防晒剂检测方法.docx

1、防晒剂检测方法防晒剂含量检测方法防晒剂即紫吸收剂。它能吸收紫外线中可引起人产生急性皮炎（红斑）和皮肤灼伤的波长为280320nn的中波紫外线（即 U.V.B）和（或）可使皮肤变黑的波长32400nn的长波紫紫外线（即U.V.A）。化妆品中紫外线吸收剂用量过多对皮肤 有不利影响，因此，化妆品卫生标准规定了防晒剂的使用量（见附录 1中的表5）、对甲氧肉桂酸乙氧乙酯高效液相色谱法（HPLC对甲氧肉桂酸乙氧乙酯：（4-甲氧肉桂酸-2-乙氧乙酯，G4H8O4，分子量250.29）是淡黄色透明的粘稠性液体，266Pa时 沸点为184187C；在水中溶解度为0.05%,在甘油中为0.5%,在丙二醇中约5%,

2、能经任意比例与其它醇类、植物油相混 合；吸收波长280320nm常作紫外吸收剂。我国化妆品卫生标准规定最大允许浓度为 10%1应用范围本方法适用于化妆品中对甲氧肉桂酸乙氧乙酯的测定。2原理样品中的对甲氧肉桂酸乙氧乙酯溶解于四氢呋喃等有机溶剂，有机溶剂提取后用高效液相色谱定性、定量。3试剂3.1四氦呋喃：色谱纯。3.2乙腈。3.3对甲氧肉桂酸乙氧乙酯标准溶液：精确称取对甲氧肉桂酸乙氧酯 0.5g,用少量四氢呋喃溶解,移入100.0ml容量瓶中 并定容至刻度。移取10.0ml置于50.0ml容量瓶中，用四氢呋喃定容至刻度。此溶液 1.00ml含1000?g对甲氧肉桂酸乙 氧乙酯。4仪器4.1高效液

3、相色谱仪：具紫外分光光度检测器4.2超声波仪。5分析步骤5.1样品预处理5.1 .l液体、乳液、膏霜：称取约0.12.0g(3)样品于50m1离心管中，力卩20m1四氢呋喃。用超声波充分溶解混匀后 加四氢呋喃至50.0ml。溶液中有不溶物时离心分离。取上清液用。 (4)5.1.2 指甲油：称取约1.0g样品(3)于50ml离心管中，加15ml乙腈，搅拌均匀，加水至25.0ml , 3000r/min离心10min, 或用聚四氟乙烯滤膜过滤，取上清液备用。(4)(5)5.2色谱条件流动相：乙腈+水 ( 6+ 4)流速：1.0m1/mi n。检测器波长：310 nm 5.3测定5.3.1定性取标准

4、溶液2.0ml，加四氢呋喃稀释至50.0m1,取5J注入HPLC求出保留时间，取样品溶液 5?1同样操作，以保留 时间进行比较和定性。(8)5.3.2定量移取标准溶液用四氢呋喃稀释， 配制成1ml相当于0.0、20.0、40.0、60.0、80.0?g的标准系列，依次取5J注入HPLC 绘制浓度-峰高(或峰面积)标准曲线。取样品溶液5?1注入HPIC,记录峰高或峰面积，从标准曲线查出对应的对甲氧肉桂酸乙氧乙酯的含量 A ( g/m1)6计算 c=AX V/mX 1/1000式中：c 对甲氧基肉桂酸乙酸乙酯含量，%A 一一由标准曲线查出的样液中对甲氧基肉桂酸乙氧乙酯含量， 旧/ ml;V样品溶液

5、总体积，ml;m 样品质量，g。注解：(1) 四氢呋喃中常常加入抗氧化剂，必须采用色谱纯试剂。(2) 乳液、膏霜指防晒油、擦手香酯、夜霜等。(3) 称取的样品量根据对甲氧肉桂酸乙氧乙酯含量来决定，应含 14mg(4) 样液中若仍有不溶物，用聚四氟乙烯滤膜(5?n)过滤。(5) 指甲油的预处理方法除用乙腈外，还可用下法：即取苯或醚10ml，水20ml与样品充分混合，离心分离(3000r/min ) 10mi n,或静置分层后，取苯或醚层，将有机相挥干，用乙腈稀释至一定体积备用。(6) 常用的色谱柱还有TSK凝胶柱LS4I0及等效物。(7) 流动相乙腈和水的比例范围在 7+ 3I + 1之间都可得

