安捷伦液相常见问题.docx

1、安捷伦液相常见问题HPLC故障排除症状类型可能的原因解决方案基线噪声大随机性-污染物积聚冲洗柱;净化样品;使用HPLC级溶剂连续性-检测器灯故障更换紫外灯(寿命为1000小时)偶然性-外部电气干扰使用LC系统专用稳压器样品量过大进样量应为流动相进样量的1/6双峰样品量过大进样量应为流动相进样量的1/6进样溶剂过强使用较弱的进样溶剂或流动相滤芯堵塞更换并使用m孔隙率的在线过滤器柱有空隙或气沟用玻璃珠或填料填充空隙;重填柱进样器流路不通畅更换进样器转子柱头有空隙使用填料或玻璃珠填充柱顶部柱上样品超载使用更高负载量的固定相;增加色谱柱内径;减少样品量单峰-存在干扰性组分净化样品;预分离拖尾峰开始出双

2、峰请参见双峰存在未扫的死体积减少接头的数量;确保进样器密封垫紧密;确保接头正确固定碱性化合物-硅醇相互作用换成聚合物固定相碱性物质-硅醇相互作用使用更强的流动相或添加竞争碱(例如,三甲胺)硅胶基-柱降解使用特种色谱柱;聚合物柱或空间位阻峰展宽进样量过大降低进样溶剂的强度以集中溶质进样阀中的峰扩散在进样前/后引入气泡以减少扩散数据系统的采样速率过低增大采样检测器时间常数低调节时间常数使之与峰宽匹配流动相粘度过高提高柱温检测器流通池容积过大使用尽可能小的池容积(系统中无热交换器)注射器体积过大减少进样量保留时间长使用梯度洗脱或较强的流动相压力波动单向阀泄漏更换单向阀泵密封垫泄漏更换泵密封垫微粒积聚

3、过滤样品；在线过滤器;过滤流动相压力渐增微粒积聚过滤样品；在线过滤器;过滤流动相水/有机系统-缓冲液沉淀测试缓冲液-有机混合物;确保兼容性保留时间超出总渗透体积体积排阻-特异性相互作用添加流动相改性剂或更改溶剂保留时间不断变动柱温不断变化使柱恒温;绝缘;保证实验室温度恒定平衡时间不足以适应梯度洗脱要求,或梯度洗脱流动相起变化确信在溶剂改变或梯度结束后至少10个柱容积通过色谱柱流动相组分选择性蒸发减少氦气的剧烈脱气;保持溶剂贮器盖好;制备新的流动相缓冲能力不足用20mM浓度的缓冲液在线流动相混合不一致保证梯度系统输送恒定组成;与手动制备流动相核对污染积聚冲洗色谱柱以去除污染物最初几次进样-吸附在

4、活性部位用浓样品进样冲洗柱,使其处于正常状态保留时间逐渐缩短流速在增加检查泵以确保正确;否则需重调柱上进样超载减少样品键合固定相的流失保持流动相pH值在间保留时间逐渐增加流速在减慢解决液流中的漏液现象,更换泵密封垫,检查泵的涡流和气泡硅胶填料的活化点使用流动相改性剂键合固定相的流失保持流动相pH值在间流动相组成在变化确保流动相容器盖好硅胶填料的活化点流动相中加竞争碱硅胶填料的活化点固定相用更高覆盖度的填充料灵敏度问题峰位于检测器线性范围之外稀释或浓缩使之处于线性区内最初几次进样-样品在样品池或柱中被吸附;自动进样器;流路阻塞用浓样品处理样品池/柱自动进样器流路阻塞检查流量情况,确保无阻塞现象进

5、样器样品定量管未充满确保样品池中已充满样品在样品制品时有关的样品流失用内标法在制备样品,优化样品制备方法柱平衡时间减慢（离子对现象）长链离子对试剂平衡时间慢使用较短的烷链试剂1.常见色谱故障压力波动可能原因：溶剂进口过滤芯堵塞；溶剂未脱气；泵的密封垫老化；出口单向阀失效；主动阀失效。最常见原因：泵内有气泡2. 常见色谱故障压力过低可能原因：溶剂进口过滤芯堵塞；连接管路泄漏或其它备件（泵头密封垫）；溶剂或流速改变；主动阀失灵；四元比例阀失灵；单向出口阀失灵；色谱柱失效（固定相流失）。3. 常见色谱故障压力过高可能原因：柱子进口过滤芯被污染；PURGE（排气）阀过滤芯被污染；色谱柱被污染；连接管路

