蜂胶技术要求编制说明0125.docx

1、蜂胶技术要求编制说明0125蜂胶技术要求编制说明一、起草背景和研究经过蜂胶是蜜蜂从植物新生枝腋芽处、花蕾处、创伤处采集的树脂类物质，再注入其腺体分泌物，经加工转化而成的胶状物质。是蜜蜂用来抵御蜂巢外部病虫害、病原性微生物入侵以及保持巢内环境干净清洁的物质。是常用的保健食品原料。也收载于中国药典2010年版，适应症为抗菌消炎、调节免疫、抗氧化、加速组织愈合。用于高脂血症和糖尿病的辅助治疗。蜂胶主要由树脂类、芳香油、蜂蜡、花粉等组成。蜂胶来源因地域广泛性和植被多样性，造成了成分的复杂性。上世纪初Kstenmacher1从蜂胶中鉴定出肉桂醇与肉桂酸。至50年代后期国内外己从蜂胶中分离鉴定出化学成分有

2、黄酮类、萜烯类、醌类、酯类、醇类、醛类、酚类、有机酸类，酶类、维生素类、多糖及多种微量元素等。中国蜂胶化学成分研究始于80年代初期，尚天民等2从北京蜂胶中分离出白杨素，3 ,4-二甲氧基肉桂酸、异阿魏酸和廿六烷酸、5,7-二羟基黄酮、3,5,7-三羟基黄酮、5,7-二羟基,2-甲氧基黄酮、二十三(烷)酸甲酯、邻苯二甲酸双(2-乙基己基)酯、邻苯二甲酸双异丁酯和葵二酸双(2-乙基己基)酯3，球橙素、乔橙素、柚木杨素、白杨素、良姜素和高良姜4。迟家平等57从辽西蜂胶中分离出白杨素、良姜素、刺槐素、洋芹素、山奈素、鼠李素、柚木杨素、咖啡酸苄酯、芫花素、硫的多倍体S8, 3，4-二甲氧基桂皮酸、异阿魏

3、酸、咖啡酸、苯甲酸。曾唏8从贵阳蜂胶中分离得到刺魄素。从贵阳蜂胶中分离得到5-苯基-2,5-戊二烯酸，3,4-二甲氧基肉桂酸，3羟基-4-甲氧基肉桂酸9。蜂胶含挥发油，鉴定出甲酸乙酷、乙酸乙醋、-按叶油醇、愈创烯醇等化合物10。用CG-MS在泰山蜂胶中分析鉴定出多种成分，主要为苯甲醇、苯甲酸、苯乙醇11，河南蜂胶中检出了苯乙醇、3-苯基-2-丙酸、1-（1, 5-二甲基-4-乙烯基）-4-甲基苯、苯并蒽酮12，宜昌蜂胶中检出肉桂酸、a-桉叶醇、10-表- C5 -桉叶醇等成分13。内蒙古蜂胶中检测出了多种化合物,主要是-2没药醇、2-甲基-3-丁烯-2-醇、3-甲基-2-丁烯-1-醇14，北京

4、蜂胶中分离得到愈创木醇、愈创木醇、-桉叶油醇、异愈创木醇15；甘肃蜂胶中检测到的主要成分是大黄酚16。我国蜂胶原料产量有限，经有关方面统计：每年蜂胶原料产量仅为350吨左右，年产值约7000万元；提纯蜂胶产量不足200吨，产值近亿元；正常情况下，年产销各种蜂胶制品约为600吨，销售总额应在18亿元左右，而实际上，各种蜂胶制品年销售额达30亿元以上。2007年，统计21家蜂胶企业生产用蜂胶原料消耗量，大大地超过了全国蜂胶原料的实际产量。保守估计，目前市场上未经批准的、存在各种问题的蜂胶产品约占蜂胶产品总量的半数以上，问题十分严重，而且愈演愈烈。更有甚者，有的蜂胶产品生产用原料掺假使杂，以油脂类物

5、质冒充蜂胶，产品安全隐患极大。目前，尚无保健食品原料蜂胶技术要求，项目组收集到有关部门颁布的9个蜂胶标准： 1、国家质量监督检验检疫总局颁布的“中华人民共和国国家标准GB/T 19330-2008蜂胶标准”；2、国家质量监督检验检疫总局颁布的“中华人民共和国国家标准GB/T24283-2009蜂胶标准”；3、国家质量监督检验检疫总局颁布的“中华人民共和国国家标准GB/T 20574-2006蜂胶中总黄酮的测定方法”； 4、国家质量监督检验检疫总局颁布的“中华人民共和国国家标准GB/T 23870-2009蜂胶中铅的测定方法”；5、国家质量监督检验检疫总局颁布的“中华人民共和国国家标准GB/T

