TU 1810PC型紫外可见分光光度仪操作规程.docx

1、TU 1810PC型紫外可见分光光度仪操作规程TU-1810PC型紫外可见分光光度计操作规程1.引言：制订本标准的目的是建立TU-1810P型紫外可见分光光度计操作规程。2.依据：国家药品监督管理局药品生产质量管理规范1998年修订）第七十五条。3.适用范围：本标准适用于TU-1810P型紫外可见分光光度计操作。4.责任：质量部QC佥验员对本标准的实施负责。5.程序：5.1开机：开机前，需要确认紫外可见分光光度计主机与计算机的连接正常，样品室内无挡光 物，打开计算机，Window完全启动后，打开紫外可见分光光度计主机电源。5.2仪器初始化：在计算机窗口上双击蓬 图标，启动UVWIN紫外可见分光

2、光度计控制与分析软 件，仪器进行初始化，大约需要四分钟。如果初始化各项都“1二旦三二护，进入工作 界面，预热半小时后，便可任意进入以下操作。5.3光度测量：单击旦按钮或选择【测量】菜单下的【光度测量】子菜单，打开光度测量窗口。5.3.1参数设置单击I丄I按钮或选择【测量】菜单下的【参数设置】子菜单，打开光度测量参数 设置窗口。5.3.1.1测量选项卡5.3.1.1.1测量波长在测量选项卡中，在【波长】编辑框中输入需要测量的波长点，然后点击【添加】 按钮，即可在下面的波长点列表中添加一个测量波长点，测量波长点最多可设置 26个， 最少需要设置一个（从长波到短波）。如果需要删除波长点或清除波长类表

3、，可点击【删 除】按钮和【清除】按钮。在波长列表中选择了一个波长后，波长编辑框中同样会显示 此波长，同时可以修改此波长，然后点击【修改】按钮，即可修改波长列表中相应的内 容。5.3.1.1.2重复测量光度测量允许对测量重复次数进行选择。如果不进行重复测量，可选择【重复测量】 中的【无】。如果需要手动重复测量，可选择【手动】，然后在【重复次数】编辑框中输 入需要重复的次数。【自动重复】的功能与手动重复类似，都是进行重复测量，但自动重 复可自动完成多次重复测量，无须每次都去按测量键。但自动测量需要指定一个测量【时 间间隔】，也就是每次测量之间所停顿的时间。此时间可以是零，也就是不停顿的连续测 量。

4、如果选择了自动重复测量，还可以选择【根据样品池数量自动重复测量】，此选项的 功能是将样品池中所有的样品自动测量一次。因此，无须指定重复次数，重复次数选项 将被禁止。如果所设置的样品池是固定样品池，则无法设置此选项。重复测量可以选择 【计算平均值】将平均值计算功能打开。这样，在每次重复测量结束后，系统会自动计 算平均值并显示在测量表格中。5.3.1.1.3光度模式光度模式是指仪器当前运行的模式，可供选择的光度模式有：Abs（吸光度模式）、 T%（透过率模式）、Es（能量模式样品光）、Er （能量模式参比光）、R%（参比光透过 率积分球附件专用）。5.3.1.1.4启始编号设置样品编号中的启始数字

5、。可输入任意数字。531.2简单计算选项卡简单计算对测量结果的计算提供了很大的方便。利用此功能，可以计算出一些比较 专业的数据和分析结果。选择【启用简单计算】选项来开启简单计算功能。5.3.1.2.1计算公式在【计算公式】编辑框中，可以输入需要进行结果运算的公式。在公式中，A、BC、D,代表对应的波长点的测量数据。例如，您在测量选项卡的波长列表中输入了两 个波长，分别是600nm和500nm当您要计算这两个波长的测量数据的比值时，可以在 简单计算选项卡的计算公式编辑框中输入A/B,然后点击【添加】按钮即可。计算公式 默认的标题是“结果1”、“结果2” , o如果指定标题，可在输入计算公式的同时

