药品微生物限度检测技术.ppt

1、1,第八章药品微生物限度检测技术,中药和生物系,2,第一节药品微生物限度检测概述,中药和生物系,3,药品微生物限度检查定义,非规定灭菌制剂及其原辅料：微生物的种类和数量必须限制在一定的范围内或不得检出。,4,部分口服给药制剂:口服液、酊剂、中药丸剂、糖浆剂、散剂、特殊部位使用的片剂（口腔帖片、阴道片、阴道泡腾片、外用可溶片）含中药原粉、豆豉、神曲、动物组织等口服制剂鼻用制剂洗剂灌肠剂等,药品微生物限度检查适用剂型,5,一、药品微生物限度检查意义,确定药物是否污染或其污染程度，控制药品的质量；保证用药的有效性和安全性；可作为衡量药品生产全过程卫生水平的根据之一。,6,二、药品微生物限度检测的内容

2、,7,8,9,10,第二节药品微生物限度检测条件,中药和生物系,11,一、药品微生物限度检测的特殊性,活体性和不稳定性分布的不均匀性多数处于受损伤状态生态环境的多样性及复杂性,12,二、药品微生物限度检测的基本条件,检查环境和人员要求,环境要求:无菌室内进行。背景洁净度10,000级下的局部100级，单向流空气。,操作人员：卫生、着装符合要求。,操作要求：严格遵守无菌操作，严防污染。,13,二、药品微生物限度检测的基本条件,由于某些供试品具有抗菌活性，在建立测定方法或原测定法的检验条件发生改变时，可能影响检验结果的准确性，必须对供试品的抑菌活性及测定方法的可靠性进行验证。,14,二、药品微生物

3、限度检测的基本条件,1.抽样方法,15,二、药品微生物限度检测的基本条件,2.检测用量,3.检测量,16,二、药品微生物限度检测的基本条件,17,二、药品微生物限度检测的基本条件,供试品检出控制菌或其它致病菌时，按一次检出结果为准，不再复试。,供试品的细菌数、霉菌和酵母菌数其中任何一项不符合该品种项下的规定，应从同一批样品中随机抽样，独立复试两次，以3次结果的平均值报告菌数。,供试品的细菌数、霉菌和酵母数及控制菌三项检验结果均符合该品种项下的规定，判供试品符合规定；若其中任何一项不符合该品种项下的规定，判供试品不符合规定。,18,第三节药品微生物限度检测方法,中药和生物系,19,一、细菌数、霉

4、菌和酵母菌数检查,1.平皿法,20,一、细菌数、霉菌和酵母菌数检查,1.平皿法,21,Viable cell count,1.dilute sample,1 ml,9 ml,10 100 1000 104 105 106 107,2.plate out 0.1 ml,22,一、细菌数、霉菌和酵母菌数检查,2.薄膜过滤法,23,24,25,26,27,28,29,一、细菌数、霉菌和酵母菌数检查（薄膜过滤法）,阴性对照：取供试品微生物限度检查相应的溶剂和稀释液同法操作，阴性对照不得长菌,30,一、细菌数、霉菌和酵母菌数检查薄膜过滤法,结果判断细菌总数真菌总数,符合药典该品种项下限度规定,判定药物的

5、细菌、真菌总数检验合格,否则因从同一批次产品中重新抽样，独立复试三次，以三次结果的品均值报告菌数,31,一、细菌数、霉菌和酵母菌数检查,32,一、细菌数、霉菌和酵母菌数检查,33,一、细菌数、霉菌和酵母菌数检查,34,一、细菌数、霉菌和酵母菌数检查,宜选取细菌、酵母菌平均菌落数小于300 cfu、霉菌平均菌落数小于100 cfu的稀释级，作为菌数报告（取两位有效数字）的依据。（1）当仅有1个稀释级的菌落数符合上述规定，以该级的平均菌落数乘以稀释倍数报告菌数;当有2个或2个以上稀释级的菌落数符合上述规定，以最高的平均菌落数乘以稀释倍数的值报告之。（2）如各稀释级的平板均无菌落生长，或仅最低稀释级

6、的平板有菌落生长，但平均菌落数小于1时，以1乘以最低稀释倍数的值报告菌数。,35,一、细菌数、霉菌和酵母菌数检查,细菌总数平均菌落数稀释倍数,2022/11/2,36,37,二、控制菌检查检查项目,（1）阴性对照试验：取稀释液10ml按相应供试品控制菌检查法检查，应无菌生长。（2）阳性对照试验：供试品+10100CFU 阳性对照菌，应检出相应的阳性对照菌。（3）供试品控制菌检查：依相应的检查方法进行。,38,二、控制菌检查检查流程,39,二、控制菌检查检查流程,40,二、控制菌检查检查流程,41,二、控制菌检查检查流程,42,二、控制菌检查检查流程,43,二、控制菌检查检查流程,44,二、控制