6、19427-2002蜂胶中芦丁、杨梅酮、槲皮素、莰菲醇、芹菜素、松属素、苛因、高良姜素含量的测定方法”；6、中国药典2010年版蜂胶标准； 7、国内贸易部颁布的“中华人民共和国蜂胶行业标准SB/T 10096-92”；8、国家农业部颁布的“中华人民共和国蜂胶农业行业标准NY 5136-2002；9、国家农业部颁布的“中华人民共和国蜂胶农业行业标准无公害食品蜂胶NY 629-2002”；表1 蜂胶不同标准感官指标比较表不同标准状态气味色泽滋味GBT 19330-2008 地理标志产品 东北黑蜂蜂胶不透明团块或碎片，在35以上逐渐变软，有粘性和可塑性，明显的芳香味褐色、灰褐、暗绿、灰黑色等，有光泽

7、有明显的辛辣味GBT 24283-2009 蜂胶蜂胶团块或碎片状，不透明，约30以上随温度升高逐渐变软，且有粘性，有蜂胶所有的芳香气味，燃烧时有树脂乳香气，无异味。棕黄色、棕红色、褐色、黄褐色、灰褐色、青绿色、灰黑色等，有光泽微苦，略涩，有微麻感和辛辣感。蜂胶提取物断面结构紧密，固体状，约30以上随温度升高逐渐变软，且有粘性，有蜂胶所有的芳香气味，燃烧时有树脂乳香气，无异味。棕色、褐色、黑褐色，有光泽微苦，略涩，有微麻感和辛辣感。B/T 10096-1992 内易部蜂胶呈不透明固体团块状或碎渣状，20-40时，胶块变软，有粘性，20C以下胶块变硬、脆。有芳香气味，然烧时有树脂乳香气，棕黄、综红

8、，有光泽一级棕褐带青绿色，光泽较差二级灰褐色，无光泽三级口尝味苦、略带辛辣味断面结构紧密，呈黑大理石花纹状断面结构密实不一，呈砂粒状断面结构粗糙，有明显的杂质NY5136-2002农业部无公害蜂胶不透明团块或碎片，在35以上逐渐变软，有粘性和可塑性有明显的芳香味褐色、灰褐、暗绿、灰黑色等，有光泽有明显的辛辣味NY/T 629-2002农业部蜂胶不透明的非晶状团块或碎片，10以下为固体，20C-40逐渐变软，有粘性和可塑性，60以上逐渐熔化为粘稠性流体有浓烈的芳香味，味强弱为分优、一、二及等外品暗绿、灰褐、灰黑或褐色等，分有较亮丽的光泽、有亮丽的光泽、有光泽、色泽灰暗用口尝辛辣感极强、较强、有辛

9、辣感、辛辣感较淡中国药典2010年版为团块状或不规则碎块，20以下性脆，30以上逐渐变软，发黏性。气芳香多数呈棕黄色、棕褐色或灰褐色，具光泽。味苦，有辛辣感。表2 蜂胶不同标准理化指标比较表总黄酮含量氧化时间/s乙醇浸出物含量蜂蜡和75%乙醇不溶物含量碘值%酚类化合物含量%薄层鉴别或含量测定GBT 19330-2008 地理标志产品 东北黑蜂蜂胶8%2255（75%乙醇）45GBT 24283-2009 蜂胶蜂胶815224060蜂胶提取物17202295B/T 10096-1992 内易部蜂胶定性反应227555552535452512NY5136-2002农业部无公害蜂胶8%2255（75

10、%乙醇）45NY/T 629-2002农业部蜂胶15% 、10-15、10-5、55、5-10、10-22、2270、55-70、40-45、40（75%乙醇）30、30-45、45-60、60中国药典2010年版2250白杨素、高良姜素TLC、HPLC测定现有的蜂胶相关标准主要从蜂胶形态、色泽、气味、滋味、总黄酮含量、氧化时间、乙醇浸出物、白杨素、高良姜素含量等指标控制蜂胶质量，对蜂胶质量控制起到了一定作用。但缺少特征鉴别和特征成分的含量检测指标等项目，可控性差，无法检测其真假优劣，严重影响了产品的质量控制和监管的有效实施。二、蜂胶技术要求研究情况1. 仪器与试药 HP-1100高效液相色谱

