操作规程SOP.docx

1、操作规程SOP市中心医院输血科ABO血型鉴定（正定型法）SOP文件编号：A1执行日期：2006-01-01编辑版本：第二版ABO血型鉴定（正定型法）标准操作规程1.目的 规ABO鉴定实验，确保ABO血型鉴定结果的准确。2.适用围 发血室，血型血清学实验室。3.职责 具有初级以上职称（检验），在血型鉴定和交叉配血工作岗位的工作人员有权执行本规程。出现血型鉴定结果本人无法判定，不能发出实验结果时，应当向上一级职称的检验人员或直接向本部门负责人报告并寻求技术上指导和帮助。4.监督 交叉配血试验审核者及实验室负责人监督工作人员是否遵从此项规程。5.原理 根据IgM类特异性血型抗体与红细胞上特异性抗原结

2、合能够出现凝集反应的原理，用已知IgM类特异性标准抗血清与被检红细胞在盐水介质中反应，若出现凝集现象，表明被检红细胞膜上有与血型抗体相对应的抗原，从而判断和鉴定被检者的血型。6.材料 （1）抗A、抗B血型定型试剂（单克隆抗体） 规格：10ml/支 保存：于2-8避光保存，有效期使用效价：1128 包装：抗A抗B各一支/盒塑料瓶 有效期：自成品鉴定合格之日起1年。 批准文号：国药准字S1* 厂商：博德生物技术有限责任公司（2）受检者3%-5%红细胞盐水悬液。（3）经过校准的台式离心机。7.操作 5%被检红细胞生理盐水悬液制备；抗凝血离心或红细胞自然沉降后取下层红细胞2滴于小试管中，加入生理盐水2

3、ml用尖滴管将红细胞与生理盐水充分混匀，2500r/min离心3min后弃去上清液，重复洗涤3次后，自管底吸取1滴压迹红细胞加入19滴生理盐水中，此即为5%的红细胞生理盐水悬液。（1）平板法（玻片法）标记玻片或白瓷板 取洁净的玻片或白瓷板1块，用蜡笔划出小格，做好编号标记抗A、抗B。加标准抗血清 在玻片或白瓷板已标记的区域分别滴加抗A、抗B标准抗血清1滴。加被检红细胞悬液 在滴加抗A、抗B标准抗血清的小格中分别加被检者5%的红细胞生理盐水悬液各1滴，不断摇动玻片或白瓷板，使血清与红细胞充分混匀，室温放置15-30min。 观察结果 先轻轻摇动玻片，肉眼观察有无颗粒状凝集及凝集程度，再用低倍镜观

4、察，判定阴阳性及阳性程度。判断结果凝集结果判断标准：.凝集判断标准：红细胞呈均匀分布，无凝集颗粒，显微镜下红细胞分散存在，无凝集靠拢现象为阴性；红细胞出现凝集为阳性。凝集强弱程度判断标准：有助于A、B亚型，类B抗原的发现，在低倍镜下凝集程度强弱判断标准如下：一片或几片凝块，仅有少数游离单个红细胞（+）呈数个大颗粒状凝块，有数个游离单个红细胞（+）数个小凝集颗粒和一部分微细凝集颗粒游离红细胞约占1/2为（+）肉眼可见无数细纱状小凝集颗粒，周围有较多的游离红细胞，于镜下观察，每个凝集团中有5-8个以上的红细胞凝集为（+）可见数个红细胞凝集在一起，周围有很多的游离红细胞（）可见极少数红细胞凝集，而大

5、多数红细胞仍呈分散分布为混合凝集外观镜下未见红细胞凝集，红细胞均匀分布为（-）（2）试管法 标记试管 取小试管2支，分别标记抗A、抗B 加标准抗血清 分别加入抗A、抗B标准血清各1滴于相应标记的试管中 加入红细胞悬液 分别加入被检者5%红细胞生理盐水悬液1滴于各试管中，混匀，立即以1000r/min，离心1分钟。 观察结果 先观察上层液有无溶血现象，再斜持试管轻轻摇动或轻轻弹动，使管底的红细胞慢慢浮起，肉眼观察有无凝集，再用低倍镜观察凝集强弱程度，如有轻微凝集或不见凝集，必须将反应物倒于玻片上，再以低倍镜观察 判断结果 判断标准：.凝集判断标准：完全凝集管，上层液体清亮、无色，底部有红细胞凝块