6、，尤其是针座毛细管堵塞；进样器旋转密封阀被堵塞；进样针或针座被阻塞4. 常见色谱故障基线噪音 是检测器基线噪音停泵噪音是否依然存在- 否泵或流动相其它要考虑的问题：是否改变了流动相的组成是否改变了检测波长在你的仪器上使用的最后的流动相是什么流动相是否相溶流动相是否干净 如何排除流动相中的气泡如何排出流动池中的气泡避免流动相中产生气泡的最佳方式是将流动相经脱气装置进行脱气。如果没有脱气装置，则可以在流动相溶剂瓶中通入氦气进行脱气。也可以在检测器的出口端加一根细管线以调节流动池中的背压，但必须注意不要超过流动池的最大压力，否则会造成流动池漏液或流动池损坏。如果流动池中出现气泡，则先摘下色谱柱，用一

7、根管线直接将流动相接入检测器的入口。将异丙醇以较大的流速注入流动池。直到基线上看不到毛刺为止。气泡就应该清除掉了。如何减少基线噪音无规律噪音可能与污染有关。请冲洗色谱柱，对样品做合适的前处理以避免污染，并使用 HPLC 级别的溶剂。连续噪音有可能由检测器或泵造成。要确定问题是否发生在检测器还是在泵，请先关泵停掉流量，监测基线。如果此时基线平稳，则噪音可能与泵有关系。使用 ChemStation 在线诊断或 LC 手持控制器检查泵方面的故障。如果停泵后噪音继续存在，则说明噪音与检测器有关。首先，请尝试更换灯。如果问题依然存在，则请与安捷伦科技公司联系。在中国，请拨打 800 820 3278。什

8、么原因导致基线毛刺这很有可能是流动池内有气泡。请先停泵来进行确认，如果毛剌消失，则很有可能是由于流动池内有气泡。需要冲洗流动池。如果毛剌仍然存在，则需检查检测器本身的电噪音有关。如果需要更多帮助，则请致电安捷伦科技公司。在中国，请拨打 800 820 3278。色谱图上出现鬼峰。如何消除可能的原因：上次进样遗留组分产生；有污染；有气泡；色谱柱问题；保护柱失效。建议用户：做样品后应保证有足够时间冲洗色谱柱，有必要的话在运行结束后使用更强溶剂冲洗色谱柱；洗脱原色谱柱中得原有污染；为确保系统中没有气泡，只使用彻底脱气后的溶剂；更换色谱柱；更换保护柱；检查流动相纯度；检查样品中的其它成分。如何决定何时

9、更换保护柱许多色谱人员在测试一定数量的样品和标准样后更换保护柱。样品数量通常由实验决定，在长时间未更换保护柱而造成分析柱破损时或样品分析数量增加，而保护柱需要更换。保护柱的更换频率通常根据经验而定，按照每个方法/样品类型综合考虑，但是许多分析人员会在完成一定数量的样品分析或测试一些柱的性能指标（例如增加10%峰展宽或拖尾因子，或降低10%的柱效（塔板数）后更换保护柱。如何开发一个反相 HPLC 的方法有什么经验或建议吗开发一个RPLC方法有很多不同的途径。目前，很多HPLC专家的一般经验建议，方法开发可从一个低 pH值(pH 开始，使用C8或C18色谱柱。他们还建议使用共轭酸-共轭碱作缓冲溶液

10、，如浓度为20-50mM的NaH2PO4/H3PO4。其他可用于控制pH值的添加剂包括但不限于： v/v三氟乙酸(TFA)、甲酸、%乙酸和用磷酸调节pH值的水（pH最高为以确保pH控制正常）。有关更多信息，请参考小分子方法开发指南。由于方法的重要性、范围和/或使用的不断增加，请务必记住始终同时进行方法开发和方法确认。方法确认可以在方法开发的开始阶段就进行简单的选择性、进样和分析重复性测试。什么原因导致液相色谱仪压力过高可能的原因：吹扫阀的PTFE滤芯堵塞；压力上限设置太低；压力传感器堵塞建议的措施：打开排气阀。如果压力依然很高，则更换排气阀的PTFE滤芯；查看软件的压力上限设置并确保设置值适于

