Ultrospec2100pro分光光度计用户手册.docx

1、Ultrospec2100pro分光光度计用户手册ULTROSPEC 2100 Pro 用户手册 装机 仔细检查仪器如发现任何由运输引起的损坏，请即与供应商联系。 确保安装点的环境符合操作安全的基础要求：室内使用室温1至4031时的最大相对湿度80%，40时的最大相对湿度50% 仪器（重13公斤）必须放置在能承重的平整表面，如实验桌，并保证周围的空气流通。 确保冷却风扇的出风口和入风口不被遮挡，并保持与墙面距离至少5厘米。 本仪器的电源必需接地，电源可用90-240V。 开机检查显示屏是否工作正常。 如需输入实验室名称，操作者姓名，仪器资产号，时间及日期等，详见仪器的基本应用说明（Instru

2、ment Utilities）。如仪器使用不当或使用环境不能确保仪器的正常工作，仪器设计的保护措施将被破坏且对仪器的保修承诺也无效。基本操作简介你的紫外/可见光分光光度计是一台独立的，操作简便且配有高分辩率的液晶屏的仪器，其使用的是氙灯光源。你的紫外分光光度计的功能 基础模式：包括吸光率，浓度和%透光率 应用模式 全波长扫描（wavelength Scanning） 简单动力学（Simple Kinetics） 标准曲线（Standard Curve） 反应速率（Reaction Rate） 多波长扫描（Multiple Wavelength Equation Entry） 已储存了DNA、R

3、NA和寡核苷酸定量分析和纯度检测的参数 18种用户自定义方法，6个方法一组，共A、B、C三组 能直接输出图表形式的结果到打印机进行打印 能直接、从仪器上下载结果到Excel软件中分析，处理和储存 有GLP自诊断功能操作键盘和显示在主页上按下显示的功能对应的F1键、F2键、F3就能进入该功能。 F1键能进入系统的基本应用（System utilities） F2键能进入样品架识别功能（Accessory） F3键进入显示屏背景灯开/关，及改变对比度的功能（Backlight）其它按键： 在自动打印功能关的情况下，按下该键开始打印，或在自动打印功能开的情况下再打一遍。回车键检测和打印开始键，（运行

4、键）终止检测，或返回主页的功能（退出键）按下数字键所对应的模式，则进入该模式。基础模式（Basic Modes）吸光率（absorbance）(1.1)吸光率检测实验样品与空白（可以是空气）相比较可通过的光强度。操作步骤如下：1输入合适的波长值后按OK（F3）2插入空白对照到样品架位置2后按，样品架会自动转到位置2且在屏幕上显示空白对照的测量值（0.000）这个空白对照将作为后续待测样品的对照，直到换新的空白对照样品3插入待测样品到样品架后按键（如有多样品重复此操作）4按Method键（F1）回主菜单或改变波长值%透光率（%Transmission）(1.2)%透光率检测实验样品与空白（可以是

5、空气）相比较可通过的光强度，而用%的形式表示。操作步骤如下：1输入合适的波长值后按OK（F3）2插入空白对照到样品架位置2然后，样品架会自动转到位置2，这个空白对照样将作为后续待测样品的对照,直到换新的空白对照样品3插入待测样品到样品架后按键（如有多个样品重复此操作）4按Method键（F1）回主菜单或改变波长值浓度系数法（Factor concentration）(1.3)浓度系数法用在转换系数已知的情况下，即在一定波长下将吸光率的值直接转换成样品的浓度值，转换时只需直接将吸光率乘以一个系数（factor）。操作步骤如下：1输入合适的波长值后按OK（F3）2输入系数值，范围0.01-9999

6、后按OK（F3） 要输入负值的浓度系数按F1；此时空白对照的吸光率值应大于待测样品3插入空白对照到样品架然后按键这个空白对照将作为后续待测样品的对照，直到换新的空白对照样品。4插入待测样品到样品架后按键（如有多个样品重复此操作）5按Method键（F1）回主菜单或改变波长值应用模式（Applications）(2)全波长扫描（Wavescan）(2.1)应用这台仪器能得到吸收图谱；从而了解吸收峰的高度与位置的关系。在进行扫描之前必须获得空白对照的扫描图，操作步骤如下：1输入扫描开始的波长（范围190-890 nm）后按OK（F3）2输入扫描结束的波长（范围200-900nm）后按OK（F3）3

