1、紫外吸收光谱法的应用紫外吸收光谱法的应用定性分析定性分析推断分子结构推断分子结构纯度检查纯度检查定量测定定量测定(四)定量测定(四)定量测定Lambert-Beer定律:A=eA=ebc1.普通分光光度法普通分光光度法2.双波长分光光度法双波长分光光度法3.导数分光光度法(导数光谱法)导数分光光度法(导数光谱法)4.示差分光光度法示差分光光度法Lambert-Beer 定律定律光吸收基本定律光吸收基本定律 Lambert-Beer 定定律律是是说说明明物物质质对对单单色色光光吸吸收收的的强强弱弱与与吸吸光光物物质质的的浓浓度度(C)和和 液液层层厚厚度度(l)间间的的关关系系的的定定律律,是是
2、光光吸吸收收的的基基本定律,是紫外本定律,是紫外可见光度法定量的基础。可见光度法定量的基础。Sample(conc.C)Path length bI0ItLambert-Beer 定定律律:当当一一束束平平行行的的单单色色光光通通过过溶溶液液时时,溶溶液液的的吸吸光度光度(A)与溶液的浓度与溶液的浓度(c)和光程和光程(b)的乘积成正比。的乘积成正比。A=acb朗伯定律朗伯定律(1760)A=lg(I0/It)=k1b比尔定律比尔定律(1852)A=lg(I0/It)=k2c透光率:透光率:T吸光度:吸光度:A 当当b 以以cm,c 以以 mol/L为为单单位位,a称称为为摩摩尔吸光系数尔吸光
3、系数,用用 表示。表示。摩尔吸光系数摩尔吸光系数 M=e emb/A 相对分子量的测定相对分子量的测定 的的单单位位为为 L/molcm,它它表表示示物物质质的的浓浓度度为为1 mol/L,液液层层厚厚度度为为1 cm时时,溶溶液液的的吸吸光光度度。a与与的关系为:的关系为:a=/M (M为摩尔质量)为摩尔质量)吸光度的加和性吸光度的加和性 溶溶液液中中含含有有多多种种吸吸光光物物质质且且各各组组分分之之间间不不存存在在相相互互作作用用,则该溶液对光的总吸光度等于各组分的吸光度之和。则该溶液对光的总吸光度等于各组分的吸光度之和。比尔定律的局限比尔定律的局限本身的局限性:只适用于稀溶液本身的局限
4、性:只适用于稀溶液 c Tx I0 Is结论:示差法提高了准确度结论:示差法提高了准确度小结小结紫外吸收光谱的定量分析紫外吸收光谱的定量分析原原理理:同同一一光光源源发发出出的的光光被被分分为为两两束束,分分别别经经过过两两个个单单色色器器后后获获得得两两束束不不同同波波长长的的单单色色光光,利利用用切切光光器器使使两两束束光光以以一一定定的的频频率率交交替替照照射射同同一一吸吸收收池池,根根据据比比耳耳定定律律,样样品品溶溶液液在在两两个个波波长长为为1和和2的的吸吸光光度度差差值值与与溶溶液中待测物质的浓度成正比。液中待测物质的浓度成正比。光源光源单色器单色器单色器单色器检测器检测器切切光光器器狭狭缝缝吸吸收收池池双波长分光光度计双波长分光光度计