6、到良好的分离。(8) 用本法测定时，对甲氧肉桂酸乙氧乙酯的保留时间是 10mi n，能与其同分异构体完全分离。以对甲氧肉桂酸乙氧 乙酯的相对保留时间作为1.00时，2-乙基己基-对2-甲基胺基苯甲酸酯(ESOALOL07)是8.47，2-乙基己基对甲氧肉桂酸酯是8.94，同时和其它紫外吸收剂也能完全分离。二、羟苯甲酮高效液相色谱法（HPLC羟苯甲酮即 2-羟-4 甲氧二苯甲酮。（oxybenzone，2-hydroxy-4-methoxybenzo phenone C mH2Q,228.25 ）是微黄色结 晶粉末，熔点66C （Merek Index ）, 6066C （化妆品原料标准U）在1

7、00g不同溶媒中溶解的克数分别为：水 0.O, 95%乙醇5.85 ,正己烷4.36，苯56.2，二甲苯44.3 ,二硫化碳30.0 ,四氯化碳34.5。羟苯甲酮的最大吸收波长（0.001 % 乙醇溶液）为2424nm 288 4nm, 325 14nm,在化妆品中用作紫外线吸收剂。我国化妆品卫生标准规定的最大允 许浓度为10%。1应用范围本方法适用于不同类型化妆品中羟苯甲酮的测定。2原理用有机溶剂提取化妆品中的羟苯甲酮， 用高效液相色谱进行测定，以保留时间定性，以标准峰高（或峰面积）进行定量。3试剂3.1四氢呋喃：色谱纯。3.2羟苯甲酮标准溶液：精确称取羟苯甲酮 0.25g，加少量四氢呋喃溶

8、解，移置于100ml容量瓶中。加四氢呋喃定容至刻度。移取5.0ml置于50.0ml容量瓶中，用四氢呋喃定容至刻度。此液 1.0ml含250?g羟苯甲酮。4仪器4.1高效液相色谱仪：具紫外分光检测器。4.2超声波仪。5分析步骤 5.1样品预处理5.1.1液体、乳状样品：准确称取约0.12.5g样品于50m1离心管中，加四氢呋喃40. 0ml,用超声波仪分散或溶解, 加四氢呋喃至50ml，如样液混浊离心分离，取上清液备用。5.1.2指甲油：称取约1. 0g(3)样品，置于离心管中，加四氢呋喃5.0ml经超声波仪超声提取后，加氯仿至 20ml，3000r /min离心10min，取上清液备用。5.2

9、色谱条件4.6mm id x 250nr)i 填充 C8 (5?m 。流速，1.0m1/min。检测器：紫外吸收检测器，波长 288nm5.3测定5.3.1定性吸取6.0ml标准溶液置于50.0ml容量瓶中，加四氢呋喃定容至刻度，取 5J注入HPLC求出保留时间。取5J样品待 测溶液注入HPLC求出保留时间，与标准保留时间,与标准保留时间比较进行定性。（6,7）5.3.2定量配制每毫升含羟甲氧基苯酮 0.0、10.0、20.0、30.0、40.0、50.0?g的标准系列，分别取5J注入HPLC绘制峰高（或 峰面积）-浓度标准曲线，取样品待测溶液 5注入HPLC以标准曲线查出样品溶液中的羟苯甲酮

10、含量（？g/ml）。6计算c%=A V/mX 1/10000式中：c一羟苯甲酮含量，%A以标准曲线查出的样品溶液中羟苯甲酮含量， Q/m1;V 一一样品溶液稀释的总体积，m1;m一样品质量，g。注解：(1) 一般在四氢呋喃中加入了微量的抗氧化剂，故要使用色谱纯的四氢呋喃。(2) 进行样品预处理时，称取的样品质量应含 0.52.5mg羟苯甲酮。(3) 称取指甲油时，由于样品中的溶媒易挥发，称取操作应敏捷。(4) 可用Lichrosorh RP-18 色谱柱(E.Merck公司制品)或 Nueleosil C偲色谱柱(Macherey Nagel公司制品)。(5) 如用乙腈+水(7+3)作流动相，

