗安全性的主要蛋传病毒REV,ALV,REO,CAV等人手,建立相应的标准及监督运行机制,通过兽用生物制品企业的

14、原材料质量控制手段对SPF鸡场提供的SPF鸡及种蛋进行监控.中国比较医学杂志2011年10月第21卷第10,11期ChinJCompMed,October2011,Vo1.21.No.10,111012SPF鸡检测2.1检测时间与方法从理论上讲SPF鸡群被病原微生物污染的可能性随时存在.需要每天都监测才能保证原则上认可的质量控制,但这在实际操作中是不可能做到的.现行国家标准规定的监测周期是根据经济成本,病原微生物感染扩散所需要的时间,容易检出的最佳时间,在SPF鸡微生物控制中的重要性等诸多方面因素综合确定的.3SPF鸡场也会根据各自实际情况制定高于国家标准的监测周期,特别对于REV,ALV,R

15、EO,CAV等几种主要蛋传微生物的检测.我国标准规定:开产前进行100%取样检测,产蛋期,每隔48周,按照鸡群数量的5%15%抽样,检测国家标准规定的所有项目.SPF鸡微生物检测方法多采用血清学方法进行,主要是因为:鸡的血清学检测方法简单,容易进行,准确性高.SPF鸡微生物检测方法有近10种,最常用的有:琼脂扩散试验(AGP),酶联免疫吸附试验(ELISA),血清中和试验(SN),血凝抑制试验(HT),平板凝集试验(SPA)等.我们比较了中国与美国,日本,澳大利亚,法国等国家的检测项目,基本一致.血清学方法在特异性上应该有保证,但在灵敏度方面较之病原的直接分离有差别,但因为特异性远较灵敏性重要

16、,假阳性的存在严重干扰对SPF鸡群的质量认定,所以血清学检测成为国家标准首选的检测方法,也为SPF鸡场所接受.2.2我们的看法从兽用生物制品企业的角度,我们认为血清学抗体检测的目的最终为SPF鸡是否污染微生物提供依据,而我们最关注的是SPF种蛋是否直接携带病原微生物,因此对于养殖业危害比较大,影响活疫苗纯净性的主要病原微生物,仅仅采用血清学检测方法来判断SPF鸡的微生物携带状况是不够的,应采取定期棉拭子采样,病毒分离的方法来提高针对SPF鸡携带病原微生物的检测灵敏度.目前还没有国家指定的SPF鸡权威检测机构,由于检测试剂的缺乏,能够按照国标进行检测的鸡场也只有少数几家,而且都是自检,各个鸡场的

17、检测项目,检测试剂,检测方法,检测周期也不一致.部分SPF鸡场检测项目少,检测频率低,甚至有的不具备检测能力,只好委托代检.而由于SPF鸡场的管理要求及屏障系统导致采样困难等因素,第三方检测机构的监督检验缺失.以上因素致使SPF鸡及种蛋质量良莠不齐,对兽用生物制品的生产和检验构成威胁.2.3建议2.3.1尽快建立我国SPF鸡权威检测机构,按照SPF鸡国家标准,不定期地对全国SPF鸡场进行质量抽检,抽样应具体到鸡舍,既要抽检血清,也要抽检种蛋,定期公布抽检结果,确保SPF鸡胚的质量.SPF鸡场售出的SPF种蛋,要附有权威检测单位提供的检验报告;2.3.2针对网状内皮组织增生病毒,禽白血病毒,禽呼

18、肠孤病毒,禽脑脊髓炎病毒,鸡白痢沙门氏菌等垂直传播的重点病原微生物,组织高校,科研单位及兽用生物制品企业联合研制针对病原检测的快速方法,并制定行业标准,提高SPF鸡微生物检测的灵敏度;2.3.3加快SPF鸡微生物检测试剂和标准品的研制和供应,研究国产替代品,解决检测试剂,标准品完全依赖进口的问题;2.3.4根据乾元浩南京SPF鸡场的检测实践,建议制定高于国家标准的检测周期和抽样量,1月龄,2月龄和3月龄按照鸡群数量的5%取样预检,4月龄对备用鸡群的每一只鸡采集血样进行100%检测,100%检测以后,每周按照鸡群的1%抽检进行血清学检测,每月按照鸡群的5%抽检血检,除周检检测部分重点监控项目(从

19、19个检测项目中挑选数个)外,其余都检测19个项目,周检可以由自己完成,但是月检和100%检测,必须向国家指定检测单位按照鸡群数量的2%提供血样.3国内SPF种蛋的来源及供应情况3.1现状1959年美国农业部地区家禽研究所建立全球第一个SPF鸡群,1961年世界上第一家商业性SPF鸡生产企业一美国SPAFAS公司成立,1961年英国Houghton家禽研究所建立SPF鸡群(ALVFREE),七十年代荷兰INTERVET,法国MERIEUX,澳大利亚CSIRO,日本相继建立了SPF鸡群.目前世界上生产SPF种蛋的3大巨头分别是美国SPAFAS公司,美国SUNRISE公司和德国LOHMANN公司.

