RocheTBIL和DBIL项目介绍_精品文档.ppt

1、Roche TBIL和和DBIL项目介绍项目介绍TBIL和DBIL检测方法学比较Denny Dong;Dec 07,2012主要内容主要内容 胆红素的代谢胆红素的代谢胆红素的分类和临床应用胆红素的分类和临床应用胆红素的检测方法胆红素的检测方法罗氏胆红素试剂盒特点罗氏胆红素试剂盒特点胆红素检测胆红素检测的标准化的标准化 胆红素是胆汁中的主要色素，呈橙黄色。胆红素具有：脂溶性，难溶于水。毒性作用 抗氧化（抑制亚油酸和磷脂的氧化）胆色素代谢以胆红素代谢为中心。肝脏在胆色素代谢中起着重要作用反反 映映 肝肝 脏脏 的的 分分 泌泌 与与 排排 泄泄 功功 能。能。胆红素测定的作用胆红素测定的作用胆红素

2、的来源胆红素的来源来源 其它铁卟啉化合物铁卟啉化合物：肌红蛋白、过氧化物酶、过氧化氢酶、细胞色素等血红蛋白血红蛋白（主要来源，约占80%）由衰老的RBC破坏、释放出的Hb分解胆红素的生成胆红素的生成部 位：肝、脾及骨髓等网状内皮细胞中衰老红细胞血红蛋白珠蛋白血红素还原胆红素单核-吞噬细胞 系统识别、吞噬（肝、脾、骨髓）NADPH+H+FeCO胆绿素NADPH+H+(250300 mg/天天)胆红素在血液中的运输胆红素在血液中的运输胆红素：脂溶性，难溶于水增高胆红素的水溶性，有利于运输限制胆红素通透细胞膜对组织造成毒性作用 血液：白蛋白胆红素白蛋白胆红素复合物（可逆结合）竞争结合剂：如磺胺药，水

3、杨酸，胆汁酸等胆红素在肝中的转变胆红素在肝中的转变 婴儿出生7周后，体内Y蛋白才会达成人水平1.摄取白蛋白胆红素 复合物血液肝脏白蛋白(不可逆结合）胆红素特异受体细胞膜胞浆胆红素载体蛋白胆红素Y蛋白胆红素Z蛋白内质网2.转化胆红素+UDPGA 葡萄糖醛酸胆红素 (结合胆红素)葡萄糖醛酸基转移酶（1）水溶性增强，易从胆汁排出，也易透过肾小球从尿排出。（2）不易通过细胞膜和血脑屏障胆红素在肝中的转变胆红素在肝中的转变 胆红素在肠道中的变化胆红素在肠道中的变化 结合胆红素 胆红素 胆素原（无色）(中胆素原、粪胆素原、尿胆素原)粪胆素 尿胆素葡萄糖醛酸基胆素肠道细菌非结合胆红素胆红素在体内的代谢胆红素

4、在体内的代谢胆汁胆色素代谢总结胆色素代谢总结主要内容主要内容 胆红素的代谢胆红素的代谢胆红素的分类和临床应用胆红素的分类和临床应用胆红素的检测方法胆红素的检测方法罗氏胆红素试剂盒特点罗氏胆红素试剂盒特点胆红素检测胆红素检测的标准化的标准化胆红素的分类胆红素的分类（1）未结合胆红素）未结合胆红素(Bu)：未与：未与葡萄糖醛酸基葡萄糖醛酸基结合，具结合，具亲脂性亲脂性，须，须加入加速剂加入加速剂破坏分子内部的氢键破坏分子内部的氢键后才能与重氮试剂反应，又称后才能与重氮试剂反应，又称间间接胆红素接胆红素。占总胆红素的。占总胆红素的4/5。（2）结合胆红素）结合胆红素(Bc)：与：与葡萄糖醛酸基葡萄糖

5、醛酸基结合，具结合，具亲水性亲水性，与重氮，与重氮试剂直接反应，又称试剂直接反应，又称直接胆红素直接胆红素(DBIL)。占总胆红素的。占总胆红素的1/5。非结合胆红素非结合胆红素的结构的结构（,Bu,Bu）血红蛋白的降解产物血红蛋白的降解产物在血液中和白蛋白以在血液中和白蛋白以非非共价键共价键的方式结合的方式结合在肝脏被清除在肝脏被清除折叠的结构，几乎不溶折叠的结构，几乎不溶于水。于水。不能直接参与重氮不能直接参与重氮反应反应是新生儿生理性黄疸的是新生儿生理性黄疸的最好指标最好指标结合结合胆红素胆红素(和和;Bc;Bc)在在肝细胞内由非结合胆红素转化肝细胞内由非结合胆红素转化而来而来在肝脏的酶