7、选择恰当的扫描速度：慢（Slow），中速（medium），快（Fast）或浏览（Survey）扫描时速度的选择受限于扫描范围，因为越大的扫描范围会引起越大的基线能量变化，从而影响数据递进，因此扫描速度应根据不同的扫描范围而定。当时扫描速度，nm/min慢250中速750快1800浏览30004如有必要，选择吸收峰核对表功能：这样一张包括了最多20个峰与其对应的吸收值的表就能被打印了5插入空白对照和样品架然后按键，获得对照基线这个空白对照样品将作为后续待测样品的对照，直到换新的空白对照样品 6插入待测样品到样品架后按键（如有多个样品重复此操作） 7按Date（F3）键进行数据指向，通过F1、F2

8、键移动指针，此时峰用旗帜表示8按Method键（F1）回主菜单或改变参数简单动力学（Simple kinetics）简单动力学分析检测曲线的形状，测吸光率时，预测的波长和时间间隔要同时输入，结果以图表的形式显示并输出，操作步骤如下：1. 输入波长值后按OK（F3） 2选择时间单位：秒（1），或分（2）3输入反应持续的时间后按OK（F3）4输入两次检测中间隔的时间，最小2秒，最大60秒 5输入空白对照样品后，按键这个空白对照将作为后续待测样品的对照，直到换新的空白对照样品6输入待测样品到样品架后按键（如有多个样品重复此操作）7在整个屏幕上显示检测结果，按Data（F3），返回按OK（F3） 通过

9、F1、F2键移动指针，能看到数据点，这样能识别斜坡的起点和终点的个数8按Method键（F1）回主菜单或改变参数注意：在使用这个检测模式前，必须查看样品的稳定性，因为氙灯与钨灯和氚灯的不同，氙灯不是连续的光源。反应率*（Reaction Rate）2.3利用试剂盒来测定食品、饮料以及临床实验中某种酶作用物是常用的手段，如检测340nm的NAD/NADH的光吸收。在某一特定的时间段内吸光率的改变并结合有关的反应系数能提供非常有价值的信息。一般情况下，试剂盒的供应商会指明相关系数。注意如果系数反映了单位时间内吸光率的变化情况,则能够以此计算反应率和酶活力。线性关系由实验过程中10等距的吸光率值/时

10、间数据点得到。操作步骤如下 ：1输入波长值后按OK（F3）2选择时间单位，秒（1），或分（2）3输入延迟时间，如果是可行的按OK（F3）4输入反应持续的时间后按OK（F3）5输入将斜率转换为有效单位的系数后按OK（F3）6插入空白对照和样品后按键 这个空白对照样将作为后续待测样品的对照，直到换新的空白对照样品7插入待测样品到样品架后按键（如有多个样品重复此操作） 检测过程以图表的形式显示，包括整个吸光率的变化，线性部分的斜率和线性质量应95%。斜率始终显示为吸光率值/分钟，即使分析的单位时间为秒。8在整个屏幕上显示检测结果，按Date（F3），返回按OK（F3） 通过F1、F2键移动指针能看到

11、数据点，这样能识别斜坡的起点和终点的个数9按Mthod键（F1）回主菜单或改变参数标准曲线（Standard Curve）(2.4)利用浓度已知的标准品建立多点校正的标准曲线来定量未知样品的浓度的方法是使用紫外分光光度计的基础，应用实例包括用Bradford方法进行蛋白浓度测定。这台仪器的优点是能把标准曲线储存为方法。操作步骤如下：1按Standard（F3）键后按New（F1）新建或按Confirm（F3）确认（如果是第一次使用则不需要Confirm）2输入检测波长后按OK（F3）3选择标准曲线的拟合方法：单点（Single Point）键盘，线性回归（linear regression）键