7、菌检查大肠埃希菌检查,大肠埃希菌,45,二、控制菌检查大肠埃希菌检查,大肠埃希菌检查意义,大肠埃希菌为条件致病菌，当人体免疫力低下或是侵入肠外组织、器官，可引起肠外感染，乃至败血症。也可随人和动物的粪便排出体外，污染环境，一旦食品、药品、水等物品中检出该菌，说明已受粪便污染，可能存在其他肠道致病菌和寄生虫卵，人们饮用或服用它们则可能引起消化道传染病。,46,二、控制菌检查大肠埃希菌检查,大肠埃希菌检查流程图,2022/11/2,47,乳糖胆盐培养基,EMB琼脂培养基,靛基质试验,紫黑色金属光泽,玫瑰红色液面,2022/11/2,48,I M Vi C试验 大肠埃希菌+(或-）+-产气杆菌-+,

8、49,二、控制菌检查大肠埃希菌检查,大肠埃希菌检查结果报告,50,二、控制菌检查大肠菌群检查,大肠菌群,51,二、控制菌检查大肠菌群检查,大肠菌群检查意义,大肠菌群主要存在于温血动物粪便中，随粪便排出体外后可直接污染药品，若产品中检出该菌群，表明该产品受到粪便污染，可能存在肠道致病菌并引起疾病，以此作为粪便指示菌比大肠埃希菌更具广泛卫生学意义，是评价化妆品卫生质量的重要指标之一。,52,二、控制菌检查大肠菌群检查,大肠菌群检查流程图,53,二、控制菌检查大肠菌群检查,大肠菌群检查结果报告大肠菌群MPN表,根据发酵乳糖产酸产气，平板上有典型菌落，并经证实为革兰氏阴性短杆菌，靛基质试验阳性，则可报

9、告被检样品中检出粪大肠菌群。,54,二、控制菌检查沙门菌检查,沙门菌,55,二、控制菌检查沙门菌检查,沙门菌检查意义,2022/11/2,56,二、控制菌检查沙门菌检查,伤寒菌检查流程图,靛基质试验 脲酶试验生化试验 氰化钾试验 赖氨酸脱羧酶试验 动力试验 血清学凝聚试验,有特征菌落,三糖铁琼脂培养基穿刺接种,最终结果判断,增菌培养,供试液的制备,书写检验记录单,分离纯化,无菌落或无特征菌落,配培养基和稀释液,预增菌,2022/11/2,57,四硫磺酸钠亮绿培养基,SS培养基,黑色菌落,麦康凯培养基,半透明菌落,2022/11/2,58,三糖铁斜面,疑似菌落,赖氨酸脱羧酶培养基,紫色,半固体营

10、养琼脂培养基,血清凝集,59,二、控制菌检查沙门菌检查,沙门菌检查结果报告,60,二、控制菌检查铜绿假单胞菌检查,铜绿假单胞菌,61,二、控制菌检查铜绿假单胞菌检查,铜绿假单胞菌检查意义,62,四、控制菌检查铜绿假单胞菌检查,最终结果判断,增菌培养,供试液的制备,书写检验记录单,分离纯化,无菌落或无特征菌落,配培养基和稀释液,铜绿假单胞菌检查流程图,30-35,1824h,30-35,1824h,63,十六烷三甲基溴化铵平板,胆盐乳糖培养基,黄绿色菌膜,灰白色湿润,氧化酶试验,粉红/紫红色,64,绿脓菌素试验,盐酸层呈粉紫色氯仿层呈蓝绿色,硝酸盐还原产气试验,N2,明胶液化试验,明胶培养基（高

11、层）,明胶液化,65,二、控制菌检查铜绿假单胞菌检查,铜绿假单胞菌检查结果报告,被检样品经增菌分离培养后，经证实为革兰氏阴性杆菌，氧化酶及绿脓菌素试验皆为阳性者，即可报告被检样品中检出铜绿假单胞菌；如绿脓菌素试验阴性而液化明胶、硝酸盐还原产气和42生长试验三者皆为阳性时，仍可报告被检样品中检出铜绿假单胞菌。,66,二、控制菌检查金黄色葡萄球菌检查,金黄色葡萄球菌,67,二、控制菌检查金黄色葡萄球菌检查,金黄色葡萄球菌检查意义,68,二、控制菌检查金黄色葡萄球菌检查,革兰染色、镜检 生化试验:血浆凝固酶试验,最终结果判断,增菌培养,供试品的处理,书写检验记录单,分离纯化,无菌落或无特征菌落,配培养基和稀释液,30-35,30-35,18-24h,24-72h,金黄色葡萄球菌检查流程图,69,卵黄氯化钠琼脂,金黄色，有乳浊圈,甘露醇发酵试验,血浆凝固酶试验,血浆凝块,液态血浆,70,二、控制菌检查金黄色葡萄球菌检查,金黄色葡萄球菌检查结果报告,71,二、控制菌检查梭菌检查,72,二、控制菌检查白色念珠菌检查,革兰染色、镜检芽管试验,有特征菌落,1%聚山梨酯80-玉米培养基,