6、，在 【标题】编辑框中输入相应的标题即可。如果要修改某个公式，可在公式列表中选择相 应的公式，在公式编辑框中修改其内容，然后点击【修改】按钮即可。如果要删除或清 除公式列表的内容，可以点击【删除】和【清除】按钮。计算公式最多可输入十个。5.3.1.2.2符号【符号】的作用其实就是模仿键盘的输入，点击符号按钮，就等于输入了对应的符 号。5.3.1.2.3显示【显示】选项的作用是为计算公式提供不同的显示方式。下拉框共有两个选择，分 别是：公式和标题。“公式”表示在测量结果表格中，计算公式将以公式的形式进行显示。“标题”则会以默认标题或用户设置的标题进行显示。531.3仪器选项卡仪器选项卡的内容与仪

7、器性能窗口的内容完全一致，提供对仪器光学系统的参数设 置功能。或选择【测量】菜单下的【仪器性能】子菜单或点击工具按钮乜，系统将会 弹出仪器性能设置窗口。在此窗口下，您可以设置光源的状态以及光学系统的一些特性。5.3.1.3.1灯状态设置氘灯和钨灯的开关。按钮为红色时是开，灰色是关。531.3.2光谱带宽设置仪器狭缝的光谱带宽值。选择范围从0.1 nm-5.Onm。本仪器为固定狭缝，无须 设置此参数。如果要改变固定狭缝仪器的光谱带宽值，可以通过选择开始 程序UVWIN的文件夹 UVWIN配置程序来启动配置程序。点击【光谱带宽选项卡】设定仪器狭缝的光谱带宽值。无特殊规定的，光谱带宽值应设置为2nm

8、5.3.1.3.3响应时间设置仪器采样的响应时间。时间越长，采集的数据越准确。5.3.1.3.4换灯波长设置仪器切换氘灯与钨灯的波长界限。小于此波长的将被认为是紫外区，仪器自动 切换为氘灯。大于此波长的被认为是可见区，仪器自动切换为钨灯。本仪器通常设置为 359.90nm5.3.1.4附件选项卡附件设置是对仪器所使用的附件进行设置。目前在软件中可设置的附件包括：固定 样品池、流量池、积分球、五联池和八联池。也可以选择【测量】菜单下的【附件】子 菜单打开附件设置窗口。本仪器所带附件为五联池。可以点击“位置”将相应的样品池 选择为“”从而设置当前样品池的位置。5.3.1.4.1类型对应样品池的样品

9、的类型。如果设置为“空白”样品，则在进行基线校正时系统会 自动切换到此样品池进行校正。如果设置为“未使用”则在测量过程中不切换此样品池。5.3.1.4.2样品名设置对应样品池的样品的名称。此名称会随测量文件一同保存，并可打印输出。5.3.1.4.3空白校正可以对五联池中的每一个空白样品进行单独校正。通过点击附件窗口中的“空白校 正”按钮进行五联池空白校正。但在这之前，先将需要校正的空白样品或空白比色皿放 入样品池中。系统会自动完成校正过程。当然，还可以通过点击“清除校正值”按钮将 空白校正值清除，恢复到原始状态。5.3.1.5 质量控制选项卡此功能的作用是对测量数据进行质量监控，一旦出现异常数

10、据，系统会立即进行提 示或按照预先设置的动作进行处理。当然，对数据的判断方法是可以设置的。在质量控 制窗口中，通过【启用质量控制功能】选项来设置质量控制的开关。5.3.1.5.1质量控制列表设置质量控制的项目。A、B C D,表示测量波长点，结果1结果2、结果3,表 示计算结果。点击【全选】按钮可选中所有的项目，点击【反选】按钮可反选所有的项 目，点击【清除】按钮可清除所有的选择。5.3.1.5.2限定在限定框中，可以输入对选择的项目所控制的【上限值】和【下限值】。【超限处理】 可设置超上限或下限时系统做出的动作。可选的动作有：【继续】继续进行测量；【停 止】停止测量；【重新测量】重新对当前样

11、品进行测量。如果需要在测量表格中对超 限结果进行标记，可点击【标记】按钮对标记进行设置。选择【开启】可开启标记功能。 在【方式】框中，可以选择对超限数据的标记方式。【标记表格】是将数据所在的表格进 行标记。可选的标记可在【表格】下拉框中进行选择。如果选择了【标记文本】，则可以 对文本的字体、颜色进行设置。5.3.1.5.3第二次超限处理【第二次超限处理】是指连续两次超限时系统所做出的动作。可选的动作有【继续】 和【停止】。5.3.2光度测量5.3.2.1一号样品池的样品的类型设置为“样品”，其它样品池的样品的类型设置为“未使用”532.1.1校零单击_ -,在一号样品池中放入参比溶液，单击 O

