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1、真菌学检验真菌学检验1病原真菌学概论4 真菌门真菌门 接合菌亚门接合菌亚门 毛霉、根霉毛霉、根霉 子囊菌亚门子囊菌亚门 酵母酵母 担子菌亚门担子菌亚门 鹅膏菌鹅膏菌 半知菌亚门半知菌亚门 表皮癣菌、隐球菌表皮癣菌、隐球菌一、真菌的分类一、真菌的分类5二、真菌与人类的关系二、真菌与人类的关系在自然界中分布广泛，约二十余万种，对在自然界中分布广泛，约二十余万种，对人致病的约人致病的约150种。种。6对人致病性的真菌分为：对人致病性的真菌分为：病原性真菌病原性真菌条件致病性真菌条件致病性真菌产毒真菌产毒真菌致癌真菌致癌真菌7 真菌是医院感染常见微生物真菌是医院感染常见微生物真菌是医院感染常见微生物真

2、菌是医院感染常见微生物v院内感染的院内感染的7.5%-15%7.5%-15%v血液感染的血液感染的第四位第四位v肿瘤病人发病率肿瘤病人发病率为为8%8%v严重创伤、烧伤病人严重创伤、烧伤病人高达高达16%16%v病死率病死率达达55%-70%55%-70%条件致病菌感染条件致病菌感染呈上升趋势，为继发性感染呈上升趋势，为继发性感染（呼吸道、皮肤、消化道粘膜损伤）（呼吸道、皮肤、消化道粘膜损伤）8真菌（真菌（fungus）属真菌界属真菌界,真核细胞型微生物。真核细胞型微生物。v典型的细胞结构典型的细胞结构v无根、茎、叶，不含叶绿素。无根、茎、叶，不含叶绿素。v腐生或寄生方式摄取营养。腐生或寄生方

3、式摄取营养。v细胞壁含几丁质（细胞壁含几丁质（chitin）、）、纤维素。纤维素。v有性和（或）无性繁殖。有性和（或）无性繁殖。三、真菌的基本特性三、真菌的基本特性9u真菌的形态特性真菌的形态特性 真菌真菌单细胞：酵母型（单细胞：酵母型（yeast）、类酵母型（）、类酵母型（yeast-like）圆、卵圆，出芽方式繁殖圆、卵圆，出芽方式繁殖 新生隐球菌，白假丝酵母菌新生隐球菌，白假丝酵母菌多细胞：霉菌型多细胞：霉菌型(mold)菌丝菌丝(hypha)、孢子、孢子(spore),交织成团，称丝状菌交织成团，称丝状菌 癣菌、霉菌癣菌、霉菌10l出芽生长出芽生长11单细胞真菌呈圆形，以出芽方式繁殖，

4、芽生孢子成熟后脱落成独立个体二相性二相性真菌真菌（dimorphic fungus）：某些真菌，可因环境条件改变，由一种形态转变成另某些真菌，可因环境条件改变，由一种形态转变成另一种形态，在体内或含动物蛋白的培养基上一种形态，在体内或含动物蛋白的培养基上3737培养培养时呈时呈酵母型酵母型，在普通培养基上，在普通培养基上25-2825-28培养时呈培养时呈霉菌霉菌型型，如球孢子菌、组织胞浆菌及芽生菌。如球孢子菌、组织胞浆菌及芽生菌。12菌菌丝丝按按有无有无横隔横隔有隔菌丝有隔菌丝按生物按生物学功能学功能菌菌丝丝体体营养菌丝体营养菌丝体气中菌丝体气中菌丝体无隔菌丝无隔菌丝生殖菌丝体生殖菌丝体孢孢

5、子子有性有性孢子孢子由同一菌体或不同菌体上的二个细胞融由同一菌体或不同菌体上的二个细胞融合形成合形成多为非致病性真菌多为非致病性真菌无无性性孢孢子子叶状孢子叶状孢子芽生孢子芽生孢子隐球菌、念珠菌隐球菌、念珠菌厚膜孢子厚膜孢子新生隐球菌新生隐球菌关节孢子关节孢子分生孢子分生孢子大分生孢子大分生孢子小孢子菌属，表皮癣菌属小孢子菌属，表皮癣菌属小分生孢子小分生孢子毛癣菌属毛癣菌属孢子囊孢子孢子囊孢子菌丝末端形成膨大的菌丝末端形成膨大的囊状结构，孢子囊，囊状结构，孢子囊，内含众多孢子内含众多孢子根霉菌根霉菌13菌丝按结构可分为：有隔菌丝与无隔菌丝菌丝按结构可分为：有隔菌丝与无隔菌丝（1 1）有隔菌丝）