6、，管底细胞呈花边状，轻弹试管凝块分布散开。完全不凝集管，上层液体清亮、无色，血细胞均匀地沉到管底，边缘整齐，用手指轻弹试管，红细胞像一缕烟似的立即上升，随即成均匀的悬液。.凝集强弱程度：判断标准与玻片法一致。8.结果发出 根据实验结果，填写实验记录、血型鉴定报告单，审核无误后，发出报告单。9.标本的采集与处理 对输血前检查血液标本的严格要求，是安全输血的关键性措施之一 送检标本的要求、检查及核对 （1）标本必须标记，确实无误的来自患者和献血者。并和血液申请单上的容核对确认。 （2）标本必须有正确的标签符合患者的体状态。 （3）防止血样的稀释和溶血的产生，溶血标本一般不能使用。 （4）血清或血浆

7、均可做检查，但是使用血浆标本时，应注意纤维蛋白原和补体的干扰。 （5）患者标本一般要求不超过2天的期限，反复输血的受血者应抽取新的标本。 （6）如果患者使用肝素治疗，则应用鱼精蛋白，使标本凝结。 （7）如果患者使用右旋糖酐、聚乙酰吡咯烷酮（PVP）等治疗应注意将红细胞洗涤。 （8）输血后所有的标本均应妥善保存于2-8中，至少一周。9.注意事项 （1）为了便于鉴别，抗A血型试剂染色呈蓝色，抗B血型试剂染色呈黄色。 （2）对含有较多自身冷凝集素的受检者，在鉴定血型时，往往被误定为AB血型，遇到此种情况，需用37生理盐水溶液洗涤受检者红细胞2-3次，以去除吸附在红细胞上的冷凝集素，然后再鉴定血型。

8、（3）在做配型实验时，如发现有不配合现象，则取受检者血清，用已知A血型或B血型红细胞进行反定型试验，以核实原鉴定的血型是否正确。 （4）用立即试管法不能测出亚型，需延长作用时间。 （5）试剂如出现混浊或变色则不能使用，若开瓶使用时间较长后，最好用已知A、B、O血型红细胞检查结果是否与已知血型相符,以防止试剂污染、变质而造成的鉴定错误。 （6）严格标记,摇动玻片动作要轻。 （7）所用器材必须干燥清洁,防止溶血；为避免交叉污染,试管、尖滴管均一次性使用。 （8）标准血清的质量、性能要符合要求。标准血清从冰箱取出待其平衡至室温后再使用,用毕后应尽快放回冰箱保存,减少细菌污染。 （9）操作应按规定的程

9、序进行,一般先加血清,然后再加红细胞悬液,以便核实是否漏加血清。 （10）玻片法定型时,注意防止悬液干涸引起的红细胞凝集误认为抗原抗体反应凝集。 （11）理论上IgM抗A和抗B与相应红细胞的反应温度以4最强,但为了防止冷凝集现象的干扰,一般在室温(20-24)进行实验,37可使反应减弱。 （12）观察结果时应注意红细胞呈特异性凝集、继发性凝集以及缗钱状形成的区别,明确凝集和溶血的意义是一样的。 （13）登记结果及发报告时应仔细记录、严格查对,避免笔误。 （14）幼儿红细胞抗原未发育完全,年老体弱者抗原性较弱,最好采用试管法鉴定血型。 （15）有些疾病可使红细胞定型困难.如严重的肠道感染,可使红

10、细胞出现类B现象;严重细菌感染可激活正常存在于红细胞上的T抗原,出现全凝集现象。血清中出现病理性冷凝集素,部分高球蛋白和异常高球蛋白血症患者,红细胞血型鉴定可出现困难。 （16）输入异型血或做过与受血者血型不合的异体骨髓、器官移植的患者,在血型鉴定时可能出现混合凝集外观现象。10.参考文献：（1）人民卫生 2003年7月（第一版） 高峰主编：输血与输血技术 （2）人民卫生 2003年6月（第二版） 罗春丽主编：检验基础 （3）科学 1999年11月（第一版） 连明等主编：临床输血手册（4）抗A、抗B血型定型试剂（单克隆抗体）说明书授权人签字日期操作人员部门负责人质量负责人市中心医院输血科ABO