11、不能将ESCA LOL 506紫外吸收剂与羟甲氧基苯酮分离。(6) 本方法选择的仪器条件，羟苯甲酮与其它异构体分离良好，羟苯甲酮的相对保留时间为 1.00时，其它异构体的相 对保留时间如下：2-羟基-4甲氧基二苯甲酚-5磺酸是0. 48，2-羟基二苯甲酮是0.72，2，2羟基二苯甲酮是0.75， 2，2 ，4, 4-四羟基二苯甲酮是0.56，2，2羟基4, 4甲氧苯酮是0.89。三、水杨酸高盖酯等 14种防晒剂反相高效液相色谱法防晒化妆品的组分含有紫外线吸收剂。常用的紫外线吸收剂为水杨酸、对氨基苯甲酸、肉桂酸、二苯甲酮等的衍生物。 此外，为了完全防止紫外线，防晒化妆品中还加有能使紫外线散乱起到

12、遮蔽作用的无机覆盖剂，如氧化锌、氧化钛、滑 石粉、高岭土等，我国化妆品卫生标准 GB 7916一 87对紫外线吸收剂的使用量做了限制。本法使用高效液相色谱，一次进样同时测定 2, 4-二羟基二苯甲酮等14种紫外吸收剂，分离效果好。本法简单、快速、灵敏、实用。1应用范围本法适用于防晒化妆品中紫外线吸收剂的检测，可检测 14种紫外线吸收剂，其最低检测量见表 2-3-27表2-3-27紫外吸收剂及化妆品卫生标准(GB 9716-87)中规定的化妆品中最大允许浓度序号代号物质名称英文名称本法检出限(?g/g)最大允许 浓度(%)供应商保留时间(min)?m(nm)5-11SALA9水杨酸高0(此字由艹

13、和孟组成)脂Homomenthyl salicylate2510QuestIn-ternational(NL)43.22250.615-20SALA9水杨酸-4-异丙基苄酯4-lsopropylbenzyl salicylate4Vebvy( I )39.59240.755-3PABA8对-二甲按基苯甲酸-2-乙酸已酯2-ehylhexyl 4-dime-thylaminobenzoate2.58Van Dyk (NL)42.35304.20BENZ12,4-二羟基二2,4-Dithydroxyben-zophenone5.0-Sigma( I )27.05284.75苯甲酮BENZ22,2

14、-二羟基-4-甲氧基二苯甲酮2,2 -Dihydroxy-4-methoxyben-zophenone7.5Saipo( I )29.85284.39BENZ32,2 -二羟基-4,4 -二甲氧基二苯甲酮-5-磺酸（钠盐）2,2 -Dehydroxy-4,4 -dimethoxyben-zophenone-5-sulfon-icacid(sodium salt)10.0Saipo( I )3.27263.06BENZ42,2 ,4,4 -甲羟基二苯甲酮2,2 ,4,4 -Tetrahy-droxybenzophenone5-Saipo( I )17.05292.075-32BENZ52-羟基-

15、4-甲氧基二苯甲酮2-Hydroxy-4-methoxyeben-zophenon510Sigma( I )33.84284.005-33BENZ62-羟基-4-甲氧基二苯甲酮-5-磺酸（钠盐）2-Hydroxy-4-methoxy-benzophe-none-5-sulfonic acid (sodiumsalt)7.55(酸)Sigma( I )9.91266.825-17CAMP43-（4-甲基亚3-(4-Methylbenzy-lidene)七ornan-2-one2.56Merck(D)38.61294.02苄基茨烷-2-酮）5-27SSCR12-苯基苯咪唑-5-磺酸2-Phenyl

16、benz-imidazole-5-sulphnic acid2.58(酸)Saipo( I )6.89278.295-14CINA7对-甲氧 基肉桂 酸二乙 酸铵Diethanolammonium 4-methoxycinnamate2.53（酸）Saipo( I)18.49292.245-18CINA10对-甲氧基肉桂 酸异戊 酯Isoamyl 4-methoxycinnamate1.310Haarman & Reimer (NL)37.73294.945-5CINA11对-甲氧 基肉酸-2-乙酸已酯2-Ethylhexyl 4-methoxy-cinnamate10Givaudan (CH

17、)42.29292.78此序号为化妆品卫生标准（GB 7916-87）中表5的序号,5-11即表5中的序号11原理化妆品中各种紫外吸收化合物由于其结构上的差异可被反相高效液相色谱分离。 根据其保留时间及其紫外可见吸收光谱进行定性；峰面积进行定量。3试剂3.1甲醇：色谱级。3.1乙腈:色谱级。3.3紫外吸收剂贮备液：取表2-3-27紫外线吸收化合物各O.IOOOg,用甲醇溶解并定容至100.0ml。浓度为1.00mg/ml紫外吸收剂标准溶液：取上述紫外吸收贮备液 10.0ml,用甲醇定容至100ml,浓度为0.10mg/ml。3.4高氯酸:分析纯。3.5高氯酸钠：分析纯。3.6硫酸:分析纯。3.