11、分析；检查系统内的堵塞部位（如下所述）：要检查是否堵塞，请采用隔离系统的方法来排除故障：将安装的色谱柱、预色谱柱和预色谱柱过滤器摘开。1.如果压力恢复到正常值，则在色谱柱的位置安装ZDV接头。 如果压力正常，则色谱柱、预色谱柱或过滤器是产生问题的原因。请进行更换。 如果压力依然很高，则在色谱柱的另一端查找堵塞位置（例如：通入检测器或从其通出的管路）。2.如果取出色谱柱后压力依然很高，则检查从排气阀到自动进样器的管路。如果压力正常，则使用进样步骤命令将自动进样器的取样阀切换到路模式。 如果压力正常，则说明自动进样器堵塞。请检查针、针座、针座毛细管和转子密封垫。 如果压力依然很高，则检查从进样六通

12、阀到色谱柱入口之间的管路。何时应更换泵密封圈泵密封圈应定期更换。建议每个液相色谱仪用户建立一个泵密封圈更换的定期检修计划。这应根据泵的使用和流动相组成情况而定。由于它们易磨损的特点，盐缓冲大大加速密封圈和活塞的磨损。在活塞下面的泵头上检测到泄漏时，保留时间不稳定时，或系统压力不稳定时，都应更换密封圈。请按照以下程序更换所维护的泵的密封圈。当LC检测器灯强度测试没有通过时我该如何办强度测试是内置的UV / Vis检测器诊断测试功能. 是用于测试光学单元在全波长范围内的性能。安捷伦化学工作站在多个波长范围测量检测器的光谱强度，针对每个范围的极限值报告Pass（通过）/ Fail（失败）状态。这一测

13、试的失败是由于：灯老化了；流通池中有吸光的溶剂/空气泡；流通池脏了/污染了；光学窗口/透镜等被污染了。要纠正这些问题，需要在流通池充满水/并用足够的时间让检测器稳定。检查开灯的运行时间，并当其寿命到期时更换之。用甲醇/无棉布清洗光学窗口。1200VWD和1200VWD S有什么区别1200 VWD SL能够实现超快速LC分析，因为其数据采集速率为27Hz到55Hz。而1100 VWD的数据采集速率为14HZ。标准HPLC柱和RRLC柱有何区别一般来说，RRLC (快速分离液相色谱)柱有较小的填料粒度- 微米，而传统的柱为2到10微米。由于填料粒度小，故比普通柱的操作压力(400 Bar)高(6

14、00 Bar )。我刚刚更换了1100模块的主板，得到出错信息Synchronization Lost或者它不能与其他模块通讯. 问题是什么如果一个固件版本为或更高的主板安装在已有的模块上，所有模块都必须升级为固件版本或更高，固件版本不允许采用混合版本。注意：如果使用非安捷伦软件，请咨询软件生产商有关固件兼容性的问题。我什么时候应当更换自动进样器阀的转子密封件最经常的进样阀维护之一就是更换转子密封件。需要更换的标志包括：转子密封垫堵塞；转子密封垫中接头点之间泄漏通过观察注射针从样品瓶抽取样品后抬起时，针头有流动相液滴渗出，就可判断接头点之间有泄漏。注意：接头点之间泄漏也可通过压力测试来判断。当

15、您发现进样体积精度变差时，您可能首先要考虑接头点之间有泄漏。1200LC RIFD有什么特点1200系列VWD SL，MWD SL，DAD SL检测器的灯和流通池有辐射频率识别（RFID）标签。RFID标签记录一次运行的必要仪器条件数据。这些数据储存在原始数据文件中。我的安捷伦1100HPLC能使用新的快速分离HTm)HPLC柱吗 若能, 我需要做什么来为快速分析改进仪器安捷伦1100采用新的ZORBAX快速分离（RRHT）柱既是可能的也是实用的。然而，要完全实现RRHT色谱柱的优点，最重要的是要对标准1100HPLC作几处小的改进。对于等度或梯度分离，检测器响应时间必须从默认值(2秒)减少到