12、2，线性插值法（linear interpolation）键34输入标准品数（2-12）后按OK（F3）5、输入每个标准品重复读数的次数（1-3）后按OK（F3）6、输入第一个标准品的浓度后按OK（F3） 如需要包括一个零浓度的的标准品，则再准备一个空白对照作为标准品1，并输入浓度值0.007根据提示输入其他标准品的浓度8插入空白对照和样品后按键 这个空白对照将作为后续待测样品的对照，直到换新的空白对照样品9输入标准品后按键，接着按OK（F3）返回，如有必要可以重复读数来创立标准曲线10按Standards(F3)查看标准曲线，按OK（F3）返回 如果使用线性回归模式，则能打印测定的斜率，截取

13、和系数插入空白对照和样品后按键11这个空白对照将作为后续待测样品的对照，直到换新的空白对照样品12插入待测样品到样品架后按键（如有多个样品重复此操作）13按Method键（F1）回主菜单或改变参数多波长和方程式登录（MultiWave）(2.5)通过多个波长检测吸光率值是避免干扰的有效方法。方程登录可以在样品检测完成OK后，能自动进行计算并显示最终的计算结果。这个工具对工业用户十分有用，例如质控和环境检测。最多能测量5个不同波长的吸光率值，以及应用5个相关的系数：整体的稀释系数能被应用在定义好的方程式中。操作步骤如下：1写下方式，查看是否有结构的错误2输入标题，则在屏幕上显示结果和打印时会含有

14、标题3输入方程式4插入空白对照和样品后按键 这个空白对照将作为后续待测样品的对照，直到换新的空白对照样品5插入待测样品到样品架后按键（如有多个样品重复此操作）6按Method键（F1）回主菜单或改变参数核酸模式（Nucleic Modes）(3)核酸用260nm波长进行定量，因为大家普遍接受这时的光密度OD值（optical density）为1相当于DNA溶液的浓度为50ug/ml，RNA溶液的浓度为40ug/ml（用10mm的比色杯）。寡核苷酸转换系数（Factor）为33ug/ml，虽然系数实际与碱基组成有关。浓度=吸光率（Abs260）*系数(Factor)从细胞中抽提得到的核酸液中往

15、往带有蛋白质。因此可用260/280比值（260nm的吸光率与280nm的吸光率比值）来检测核酸的纯度，但是这个比值也仅供参考，而不是绝对的。纯的DNA其260/280值应1.8，纯的RNA其260/280值应2.0。230nm的光吸收增加也提示存在蛋白污染，因为230nm已接近黏附肽片段的最大光吸收波长，另外230nm的光吸收增加也提示存在缓冲液污染，因为Tris，EDTA以及其他含盐的缓冲液在230nm也有光吸收。当检测RNA样品时，260/230应2.0，如低于此比例则提示存在胍基硫氰酸盐的污染。一般情况下如存在RNA纯化试剂的污染，则在波长230-260nm的范围内会有光吸收。一般而言

16、用另一单波长来做背景校正能将核酸和蛋白质的在260nm和280nm的吸收峰完全区分开，而且有时还能补偿背景的吸收。一般用320nm波长做背景校正，因为这个波长能耐受浑浊的样品，高吸光率的缓冲液和小缝隙的比色杯。这个仪器能计算浓度，显示260/280比值和260/230比值，补偿稀误差和使用非10nm光程的比色0杯。能对样品进行可见光区的全波长扫描。操作步骤如下：DNA（3.1），RNA（3.2），oligo（3.3）1、输入比色杯的光程；10mm（1），5mm(2)，2mm(3)，1mm(4)，0.5mm(5)2、选择单位：ug/ml(1)，ng/ul(2)，ug/ul(3)3、选择是否使用3

17、20mm做背景校正4、选择是否要扫描（扫描范围220-320mm，自动调节比例）5、输入稀释系数6、如果是Oligo，输入已知的系数或使用默认系数33ug/ml。7、插入空白对照和样品后按键 这个空白对照将作为后续待测样品的对照，直到换新的空白对照样品8、插入待测样品到样品架后按键（如有多个样品重复此操作）9、按Method键（F1）回主菜单或改变数10、按Graph键查看样品光谱图方法（Methods）A(4)，方法B（5），方法C（6）每次在方法应用的过程中定义了一个参数，都能在检测样品前将该方法保存，保存的方法如下：1、按Stop键返回主页2、选择一个方法库（用4、5、6表示）3、按sa