12、1。5.3.2.1.2测量单击 开始，在一号样品池中放入样品溶液，单击匚解二；即可测出样品的Abs值。5.3.2.2一号样品池的样品的类型设置为“空白”二号样品池的样品的类型设置 为“样品”其它样品池的样品的类型设置为“未使用”5.3.2.1.1校零单击,在一号样品池中放入参比溶液，单击电亘5.3.2.1.2测量单击 -，在二号样品池中放入样品溶液，单击 的忙 ；即可测出样品的Abs值。5.3.3结果保存与打印对于测量结果，既可以保存为文件，也可以打印输出。533.1结果保存完成了分析测量后，可选择【文件】菜单下的【保存】子菜单，或点击“云”按钮， 系统会弹出保存文件窗口，输入您需要保存的文件

13、名，点击【保存】按钮，即可将文件 保存到指定的位置。在窗口的底部，将显示当前的分析员。点击【注释】按钮可对测量结果进行注释。可以在【样品名】编辑框中输入测量样 品的名称，在【注释】编辑框中输入对测量结果的注释信息。5.3.3.2结果打印如果要将测量结果打印输出，可选择【文件】菜单下的【打印】子菜单，或点击“同 按钮，即可将测量结果打印输出。另外，如果您要修改打印输出的格式，可选择【文件】 菜单下的【页面设置】子菜单，或点击“疋”按钮，即可打开页面设置窗口5.4光谱扫描单击I二I按钮或选择【测量】菜单下的【光谱扫描】子菜单，打开光谱扫描窗口。5.4.1参数设置单击I丄I按钮或选择【测量】菜单下的

14、【参数设置】子菜单，打开光谱扫描参数 设置窗口。5.4.1.1测量选项卡测量选项卡中的内容是设置光谱扫描参数的主要内容。5.4.1.1.1光谱扫描光度模式设置光谱扫描的【光度模式】。光度模式是指仪器当前运行的模式，可供选择的光 度模式有：Abs（吸光度模式）、T%（透过率模式）、Es（能量模式样品光）、Er （能量 模式-参比光）、R%（参比光透过率-积分球附件专用）。5.4.1.1.2显示范围设置光谱扫描图形中纵坐标的范围。您可以在【最大】和【最小】编辑框中输入相 应的数值。5.4.1.1.3扫描参数设置扫描的波长范围、间隔、速度等参数。【起点】和【终点】构成了扫描范围。【速 度】表示扫描速

15、度。扫描速度越快，数据的质量相对越不好；扫描速度慢，数据的质量 相对越好。【间隔】表示扫描的波长间隔。也就是间隔多少纳米采一次样。可选的扫描间 隔有：0.1、0.2、0.5、1.0、2.0和5.0nm （根据仪器型号不同，扫描间隔也将会有所不 同）。【自动间隔】的作用是根据您设置的扫描范围来为您自动选择一个扫描间隔。5.4.1.1.4扫描方式扫描方式是设置光谱扫描的重复扫描方式。【单次扫描】表示只进行一次扫描，不 重复。【重复扫描】表示可进行多次重复扫描。【自动扫描】是根据您选择的附件样品池 的数量进行扫描。如果您选择了重复扫描，则需要设置扫描的【时间间隔】和【重复次 数】。如果您选择了自动扫

16、描，则不需要设置重复次数，只要设置时间间隔就可以了。541.2仪器选项卡本项内容同“531.3 ”项。541.3附件选项卡本项内容同“531.4 ”项。5.4.2光谱扫描5.4.2.1一号样品池的样品的类型设置为“样品”，其它样品池的样品的类型设置 为“未使用”。5.4.2.1.1基线校正单击気號，在一号样品池中放入参比溶液，单击二鶯g,校完后单击II I! 1 IB11 % |氓4 存入基线。5.4.2.1.2扫描单击厂，在一号样品池中放入样品溶液，单击二迄匸二I进行扫描，当扫 描完毕后，单击检出图谱的峰、谷波长值及Abs值。5.4.2.2一号样品池的样品的类型设置为“空白”，二号样品池的样