16、较小的值秒)。这很容易在化学工作站的检测器设置屏幕实现。此外，柱外体积和其他流路的效应必须最小化，比如连接管的长度和内径，检测器流通池体积和进样量。从进样口到色谱柱和从色谱柱到检测器的管线必须从“绿色”管线 .)改用“红色”管线 mm .)。应该采用5-uL DAD流通池(部件号G1315-60011)替换安捷伦1100DAD标准配置的13-uL流通池。进样体积应当与色谱柱长度的减小成比例地减小。对于梯度分离，需要有几个额外的改进以优化性能和最小化循环时间。为了实现快速梯度并最小化重新平衡时间，系统的死体积应当最小化。所以，推荐使用二元泵而不是四元泵，要么不用混合器，要么采用体积较小的混合器替

17、代，如LC/MS混合器 (部件号5022-2165)。应当使用孔板自动进样器（也可采用样品瓶板）达到最短的循环时间(短至15秒)，以实现RRHT色谱柱的最高通量应用。在我的二极管阵列检测器上，为什么在更换了新灯和流通池以后仍然有基线噪声和漂移该问题应该与流速有关。拆下流通池检查基线。如果问题消除了，说明流通池被污染了(更换/清洗检测窗口)，或者泵/进样器有问题。或者该问题在光学系统或光学系统的部件。或者更换整个光源透镜组件（部件号G1315-65201）(或者组件的单个部件，如光谱窗口，部件号79880-28111以及单色器透镜，部件号1000-0486)，或者更换检测池支持窗口G1315-6

18、5202。如果问题仍然存在，请联系您最近的安捷伦技术代表。我什么时候需要更换溶剂输送模块（泵）的冲洗阀中的过滤芯确定冲洗阀滤芯是否需要更换的常见方法是打开冲洗阀，设定甲醇流速为1 ml/min。如果压力大于7 BAR，就应该更换滤芯。在进样过程中HPLC的自动进样器为什么有压力的突变自动进样器进样阀中的转子密封垫可能部分堵塞了。请清洗转子密封垫或者更换之。从我的HPLC系统卸下色谱柱并用1ml/min 的溶剂冲洗系统后, 为什么我发现泵冲洗阀关闭时压力高，而打开时冲洗阀时压力很小当关闭泵冲洗阀时出现高压的原因有多个，某些可能的原因是：如果系统有自动进样器模块，针底座、注射针或样品定量环可能堵塞

19、了，需要清洗或更换。一般来说，针底座出现这种问题的可能性较大。 连接该模块的毛细管之一可能部分被堵塞，需要清洗或更换。 检测器流通池的入口和出口可能堵塞。一般来说，流通池的出口毛细管易出现这种问题。什么是1100/1200自动进样器马达温度错误传动部分的马达运行时所需电流过大，引起过热。处理器将马达关掉，以免损坏它。可能的原因: 机械故障；传动部分摩擦力过大；马达皮带张力过高；马达损坏；传动部分弯板损坏建议: 关掉自动进样器电源开关。等至少10秒钟之后再开开关；确认传动部分的运动不受阻碍；更换传动部分。怎样知道UV检测器的流动池被污染了用工作站诊断功能作池体测试，是比较流动池二极管的样品边与参

20、考边所测到的氘灯强度。强度比值的结果(样品:参考)是测试流动池吸收的光的量。测试可用来检验流动池窗口是脏了或者被污染了。用水通过流动池作测试。工作站自动计算强度比值。强度比取决于流动池窗口污染的程度。以及所用的流动池的类型。理想的比值是1，比值为7或更大也可以接受。比值较低，说明流动池窗口有一些涂层或者流动池里有气泡。更多的光被流动池吸收。用水冲洗流通池以去除污染物。这样可以来代替溶剂，用水来冲洗。这时样品溶解在水中。为什么我的灯点不着最大的可能是它已经超过使用期限了或者坏了。根据检测器类型作诊断测试。如果需要，更换灯。如果问题依然存在，请联系Agilent公司。什么时候需要更换泵密封件更换泵