18、ve（F1）后按下对应的方法库数值4、输入方法名后按OK（F3）一个方法被保存后在仪器的菜单中能直接调用该方法，当调用已保存的方法时，以前定义的参数无法修改和看到，但能被打印。如果要修改参数，必须先删除该方法。1、按Stop键返回主页2、选择一个方法库（用4、5、6表示）3、按delete（F2）后按下要删除的方法库对应的数值，仪器会让你确认删除操作为打印输出和方法名称输入字符（Entry of alphanumeric characters for print outs and method names）通过回车键去掉字符通过重复按键使该键的字符循环显示来输入需要的字母或数字，注意空格键用键

19、1输入，按下键1在1-1之间循环显示按下另一键时光标移动到下一字符，如果要输入重复的字符，如AA，则先按F2再按恰当的键用回车键删除输入完成输入后按OK（F3）仪器的基本应用（instrument Utlities）在主页中选择了system选项（F1）后，会显示仪器的一些初始信息如校正情况，最后一次GLP校正的日期等。按F2键会显示和打印详细的GLP校正记录；注意一般在GLP管理中会设定定期打印的时间间隔。设置（Set up）要调节显示屏的对比度，可以按Contrast（F1）或Contrast（F2）来减弱或增强。时钟（Clock）（1）这个工具用来设定时间和日期。按OK键年，月，日，小时

20、和分钟会循环显示，用F1和F2来调到准确的时间和日期。用户化（Customise）（2）这个工具用来设定用户的信息，如输入操作者的姓名，方法A，B，C的名称等。输入时按下对应的字母键和数字键，重复按键能使字符滚动显示和输入。优先选择（preference）（3）按以下操作设定优先选择项目样品号提示no/yes（能在实验开始前预设1-999个样品号，一般从1号开始）自动打印on/off（如果设为off，则通过按能启动打印功能）打印机设定图表显示比例（0-3，0-2，0-1，0-0.5和自动）退出应用功能时需确认no/yes按键音on/off良好的实验室操作规范（GLP）（4）这个工具有在设定了G

21、LP操作的仪器才能用，详见附录（Appendix）中的GLP。用来显示作为参考的GLP校正结果。Ultrospec 2100 pro GLP Report InstrumentOperatorDateTimeSerial No.VersionCalibratedInstrument LifeLamp EnergyServiceBandwidth(2.0-3.0nm)Wavelength Accuracy881.9mm(1nm)Absorbance Accuracy220nm(1.763-1.781A)340nm(1.633-1.665A)500nm(1.477-1.491A)Stray Lig

22、ht220nm (0.05%)Ultrospec 2100 proA T Dadd22 September 200010:00:17795004190 v1.021 September 200025.6 Hours100%10 September 20002.9 PASS881.9 PASS1.772 PASS1.649 PASS1.484 PASS0.021 PASS语言（Language）（5）选择屏幕显示和打印输出的语言服务（service）（6）这个工具只供维修工程师使用，用密码保护输出数据到打印机（Output to Printer）打印机不能是只有USB接口的打印机不能是GDI型的

23、，即不能是只能与MS windows连用的选择与仪器匹配的打印机，选择有seiko DPU-414(1)，Epson FX-80/Epson 9 pin(2)，Text printer(no graphics)(3)，HP PCL3(4)，Epson 24pin(ESCP)(5)按下键能启动自动打印功能。如果自动打印在关闭状态，则在需要打印时按就能打印。数据下载到电子数据表功能（Download to Spreadsheet）当PC机安装了电子数据表界面软件（Spreadsheet interface software 80-2110-73）以后，结果就能被直接输出到Excel，仪器和PC机由