17、品的类型设置 为“样品”，其它样品池的样品的类型设置为“未使用”。5.4.2.2.1基线校正单击0基线，在一号样品池中放入参比溶液，单击匸匚诵屢二J，校完后单击 邂亠 存入基线。5.4.2.2.2扫描单击厂芒，在二号样品池中放入样品溶液，单击 进行扫描，当扫描完毕后，单击检出图谱的峰、谷波长值及Abs值。5.4.3查看光谱信息选择【图形】菜单下的【光谱信息】子菜单，或点击“寻”按钮，即可打开光谱信 息窗口。在此窗口中，所有扫描的光谱将以列表的形式进行显示。可以任意点击一条光 谱，在其右侧的详细信息窗口中将会显示其详细信息。还可以点击“颜色”按钮来改变 对应光谱的颜色。544保存和打开光谱文件选

18、择【文件】菜单下的【保存】子菜单，或点击”按钮，在弹出的保存窗口中 输入要保存的文件名，然后点击【确定】按钮即可。要浏览保存过的光谱文件时，选择 【文件】菜单下的【打开】子菜单，或点击“耳”按钮，此时系统将弹出打开光谱文件 窗口。在此窗口中，您可以选择需要打开的光谱文件。右侧的谱图为预览窗口。点击【属 性】按钮可以查看光谱文件的详细信息。5.5 定量测量单击丄1按钮或选择【测量】菜单下的【定量测量】子菜单，打开定量测量窗口。5.5.1参数设置单击I丄I按钮或选择【测量】菜单下的【参数设置】子菜单，打开定量测量参数 设置窗口。5.5.1.1测量选项卡测量选项卡主要提供定量测定的方法设置、波长设置

19、和重复测量设置等。5.5.1.1.1测量方法设置定量测定的测量方法。可选的测量方法有：【单波长法】、【双波长法】、【双波 长系数法】、【三波长法】、【一次微分法】、【二次微分法】、【三次微分法】、【四次微分法】 和【双波长二次微分】。可以根据不同的测试要求对方法进行选择。如果选择了单波长法， 则需要在【主波长】编辑框中输入测定波长。如果选择了双波长或三波长法，则需要在【基线波长1】和【基线波长2】编辑框中输入基线波长5.5.1.1.2样品编号设置标准样品和未知样品的标识名称及编号。5.5.1.1.3其他设置 在其他设置中，可以设置对样品进行重复测量。重复测量是对一个样品进行多次测 量，然后取多

20、次测量结果的平均值进行含量计算。因此，如果选择了【重复测量】选项， 还需要在【重复次数】编辑框中输入需要重复测量的次数，这样才能够达到重复测量的 目的。重复测量可使测量的数据更为准确，但测量所花费的时间要比正常测量稍长一些。 另外，如果仪器配有多联样品池，还可以选择【自动切换样品池】选项。这样，系统会 每测量一个样品就自动切换到下一个样品池，只需要将样品按照顺序放置于样品池中即 可。5.5.1.2校正曲线选项卡 校正曲线选项卡是对校正曲线的参数进行设置。可设置的参数包括：【曲线方程】、 【方程次数】、【浓度单位】、【零点插入】、【曲线评估】、【校正方法】等。5.5.1.2.1曲线方程设置校正曲

21、线所使用的方程。可选的方程有两个，分别是：C=f(Abs)和Abs=f(C)。 前者是以吸光度做为变化量来求解浓度值。而后者是前者的反函数，主要用于吸收系数 的计算。5.5.1.2.2方程次数 方程次数表示校正曲线所使用的方程的次数，也可以称为阶数。就是我们常说的“一 元二次方程”、“一元三次方程”中的“二次”和“三次”，主要是指方程中变化量的最高 次数。可选的方程次数有：【一次】、【二次】、【三次】和【四次】。其中，一次方程也可 以称“线性方程”，其他的则称为“非线性方程”。由于紫外可见分光光度计的测光准确 度和重复性都比较好，在允许的吸光度范围内其测量的数据与浓度值基本程线性变化， 因此，