11、血型鉴定（反定型法）SOP文件编号：A2执行日期：2006-01-01编辑版本：第二版ABO血型鉴定(反定型法)标准操作规程1.目的 规ABO鉴定实验，确保ABO血型鉴定结果的准确。2.适用围2.适用围。3.职责 具有初级以上职称（检验），在血型鉴定和交叉配血工作岗位的工作人员有权执行本规程。出现血型鉴定结果本人无法判定，不能发出实验结果时，应当向上一级职称的检验人员或直接向本部门负责人报告并寻求技术上指导和帮助。4.监督 交叉配血试验审核者及实验室负责人监督工作人员是否遵从此项规程。5.原理 用已知标准A、B、O型红细胞与被检血清反应，被检血清与已知型别的标准红细胞出现凝集,则证明血清中存在

12、着与该红细胞抗原相对应的抗体。反之，若被检血清与已知型别的标准红细胞不出现凝集，则证明血清中不存在与红细胞抗原相对应的抗体，以此反证被检红细胞上抗原的型别。6.材料 （1）3%-5%标准A、B、O型红细胞试剂 （2）受检者血清 （3）经过校准的台式离心机7.程序 （1）平板法： 取洁净玻片3块，用蜡笔分别在玻片左右两上角标明Ac、Bc、Oc等字样及受检者或编号。 在标记Ac、Bc、Oc格加5%标准A型、B型、O型红细胞悬液各一滴，再加受检者血清一滴于各小格。 用竹签（或洁净小试管底部）分别混合小格容物，不时转动玻片促进凝集反应的发生，10分钟后肉眼及显微镜观察结果。 （2）试管法： 分离血清

13、将待检血液以2500r/min离心3分钟，分离血清。 标记并加被检者血清 取小试管3支，分别标记A、B、O字样，于各管加入被检者血清1滴。 加标准红细胞 按标记分别加入5%的A、B、O型标准红细胞生理盐水悬液1滴，混匀，立即以1000r/min离心1分钟。 观察结果 先观察上层液有无溶血现象，再斜持试管轻轻摇动或轻轻弹动肉眼观察有无凝集，在低倍镜观察。 判断结果 凝集结果判断标准同正定型法。8.结果发出 根据实验结果，填写实验记录、血型鉴定报告单，审核无误后，发出报告单。9.注意事项 （1）标准红细胞用3名健康人同型新鲜红细胞混合，用生理盐水洗涤3次，以除去存在血清中的抗体及可溶性抗原。（2）

14、观察结果时，若试管中出现溶血现象，表明存在抗原抗体反应并有补体激活，应视为凝集。（3）先天性免疫球蛋白缺陷，长期大量应用免疫抑制剂，血型抗体可减弱或消失，造成反定型困难。（4）血清中存在自身免疫性抗体、冷凝集素效价增高、多发性骨髓瘤、免疫球蛋白异常均可造成反定型困难。（5）由于新生儿体可存在母亲输送的血型抗体，而且自身血型抗体效价又低因而出生6个月以的婴儿不宜做反定型。（6）其他与正定型相同。10.ABO血型鉴定的临床意义输血 血型鉴定是实施输血治疗的首要步骤，应该在受血者与供血者血型相同，交叉配血完全相合的条件下才能输血。器官移植 受者与供者必须ABO血型相符才能移植，血型不符极易引起排斥反

15、应导致移植失败。新生儿溶血 母子ABO血型不合可引起新生儿溶血病，主要是依靠血型血清学检查来诊断。其他 ABO血型检查还用于亲缘鉴定，法医学鉴定以及某些疾病相关的调查等。12.参考文献 （1）人民卫生 2003年7月（第一版） 高峰主编：输血与输血技术 （2）人民卫生 2003年6月（第二版） 罗春丽主编：检验基础 （3）科学 1999年11月（第一版） 连明等主编：临床输血手册 授权人签字日期操作人员部门负责人质量负责人市中心医院输血科Rh血型鉴定/抗D鉴定SOP文件编号:A3执行日期:2006-01-01编辑版本:第2版Rh血型鉴定/抗D鉴定标准操作规程1.目的 规RhD鉴定实验，确保Rh