11、仪（美国：包括1322A在线脱气机、G1311A四元梯度泵、G1315A二极管阵列检测器、HP化学工作站），PBQ-薄层自动铺板器（重庆南岸实验电器厂）；SPU-自动喷雾显色仪（日本岛津）；CQ-250超声波清洗器（上海船舶电子设备研究所），定量毛细管（美国Drummond公司），SimplicityTM型超纯水系统（Millipore公司），硅胶G预制板、硅胶G高效薄层板（青岛海洋化工有限公司）。 白杨素对照品（含量测定用，批号:111701-200501，中国药品生物制品检定所），高良姜素对照品（含量测定用，批号:111699-200501，中国药品生物制品检定所），芦丁对照品（含量测定用

12、，批号:100080-200707，中国药品生物制品检定所），槲皮素对照品（含量测定用，批号:100081-200907，中国药品生物制品检定所），木犀草素对照品（含量测定用，批号:111520-200504，中国药品生物制品检定所），山奈素对照品（含量测定用，批号: 110861-200606，中国药品生物制品检定所），蜂胶对照品（自制），甲醇、乙腈为色谱纯，其他试剂为分析纯。 疑似掺假蜂胶原料：编号7、13、24；掺假蜂胶提取物：编号18、19、58、59、62、63、64、65、66；疑似假蜂胶：编号7、24、25；芦丁粉：编号60；杨树芽：编号61、92、93、94；杨树叶：编号67、

13、69、71、73、75、77、81、83、85；杨树枝：编号68、70、72、74、76、78、82、84；杨树皮：编号80；巴西蜂胶原料：编号91；其他编号为蜂胶原料。2、感官指标表3 感官指标项 目特 征状 态为团块状或不规则碎块，10以下性脆，30以上逐渐变软色 泽多数呈棕黄色、棕褐色或灰褐色，具光泽气 味气芳香，无异味滋 味味微苦，略涩，有辛辣感和微麻感状态：经江西汪氏蜂蜜园有限公司多年来收样观察和采购经验以及本课题组对60多批次样品的观察，多数蜂胶为团块状或不规则碎块，10以下性脆，1030脆性不强，30以上逐渐变软，因此，状态定为：为团块状或不规则碎块，10以下性脆，30以上逐渐变

14、软。色泽：经观察60多批次样品，多数蜂胶多数呈棕黄色、棕褐色或灰褐色，具光泽，与中国药典2010年版蜂胶描述一致。气味：经嗅闻60多批次样品，蜂胶具芳香气味，正品蜂胶气味芳香，而掺假蜂胶气无芳香味或有异味，因此，结合GBT 24283-2009 蜂胶标准，气味定为：气芳香，无异味。滋味：中国药典规定：味苦，有辛辣感。经品尝40多批次样品，参照GBT 24283-2009 蜂胶标准，滋味定义为：味微苦，略涩，有辛辣感和微麻感。3 理化指标表4 理化指标项 目指 标蜂胶薄层鉴别二项鉴别试验都呈蜂胶对照品特征反应干燥失重/（%） 4.0总灰分/（%） 8.0酸不溶性灰分/（%） 6.0氧化时间/（s

15、） 22乙醇浸出物含量/（%） 38.0蜂胶薄层色谱鉴别方法1：是为真伪鉴别而研究的薄层色谱鉴别方法。蜂胶主要成分有：球橙素、乔橙素、柚木杨素、白杨素、高良姜素、刺槐素、洋芹素、山奈素、鼠李素、柚木杨素、咖啡酸苄酯、芫花素，采用单一成分对照难以杜绝伪劣、造假现象，有人将杨树叶、芽等粉末或者杨树分泌物搀入蜂胶中，或者直接用杨树芽提取物来假冒蜂胶提取物，所得到的劣质蜂胶在颜色、气味、形状上都与真蜂胶十分相似，给蜂胶的鉴别带来了困难17。曹炜等18采用高效液相色谱-二极管阵列检测器-多极质谱联用法分析了不同产地的30个蜂胶样品以及2个杨树芽乙醇提取物的化学成分，结果30个蜂胶样品与杨树芽乙醇提取物的