6、有隔菌丝：大部分真菌的大部分真菌的菌丝在一定间距见菌丝在一定间距见有横隔，称有横隔，称隔膜隔膜。将菌丝分成一连串将菌丝分成一连串的细胞。的细胞。菌丝中无横隔菌丝中无横隔将其分段，整条菌将其分段，整条菌丝就是一个细胞。丝就是一个细胞。在一个细胞内含有在一个细胞内含有许多核，是一种多许多核，是一种多核单细胞。核单细胞。（2）无隔菌丝：）无隔菌丝：16孢子孢子(spore)(spore)：孢子是真菌的孢子是真菌的繁殖器官，一条菌繁殖器官，一条菌丝上可长出多个孢丝上可长出多个孢子。在环境条件适子。在环境条件适宜时，孢子又可发宜时，孢子又可发芽生出芽管，发育芽生出芽管，发育成菌丝体。成菌丝体。孢子分有性

7、孢子和无性孢子两大类：孢子分有性孢子和无性孢子两大类：有性孢子有性孢子由同一菌体或不同菌体由同一菌体或不同菌体上的两个细胞融合而成。上的两个细胞融合而成。无性孢子无性孢子由菌丝上的细胞分化生由菌丝上的细胞分化生成，并不发生细胞融合，包括：分生孢子、成，并不发生细胞融合，包括：分生孢子、叶状孢子和孢子囊孢子。叶状孢子和孢子囊孢子。19 （1）分生孢子分生孢子（condiumcondium）由生殖菌丝末端细胞分裂或收缩形成，也可在菌由生殖菌丝末端细胞分裂或收缩形成，也可在菌丝侧面出芽形成，有两种：丝侧面出芽形成，有两种：大分生孢子（大分生孢子（macrocondiummacrocondium）：）

8、：多细胞组成，梭状、棍棒状；多细胞组成，梭状、棍棒状；小分生孢子小分生孢子（microcondiummicrocondium）：）：单细胞组成。单细胞组成。（2 2）叶状孢子）叶状孢子（thallosporethallospore）：）：芽生孢子芽生孢子出芽形成；出芽形成；厚膜孢子厚膜孢子胞浆浓缩，胞壁胞浆浓缩，胞壁增厚而成；增厚而成；关节孢子关节孢子菌丝胞壁增厚，菌丝胞壁增厚，形成链状排列的长方形节段。形成链状排列的长方形节段。芽生孢子芽生孢子关节孢子关节孢子厚膜孢子厚膜孢子（3 3）孢子囊孢子）孢子囊孢子（sporangiosporesporangiospore）：）：菌丝末端膨大成囊状，

9、内含许多孢子。菌丝末端膨大成囊状，内含许多孢子。23u真菌菌落特性真菌菌落特性v酵母型菌落酵母型菌落：单细胞真菌的菌落，较大，光滑、湿润、柔软、边缘整齐。v霉菌型菌落霉菌型菌落：多细胞真菌的菌落，棉絮状，绒毛状，粉末状、产生色素。如皮肤癣菌。2425真菌感染的实验诊断261.临床标本的采集临床标本的类别v皮肤的角质性物质；皮肤的角质性物质；v各种分泌物和排泄物；各种分泌物和排泄物；v血液和体液；血液和体液；v脓汁及渗出物。脓汁及渗出物。27采集标本注意事项1、采集的标本要适宜：、采集的标本要适宜：不同真菌感染应采取不不同真菌感染应采取不同的临床标本。同的临床标本。2、用药前采集标本：、用药前采

10、集标本：3、采集的标本量要足：血液和脑脊液、采集的标本量要足：血液和脑脊液5ml，胸腔液，胸腔液20ml4、严格无菌操作：、严格无菌操作：5、采集的标本立即送检：、采集的标本立即送检：28二、真菌学检验二、真菌学检验v直接镜检直接镜检：形态学检查是重要依据v抗原的检测：抗原的检测：v分离培养与鉴定分离培养与鉴定：v核酸检测核酸检测：v毒素检测：毒素检测：29 真菌标本直接检查1.1.直接镜检直接镜检：方法简便，快速方法简便，快速10%KOH微加热微加热低倍低倍/高倍镜检查高倍镜检查有无菌丝有无菌丝/孢子孢子角质标本角质标本（皮肤癣菌）（皮肤癣菌）直接观察直接观察/染色后观察染色后观察30标本直

11、接检查标本直接检查显显微微镜镜检检查查不不染染色色KOH1020%致密难以透明致密难以透明毛发、指（趾）毛发、指（趾）甲、鳞屑甲、鳞屑生理盐水生理盐水观察出芽现象观察出芽现象染染色色检检查查革兰染色革兰染色G+酵母菌、白色念酵母菌、白色念珠菌珠菌乳酸酚棉蓝乳酸酚棉蓝菌丝、孢子菌丝、孢子皮肤癣菌皮肤癣菌墨汁染色墨汁染色用于有荚膜的真菌用于有荚膜的真菌新型隐球菌新型隐球菌瑞氏染色瑞氏染色骨髓、外周血骨髓、外周血荚膜组织胞浆菌荚膜组织胞浆菌荧光染色荧光染色吖啶橙和吖啶橙和KOH染色染色培养涂片、组织培养涂片、组织切片切片313233直接镜检评价阳性结果意义阳性结果意义1.有诊断意义；有诊断意义；2.