16、D血型鉴定结果的准确。2.适用围 发血室，血型血清学实验室。3.职责 具有初级以上职称（检验），在血型鉴定和交叉配血工作岗位的工作人员有权执行本规程。出现血型鉴定结果本人无法判定，不能发出实验结果时，应当向上一级职称的检验人员或直接向本部门负责人报告并寻求技术上指导和帮助。4.监督 交叉配血试验审核者及实验室负责人监督工作人员是否遵从此项规程。5.材料 （1）RhD（IgM）血型定型试剂（单克隆抗体） 规格：10ml/支 保存：于2-8避光保存，有效期使用效价：抗D（IgM）164（ccDee O型） 有效期：自成品鉴定合格之日起2年。 批准文号：10ml/支，国药准字S2* 厂商：血液生物有

17、限责任公司 （2）受检者3%-5%红细胞悬液 （3）经过校准的台式离心机6.原理 根据RhD（IgM）类特异性血型抗体与红细胞上特异性抗原结合能够出现凝集反应的原理，用已知RhD（IgM）类特异性标准抗血清与被检红细胞在盐水介质中反应，若出现凝集现象，表明被检红细胞膜上有与血型抗体相对应的抗原，从而判断和鉴定被检者的血型。7.程序 （1）平板法（玻片法） 加1滴抗D试剂于玻片上。 再加1滴3%-5%受检者红细胞悬液。 在圆形的玻片区域中混匀，前后缓慢摇动玻片。2分钟左右肉眼判断结果。 如果是阴性，需用试管法重做一边实验。 （2）试管法 加1滴抗D试剂于一支预先标记好的试管中。 再加1滴约3%-

18、5%被检者红细胞悬液与试管中，混匀。 离心，3400rpm 15s或1000rpm 1min。 检查是否有溶血（溶血可能是阳性结果，或者是细菌污染），然后轻轻摇晃，使细胞再悬浮起来。 观察凝集情况，并立即记录结果。必要时可借助显微镜。 若是阴性结果，需在37孵育15-30分钟，然后再离心观察结果。结果若是阴性需进一步确认是否是弱D。结果判断 阳性反应：出现红细胞凝集，为RhD阳性。阴性反应：红细胞不出现凝集，为RhD阴性。8.结果发出 根据实验结果，填写实验记录、血型鉴定报告单，审核无误后，发出报告单。9.注意事项 （1）试剂如出现混浊则不能使用，若开瓶使用时间较长后，最好用已知RhD阳性、R

19、hD阴性红细胞检查结果是否符合，以防止试剂污染、变质失效而造成鉴定错误。 （2）如果长时间储存在高温或反复冻融会使试剂失去活性。10. Rh血型鉴定的临床意义输血前检查 为了保证安全输血，输血前也应做Rh血型鉴定及交叉配血，以避免由于Rh抗体引起的溶血性输血反应。新生儿溶血病的诊断 由于IgG类Rh抗体易通过胎盘，从而破坏胎儿相应抗原红细胞，引起严重的新生儿溶血病。协助治疗 当实验证实有少量Rh阳性红细胞进入Rh阴性受血者时，可用大剂量Rh免疫球蛋白来防止Rh阳性红细胞的免疫作用。10.参考文献： （1）人民卫生 2003年7月（第一版） 高峰主编：输血与输血技术 （2）人民卫生 2003年6

20、月（第二版） 罗春丽主编：检验基础 （3）科学 1999年11月（第一版） 连明等主编：临床输血手册 （4）Rh（IgM）血型定型试剂说明书授权人签字日期操作人员部门负责人质量负责人市中心医院输血科不规则抗体筛查SOP文件编号:A4执行日期:2006-01-01编辑版本:第2版不规则抗体筛查标准操作规程1.目的 筛查样本中是否含ABO系统以外的抗体，减少输血不良反应。2.适用围 发血室，血型血清学实验室。3.职责 具有初级以上职称（检验），在血型鉴定和交叉配血工作岗位的工作人员有权执行本规程。出现鉴定结果本人无法判定，不能发出实验结果时，应当向上一级职称的检验人员或直接向本部门负责人报告并寻求