16、成分十分相似，因此，建立蜂胶专属性强的鉴别方法尤其重要，我们采用蜂胶对照品作为对照，对其进行了薄层鉴别研究。通过综合考察，确定薄层色谱条件为，采用预制硅胶板，以甲苯-乙酸乙酯-冰醋酸（1030.5）为展开剂，喷以1%三氯化铝乙醇试液，热风吹干，置紫外光灯（365nm）下检视。供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点，特征斑点Rf值适中，结果见图1。图1. 蜂胶TLC图1、12、13、20、29、31、36、37、46、47、53为蜂胶样品48（蜂胶对照品），18、58为假蜂胶提取物，7、24、61（杨树芽）。蜂胶薄层色谱鉴别方法2：是为本次提高技术要求而研究的薄层色谱鉴别

17、方法。取鉴别1项下的供试品溶液和对照品溶液各0.5ml，分别加入0.25% 5-二甲氨基萘磺酰氯丙酮溶液0.5ml，用三乙胺调pH至9-9.5，放置2-3小时，分别作为供试品溶液和对照品溶液。照薄层色谱法（中国药典2010年版附录 B）试验，吸取上述二种溶液各2l，分别点于同一聚酰胺薄膜上，以甲苯冰醋酸（91）为展开剂，展开，取出，晾干，置紫外光（365 nm）灯下检视。供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点。图2. 蜂胶TLC图43、44、45、46、47、49、50、51、52、53、54、55、56、57为蜂胶样品，48（蜂胶对照品），58、59为假胶，60为芦丁

18、，61杨树芽。干燥失重：中国药典2010年版蜂胶项下规定干燥失重不得过2%，经测定，蜂胶水分在不同季节波动较大一般在1.2至4.5之间，结果见表5，因此，规定干燥失重不得过4.0%。总灰分、酸不溶性灰分：按中国药典2010年版蜂胶项下的方法测定，总灰分在1.0%4.5%之间，酸不溶性灰分在0.2%4.0%之间，因此，规定总灰分不得过8.0%，酸不溶性灰分不得过6.0%表5 不同批次蜂胶有关理化指标测定结果批 次干燥失重（%）总灰分（%）酸不溶性灰分（%）批 次干燥失重（%）总灰分（%）酸不溶性灰分（%）蜂胶样品11.673.621.35蜂胶样品342.083.361.32蜂胶样品21.883.

19、042.63蜂胶样品351.493.281.68蜂胶样品31.433.121.33蜂胶样品361.873.051.68蜂胶样品41.282481.92蜂胶样品371.612.283.41蜂胶样品51.912.692.28蜂胶样品381.551.983.20蜂胶样品61.053.252.21蜂胶样品391.841.832.98蜂胶样品74.103.332.33蜂胶样品401.462.463.51蜂胶样品81.592.982.08蜂胶样品411.733.193.66蜂胶样品91.283.352.78蜂胶样品422.173.282.89蜂胶样品101.532.461.69蜂胶样品432.283.04

20、2.06蜂胶样品111.822.991.55蜂胶样品442.042.682.51蜂胶样品121.222.231.64蜂胶样品451.861.192.12蜂胶样品134.364.082.12蜂胶样品461.492.082.77蜂胶样品141.951.592.09蜂胶样品471.271.842.32蜂胶样品152.082.122.33蜂胶样品481.582.732.26蜂胶样品161.552.872.12蜂胶样品491.291.612.65蜂胶样品171.373.661.25蜂胶样品504.511.681.66蜂胶样品201.623.781.41蜂胶样品511.281.662.42蜂胶样品211.

21、284.171.29蜂胶样品521.654.281.43蜂胶样品241.174.082.06蜂胶样品531.553.381.82蜂胶样品251.673.671.88蜂胶样品544.372.191.49蜂胶样品261.494.351.16蜂胶样品552.292.811.12蜂胶样品271.313.461.99蜂胶样品561.542.671.62蜂胶样品282.153.282.21蜂胶样品573.362.091.08蜂胶样品294.073.691.56蜂胶样品861.511.280.04蜂胶样品302.552.871.54蜂胶样品871.501.390.98蜂胶样品311.643.210.89蜂胶