22、线性方程应用得比较广泛。可以根据实际情况来对曲线方程进行选择。5.5.1.2.3浓度单位设置样品系列的浓度单位。默认的浓度单位有：【ng/卩1】、【ng/ml】、【口 g/卩l】、【g/ml】、【mg/l】、【ppb】、【ppn!和【mol/l】。如果没有所需要的浓度单位，还可以 手工输入一个浓度单位。5.5.1.2.4零点插入【零点插入】是在第一个标准样品前插入一个浓度和吸光度都是零的标准样品，并 参加曲线拟和运算。5.5.1.2.5曲线评估曲线评估是对校正曲线的质量（也就是我们常说的相关系数）进行评估。评估结果 会显示在定量测定窗口的参数窗口中。如果需要对校正曲线进行评估，可将【曲线评估】

23、 选项设置为【R2I （相关系数），然后点击【设置按钮】，系统将弹出曲线评估设置窗口。在设置窗口中，您可以将【评估值】和【正偏差】设置为1.0和0.0，因为校正曲 线的相关性是以百分比来表示的，因此应以 100%作为评估值。并且，相关性是不会大于 100%的，因此，就不会产生正偏差。所以，正偏差可设置为0.0。 【负偏差】是指在评估 值的基础上允许产生的负偏差。例如，可以将负偏差设置为 0.001，这就说明，评估下 限是1.0-0.00仁0.999，评估范围则是1.00.999。超出此范围的数值将被认为是不合 格的数值。用一句俗话说就是“不能少于三个9” 。【显示符号】用于对评估的结果进行显示

24、，【偏移数量】是指显示符号的数量。例 如，您将评估值设置为1.0，将正偏差设置为1.5，将负偏差设置为0.5，将显示符号设 置为“*”，将偏移数量设置为5。这时，如果您对0.5进行评估，则会得到1个“*”， 对1.0进行评估，则会得到5个“*”。这是由于，您将偏移数量设置为5，就表明将正 偏差与评估值的差值和负偏差与评估值的差值都平均分成了 5段，每段用一个“* ”表示。评估的过程是这样的：先判断被评估的数值相对于评估值是属于正偏差还是负偏 差。也就是说，比评估值大的数值属于正偏差，比评估值小的数值属于负偏差。当确定 好正、负偏差后，就开始进行判断。判断的过程其实就是看被评估的数值距评估值有多

25、 近，越近，得到的“* ”就越多。例如，结合上图对0.85 进行评估的过程是这样的：判 断0.8 是属于负偏差，则应以0.51.0 为评估范围。首先，判断0.85是否在0.5 和0.6 之间，如果不是，则增加一个“*”，再判断是否在0.6 与0.7 之间，如果不是，又增加 一个“*”，依次类推。等判断到0.8与0.9时就结束了，因为0.85是在0.8与0.9 之间。 至此，总共得到了四颗“*”。得到的“*”越多，证明曲线的相关性就越好。这些“*” 将被显示在定量测定的参数窗口中，并在打印校正曲线时一同打印输出。5.5.1.2.6校正方法 校正方法共分为两种，分别是：【浓度法】和【系数法】。浓度

26、法要求输入标准溶液 的浓度，然后对标准溶液进行吸光度测量，得到测量数值后，与输入的浓度进行曲线拟 和并计算出方程的系数与相关性。而系数法则要求直接输入方程的各项系数，不用进行 标准样品的测量。例如，如果将方程次数设置为二次，同时选择了系数法，则需要输入 三个方程系数，即：K0 K1 K2 K0表示常数项，K1表示一次项系数，K2表示二次项 系数。5.5.1.3质量控制选项卡 本项内容同“5.3.1.5 ”项。5.5.1.4简单计算选项卡 简单计算对测量结果的计算提供了很大的方便。利用此功能，可以计算出一些比较专业的数据和分析结果。选择【启用简单计算】选项来开启简单计算功能。5.5.1.4.1计

27、算公式在【计算公式】编辑框中，可以输入对未知样品浓度Conc进行运算的公式及其结 果单位。在公式中，ConC弋表测量得到的未知样品的浓度。例如，您在测量未知样品的 浓度时得到单位为mg/l的结果，而需要的是以g/l为单位的浓度值，因此在计算公式编 辑框中输入Conc/1000在计算单位编辑框中输入g/l ，然后点击【添加】按钮即可。计算公式默认的标题是“结果1”、“结果 2”, 。 如果指定标题，可在输入计算公式的同时，在【标题】编辑框中输入相应的标题即可。如果要修改某个公式，可在公式列表中 选择相应的公式，在公式编辑框中修改其内容，然后点击【修改】按钮即可。如果要删 除或清除公式列表的内容，