21、技术上指导和帮助。4.监督 本试验审核者及实验室负责人监督工作人员是否遵从此项规程。5.材料 （1）标准抗体筛查细胞（0.8%）（2）达亚美抗体筛查卡（3）被检者血清（4）ID-Centrifuge 12， ID-Incubator376.原理 达亚美微量定性系统凝胶测试法基于生物化学凝胶过滤技术和离心技术及免疫化学抗原抗体特异反应。当抗原抗体反应，抗人球试验时，血细胞发生凝集。离心时凝集块不能通过凝胶间隙而留在凝胶上层，呈阳性反应；未凝集细胞离心时可通过凝胶间隙而沉积在凝胶管底部，呈阴性反应。7.程序 （1）三管中分别加入抗体筛查细胞50ul （2）三管中均加入25ul待检样本血浆或血清 （

22、3）孵育15分钟 （4）离心10分钟，判断结果，记录注：1+至4+为抗体筛查阳性（抗人球法），样本含ABO系统以外的抗体，需进一步作抗体鉴定。（）为抗体筛查阴性。8.注意事项（1）每日实验前，先取出小瓶2号稀释液及标准细胞，放置一段时间至室温，以防冷凝集。（2）凡符合下列条件者需做抗体筛查：交叉配血不合者；有输血史、妊娠史或短期需要接受多次输血者。（3）DiaMed卡封口有损坏时，管中干涸或有气泡时，卡不可使用。（4）必须用2号稀释液保证反应结果可靠，细胞浓度要在0.8%左右，不可太浓太稀。（5）纤维蛋白可吸附部分红细胞，应将血样离心。（6）液体应加至卡反应室中。（7）严格按标准程序操作可检出

23、弱抗原抗体反应、弱凝集。（8）某些药物、疾病可导致血液不配合。（9）细菌及异常血清蛋白可影响结果。（10）必须标记卡。9.结果发出 根据实验结果，填写实验记录，审核无误后发出报告单。10.参考文献： （1）人民卫生 2003年7月（第一版） 高峰主编：输血与输血技术 （2）人民卫生 2003年6月（第二版） 罗春丽主编：检验基础 （3）科学 1999年11月（第一版） 连明等主编：临床输血手册 授权人签字日期操作人员部门负责人质量负责人市中心医院输血科盐水介质交叉配血SOP文件编号:A5执行日期:2006-01-01编辑版本:第2版盐水介质交叉配血标准操作规程1.目的 进一步验证受血者与供血者

24、血型鉴定是否正确，以防止受血者与供血者相互之间血型不合，保证输血安全。2.适用围 配血室，发血室，血型血清学实验室。3.职责 具有初级以上职称（检验），在血型鉴定和交叉配血工作岗位的工作人员有权执行本规程。出现交叉配血鉴定结果本人无法判定，不能发出实验结果时，应当向上一级职称的检验人员或直接向本部门负责人报告并寻求技术上指导和帮助。4.监督 交叉配血审核者及实验室负责人监督工作人员是否遵从此项规程。5.材料（1）0.9%生理盐水（2）受血者血样（3）供血者血样（4）经过校准的台式离心机6.原理天然IgM类血型抗体与对应红细胞抗原相遇，在室温下的盐水介质中出现凝集反应。通过离心，观察受血者血清与

25、供血红细胞以及受血者红细胞与供血者血清的凝集现象，判断供血者有无ABO血型不合的情况。7.程序（1）取洁净小试管3只，分别标注主管（Ps+Dc）即受血者血清加供血者红细胞，次管（Pc+Ds）即受血者红细胞加供血者血清，自身对照管（Ps+Pc）即受血者血清加受血者红细胞。于主管加受血者血清2滴和供血者5%红细胞悬液1滴；次管加供血者血清2滴和受血者红细胞悬液1滴；自身对照管分别加受血者自身血清和红细胞悬液各1滴。（2）摇匀混合，1000转/分钟，离心1分钟。（3）取出试管，先看上清液有无溶血现象，然后将试管倾斜，轻轻摇动，肉眼观察结果有无凝集，再用吸管分别吸取管悬液各1滴于玻片上，在低倍显微镜下