22、样品881.101.250.25蜂胶样品321.753.051.87蜂胶样品891.051.650.54蜂胶样品332.302.871.16蜂胶样品901.481.280.33氧化时间：按中国药典2010年版蜂胶项下的方法测定，氧化时间均在22秒之内，结果见表6，因此规定氧化时间不得过22秒。乙醇浸出物含量：中国药典2010年版蜂胶项下规定醇浸出物含量为50%，经江西汪氏蜂蜜园有限公司近几年大生产提取数据和本课题组浸出物测定数据表明，蜂胶醇浸出物含量均在35%52%之间，结果见表6，因此，规定醇浸出物含量大于或等于38.0%。表6 不同批次蜂胶醇浸出物、氧化时间测定结果批 次醇浸出物（%）氧化

23、时间（s）批 次醇浸出物（%）氧化时间（s）蜂胶样品143.217蜂胶样品3447.316蜂胶样品240.515蜂胶样品3536.115蜂胶样品344.613蜂胶样品3636.712蜂胶样品446.814蜂胶样品3740.917蜂胶样品548.215蜂胶样品3842.111蜂胶样品647.616蜂胶样品3938.615蜂胶样品739.720蜂胶样品4037.213蜂胶样品837.613蜂胶样品4143.817蜂胶样品941.314蜂胶样品4244.515蜂胶样品1039.811蜂胶样品4349.214蜂胶样品1117.312蜂胶样品4447.212蜂胶样品1236.813蜂胶样品4543.61

24、3蜂胶样品1343.219蜂胶样品4641.014蜂胶样品1445.917蜂胶样品4742.518蜂胶样品1546.813蜂胶样品4839.515蜂胶样品1650.711蜂胶样品4947.815蜂胶样品1751.312蜂胶样品5053.413蜂胶样品2052.310蜂胶样品5145.614蜂胶样品2154.310蜂胶样品5247.014蜂胶样品2443.512蜂胶样品5341.515蜂胶样品2544.815蜂胶样品5453.711蜂胶样品2647.217蜂胶样品5548.715蜂胶样品2746.013蜂胶样品5640.216蜂胶样品2843.813蜂胶样品5750.114蜂胶样品2936.41

25、5蜂胶样品8652.912蜂胶样品3053.412蜂胶样品8753.410蜂胶样品3151.614蜂胶样品8855.111蜂胶样品3235.812蜂胶样品8952.810蜂胶样品3346.117蜂胶样品9050.8104、标志性成分指标表7 标志性成分指标项 目指 标标志性成分薄层鉴别呈白杨素、高良姜素对照品特征反应白杨素含量/（%） 2.0高良姜素含量/（%） 1.0标志性成分（白杨素、高良姜素）TLC：按中国药典一部2010年版蜂胶药材项下的鉴别方法，采用白杨素、高良姜素对照品作对照，对蜂胶进行薄层色谱鉴别有一定意义，因此，本技术要求采用该鉴别方法。标志性成分（白杨素、高良姜素）含量：按中

26、国药典2010年版蜂胶项下含量测定方法，测得各批次含量白杨素在1.63.8%之间，高良姜素在0.853.42%之间，结果见表8，因此，规定白杨素含量不得少于2.0%，高良姜素含量不得少于1.0%。表8 不同批次蜂胶中杨素、高良姜素测定结果批 次白杨素（%）高良姜素（%）批 次白杨素（%）高良姜素（%）蜂胶样品12.031.17蜂胶样品342.341.36蜂胶样品22.511.45蜂胶样品352.311.25蜂胶样品32.601.53蜂胶样品362.371.22蜂胶样品43.301.74蜂胶样品373.091.77蜂胶样品53.251.65蜂胶样品382.561.31蜂胶样品63.641.76蜂

27、胶样品391.640.94蜂胶样品71.760.98蜂胶样品401.921.03蜂胶样品82.221.43蜂胶样品412.841.47蜂胶样品92.301.64蜂胶样品422.511.55蜂胶样品102.111.61蜂胶样品432.901.74蜂胶样品112.351.42蜂胶样品442.421.32蜂胶样品122.801.93蜂胶样品452.061.11蜂胶样品131.961.49蜂胶样品462.401.46蜂胶样品142.521.57蜂胶样品472.351.48蜂胶样品152.871.43蜂胶样品482.151.14蜂胶样品162.731.31蜂胶样品492.381.35蜂胶样品172.601.52蜂胶样品503.401.93蜂胶样品203.311.80蜂胶样品512.681.54蜂胶样品213.351.94蜂胶样品522.801.74蜂胶样品242.041.02蜂胶样品532.071.05蜂胶样品252.421.65蜂胶样品542.771.61蜂胶样品262