28、可以点击【删除】和【清除】按钮。计算公式最多可输入十 个。5.5.1.4.2符号【符号】的作用其实就是模仿键盘的输入，点击符号按钮，就等于输入了对应的符 号。5.5.1.4.3显示【显示】选项的作用是为计算公式提供不同的显示方式。下拉框共有两个选择，分 别是：公式和标题。“公式”表示在测量结果表格中，计算公式将以公式的形式进行显示。 “标题”则会以默认标题或用户设置的标题进行显示。5.5.2定量测定定量测定窗口共分为四个部分，即：【标准样品表格】、【未知样品表格】、【校正曲 线】和【参数列表】。5.5.2.1测量表格标准样品表格负责显示标准样品的测量结果。一般情况下，表格共有八列，分别是： 【

29、序号】、【编号】、【类型】、【浓度】、【吸光度】、【测定波长的吸光度】、【标准偏差】和 【相对标准偏差】。如果您使用双波长法或三波长法，表格中还将显示其他测量波长的数 值。【序号】：表示样品数量。【编号】：为样品进行名称编号，可编辑。【类型】：对于标准样品，类型为“标准样品“，对于未知样品，类型为“未知样口 ”【浓度】：样品的浓度值。【吸光度】：样品的最终吸光度值。计算公式如下表所示表定量测定计算方法表中，【AbSI表示最终的吸光值，【W】表示测定波长1,也称主波长。【WI为测定 波长2,也称基线波长1。【WI为测定波长3,也称基线波长2。【AI主波长的吸光值。【AI基线波长1的吸光值。【A】

30、基线波长2的吸光值。【KI表示双波长系数法中的系 数。【测定波长的吸光度】：样品在相应波长点的吸光度值。【标准偏差】重复测量的标准偏差值。【相对标准偏差】：重复测量的相对标准偏差值。如果未设置重复测量，标准偏差 和相对标准偏差均为零。进行标准样品测量和未知样品测量时，可点击相应的测量表格，表格上方将显示“（使用中）”的字样，表示此表格已经激活，所有的测量均在此表格中操作。5.5.2.2校正曲线校正曲线负责显示当前的校正曲线图形。如果未进行标准样品测量，则无图形显示。5.523参数列表参数列表显示当前的定量测量参数。包括曲线方程、系数等信息。5.524测量如果在定量测定参数设置中，将校正方法设置

31、为浓度法，则在测量之前，需要在定 量测定表格中输入标准样品的浓度值，然后才可以测量。输入浓度值的方法有两种，方法一：双击【编号】列中的空白格，输入样品编号后 按回车键。系统会自动在表格中添加一行样品。然后点击对应样品的【浓度】，输入浓度 值即可。方法二：不输入任何浓度值，直接点击测量按钮，此时系统会提示您输入一个 浓度值，输入浓度值后，点击【确定】按钮，系统会自动添加一个标准样品，将浓度值 设置为您刚才设置的数值，并立即测量此样品。如果在定量测定参数设置中，将校正方法设置为系数法，则不需要对标准样品进行 测量。直接测量未知样品即可。5.5.3保存测量文件定量测定的数据同样可以保存的磁盘。选择【文件】菜单下的【保存】子菜单，或 点击按钮，即可打开文件保存窗口，在窗口中输入要保存的文件名，点击【保存】 按钮即可。如果要对测量文件添加注释信息，可点击【注释】按钮，输入注释信息后点 击【确定】按钮即可。5.6时间扫描单击时间扫描按钮或选择【测量】菜单下的【时间扫描】子菜单，打开时间扫描窗 口。5.6.1参数设置单击I丄I按钮或选择【测量】菜单下的【参数设置】子菜单，打开时间扫描参数 设置窗口。561.1测量选项卡测量选项卡中的内容是设置时间扫描参数的主要内容。5.6.1.1.1时间扫描光度模式设置