6、作用，生成了在肝脏的酶作用，生成了单葡萄糖醛酸酯胆红素单葡萄糖醛酸酯胆红素和和双双葡萄糖醛酸酯胆红素葡萄糖醛酸酯胆红素造成胆红素分子内造成胆红素分子内各基团间原有距离增大各基团间原有距离增大，难以再形，难以再形成氢键，由此，使胆红素的成氢键，由此，使胆红素的亲水基团暴露亲水基团暴露在外，表现在外，表现出出水溶性水溶性，便于从胆管排入肠道。，便于从胆管排入肠道。是是胆道梗阻解除后最敏感胆道梗阻解除后最敏感的指标的指标可可直接参与重氮直接参与重氮反应，表现为直接反应的胆红素反应，表现为直接反应的胆红素。血清胆红素与黄疸血清胆红素与黄疸 正常血清 未结合胆红素:占4/5（有毒）总胆红素 17.1um

7、ol/L 结合胆红素：占1/5（无毒）34.2 umol/L 巩膜、皮肤、黄疸 粘膜黄染 (显性）17.1-34.2 umol/L 无黄染 隐性黄疸黄疸的种类(按血清胆红素的来源)：溶血性黄疸 又称肝前性黄疸。胆红素的来源肝脏的转化能力 游离胆红素过多 肝细胞性黄疸 又称肝原性黄疸。肝脏转化能力降低 游离和结合胆红素均升高 阻塞性黄疸 又称肝后性黄疸。结合胆红素排泄障碍 结合胆红素过多黄疸是指高胆红素血症引起皮肤、巩膜和粘膜等组织黄染的现象。黄疸的鉴别诊断黄疸的鉴别诊断胆红素检测的临床意义胆红素检测的临床意义（1）黄疸及鉴别DBi/TB比值60%阻塞性黄疸（2）肝细胞损害程度和预后的判断。（3

8、）新生儿黄疸病情掌握。（4）再障等疾病，TB减少。三种黄疸的临床检验特征三种黄疸的临床检验特征类型类型正常正常溶血性黄疸溶血性黄疸 肝细胞性黄疸肝细胞性黄疸 阻塞性黄疸阻塞性黄疸血胆红素血胆红素 总量总量1mg/dl1mg/dl1mg/dl1mg/dl直接直接00.2mg/dl间接间接1mg/dlDB/TB60%尿三胆尿三胆尿胆红素尿胆红素尿胆素原尿胆素原少量少量不一定不一定尿胆素尿胆素少量少量不一定不一定粪便粪便颜色颜色黄褐色黄褐色加深加深变浅或正常变浅或正常 变浅或陶土色变浅或陶土色新生儿生理性黄疸新生儿生理性黄疸l新生儿血液内原来过多的红细胞被破坏，新生儿血液内原来过多的红细胞被破坏，未

9、结合胆红素生成过多未结合胆红素生成过多。l婴儿出生婴儿出生7周后，体内周后，体内Y蛋白才会达成人水平，蛋白才会达成人水平，肝细胞内载体蛋白肝细胞内载体蛋白Y Y蛋白少，肝细胞摄取未结合胆红素的能力不足。蛋白少，肝细胞摄取未结合胆红素的能力不足。l肝细胞内胆红素葡萄糖醛酸基转移酶生成不足，肝细胞内胆红素葡萄糖醛酸基转移酶生成不足，结合胆红素结合胆红素生成少。生成少。l肝细胞胆汁分泌器发育不完善，对肝胆汁分泌的潜力不大。肝细胞胆汁分泌器发育不完善，对肝胆汁分泌的潜力不大。l母乳中含有孕二醇，对葡萄糖醛酸基转移酶有抑制作用。母乳中含有孕二醇，对葡萄糖醛酸基转移酶有抑制作用。过多的游离胆红素可与脑部基

10、底核的脂类结合，并干扰脑的正常功能，称胆红素脑病或核黄疸。如：新生儿黄疸/高胆红素血症反相反相HPLC(A436 nm)分离法分离法时间时间(min):Bu 未结合胆红素:mBc 单葡萄糖醛酸结合胆红素:Bd 与白蛋白共价结合的胆红素Kuenzle CC,et al.:四种血清胆红素及三种胆汁胆红素的分离和定量检测。J Lab Clin Med 1966;67:282Lauff JJ,et al.:血清和胆汁胆红素反相HPLC分离法。J Chromatogr 1981;226:391:dBc 双葡萄糖醛酸结合胆红素胆红素的四种成分胆红素的四种成分在血液循环中结合胆红素和白蛋白结合胆红素和白蛋白