21、密封件有一个规则。建议每一个液相使用者建立一个更换泵密封件的预先维护时间表。这要以泵的使用情况和流动相两项为准。由于它们的磨损本性，含盐的缓冲液会大大加速密封垫和柱塞的磨损。当泵头柱塞下面检查出漏液时，当保留时间不稳定时，或者当系统的压力不稳定时，就应更换密封垫。用什么溶剂冲洗LC管线，以去除污染已发现各含50%的IPA和水的混合溶液，能有效地除去HPLC系统的溶液管线里，毛细管里，以及流动池里的污染物。水能清除盐类和其他的污染物，IPA能清除极性和非极性的污染物。准备一瓶各含50%的IPA和水的混合溶剂，并对溶剂脱气。将所有的溶剂管线连到这个瓶子里(例如连四元泵的A,B,C和D溶剂管线，连二

22、元泵的A和B溶剂管线，连单元泵的溶剂管线)。可以关掉所有检测器的灯，如果不希望IPA和水的混合液通过柱子时，可以在柱子的位置安装一个两通接头替换它。更换柱塞密封垫之后推荐什么样的插入或磨合过程*注意这个过程适用于标准密封垫而非正向密封垫。这种过程会损坏正向密封垫。当新的密封垫安装之后，初始的磨合过程仍然是需要的。Pump ISOPROPANOL经受至少350 bar的背压15-30分钟。此时最好使用一根旧柱子或者一个流量阻尼器。为示差折光检测器选择正确的泵，要考虑哪些因素为了获得最好的性能，示差需要混合溶液，建议首选单元泵。用梯度泵混合溶剂会使基线不稳定。如果是二元泵，只用一个通道，将另一个通

23、道关闭。在四元泵的情况下，只接一个通道，并将比例阀旁路关掉。这需要一个附加的接头(part no. 0100-1847) 接到主动进口阀上，直接将溶剂管线连到进口阀上 (代替接到比例阀上)。样品打进去了但没有收集到数据。可能是什么问题化学工作站软件有一个在线的图谱窗口，显示从所连的检测器收到的信号。当样品打进去之后，一根红色的垂直起始线就会显示在在线图谱窗口中。红色线表明软件开始收集原始数据。如果这根红色线不出现，数据将不会被收集。检查所有连接到1100/1200系列LC的CAN电缆。如果安装了A/D转换器(35900 ADC)，在ADC与一个1100/1200组件之间要连一根遥控电缆。我使用

24、PSI的压力单位读数，如何与BAR转换 psi = 1 bar易弯折的不锈钢毛细管线外表面上的颜色标记是什么意思Agilent 易弯折的不锈钢毛细管线外表面上的颜色标记，指示管子的内径 (ID) 红色 指示内径为 mm 或者 英寸。绿色 指示内径为 mm.或者 英寸。蓝色 指示内径为 mm 或者 英寸。桔色 指示内径为 mm 或者 英寸。我的1100/1200LC组件显示一个错误Timeout Error。怎么出现这个错误的G1314A/B VWD时间溢出错误：由于在未准备好的情况下，VWD不能初始化一次运行，就出现这个错误。未准备好的状态可以从系统中任一组件产生。检查所有组件的准备状态。最普

25、通的原因是，柱温箱的温度设置，它保持有困难，或连到A/D转换器或非Agilent产品的遥控电缆松动 。一旦未准备好的情况被纠正，就可以简单的再次启动运行。如果不能纠正问题，建议联系Agilent公司技术支持。什么时候要使用连续密封垫清洗选件高浓度的缓蚀液会减少四元泵的密封垫及柱塞的寿命。密封垫清洗选项，用清洗溶液冲洗密封垫的另一侧，以维护密封垫的寿命。 如果缓蚀液的浓度为 M或更高，常时间地用于四元泵，则强力推荐使用密封垫清洗选项，作为二元泵的通用部件。连续密封垫清洗选项可用订货号01018-68722订货（它包括用于一个泵头的零件）。密封垫清洗选项，包括一个支持环，第二级密封垫，密封膜, 以

26、及每个柱塞一侧的密封垫固定件。清洗瓶装水/异丙醇(90/10vol%)溶液放在四元泵上边的溶剂瓶箱里，重力将使溶液流过泵头。可以将1100/1200单元泵升级为四元泵吗可以。G1352A是将一台1100/1200单元泵升级为四元泵所需要的产品号。这个套件包括比例阀，溶剂瓶，过滤头和管线。蒸发光散射检测法的好处是什么实质上可以检测到所有的化合物。检测基于所有分析物的通用属性，不需要存在发色基团和电活化基团等。检测器的响应直接与洗提过的化合物质量相关。可以获得无法识别化合物的精确定量分析数据。安捷伦1200系列ELSD和安捷伦RRLC是否兼容安捷伦1200系列ELSD完全兼容于高分离度液相色谱（R