24、数据线（80-2105-97）连接。详细的说明与软件一起提供。这样组成一次扫描的吸光率值/波长就能通过电子数据表界面被转换成更常规的图表形式：实验结果也能改变格式和编辑以适应报告的格式或存到硬盘。无论用任何检测模式得到的数据都能用这种方式输出。按键后输出将自动进行。通告（Message）几乎所有的通告都是与仪器的状态相关的，其他的是开机时的校正信息。通告总结可能的原因This instrument has failed 1 of more GLP tests一个以上的GLP测试参数校正超出了定义值（详见附录）。你能继续使用这个仪器或与当地的工程师联系。Failed to find ABS仪器校

25、正失败，请与当地的工程师联系Failed to find Refl仪器校正失败，请与当地的工程师联系Failed to align filters仪器校正失败，请与当地的工程师联系Failed to align grating仪器校正失败，请与当地的工程师联系附件（Accessories）如果更换了附件，要按主页上的Accessory键（F2）进行初始化使仪器识别新换的附件。根据附件的类型，会列出一系列选项。多位置比色杯架附件（Multiple Cell Holder Accessories）要安装新的比色杯架，将旧的移走，然后将新的比色杯架放到恰当的位置，并用手拧紧中间的螺丝。最后在主页上按

26、accessory键。任何多位置比色杯架都能作为单个位置的比色杯架使用。即在操作中不转动比色杯架。类型货号说明4位置比色杯架80-2106-01适合10-50mm光程的比色杯8位置比色杯架带水加热80-2109-70需要水浴循环6位置比色杯架带加热80-2106-04需要温控装置（80-2105-49）。插入插槽38位置比色杯架80-2108-01备用单位置比色杯架附件（Single Cell Holder Accessories）要安装新的比色杯架，将旧的移走，然后将新的比色杯架放到恰当的位置。已提供了底板的插头，根据比色杯架正面的箭头将它放到正确位置。然后向后推手锁使锁到正确位置。最后在主

27、页上按accessory键。类型货号说明10mm光程比色杯架80-2106-05样品搅拌比色杯架80-2108-10需配磁珠和控制器50mm光程比色杯架80-2106-07100mm光程比色杯架80-2107-14超微量比色杯架80-2106-06适合5ul（80-2103-68）比色杯和70ul（80-2103-69）比色杯微量比色杯架80-2106-09适合50ul（80-2076-38）比色杯圆柱形比色杯架80-2106-10适合最大100mm光程圆柱形比色杯水加热比色杯架80-2106-0810-40mm光程比色杯，需要水浴循环HPLC比色杯架80-2106-11样品池的体积8ul，光

28、程2.5mm，将金属线穿过导管上的小洞并用仪器上的螺丝固定加热比色杯架80-2106-13设定温度范围20-49插入插槽2电子加热比色杯架80-2106-12设定温度：关，25，30，37。插入插槽2Tm可编程加热比色杯架80-2106-14与SWIFT Tm软件一起提供。温度范围20-105。适合DNA/RNA变性研究。需配温度控制装置（80-2105-49）。插入插槽1。其他附件和耗材类型货号说明吸 器80-2112-15在使用单个位置比色杯架且样品量很大时使用。适合比色杯架(80-2106-05)和(80-2106-13)温度控制装置80-2105-49需要额外的电源。与加热比色杯器(0

29、-2106-04)和Tm可编程加热比色杯架(80-2106-14)配合使用PC支持底座80-2112-14适合可携式PC 打印架80-2112-13适合Seiko DPU-414thermal打印机防尘罩80-2106-19备有吸器的泵头管80-2080-74PTFE样品池包括连接器80-2055-13替换样品池80-2080-60自动进样器界备工具80-2104-96串联连接的PC界面电缆(D9仪器与D9 PC连接)80-2105-97电子数据表界面软件80-2110-73通用的UV微量比色杯（100个包装）80-2110-94并行打印机界面电缆80-2071-87SWIFT II 应用软件(SWIFT II Applications Software)SWIFT II 应用软件由多个应用模式组成，如波长扫描，反应动力学，定量，多波长模式等，且能够增强紫外分光光度计的软件功能。80-2108-26SWIFT II -适合一般的分析，包括波长扫描，反应动力学，定量和定时驱动80-2108-31SWIFT II-适合方法开发，包括波长扫描，反应动力学，定量，定时驱动和多波长分析维护（MAINTENAN