11、形成的。白蛋白缓慢地非酶作用置换了原葡萄糖醛酸酯。类似于糖化血红蛋白。在长期的高结合胆红素血症患者的血液内，才能被检测出来。在血液循环中的清除缓慢。半衰期2-3周。因为胆红素不存在氢键的影响，所以胆红素可以与重氮直接胆红素反应。B不能通过肾小球故不从尿排出。B只存在于人血清而不存在于胆汁，说明它不从胆汁排出，即它的代谢调节不依赖肝胆的排泄功能胆红素胆红素MeMeR RCOOCOOR2R2CH2CH2CH2CH2MeMeMeMeMeMeR RN NHHCHCHOON NHHCHCHN NHHN NHHOOCH2CH2COOCOOR1R1CH2CH2CH2CH2mBc =R1R1=glucuron

12、ic acid and R2R2=H(monoglucuronide)dBc =R1R1 and R2R2=glucuronic acid(diclucuronide)结合胆红素的结构结合胆红素的结构MeMeR RCOOHCOOHCH2CH2CH2CH2MeMeMeMeMeMeR RN NHHCHCHOON NHHCHCHN NHHN NHHOOCH2CH2COOHCOOHCH2CH2CH2CH2CHCHMe=Me=CH3CH3R R =CH2CH2非结合胆红素的结构非结合胆红素的结构MeMeR RCOOCOOCH2CH2CH2CH2MeMeMeMeMeMeR RN NHHCHCHOON NH

13、HCHCHN NHHN NHHOOCH2CH2COOCOOCH2CH2CH2CH2胆红素胆红素:R1 或或 R2=白蛋白白蛋白 共价键结合白蛋白共价键结合白蛋白白蛋白白蛋白胆红素结构胆红素结构主要内容主要内容 胆红素的代谢胆红素的代谢胆红素的分类和临床应用胆红素的分类和临床应用胆红素的检测方法胆红素的检测方法罗氏胆红素试剂盒特点罗氏胆红素试剂盒特点胆红素检测胆红素检测的标准化的标准化胆红素检测的常用方法分类胆红素检测的常用方法分类1.重氮盐法重氮盐法diazo reaction原理：橙黄色橙黄色的的胆红素与重氮盐反应生成有色的偶氮胆红素（偶氮胆红素在酸性PH值为红色，碱性PH值为蓝色）一般在酸

14、性环境下，主波长546nm，次波长800nm2.氧化法氧化法-oxidative methods原理：橙黄色橙黄色的的胆红素被氧化成绿色绿色的胆绿素450nm主波长，546nm次波长3.直接分光光度法直接分光光度法（Direct Spectrophotometry）原理：直接检测胆红素的颜色，波长460nm （血清指数）4.高压液相色谱高压液相色谱（HPLC）5.经皮直接测量经皮直接测量（transcutaneous methods）胆红素常用生化检测方胆红素常用生化检测方 法法(1)重氮盐法重氮盐法diazoreaction2，5-二氯苯重氮四氟硼酸盐法（DPD法）改良Malloy-Evel

15、yn法Jendrassik-GrOf法改良JG法改良间氨基苯磺酸法强生干片法(1)氧化法氧化法oxidative（enzymatic&chemical methods）胆红素氧化酶法（BOD)化学氧化法oxidative,chemicalmethods钒酸盐氧化法VanadateMethods硝酸氧化法过硫酸盐氧化法综合氧化剂法复合有机氧化法重氮法检测胆红素重氮法检测胆红素重氮反应（重氮反应（Ehrlich 1883Ehrlich 1883）19161916年年van den Bergh and Mullervan den Bergh and Muller根据胆红素是否根据胆红素是否直接与重氮

16、试剂直接与重氮试剂反应，反应，将其分为将其分为直接胆红素直接胆红素和和间接胆红素间接胆红素，并且应用于临床。，并且应用于临床。JendrassikandGrof法（1938年）结合胆红素反应快速。结合胆红素反应快速。游离胆红素几乎不参与反应（分子折叠，不溶性）。游离胆红素几乎不参与反应（分子折叠，不溶性）。当某些物质（强酸酸，乙醇，咖啡因和苯甲酸钠等当某些物质（强酸酸，乙醇，咖啡因和苯甲酸钠等 ）的存在时，）的存在时，才会打才会打开游离胆红素间的氢键开游离胆红素间的氢键，使溶解在水，并和重氮试剂反应。，使溶解在水，并和重氮试剂反应。由由Doumas领导的领导的AACC小组对小组对J-G方法改良方法改良(1983)。目前确定该方法为总目前确定该方法为总胆红素的推荐法。胆红素的推荐法。总胆红素总胆红素=具有加速剂的重氮反应具有加速剂的重氮反应直接胆红素直接胆红素=不加加速剂的重氮反应不加加速剂的重氮反应间接胆红素间接胆红素=总胆红素总胆红素-直接胆红素。直接胆红素。按照反应条件区分为直接和间接胆红素。按照反应条件区分为直接和间接胆红素。重氮重氮法检测总法检测总胆红素胆红素在使用在使用加速剂