20、美国SPAFAS公司是目前世界上最大的SPF种蛋供应1O2中国比较医学杂志2011年lO月第21卷第10,11期ChinJCompMed,October2011,Vo1.21.No.10,11商,拥有Line22(30多年历史)和Bx(10多年历史)两种品系,现有11个鸡场,36个鸡舍,每个鸡舍月饲养4000-8000只母鸡,2009年生产3660万枚SPF种蛋(其中美国Illinois供应2100万枚,美国Connecticut供应990万枚,欧洲Hungary供应570万枚),销往全球40多个国家.我国SPF鸡群的饲养,开始于20世纪80年代.山东省家禽研究所1984年建立SPF鸡舍,19

21、85年引进美国SPF种蛋,成功地培育出我国第一个SPF鸡群.中国兽医药品监察所1987年建立SPF鸡舍,1988年引进德国罗曼公司SPF种蛋,成功建立300只鸡的SPF鸡群.90年代以后,乾元浩,哈兽研,济南斯帕法斯,辽宁益康,黑一厂等多家单位先后建立了具有一定生产规模的SPF鸡群.为了规范SPF鸡胚生产,确保SPF鸡胚质量,国家加强了对SPF鸡场的管理,2007年2月发布了兽药生产,检验用SPF鸡(蛋)定点生产企业管理办法(征求意见稿)和兽药生产,检验用SPF鸡(蛋)定点生产企业检查验收评定标准,该标准共73条,全面系统地规范了SPF鸡的饲养管理.截止2009年底,全国有17家SPF鸡场通过

22、验收,获得SPF鸡生产许可证,2009年共生产SPF种蛋2396万枚,2010年全国又新建5家SPF鸡场,从设计产能看基本能够满足供应.3.2我们的看法虽然国内SPF鸡场的数量及产能能够符合要求,但SPF种源的问题没有得到根本解决,没有稳定可靠的SPF种源,SPF鸡场从不同途径引进SPF种蛋,通过检测筛选合格的SPF鸡,建立自己的核心种群.这样的状况令国内SPF种蛋质量难以得到有效保证,我国每年生产禽用活疫苗接近1000亿羽份,禽用活疫苗的纯净性已经受到养殖户的高度关注,规模化集团用户均高价使用进口活疫苗,SPF种蛋的质量状况已经成为国产活疫苗进入国内中高端市场的制约因素之一,如不能有效解决S

23、PF种源问题,国产禽用活疫苗的发展前景堪忧.3.3建议3.3.1SPF种源问题应引起有关单位高度重视,近期需要通过引进国外优质SPF种蛋,建立国内的SPF种蛋供应基地来解决种源问题,中长期需要培育出中国自己的SPF种鸡群,从而从根本上解决我国SPF鸡的种源问题.3.3.2在SPF种蛋产大于销的前提下,国家应加强对SPF鸡场的验收和管理,加大对SPF鸡群抽检,建立不合格的SPF鸡场淘汰机制,树立国产SPF鸡及种蛋的公信制,使兽用生物制品生产企业能够选择到优质SPF种蛋,养殖户能够使用放心安全的国产疫苗.4兽用生物制品企业对SPF种蛋的质量监测情况4.1现状在许多国家,通常生产活疫苗使用SPF种蛋

24、,生产灭活苗使用非免种蛋,但是灭活剂和灭活技术不能确保杀灭所有的病原微生物,同时灭活的病毒也有可能引发免疫反应,所以非免种蛋存在安全风险,美国所有禽用疫苗,无论活疫苗还是灭活苗,全部使用SPF种蛋生产.2000年版的中华人民共和国兽用生物制品规程明确规定:生产禽用活疫苗必须使用SPF鸡胚.农业部2006年11月22号下发的关于加强兽用生物制品生产检验原料监督管理的通知规定:自2008年1月1日起,农业部将对具备GMP资质疫苗生产企业的活疫苗生产使用无特定病原体(SPF级)鸡胚情况进行全面监督检查,对达不到标准要求的,将根据兽药管理条例规定进行处理.为了确保禽用活疫苗的纯净性,部分兽用生物制品生