12、代表组织相、确定某些致病性真菌属或种；代表组织相、确定某些致病性真菌属或种；3.判断某些真菌种的致病性等判断某些真菌种的致病性等 34直接镜检局限性 1.阴性结果不能排除真菌感染阴性结果不能排除真菌感染;2.有有假阳性假阳性结果。结果。35采用免疫学方法检测真菌抗原，常用的方法有胶采用免疫学方法检测真菌抗原，常用的方法有胶乳凝集试验、乳凝集试验、ELISAELISA、半定量放射免疫测定法、半定量放射免疫测定法。2.2.抗原检测抗原检测:363.分 离 培 养v真菌培养是目前鉴定真菌的唯一方法真菌培养是目前鉴定真菌的唯一方法;v培养成功与否与采集的培养成功与否与采集的标本是否适当标本是否适当、是

13、否新鲜是否新鲜、培养基的选择培养基的选择、培养温度与时间培养温度与时间等有关等有关;v二相性真菌二相性真菌培养培养37常用培养基及用途常用培养基及用途培养基名称培养基名称用途用途沙氏培养基沙氏培养基（Sabourand）用于深浅部真菌的常规培养用于深浅部真菌的常规培养玉米粉聚山梨酯玉米粉聚山梨酯80琼脂琼脂观察白色念珠菌的厚膜孢子观察白色念珠菌的厚膜孢子马铃薯葡萄糖琼脂马铃薯葡萄糖琼脂脑心浸膏琼脂（脑心浸膏琼脂（BHI）沙比（沙比（Sabhi）观察真菌菌落的色素、鉴别深部观察真菌菌落的色素、鉴别深部真菌，使二相型真菌呈酵母型真菌，使二相型真菌呈酵母型尿素琼脂尿素琼脂刺激真菌孢子形成刺激真菌孢子

14、形成血琼脂血琼脂多数病原性真菌多数病原性真菌皮肤真菌实验培养基皮肤真菌实验培养基（DTM）分离皮肤真菌分离皮肤真菌38v平皿培养平皿培养：只能培养生长繁殖较快的真菌只能培养生长繁殖较快的真菌;v大试管培养大试管培养:用于皮肤癣菌的培养和真菌菌种的保存用于皮肤癣菌的培养和真菌菌种的保存;v玻片培养玻片培养(微量、小培养微量、小培养):可用于真菌菌种的鉴定。可用于真菌菌种的鉴定。39观察菌落形态应注意：观察菌落形态应注意：1、菌落的性质：酵母菌还是霉菌；酵母菌还是霉菌；2、菌落的大小：病原性真菌菌落小，条件致病病原性真菌菌落小，条件致病 性真菌则大；性真菌则大；3、菌落颜色：病原性真菌色淡，污染性

15、真菌色深；病原性真菌色淡，污染性真菌色深；4、致病性真菌菌落下沉，有时使培养基开裂，污染性真菌菌落不下沉，很少引起培养基开裂。40真真 菌菌 鉴鉴 定定v全面生化反应、分子生物学鉴定，必要时将菌种送有全面生化反应、分子生物学鉴定，必要时将菌种送有关单位鉴定。关单位鉴定。v检验真菌常用的生化反应有检验真菌常用的生化反应有糖糖(醇醇)类发酵试验类发酵试验、同化碳同化碳源试验、同化氮源试验源试验、同化氮源试验或利用硝酸钾试验、牛乳分解或利用硝酸钾试验、牛乳分解试验、酚氧化酶试验、明胶液化试验和脲酶试验等。试验、酚氧化酶试验、明胶液化试验和脲酶试验等。v试验方法同细菌试验，主要用于检验深部感染真菌如试

16、验方法同细菌试验，主要用于检验深部感染真菌如假丝酵母菌、隐球菌等。假丝酵母菌、隐球菌等。41 分类分类根据侵犯的部位不同分为：根据侵犯的部位不同分为：浅部感染真菌浅部感染真菌 深部感染真菌深部感染真菌42浅部感染真菌43定义：定义：侵犯皮肤、毛发、指甲等角化组织。侵犯皮肤、毛发、指甲等角化组织。分类：分类：皮肤癣真菌皮肤癣真菌(临床最多见）临床最多见）表皮感染真菌表皮感染真菌 皮下组织感染真菌皮下组织感染真菌44 侵犯皮肤、毛发、指甲等角蛋白组织引起侵犯皮肤、毛发、指甲等角蛋白组织引起癣症癣症（发癣、体癣、甲癣等），（发癣、体癣、甲癣等），分三属，约分三属，约4545种种皮肤癣真菌45皮肤癣菌的特征皮肤癣菌的特征皮肤癣菌的特征皮肤癣菌的特征 属名属名属名属名种种种种数数数数 侵犯部位侵犯部位侵犯部位侵犯部位形态特征形态特征形态特征形态特征皮皮皮皮肤肤肤肤指指指指甲甲甲甲毛毛毛毛发发发发大分生孢子大分生孢子大分生孢子大分生孢子 小分生孢子小分生孢子小分生孢子小分生孢子菌菌菌菌 丝丝丝丝毛癣毛癣毛癣毛癣菌属菌属菌属菌属 21212121+细长、棒形、细长、棒形、细长、棒形、细长、棒形、壁薄