27、RLC）（宽度为1秒或以上）的快速发展应用领域。在RRLC色谱柱中，使用填装亚二微米微粒的色谱柱。支持专利气体的聚焦，聚焦样品分子，改进的光学头设计让检测器准备好处理RRLC中生成的快速色谱图。柱室温度最高可设置为100C，以便优化分离度和最小化背压。我们是否需要利用额外的硬件把安捷伦1200系列ELSD连接至1200系列HPLC和数据系统不需要。安捷伦1200系列 ELSD可以直接连接至安捷伦1200系列HPLC，并且可以通过RS232电缆直接与安捷伦色谱数据进行通信。安捷伦1200系列ELSD涵盖哪些HPLC技术或模式安捷伦1200系列ELSD带有四个雾化器，因而可以使用从5 L/min

28、到5 mL/min的流速。因此，它适用于所有的HPLC模式，包括 RRLC（只需简单地更换雾化器）。安捷伦ELSD与UV或FLD检测器相比如何相比于其它检测类型，例如 UV 或者荧光（FLD），蒸发光散射（ELSD）检测器更加通用，它能够检测挥发性低于流动相的任何化合物。通过 UV 或者荧光检测，用户根本无法确定是否检测到样品中的所有化合物。蒸发光散射检测法解决了这种不确定性。推荐哪些适用于安捷伦1200系列ELSD的雾化气建议安捷伦1200系列ELSD将分析级氮气用作雾化。低温蒸发对于安捷伦1200系列ELSD有什么帮助安捷伦1200系列 ELSD中的低温技术把挥发作用降低到最低程度，并且能

29、够显著提高灵敏性。什么是蒸发光散射检测器或ELSD对于挥发性低于流动相的化合物，蒸发光散射检测器（ELSD）能够有效地执行敏感检测。 它提供了一种在等度和梯度条件下实质上通用的测量法，独立于化合物的吸收、荧光性或电活性。低温蒸发技术能够检测半挥发性性和低水平感热性化合物。如何从化学工作站控制1100系列自动取样器恒温器1100 温控自动取样器设定点LC化学工作站，版本1.拉下【View(视图)】菜单，并且选择【Method and Run Contro(方法和运行控制)】2. .拉下【Instrument(仪器)】菜单，然后选择【More Injector(更多注射器)】3.从【More In

30、jector(更多注射器)】菜单，选择【Sample Thermostat(样品恒温器)】4.出现【Sample Thermostat(样品恒温器)】对话框，让您指定注射器托盘中的样品温度。恒温器：Volumes（体积）组让您ON（打开）和OFF（关闭）温度控制器。温度：Temperature（温度）组让您设置温度，或者OFF（关闭）温度控制器。At Power On（接通电源时）：选择Turn Thermostat on（打开恒温器），当仪器接通电源时打开恒温器。Automatic Turn On（自动打开）：您可以设置用于自动打开灯的日期和时间。选择 Turn thermostat on

31、at（打开恒温器的日期和时间）：启用日期和时间字段，并且在适当的字段中输入指定格式的日期和时间。什么是1100/1200系列FLD灯强度测试能否介绍化学工作站的使用步骤灯强度测试通过参照二极管扫描强度光谱，波长范围为200到650 nm，共分三个步骤。扫描图保存在诊断缓冲器中，并且在图形窗口中显示出来。不执行进一步的评估。为了消除由于吸收溶剂而带来的影响，执行这种测试时，流通池中应装有水；可以通过化学工作站软件执行FLD灯强度测试。1.如果尚未显示出来，请下拉View(视图)菜单，然后选择Diagnosis(诊断)2.拉下Diagnosis(诊断)菜单，然后选择Tests(测试)3.选择Detector(检测器)选项卡和FLD Lamp Intensity Test(FLD灯强度测试)4.通过选择Start(开始)启动FLD灯强度测试