18、7水、去离子水及二次重蒸水。所有溶剂和溶液在进行HPLC分析前都经0.45?m的微孔滤膜过滤及真空脱气。4仪器4.1 高效液相色谱仪：Varian 5000 型(Z?g, Switzerland )。4.2检测器：Varian polychrom 9060 型二极管珍列阵检测器。4.3 积分仪：Varian 4290 型。4.4微量进样器：10?l。5分析步骤(15.1称取1g防晒化妆品于离心管中，力卩0.25ml 2mol/L硫酸和10ml甲醇,30 C恒温超声水浴30min,然后以900r/min 离心10mi n,提取上清液；残留物按上述方法重新萃取一次，合并二次萃取液，用甲醇定容至 2

19、5ml。5.2色谱条件5.2.1 色谱柱：Lichrosorb RP-18 柱(250mm 4.6mm id. , 10?m Merck, Darmstadt, F.R.G.)。5.2.2流动相流动相A： 10-3mol/L的高氯酸和5X 10-2mol/L高氯酸钠的乙腈-水溶液(5+95, V/V);流动相B: 1X10-3mo/L高氯酸和5X 10-2mo/L高氯酸钠的乙腈-水溶液35 + 65, V/V。流动相C: 1X10-3mo/L的高氯酸和5X10-2mo/L高氯酸钠的乙腈-水溶液(80+ 20, V/V)。起始为流动相A,在20min内线性梯度变换到流动相B:保持流动相B 5mi

20、n，然后在40min内梯度变换到流动相C。5.2.3 流速：2.5ml/min 。524 柱温：30C。525进样体积：10?1。5.2.6检测波长：311 nm。5.2.7 检测器灵敏度：0.32a.u.f.s.。5.2.8 纸速：0.5cm/min。5.3测定5.3.1定性取10?1样品处理液（5.1 ），注入高效液相色谱仪。根据其保留时间（参照表 2-3-27 ）及紫外可见吸收光谱定性。5.3.2定量5.3.2.1 标准曲线移取0、0.50、1.00、2.00、4.00、6.00、8.00、10.0ml紫外吸收剂标准液于10ml具塞刻度管中，用甲醇稀释至刻度。 取10?1进行高效液相色谱

21、分析，记录各峰面积，用峰面积与对应的紫外吸收剂浓度作图获得标准曲线。5.3.2.2 取5.1制备的样品处理液，进行高效液相色谱分析，记录其各峰面积。在标准曲线上查得相应的紫外吸收剂浓 度。6计算按下式计算防晒吸收剂含量：c=AX 25/ (10000)式中：c 一一样品中紫外吸收剂的浓度， %A从标准曲线上查得的紫外吸收剂浓度，？g/m1；nn-样品质量，g。7方法的准确度、精密度样品加标加回收率为97100%，平均变异系数不大于2%( n=5)。注解：(1) 由于PABA 8和CINA II在所用色谱条件下不能分离(如图_2-3-36 )，在进行分析之前确定样品中是否同时存在 这两种物质是必

22、要的。可用薄层层析对其进行快速扫描。(2) 若样品中PABA 8及 CINA 11共存，为了分离这两种防晒剂，样品经 10ml甲醇离心后，减压蒸馏此甲醇溶液，残渣用5ml 2mo1/L硫酸萃取两次，合并上层酸萃取液。此萃取液含有 PABA 8 (溶液A);萃取残渣用10ml甲醇溶解，该液(溶液B)含有CINA11。溶液A、溶液B分别进行HPLC分析。此时标准溶液也需配两组：标准溶液 A,含有BEN 4，BENZ 8，SSCR 1 PABA 8,用2mo/L的硫酸作溶剂；标准溶液 B,含有其余的10种紫外吸收化合物，用甲醇作 溶剂。图2-3-37为标准溶液A和标准溶液B的色谱图。(3) 保留时间在实验条件下重现性良好，平均变异系数小于 3%。图2-3-37标准溶液A和标准溶液B的高效液相色谱图图2-3-36 IIENZ 1 等14种紫外吸收剂的高效液相色谱图