26、观察有无凝集现象。8.结果发出 根据实验结果，填写实验记录，审核无误后发出报告单。9.注意事项（1）严格三查三对，确保标本、血型准确无误。（2）配血试管中发生溶血现象是配血不合，表明有抗原抗体反应，同时还有补体参与，必须高度重视。（3）如主侧试管凝集，应禁止输血，必须查找原因，另选血源。（4）室温控制（222），以防止冷抗体引起凝集反应，影响配血结果的判断。（5）盐水配血不凝集但有反复输血史或妊娠史的受血者，应加用聚凝胺介质、酶介质或抗球蛋白介质配血。（6）为确保输血安全，应输同型血，特殊情况下无同型血又必须输血时，可选择O型血输给AB、A及B型血的患者，或A、B型血输给AB型的患者，但主侧管

27、必须无凝集和溶血现象，次侧管有凝集、无溶血，方允许少量输入（不超过200毫升），但供血者血清中抗A（B）效价要小于164。若有免疫性抗A（B）抗体，不能输血。（7）若受血者用血大量，需用几个献血员血液时，献血员也应进行交叉配血。（8）盐水介质配血法也可用玻片法进行操作，但提倡用试管法。10.参考文献： （1）人民卫生 2003年7月（第一版） 高峰主编：输血与输血技术 （2）人民卫生 2003年6月（第二版） 罗春丽主编：检验基础 （3）科学 1999年11月（第一版） 连明等主编：临床输血手册授权人签字日期操作人员部门负责人质量负责人市中心医院输血科聚凝胺技术交叉配血SOP文件编号:A6执行

28、日期:2006-01-01编辑版本:第2版聚凝胺技术交叉配血标准操作规程1.目的 进一步验证受血者与供血者血型鉴定是否正确，以防止受血者与供血者相互之间血型不合，保证输血安全。2.适用围 配血室，发血室，血型血清学实验室。3.职责 具有初级以上职称（检验），在血型鉴定和交叉配血工作岗位的工作人员有权执行本规程。出现交叉配血鉴定结果本人无法判定，不能发出实验结果时，应当向上一级职称的检验人员或直接向本部门负责人报告并寻求技术上指导和帮助。4.监督 交叉配血审核者及实验室负责人监督工作人员是否遵从此项规程5.材料 （1）聚凝胺介质试剂(BASO-Polymatching) 套组容：低离子溶液(Lo

29、w lonic Medium)，聚凝胺溶液(Polybrene Reagent)，悬浮液(Rensuspending) 生产许可证：粤食药监械生产许20010407号 生产编号：BA-1002 产品注册号：国食药监械（准）字2004第3400397号 执行标准号：YZB/国 1592-2003 （2）受血者血样 （3）供血者血样 （4）经过校准的台式离心机6.原理 红细胞表面带有大量负电荷，以避免其产生自发性凝集，当红细胞悬浮在电解质时，阳离子会被红细胞的负电荷所吸引，此时红细胞则被扩散的双层离子云所包绕，而形成Zata电位，Zata电位决定红细胞之间的排斥作用。 聚凝胺技术首先利用低离子溶液

30、（LIM）降低介质的离子强度，减少红细胞周围的阳离子云，以促进红细胞和血清（血浆）中的抗体结合。其后，加入聚凝胺（Polybrene）溶液，它是一种高价阳离子多聚物、肝素中和剂，溶解后能产生很多正电荷，可以中和红细胞表面带有的负电荷，使红细胞的Zata电位降低，缩短红细胞之间的距离，是红细胞产生非特异性的凝集。最后，加入悬浮液（Rensuspending），悬浮液具有中和聚凝胺（Polybrene）的作用，使正常红细胞的非特异性凝集散开，实验结果为阴性；但如果红细胞被相应的抗体致敏，则会被聚凝胺凝结，凝集就不会散开，实验结果为阳性。7.程序（1）取试管2支，标主次侧，主侧管加病人血清（血浆）2滴 ，加供血者3%-5%红细胞悬液（洗涤或不洗涤均可）1滴，次侧管反之。（2）各加LIM0.7ml混合均匀后，再各加Polybrene溶液2滴，并混合均匀。（3）用BASO血库专用离心机1000g离心力，离心10秒（若用普通离心机，离心条件为：3400rpm,离心10秒）然后把上清夜倒掉，不要沥干，让管底残留约0.1ml液体。（4）轻轻摇动试管，目测红细胞有无凝集，如无凝集，则必须