25、产企业建立了自己的SPF鸡场,通过有效的检测手段,控制了SPF种蛋污染病原微生物,确保禽用活疫苗的纯净性.但多数企业并不拥有自己的SPF鸡场,除了在选择SPF鸡及种蛋供应商的初期能够得到SPF鸡血样进行各种抗体检测外,在使用过程中很难做到定期获得血清监测血清抗体,只能选择相对稳定的SPF种蛋供应来源,通过对SPF种蛋卵黄抗体,疫苗半成品,成品外源微生物的检测监控SPF鸡外源微生物污染.如针对行业关注的主要蛋传外源微生物,企业通常采用的方法是用ELISA试剂盒检测SPF种蛋卵黄抗体,采用PCR,间接免疫荧光等方法检测半成品病原,采用鸡胚法,细胞法,动物法检测成品.4.2我们的看法按照国家制订并发

26、布的SPF鸡微生物检测标准严格执行的SPF鸡场,其种蛋质量应能保证无外源污染微生物,但实际上,疫苗中能够检测到的外源微生物绝大部分是由于SPF种蛋污染造成,这与我们SPF鸡的种源,饲养管理,设施,质量监测过程中存在的问题密切相关.在SPF鸡场兽用生中国比较医学杂志2011年1O月第21卷第10,11期ChinJCompMed,October2011,Vo1.21.No.10,11103物制品生产企业养殖户的供应链中,养殖户除了国产活疫苗还可以选择进口活疫苗,SPF鸡场虽然真正能够满足19项外源微生物检测全部合格要求的不多,但由于存在市场需求,SPF鸡及种蛋仍然是供不应求,唯有兽用生物制品生产企

27、业面对激烈的市场竞争,根据国家和养殖户要求,为保证疫苗的纯净性,不得不在疫苗原材料质量控制及生产环节中建立诸多外源微生物内控质量标准,把本该SPF鸡场控制的SPF种蛋外源微生物污染风险转嫁到兽用生物制品生产企业自身,无形中增加了疫苗检测的人力,物力和财力,削弱了国产禽用活疫苗的国际竞争力.4.3建议4.3.1行业主管单位将企业针对SPF种蛋及疫苗产品外源微生物检测结果作为对SPF鸡场进行质量监控的参考.同时鼓励企业与科研单位合作将外源微生物检测技术及企业的内控标准上升为行业标准,对SPF鸡场实施有效的质量监控;4.3.2建立SPF鸡污染外源微生物质量追溯机制,促使SPF鸡场自觉按照国家标准及要

28、求做好SPF鸡质量检测工作并承担相应的责任.参考文献234徐桓.SPF鸡群与疫苗生产J.中国兽药杂志.2003,37(4):2325.秦卓明,张世栋,金维江.对中国SPF鸡监测的建议J,中国家禽.2003,5(18):69.赵继勋,秦卓明,张秀美.浅析中国SPF鸡微生物质量控制标准J.山东家禽.1996,2:37.程水生,陈洪岩,李昌文.关于我国SPF鸡卵生产情况的调查报告J.中国预防兽医.2006,28(5):606608.修回日期2011-09.15(上接第106页)参考文献中华人民共和国国家科学技术委员会.1988.实验动物管理条例.中华人民共和国科学技术部.2006.关于善待实验动物的

29、指导性意见.中华人民共和国农业部.2010.动物检疫管理办法.汪晖,沈智,庞万勇.2010.浅论与实验动物相关的职业健康安全与人畜共患病J.中国比较医学杂志.20(4):14.中华人民共和国卫生部.1998.医学实验动物管理实施细则.沈智,庞万勇.2010.浅论实验动物兽医的职责及实践J.中国比较医学杂志.20(6):16.黑泽努.日本实验动物医学发展情况介绍.实验动物医学技术培训班.2009年I1月,西安.8910AmericanAssociationforLaboratoryAnimalSciences(AALAS).IntroductiontoLaboratoryAnimalMedici

30、ne.AALASLearningLibrary.AmericanAssociationforLaboratoryAnimalSciences(AALAS).IntroductiontoLaboratoryAnimalMedicine.AALASLearningLibrary.AmericanAssociationforLaboratoryAnimalSciences(AALAS).LAT12:EmergencyVeterinaryCareLessons.AALASLearningLibrary.AmericanAssociationforLaboratoryAnimalSciences(AALAS).LATG5:HealthSurveillanceandQualityAssurance(2007)Lessons.AALASLearningLibrary.修回日期2011-09.151234567ii